cccDNA作为嗜肝DNA病毒基因组的复制中间体,是乙肝病毒在体内持续感染的关键因素
[1-2]。由于目前主要的抗病毒药物作用靶点在cccDNA水平之下,很难降低体内cccDNA水平
[3],所以在抗病毒药物的使用下,检验cccDNA的水平比现行的乙型肝炎病毒DNA水平更具有意义。乙型肝炎病毒是嗜肝性小颗粒双链DNA病毒,肝脏是其体内最主要的复制部位。外周血单个核细胞、骨髓细胞、胰腺细胞及皮肤和肾细胞中存在少量病毒抗原或DNA的复制,但不致细胞和组织损伤。而cccDNA的存在定位颇具争议
[4-6],有文献报道单个核细胞中乙型肝炎病毒的存在复制是因为乙型肝炎病毒cccDNA是血浆中病毒吸附于单个核细胞上,并非单个核细胞中复制的结果
[7]。乙肝复发的病毒来源可能为:肝移植后肝外组织如外周血单个核细胞、骨髓细胞、胰腺细胞及皮肤和肾细胞中潜在的病毒颗粒,重新大量复制并迁移至供肝导致感染
[8]。其中单个核细胞作为外周血中的免疫细胞,更具意义,可能与肝移植后乙肝复发存在一定关系
[9]。
本实验采用实时定量荧光PCR技术检测乙肝相关性肝病行肝移植患者不同时期外周单个核细胞[10]、肝组织中cccDNA的量及血清乙型肝炎病毒DNA[11-12]。通过检测结果分析同组中单个核细胞、肝组织及血清乙型肝炎病毒 DNA之间有何关系及意义大小,并通过不同时期检测结果前后对比分析单个核细胞中cccDNA是否能作为乙肝检测的手段及找到可能的肝移植后乙肝复发的途径。本组实验第一步示全部37例患者肝移植前单个核细胞中cccDNA阳性12例,肝组织中cccDNA阳性6例,阳性率分别是32%,16%,血清乙型肝炎病毒DNA阳性14例,单个核细胞和肝组织cccDNA阳性大部分都属乙型肝炎病毒DNA阳性者,但cccDNA拷贝数与血清拷贝数无数量间关系。并将37例按HBeAg(+),HBeAg(-)HBeAb(-),HBeAb(+)分为3组,比较外周血单个核细胞和乙型肝炎病毒DNA定量与HBeAg(+),HBeAg(-)HBeAb(-),HBeAb(+)各组的关系。单个核细胞中cccDNA的定量值,HbeAg(+)高于其他两组(P=0.02),HBeAg(-)HBeAb(-)组与HBeAb(+)定量结果无差异。证明除肝组织以外,外周血单个核细胞中存在cccDNA,并在乙型肝炎病毒DNA阳性及HbeAg阳性的检测率高。但在病毒大量复制的情况下单个核细胞中cccDNA检测与血清乙型肝炎病毒DNA检测的优越性不能比较。
肝移植后肝脏内的病毒负荷被清除,且抗病毒药物和免疫球蛋白的使用下肝外的大部分病毒负荷也被清除或出于低复制状态[13],乙肝复发肯定存在非常隐匿的病毒来源。本组实验第二步肝移植后,血清乙型肝炎病毒DNA阳性者全部转阴,乃肝脏病毒负荷被清除,抗病毒药物和免疫球蛋白作用结果,但移植前单个核细胞中cccDNA阳性中仍有1例阳性,更证实了单个核细胞中cccDNA存在给以后乙肝的复发提供了病毒来源,同时可逃避免疫监视,产生免疫耐受。同时统计学分析,肝移植后患者和其他乙肝患者的单个核细胞中的cccDNA检出率差异无显著性意义(P > 0.05),但单个核细胞中cccDNA和血清乙型肝炎病毒DNA差异有非常显著(P < 0.01)。
本组实验第三步示6例肝移植后乙肝复发的病例中外周血单个核细胞中cccDNA阳性为4例,肝脏组织活检cccDNA阳性为1例,全部6例血清乙型肝炎病毒DNA为阳性。复发的6例病例均为术前单个核细胞中cccDNA拷贝数较高病例,且术后乙肝复发前1例单个核细胞中cccDNA阳性的病例也包括在这6例病例中。可以看出血清乙型肝炎病毒DNA阳性出现在单个核细胞中cccDNA阳性的基础上,并存在时相上的先后过程,有些文献理论上分析存在肝细胞质和线粒体中丙氨酸转氨酶、门冬氨酸转氨酶等酶类在肝细胞受损破坏时释放到血清中,那么单个核细胞中的cccDNA也同样能这样释放到血清中,这里也证明了理论分析,同时复发病例肝脏活检仅1例肝组织cccDNA阳性,进一步说明了外周血单个核细胞中的cccDNA可通过某种途径迁延到肝脏,导致病毒在肝脏内复制,最终导致肝脏的免疫学损伤[14]。此外, 在长期免疫抑制状态下,机体免疫系统对乙型肝炎病毒的清除能力降低,使得移植后乙型肝炎病毒的复制更复杂[15]。
本实验说明乙肝病毒相关终末期肝病患者肝移植后乙肝复发途径可能是残留乙肝病毒在外周单个核细胞中以cccDNA为模板复制,然后在迁移到肝脏。但需要进一步的研究分析单个核细胞中cccDNA检测能否作为肝移植后乙肝复发的早期指标。