塞来昔布抑制凝血酶诱导的大鼠软骨细胞退变

doi:10.12307/2024.834

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (34): 5446-5451.doi: 10.12307/2024.834

• 软骨组织构建 cartilage tissue construction • 上一篇下一篇

塞来昔布抑制凝血酶诱导的大鼠软骨细胞退变

朱志恒1，2，丁佳滢1，2，葛杨硕1，2，黄春萌1，2，沈军3，王学宗4，郑昱新4，丁道芳1，2

1上海中医药大学康复医学院，上海市 201203；2上海中医药大学康复医学研究所，上海市 201203；3上海中医药大学附属光华医院，上海市 200052；4上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心，上海市 201203

收稿日期:2023-12-03 接受日期:2024-01-16 出版日期:2024-12-08 发布日期:2024-03-14
通讯作者: 丁道芳，博士，研究员，上海中医药大学康复医学院，上海市 201203；上海中医药大学康复医学研究所，上海市 201203
作者简介:朱志恒，男，1998年生，河南省郑州市人，汉族，2024年上海中医药大学毕业，硕士，初级治疗师，主要从事肌骨类疾病康复及机制研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(82174406)，项目负责人：王学宗；国家自然科学基金项目(81902306)，项目负责人：丁道芳；上海中医药大学科技发展项目(23KFL023)，项目负责人：丁道芳

Celecoxib inhibits thrombin-induced chondrocyte degeneration in rats

Zhu Zhiheng1, 2, Ding Jiaying1, 2, Ge Yangshuo1, 2, Huang Chunmeng1, 2, Shen Jun3, Wang Xuezong4, Zheng Yuxin4, Ding Daofang1, 2

1School of Rehabilitation Science, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; 2Institute of Rehabilitation Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; 3Shang Guanghua Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200052, China; 4Shi’s Medical Center for Injuries, Shuguang Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China

Received:2023-12-03 Accepted:2024-01-16 Online:2024-12-08 Published:2024-03-14
Contact: Ding Daofang, PhD, Researcher, School of Rehabilitation Science, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; Institute of Rehabilitation Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China
About author:Zhu Zhiheng, Master, Primary therapist, School of Rehabilitation Science, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; Institute of Rehabilitation Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, Nos. 82174406 (to WXZ) and 81902306 (to DDF); Science and Technology Development Project of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, No. 23KFL023 (to DDF)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

骨关节炎：是一种由多因素导致的常见慢性退行性关节疾病，软骨退变和软骨下骨硬化等是其主要病理特点。骨关节炎严重危害了中老年人群的身体健康，降低了生活质量。
凝血酶：是一种丝氨酸蛋白酶，在体内作为凝血的主要因子参与血栓形成的病理过程，可直接或间接影响炎症类疾病的发生发展。

背景：骨关节炎患者血清中凝血酶含量显著高于正常人，且凝血酶可以诱导大鼠软骨细胞退变，提示抑制凝血酶功能可能成为治疗骨关节炎的一种方法。塞来昔布为临床治疗骨关节炎的常见药物，是否可以抑制凝血酶的促炎作用而改善大鼠软骨细胞退变尚未可知。

目的：探讨塞来昔布对凝血酶诱导软骨细胞退变的影响。
方法：使用ELISA试剂盒检测骨关节炎患者与正常人血清中凝血酶含量。体外提取、培养SD乳鼠关节软骨细胞，使用第一代细胞进行实验，将软骨细胞分对照组、凝血酶组和塞来昔布组。显微镜下观察3组细胞形态，并使用Edu试剂盒检测细胞增殖情况；qRT-PCR检测软骨细胞外基质成分(聚集蛋白聚糖、弹性蛋白、软骨寡聚基质蛋白)、炎症因子(白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α)、炎症趋化因子(单核细胞趋化蛋白2、单核细胞趋化蛋白7、粒细胞趋化蛋白6)的表达；免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1的表达；Western Blot检测分解代谢基因如基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13和环氧化酶2等蛋白的表达。

结果与结论：①与正常人相比，骨关节炎患者血清中凝血酶含量显著增高；②塞来昔布可明显抑制凝血酶诱导的软骨细胞纤维样形态改变；③与凝血酶组相比，塞来昔布抑制了软骨细胞的增殖；④凝血酶组Ⅱ型胶原α1等软骨细胞外基质基因表达的下调被塞来昔布抑制(P < 0.05)；⑤凝血酶可促进软骨细胞炎症因子(白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α)、炎症趋化因子(单核细胞趋化蛋白2、单核细胞趋化蛋白7、粒细胞趋化蛋白6)以及分解代谢基因(基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13和环氧化酶2)的表达，在塞来昔布干预下，上述基因的表达下调(P < 0.05)；⑥结果提示，塞来昔布可以抑制凝血酶的促炎作用，从而改善大鼠软骨细胞退变。

https://orcid.org/0000-0001-6883-1642(朱志恒)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 软骨细胞, 凝血酶, 塞来昔布, 细胞增殖, 细胞退变

Abstract: BACKGROUND: The content of serum thrombin in patients with osteoarthritis is significantly higher than that in normal individuals, and thrombin can induce inflammatory degeneration of rat chondrocytes, suggesting that inhibiting the function of thrombin may become a method for treating osteoarthritis. Celecoxib is a common therapeutic drug for the clinical treatment of osteoarthritis. It is not yet known whether it improves chondrocyte degeneration by inhibiting the activity of thrombin.
OBJECTIVE: To investigate the effect of celecoxib on thrombin-induced degeneration of rat chondrocytes.
METHODS: Thrombin levels in the serum of osteoarthritis patients and normal individuals were detected by an ELISA kit. Primary chondrocytes of neonatal Sprague-Dawley rats were isolated, and all experiments were performed with cells from passage one. Chondrocytes were randomly divided into three groups: control group, thrombin group, and celecoxib group. The cell morphology of the three groups was observed under an inverted microscope, and an Edu kit was used to detect the cell proliferation. qRT-PCR was used to detect the expression of extracellular matrix components (aggrecan, elastin, cartilage oligomeric matrix proteins), inflammatory factors (interleukin-1, interleukin-6, and tumor necrosis factor-α), and chemokines (monocyte chemotactic protein 2, monocyte chemotactic protein 7, granulocyte chemotactic protein 6). The expression of type 2 collagen α1 was detected by immunofluorescence. Western blot method was used to detect the expression of catabolic metabolism genes, such as matrix metalloproteinase 9, matrix metalloproteinase 13, and cyclooxygenase 2.
RESULTS AND CONCLUSION: Patients with osteoarthritis had higher levels of thrombin in the serum compared with normal individuals. Under the microscope, celecoxib was found to significantly inhibit fibroid changes in chondrocytes. Compared with the thrombin group, celecoxib inhibited the proliferation of chondrocytes. The downregulation of extracellular matrix gene expression, such as type II collagen α1, in the thrombin group was inhibited by celecoxib (P < 0.05). Thrombin promoted the expression of inflammatory factors (interleukin-1, interleukin-6, and tumor necrosis factor-α), chemokines (monocyte chemotactic protein 2, monocyte chemotactic protein 7, granulocyte chemotactic protein 6), as well as catabolic genes (matrix metalloproteinase 9, matrix metalloproteinase 13, and cyclooxygenase 2), and under the intervention of celecoxib, the expression of these genes could be downregulated (P < 0.05). Overall, these findings indicate that celecoxib inhibits the pro-inflammatory effects of thrombin and thereby ameliorates chondrocyte degeneration in rats.

Key words: chondrocyte, thrombin, celecoxib, cell proliferation, cell degeneration

中图分类号:

朱志恒, 丁佳滢, 葛杨硕, 黄春萌, 沈军, 王学宗, 郑昱新, 丁道芳. 塞来昔布抑制凝血酶诱导的大鼠软骨细胞退变[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(34): 5446-5451.

Zhu Zhiheng, Ding Jiaying, Ge Yangshuo, Huang Chunmeng, Shen Jun, Wang Xuezong, Zheng Yuxin, Ding Daofang. Celecoxib inhibits thrombin-induced chondrocyte degeneration in rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(34): 5446-5451.

图/表（结果） 6

2.1 正常人和骨关节炎患者血清凝血酶含量正常人和骨关节炎患者性别和年龄等一般资料比较，差异均无显著性意义(P > 0.05)。ELISA结果显示，8例正常人的血清凝血酶含量为(34.90±11.69) mg/L，48例骨关节炎患者血清凝血酶含量为(447.58±60.98) mg/L，骨关节炎患者血清凝血酶含量显著高于正常人(P < 0.05)，见表2。

2.2 软骨细胞形态凝血酶组大鼠软骨细胞较对照组发生明显的形态学改变，向纤维样细胞转变，多为长梭形；塞来昔布逆转了凝血酶诱导的软骨细胞形态改变，见图1。

2.3 软骨细胞增殖 Edu标记软骨细胞两三小时后，检测Edu阳性细胞，结果表明对照组Edu阳性细胞比例为37%，凝血酶组Edu阳性细胞比例为50%，塞来昔布组Edu阳性细胞比例为23%，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图2。

2.4 软骨细胞外基质中Ⅱ型胶原α1、聚集蛋白聚糖、弹性蛋白、软骨寡聚基质蛋白基因的表达 qRT-PCR结果表明，凝血酶下调软骨细胞中聚集蛋白聚糖、弹性蛋白、软骨寡聚基质蛋白基因 mRNA的表达(图3A)，塞来昔布可显著抑制凝血酶的作用，即上调这些基因的mRNA水平，差异有显著性意义(P < 0.05)。细胞免疫荧光结果进一步表明，塞来昔布干预可上调Ⅱ型胶原α1的表达(图3B)，抑制了凝血酶对软骨基质的降解作用。

2.5 软骨细胞中炎症因子和趋化因子的表达 qRT-PCR检测结果表明，凝血酶诱导软骨细胞中炎症因子(白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α)和趋化因子(单核细胞趋化蛋白2、单核细胞趋化蛋白7、粒细胞趋化蛋白6)的mRNA表达水平上升，塞来昔布可明显抑制上述炎症因子和趋化因子的表达，组间表达差异有显著性意义(P < 0.05)，见图4。

2.6 软骨细胞分解代谢基因的表达 Western Blot检测软骨细胞中基质金属蛋白酶13、基质金属蛋白酶9和环氧化酶2等蛋白的表达。结果表明，相对于凝血酶组，塞来昔布组基质金属蛋白酶13、基质金属蛋白酶9和环氧化酶2的蛋白表达下降，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图5。

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引言

材料方法

1.1 设计体外细胞学实验，若计量资料服从正态分布，多组间比较采用单因素方差分析，组内差异采用 LSD-t 检验。若资料不符合正态分布，采用 Kruskal-Wallis 检验。
1.2 时间及地点实验于2023年6-9月在上海中医药大学完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物雌性SPF级 SD大鼠(新生24 h)，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司[合格证号：SCXK(沪) 2018-0006]。此次实验所用实验动物和实验设计均得到上海中医药大学实验动物福利伦理委员会批准(批准号：PZSHUTCM200710008)。
1.3.2 实验仪器 CO2培养箱、QuantStudio3荧光定量PCR仪(Thermo)；超净工作台(力康生物医疗科技有限公司)；显微照相系统(Olympus)；电泳仪、电泳槽、转膜仪、凝胶成像系统(Bio-Rad)；酶标仪(BioTek)；摇床(梅特仪器公司)；离心机(美瑞克公司)。
1.3.3 化学品和试剂 DMEM培养基和胎牛血清(Biosera公司，10270-106)；Ⅱ型胶原酶(Sigma公司，C6885)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(Pierce公司，No.23227)；Evo M-MLV 反转录预混型试剂盒和SYBR® Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒(含 ROX)(艾科瑞生物公司，AG11706，AG11718)；青霉素－链霉素试液、凝血酶、BeyoClick™ EdU细胞增殖检测试剂盒、RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式)、β-actin、基质金属蛋白酶9(碧云天公司，C0222，ST1699，C0075，R0027，AF0003，AF5234)；环氧化酶2(Bimake公司，A5523)；兔二抗、鼠二抗(CST公司，7074P2，7076P2)；Ⅱ型胶原α1和基质金属蛋白酶13(Santa公司，sc-28887，sc-30073)；塞来昔布(Selleck公司，S1261)；凝血酶ELISA试剂盒(Abcam公司，ab270210)；异氟烷(瑞沃德公司，R510-22-10)。
1.4 实验方法
1.4.1 ELISA法测定血清凝血酶浓度正常人及关节炎患者血液样本均来自2022年1-9月在上海中医药大学附属曙光医院进行健康体检及骨关节炎治疗的患者。骨关节炎参照膝骨关节炎的放射学诊断标准，源自2021年中华医学会骨科学分会制定的《中国骨关节炎诊疗指南(2021年版)》中的膝骨关节炎诊断部分。收集受试者肘正中静脉血清，放于-80 ℃保存，用于后续检测。此次实验设计均经过上海中医药大学附属曙光医院伦理委员会伦理审查(批准号：2021-1013-88-01)。使用ELISA试剂盒检测正常人和骨关节炎患者血清凝血酶含量。配置Sample Diluent NS+1×Enhancer、Wash Buffer PT以及标准品。96孔板中每孔加入10 μL血清和90 μL Sample Diluent NS+1×Enhancer，置于摇床，200 r/min，室温摇匀1 min，重复4次此步骤，即将样本稀释100 000倍。SimpleStep预涂的96孔板每孔加入稀释后的血清50 μL和50 μL抗体。用膜封住孔板，400 r/min，室温孵育1 h。每孔加入Wash Buffer PT洗3次，洗涤液在孔内至少停留10 s，每次洗完倒扣弃掉洗涤液，重复3次。每孔加入TMB显色液，300 r/min，室温避光孵育10 min。每孔加入终止液，400 r/min，孵育1 min，颜色从蓝色变为黄色。将酶标仪设置至450 nm波长处，放入检测吸光度值。

1.4.2 软骨细胞的分离和培养过量异氟烷气体麻醉处死新生24 h的幼鼠，置于体积分数75%乙醇中浸泡消毒10 min，PBS清洗3次。在无菌条件下解剖出关节软骨，剥离其他软组织后，PBS漂洗3次，将其切成1 mm3大小的碎片，加入0.5%Ⅱ型胶原酶，37 ℃恒温摇床(转速150 r/min)消化约60 min；取上清液，2 000 r/min离心5 min，倒去上清液，沉淀用PBS洗涤3次，用含体积分数10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM培养基重悬细胞，接种于10 cm培养皿中(1×1010 L-1)，置37 ℃、5%CO2培养箱中培养。剩余的软骨组织继续加入胶原酶重复上述过程。

1.4.3 软骨细胞分组及处理取第1代软骨细胞接种到6孔板中(6×105个/孔)进行干预，将细胞分为对照组、凝血酶组和塞来昔布组。对照组加入培养基(体积分数10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素试液的DMEM培养基)，凝血酶组在对照组培养基的基础上加入20 U/mL凝血酶，塞来昔布组在凝血酶组培养基的基础上加入10 μmol/L塞来昔布。24 h后，倒置显微镜下观察细胞的形态并拍照。

1.4.4 Edu法检测软骨细胞增殖将软骨细胞接种到6孔板中(6×105个/孔)，分组培养至正常状态，加入Edu工作液，继续孵育2 h。去除培养液，使用PBS清洗3次。加入固定液，室温固定15 min。去除固定液，洗涤液清洗3次。加入通透液，室温孵育15 min。洗涤液清洗3次，加入Click反应液，室温避光孵育30 min。洗涤液清洗3次，DAPI试剂标记细胞核，避光10 min。洗涤液清洗3次，在荧光显微镜下观察拍照。

1.4.5 qRT-PCR检测mRNA表达软骨细胞分组培养24 h后，RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式)抽提细胞内RNA。采用Evo M-MLV 反转录预混型试剂盒合成cDNA，按照SYBR® Green Pro Taq HS 预混型 qPCR 试剂盒(含 ROX)配制20 μL反应体系，包括2×SYBR® Green Pro Taq HS Premix(ROS plus)10 μL，10 μmol/L浓度的前后引物各2 μL，DNA模板小于100 ng，ddH2O补足体积至20 μL。以β-actin为内参进行PCR扩增，反应条件为95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共40个循环。以2-ΔΔCt法表示各目的基因的相对表达量。各基因的引物序列见表1。

1.4.6 Western Blot检测蛋白表达软骨细胞分组培养48 h后，RIPA液裂解细胞并且进行超声破碎，提取细胞蛋白。BCA法测定细胞总蛋白浓度，将蛋白样本与上样缓冲液混合，100 ℃煮沸10 min。制备10%分离胶和5%浓缩胶，将蛋白样品加入上样孔中，在SDS-PAGE中电泳分离110 min，再将蛋白电转至PVDF膜，使用快速封闭液室温封闭30 min后，4 ℃条件下过夜孵育一抗(β-actin、环氧化酶2、基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13，稀释比例分别为1∶1 000-1∶2 000)。TBST洗涤3次，室温孵育二抗60 min(稀释比例为1∶5 000)，再用TBST洗涤3次，使用ECL试剂盒进行显影并拍照。
1.4.7 免疫荧光检测Ⅱ型胶原α1表达将软骨细胞接种到6孔板中(4×105个/孔)，分组培养24 h后，细胞约铺满每孔的80%，将培养基弃去，用PBS清洗3次。加入免疫染色固定液固定10 min，免疫染色洗涤液清洗3次。使用免疫染色封闭液室温封闭60 min。加入一抗 (Ⅱ型胶原α1，稀释比例为1∶200)，4 ℃孵育过夜。免疫染色洗涤液清洗3次，加入荧光二抗(稀释比例为1∶700)，避光室温孵育60 min。然后加入DAPI试剂标记细胞核，避光10 min。免疫染色洗涤液清洗3次，在荧光显微镜下观察拍照。
1.5 主要观察指标 ①软骨细胞增殖能力；②软骨细胞形态改变；③软骨细胞外基质的表达；④软骨细胞内炎症因子和趋化因子水平；⑤软骨细胞分解代谢基因的表达。
1.6 统计学分析采用SPSS 25.0进行统计学分析，通过GraphPad Prism 9进行实验结果图像化展示。若计量资料服从正态分布，多组间比较采用单因素方差分析，组内差异采用 LSD-t 检验。若资料不符合正态分布，采用 Kruskal-Wallis 检验。实验结果均以x±s表示。P < 0.05 时认为差异有显著性意义。该文章的统计学方法已经上海中医药大学生物统计学专家审核。

讨论

软骨细胞是软骨组织中的唯一细胞，负责合成和分泌软骨细胞外基质成分。骨关节炎发生时炎症因子大量表达，导致软骨细胞外基质合成与基质降解动态失衡，造成软骨细胞纤维化[15]。近年来研究发现，体内异常的凝血酶水平在阿尔茨海默症和动脉粥样硬化等疾病中可以刺激白细胞介素1、白细胞介素6和单核细胞趋化蛋白1等因子的产生，促进疾病的进展[16-20]。作者发现骨关节炎患者血清中凝血酶含量高于正常人，因此在体外进一步观察凝血酶是否影响软骨细胞增殖、形态改变、细胞外基质相关基因和炎性基因的表达。塞来昔布是临床常见抗炎药，此次研究将观察塞来昔布是否通过调控凝血酶的作用而发挥抗炎功能。
当炎症反应发生时，软骨细胞发生增殖和向纤维样细胞形态改变[21]。作者发现凝血酶明显促进软骨细胞增殖，且软骨细胞向纤维样细胞形态改变，凝血酶此效应与白细胞介素1等炎症因子刺激后软骨细胞发生的改变相似[22]。
软骨细胞外基质主要由Ⅱ型胶原和蛋白聚糖构成，二者分布于软骨组织并形成立体结构，对细胞起到良好的保护作用[23]。炎症条件促进软骨细胞外基质合成减少。此次研究中发现，凝血酶下调了软骨细胞外基质中Ⅱ型胶原α1、聚集蛋白聚糖、弹性蛋白和软骨寡聚基质蛋白基因的表达。
在骨关节炎发生发展过程中，炎症因子和趋化因子同样发挥了重要作用。白细胞介素1不仅可以刺激软骨细胞合成基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶13等基质金属蛋白酶，促进基质的降解；还可以介导一氧化氮和白细胞介素6等基因的表达，抑制蛋白多糖的合成和胶原的产生，放大促炎作用[24-27]。肿瘤坏死因子α具有破坏蛋白聚糖分解代谢平衡的作用，其在细胞中的表达量与骨关节炎严重程度呈正相关。单核细胞趋化蛋白1和粒细胞趋化蛋白2可以诱导炎症因子的表达，激活单核细胞和巨噬细胞向炎症部位的趋化作用，参与炎症反应[28-29]。此外，环氧化酶2释放的前列腺素会促进基质金属蛋白酶表达，加剧软骨损伤[30-31]。此次实验结果显示，凝血酶上调了软骨细胞中白细胞介素1、肿瘤坏死因子α和单核细胞趋化蛋白3等炎症因子以及基质金属蛋白酶9、基质金属蛋白酶13和环氧化酶2等细胞外基质分解代谢基因表达。其中白细胞介素1、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α等在既往研究中已被证明是骨关节炎炎症反应中关键的炎症因子，此次研究发现凝血酶显著促进上述因子的表达[32-33]。
综上所述，提示凝血酶在软骨细胞退变的发生发展过程中起着决定性的作用。既往文献显示塞来昔布通过显著降低骨关节炎患者体外软骨细胞和白细胞介素1β诱导的软骨细胞中环氧化酶2、前列腺素E2、白细胞介素6、基质金属蛋白酶等基因的表达，抑制细胞炎症反应[34-35]。进一步机制研究发现，塞来昔布同样可明显抑制凝血酶的促软骨细胞增殖作用以及逆转纤维样形态改变，上调软骨细胞外基质基因的表达，下调炎症因子、趋化因子和分解代谢基因的表达。
此次实验分析了塞来昔布是否可以通过抑制凝血酶的促炎效应而发挥抗炎作用的机制，结果证实凝血酶的促炎作用体现在以下几个方面如促软骨细胞增殖、促分解代谢酶表达、促炎症因子表达和降解细胞外基质基因的表达，而塞来昔布在以上几个方面均发挥调控作用，提示塞来昔布可以抑制凝血酶的促炎作用，发挥抗炎作用。临床上患者长期服用塞来昔布可能增加消化不良、胃肠气胀和心肌梗死等疾病发生的风险。而凝血酶在骨关节炎患者血清中显著增加，同时在此次实验中证明是软骨炎症的关键性因子，因此凝血酶作为药物靶点筛选抗炎药成为一种可能。此研究的意义在于为骨关节炎治疗提供药物靶点，筛选出新药，从而治疗骨关节炎。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

塞来昔布抑制凝血酶诱导的大鼠软骨细胞退变

Celecoxib inhibits thrombin-induced chondrocyte degeneration in rats

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