中国组织工程研究 ›› 2011, Vol. 15 ›› Issue (2): 241-244.doi: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.02.012
• 组织构建细胞学实验 cytology experiments in tissue construction • 上一篇 下一篇
孟步亮1,徐 丹2,刘 佳2,李力燕2,王廷华2
Meng Bu-liang1, Xu Dan2, Liu Jia2, Li Li-yan2, Wang Ting-hua2
摘要:
背景:脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)作用广泛,但属于生物大分子,不能通过血脑屏障。基因治疗是目前解决脑源性神经营养因子给药途径最有希望的方案。 目的:拟构建大鼠脑源性神经营养因子基因真核表达载体。 方法:采用反转录聚合酶链式反应技术从SD大鼠脑组织提取总RNA,扩增脑源性神经营养因子基因cDNA序列,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,分别取10 g质粒pcDNA3和纯化的目的基因分别进行EcoR Ⅰ、xho Ⅰ双酶切。将目的基因片段和pcDNA3载体连接,转入感受态DH5α细胞中,经酶切鉴定后送上海博亚生物技术有限公司测序。 结果与结论:RT-PCR产物为749 bp的特异片段,重组质粒pcDNA3/BDNF酶切后产生 749 bp和5 446 bp的片段,DNA测序证实749 bp片段的碱基序列与大鼠脑源性神经营养因子基因序列完全一致,成功构建了pcDNA3/BDNF重组质粒。
中图分类号: