角膜保存中最重要的是活性保存,使用角膜中期保存液成为目前世界上最重要的角膜活性保存方法。为了使保存液具有更好保护内皮细胞的作用,各家在配制保存液时均在基础保存液中加入认为能够保护内皮细胞的物质,以期提高保存角膜的质量。20世纪90年代,有学者把10 g/L的透明质酸作为渗透性物质添加在角膜保存液中
[2],将猪角膜标本置于该保存液中保存8 d后,进行内皮计数和超声测量角膜厚度。认为透明质酸作为眼的一种生理性物质,其在角膜的保存上有较多的优势。杨月等
[3]报道了透明质酸制剂作为介质在人角膜保存和角膜移植术中发挥的有效作用。杨娟等
[4]将透明质酸钠加入自制改良中期保存液中,其浓度分别为0.05%,0.03%,0.01%,结果证明透明质酸钠对角膜内皮细胞有明显的保护作用,可提高保存角膜的质量,延长保存时间,其效果与透明质酸钠浓度有关;亦将外源性的透明质酸钠加入到改良中期保存液(MMK液)中,显示保存角膜效果佳,透明度好,CEC活性高,其各项指标均明显高于对照,因此认为透明质酸用于角膜保存可增强该保存液对角膜的保存作用,并延长保存时间,提高保存质量。
角膜上皮细胞、基质细胞、后弹力层和内皮细胞均有bFGF的分布和表达,外源性bFGF可特异性作用于角膜组织,在损伤部位激活并调控角膜组织细胞修复机制,并促进有丝分裂及促进邻近细胞扩大、移动,使修复的细胞在形成和排列上趋于正常。Schultz等[5]认为在保存和培养液中加入生长因子,能激发人CEC较低的丝裂潜能,改善保存过程中CEC的代谢和创伤修复。2003年,Rieck等[6]将4,20,40 μg/L的bFGF加入改良0ptisol液中,在4 ℃条件下保存牛角膜1~14 d,结果发现在固定的时间点上,保存在加入20 μg/L和40 μg/L bFGF的保存液中的角膜内皮细胞的降低率明显低于对照组;徐志勇等[7-8]在研究角膜中期保存液bFGF的浓度对保存内皮细胞活性的影响时,通过对兔角膜的保存效果进行评价认为,在保存液中添加bFGF的浓度以20~50 μg/L为宜;闰超等[9]通过实验证明角膜保存液中加入bFGF (20 μg/L)与加入EGF相比较,角膜内皮细胞活细胞密度明显高于EGF组,并且角膜中期保存液中加入较高浓度bFGF(FGF-2)(20 μg/L),在较长时期内对角膜内皮细胞的形态结构和数量有良好的保护作用,但是低浓度的bFGF(5 μL/L)对角膜内皮细胞的保护作用相对较弱。
由于中国尚没有属于本国的商品化的角膜保存液,加上国内在延长角膜保存时间方面的研究甚少,故提高角膜保存的质量与延长保存的时间则成为目前亟待解决的重要课题。目前国内学者根据国外中期保存的经验,设计配制了适合国情的中期保存液。如河南省眼科研究所在国内首创的以Hanks液和水解乳蛋白为主要成分得人工营养液保存眼球和角膜,其后又用50%的低分子右旋糖酐代替体积分数为10%的小牛血清,用来保存眼球。而1997年由山东省医学科学院眼科研究所董晓光等研制的DX-1液,经实验研究和临床应用观察,认为保存效果较好,时间达1周以上,为一种适合国情、成分简单、配制方便的角膜活性保存液。本课题组通过大量的前期研究及相关文献显示,bFGF及透明质酸钠确实能对保存角膜内皮细胞起到很好的保护作用,但前期均是对两种物质的作用分别进行研究,没有探讨两种物质的联合作用,本实验在基础保存液的基础上同时加入了该两种物质,配制成一种全新的角膜保存液,通过实验证实了该保存液在角膜活性保存中的有效作用,并在参考其他研究的结果中选择几种有效浓度进行分组,以期得到最适浓度进一步深入研究。本实验证明,浓度为透明质酸钠 2 g/L bFGF 200 μg/L的角膜中期保存液对角膜内皮细胞的保护作用最好,该保存液能够有效保存角膜内皮细胞活性达14 d。
综上所述,bFGF联合透明质酸钠制成的该角膜中期保存液,能有效保护角膜内皮细胞,为临床进行穿透性角膜移植手术提供更好的供体材料,从而极大地推动角膜移植手术的开展。