沙苑子苷A对关节软骨细胞凋亡的影响

doi:10.12307/2025.339

中国组织工程研究 ›› 2025, Vol. 29 ›› Issue (8): 1541-1547.doi: 10.12307/2025.339

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沙苑子苷A对关节软骨细胞凋亡的影响

尹路1，蒋川锋1，陈俊杰1，易明1，王子赫1，石厚银2，汪国友2，沈骅睿2

1西南医科大学，四川省泸州市 646000；2西南医科大学附属中医医院，四川省泸州市 646000

收稿日期:2024-03-22 接受日期:2024-05-06 出版日期:2025-03-18 发布日期:2024-07-05
通讯作者: 沈骅睿，主任中医师，西南医科大学附属中医医院骨关节科，四川省泸州市 646000
作者简介:尹路，男，1997年生，四川省成都市人，汉族，西南医科大学在读硕士，主要从事骨与关节的基础与临床的研究。
基金资助:
泸州市人民政府-西南医科大学科技战略合作项目(2021LZXNYD-J31)，项目负责人：沈骅睿；四川省科技计划专项(2022YFS0609)，项目负责人：石厚银；四川省中医药管理局项目(2023MS446)，项目负责人：沈骅睿；2023年度西南医科大学校级科研项目(2023ZYYJ05)，项目负责人：沈骅睿

Effect of Complanatoside A on the apoptosis of articular chondrocytes

Yin Lu1, Jiang Chuanfeng1, Chen Junjie1, Yi Ming1, Wang Zihe1, Shi Houyin2, Wang Guoyou2, Shen Huarui2

1Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China; 2The Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China

Received:2024-03-22 Accepted:2024-05-06 Online:2025-03-18 Published:2024-07-05
Contact: Shen Huarui, Chief physician, The Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
About author:Yin Lu, Master candidate, Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
Supported by:
Luzhou Municipal Government Southwest Medical University Science and Technology Strategic Cooperation Project, No. 2021LZXNYD-J31 (to SHR); Sichuan Provincial Science and Technology Plan Special Project, No. 2022YFS0609 (to SHY); Project of Sichuan Provincial Administration of Traditional Chinese Medicine, No. 2023MS446 (to SHR); 2023 Southwest Medical University School-level Research Program, No. 2023ZYYJ05 (to SHR)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
沙苑子苷A：分子式为C28H32O16，是中药沙苑子中提取的含量较高的黄酮类成分之一。研究表明沙苑子苷A对肺上皮细胞、肝细胞具有保护和抗凋亡作用。
细胞凋亡：机体生理与病理情况下的细胞自主有序的死亡，凋亡的异常会导致慢性退行性疾病等。

背景：软骨细胞凋亡是骨关节炎发生发展的重要因素，沙苑子苷A具有类黄酮作用，可抑制多种细胞凋亡，但其对软骨细胞凋亡的影响及作用机制尚不明确。
目的：基于Wnt/β-catenin信号通路探讨沙苑子苷A与软骨细胞凋亡的内在关联及作用机制。
方法：①收集膝关节置换术中截取的股骨及胫骨部分软骨组织，体外分离培养及鉴定软骨细胞；②通过CCK-8检测沙苑子苷A在0-
160 μmol/L范围内是对软骨细胞的最佳干预浓度；③将软骨细胞分为空白组、硝普钠(1.5 mmol/L)诱导组、硝普钠(1.5 mmol/L)+沙苑子苷A
(5 μmol/L)组。采用CCK-8、流式细胞技术检测各组细胞活力、凋亡率；免疫荧光染色检测各组细胞中Ⅱ型胶原蛋白、SOX9表达；Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白及Wnt/β-catenin通路蛋白的表达。
结果与结论：①体外提取的细胞经培养、染色鉴定为软骨细胞；②沙苑子苷A在0-80 μmol/L浓度范围内对软骨细胞无明显细胞毒性，在2.5-10 μmol/L浓度范围内可明显提高软骨细胞活力，且当浓度为5 μmol/L时作用较为显著；③硝普钠诱导组软骨细胞凋亡率高于空白组，硝普钠+沙苑子苷A组的细胞凋亡率低于硝普钠诱导组；④硝普钠诱导组软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SOX9荧光强度弱于空白组，硝普钠+
沙苑苷A组Ⅱ型胶原蛋白、SOX9的荧光强度高于硝普钠诱导组；⑤硝普钠诱导组Bax、Caspase-3、基质金属蛋白酶13、Wnt3a、Wnt5a和β-catenin的蛋白表达量高于空白组，Bcl-2蛋白表达低于空白组；硝普钠+沙苑子苷A组除Bcl-2的蛋白表达高于硝普钠诱导组外，上述其他蛋白表达均低于硝普钠诱导组。结果表明沙苑子苷A对软骨细胞凋亡具有一定的抑制作用，可调节凋亡相关蛋白、促进软骨细胞调节因子表达，推测可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。
https://orcid.org/0009-0006-9016-2645(尹路)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 骨关节炎, 软骨细胞, 沙苑子苷A, 细胞凋亡, Wnt/β-catenin信号通路

Abstract: BACKGROUND: Chondrocyte apoptosis is an important factor in the development of osteoarthritis, and Complanatoside A has a flavonoid effect, which can inhibit apoptosis of various cells, but its effect on chondrocyte apoptosis and the mechanism of action are not clear.
OBJECTIVE: To investigate the intrinsic association and mechanism of Complanatoside A in chondrocyte apoptosis based on the Wnt/β-catenin signaling pathway.
METHODS: (1) The cartilage tissues of the femur and tibia transected during knee arthroplasty were collected, and chondrocytes were isolated, cultured in vitro, and identified. (2) Cell counting kit-8 was used to detect the optimal intervention concentration of Complanatoside A in the concentration range of 0-
160 μmol/L. (3) Chondrocytes were divided into blank group, sodium nitroprusside (1.5 mmol/L)-induced group, and sodium nitroprusside (1.5 mmol/L)+
Complanatoside A (5 μmol/L) group. The viability and apoptosis rate of the cells in each group were detected by cell counting kit-8 and flow cytometry. The expression of type II collagen and SOX9 was detected by immunofluorescence staining. The expression of apoptosis-related proteins and Wnt/β-catenin pathway proteins was detected by western blot assay.
RESULTS AND CONCLUSION: The cells extracted in vitro were cultured and stained, and were clearly identified as chondrocytes. Complanatoside A had no obvious cytotoxicity to chondrocytes in the concentration range of 0-80 μmol/L, and significantly improved the chondrocyte viability in the concentration range of 2.5-10 μmol/L, especially when the concentration was 5 μmol/L. The apoptotic rate of chondrocytes was higher in the sodium nitroprusside-induced group than the blank control group, while the apoptotic rate was lower in the sodium nitroprusside+Complanatoside A group than the sodium nitroprusside-induced group. The fluorescence intensity of type II collagen and SOX9 in chondrocytes was weaker in the sodium nitroprusside-induced group than the blank control group, while the fluorescence intensity of type II collagen and SOX9 in the sodium nitroprusside+Complanatoside A group was higher than that of the sodium nitroprusside-induced group. In the sodium nitroprusside-induced group, the protein expression of Bax, Caspase-3, matrix metalloproteinase 13, Wnt3a, Wnt5a and β-catenin was higher than that of the blank control group, while the protein expression of Bcl-2 was lower than that of the blank control group. In the sodium nitroprusside+Complanatoside A group, except for the protein expression of Bcl-2 which was higher than that of the sodium nitroprusside-induced group, the expression of the other aforementioned proteins was lower than that of the sodium nitroprusside-induced group. To conclude, Complanatoside A has a certain inhibitory effect on chondrocyte apoptosis, which could regulate apoptosis-related proteins and promote the expression of chondrocyte regulatory factors, and presumably might play a role through inhibiting the Wnt/β-catenin signaling pathway.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: osteoarthritis, chondrocyte, Complanatoside A, apoptosis, Wnt/β-catenin signaling pathway

中图分类号:

尹路, 蒋川锋, 陈俊杰, 易明, 王子赫, 石厚银, 汪国友, 沈骅睿. 沙苑子苷A对关节软骨细胞凋亡的影响[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(8): 1541-1547.

Yin Lu, Jiang Chuanfeng, Chen Junjie, Yi Ming, Wang Zihe, Shi Houyin, Wang Guoyou, Shen Huarui. Effect of Complanatoside A on the apoptosis of articular chondrocytes[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2025, 29(8): 1541-1547.

图/表（结果） 8

2.1 细胞形态观察原代细胞培养12 h后镜下可见较多圆形、半透明细胞及少量梭形细胞(图1 A)；培养24 h后较多细胞贴壁生长(图1B)；培养48 h后有更多细胞贴壁，形状更为丰满，呈现梭形、多边形(图1C)；1周左右原代细胞贴壁生长占培养皿底部70%-80%，细胞大多呈长梭形、多边形(图1D)。随着传代次数的增加，细胞的体积增大、细胞形态逐渐变得更为细长。两三代软骨细胞增殖速度相对较快，状态较好，因此选用两三代软骨细胞用于后期实验。

2.2 细胞甲苯胺蓝染色结果倒置显微镜下观察可见整个细胞呈现出蓝色，胞质为淡蓝色，胞核则呈现深蓝色，镜下视野中细胞均有着色，见图2。

2.3 沙苑子苷A对软骨细胞活力的影响结果所示沙苑子苷A在浓度0-80 μmol/L的范围内，各组软骨细胞的活力没有明显下降；而在2.5-10 μmol/L的浓度范围内，与空白组相比，细胞活力显著提高(P < 0.001)。当浓度在5 μmol/L时，与2.5，10 μmol/L相比活力增长更加明显(P < 0.05)，见图3。
2.4 沙苑子苷A对诱导凋亡软骨细胞活力的影响结果所示与空白组相比，经过硝普钠诱导处理过的软骨细胞活性显著降低(P < 0.001)；当使用沙苑子苷A干预后，软骨细胞活力提高，显著高于硝普钠诱导组(P < 0.01)，见图4。
2.5 沙苑子苷A对软骨细胞凋亡的影响结果所示硝普钠诱导组的细胞凋亡率显著高于空白组(P < 0.001)；硝普钠+沙苑子苷A组的细胞凋亡率显著低于硝普钠诱导组(P < 0.01)，见图5。

2.6 沙苑子苷A对软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SOX9表达的影响 Ⅱ型胶原蛋白、SOX9免疫荧光染色结果所示(图6，7)，Ⅱ型胶原蛋白、SOX9在3个组中均有一定的表达，硝普钠诱导组荧光强度低于空白组，硝普钠+沙苑子苷A

组荧光强度高于硝普钠诱导组。各组的荧光强度经Image J软件统一量化后结果所示(图8)，相较于空白组，硝普钠诱导组细胞的Ⅱ型胶原蛋白、SOX9的荧光都表现出下降趋势(P < 0.001)；与硝普钠诱导组相比，硝普钠+沙苑子苷A组Ⅱ型胶原蛋白、SOX9的荧光呈现出更高的水平(P < 0.05，P < 0.01)。
2.7 沙苑子苷A对软骨细胞凋亡相关蛋白的影响结果所示各组Bax、Bcl-2、Caspase-3和基质金属蛋白酶13蛋白均具有一定的表达。硝普钠诱导组Bax、Caspase-3和基质金属蛋白酶13的表达量显著高于空白组(P < 0.01，P < 0.001)，Bcl-2的表达明显低于空白组(P < 0.001)。硝普钠+沙苑子苷A组Bax、Caspase-3和基质金属蛋白酶13的表达量明显低于硝普钠诱导组(P < 0.05，P < 0.01)，Bcl-2的表达量显著高于硝普钠诱导组(P < 0.01)，见图9。

2.8 沙苑子苷A对软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路蛋白的影响见图10。

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引言

材料方法

1.1 设计细胞学实验，One-way ANOVA分析。
1.2 时间及地点实验于2023年1-12月在西南医科大学附属中医医院实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 骨关节软骨组织取材由西南医科大学附属中医医院骨关节科接受全膝关节置换手术的患者作为组织来源，收集膝关节置换手术中截取的股骨及胫骨部分软骨组织。该研究已经得到西南医科大学附属中医医院伦理委员会的批准，并且确保在整个研究过程中患者已经充分了解研究的内容并同意参与实验。伦理批件号：KY2022070-FS01。
1.3.2 实验试剂与仪器 DMEM/F12培养基购于Procell公司；FBS购于PAN公司；胰蛋白酶、青-链霉素、PBS、BCA 蛋白定量试剂盒购于Beyotime公司；沙苑子苷A购于瑞芬思公司(成都)；预染蛋白Marker、PAGE凝胶制备试剂盒、Omni-ECL超灵敏化学发光检测试剂盒、RIPA裂解液、蛋白酶抑制剂混合液均购于EpiZyme 公司；胶原酶Ⅱ购于Solarbio公司；SOX9 Antibody、Ⅱ型胶原蛋白 Antibody、荧光二抗、GAPDH、Bcl-2 Antibody、Bax Antibody、Caspase 3 Antibody、基质金属蛋白酶13 Antibody、Wnt3a Antibody、Wnt5a Antibody、β-Catenin Antibody、GoatAnti-Rabbit lgG (H+L)HRP均购于Affinity公司；硝普钠、10×TBST、DAPI 溶液、Triton X-100、封闭山羊血清均购于Solarbio公司；电泳缓冲液购于Biosharp公司；PVDF膜购于Bioder 公司；CO2细胞培养箱购于天津市莱玻特瑞仪器设备有限公司；生物安全柜购于济南鑫贝西生物技术有限公司；倒置相差显微镜购于NIKON CORPORATION；荧光显微镜购于北京新卓仪器有限公司；酶标仪购于美国Bio-Rad公司；流式细胞仪购于美国BD公司；化学发光成像系统购于成都君意华荣科技有限公司；电泳仪电源、垂直电泳槽、转膜槽购于伯乐医学产品(上海)有限公司。
1.4 实验方法
1.4.1 原代软骨细胞的提取及培养取术中收集的股骨及胫骨部分软骨组织，去掉血迹与多余的脂肪、筋膜和软骨下骨等组织，迅速将组织转移至实验室。在无菌工作环境中，使用尖锐的刀片将软骨组织削成薄的片状并用剪刀将其剪碎，碎块体积约为1 mm3，两步消化法进行消化处理。按软骨体积与胰蛋白酶 1∶3配比，添加适量的胰蛋白酶放入恒温振荡箱行20 min振荡消化；软骨体积与胶原酶Ⅱ按1∶4配比，加入适量0.2% 胶原酶Ⅱ振荡消化。使用200目滤网过滤并离心，去上清，重悬细胞，转移至培养皿培养。使用倒置显微镜动态观察细胞贴壁情况。根据培养情况两三天更换培养基，以保持细胞的正常贴壁生长。待细胞贴壁生长融合至90%时，行细胞传代培养。
1.4.2 细胞甲苯胺蓝染色选择贴壁生长状况较佳的第3代细胞，PBS洗涤细胞2次，加入胰蛋白酶消化，离心，去除上清，重悬细胞并计数。在6孔板中提前放置无菌玻片，将1×108 L-1浓度的细胞接种至6孔板中，每孔2 mL，制作细胞爬片。并进行甲苯胺蓝染色：每个孔中添加40 g/L的多聚甲醛1 mL，固定处理20 min。每孔加入500 μL甲苯胺蓝染色20 min。清洗细胞并脱色，封固，倒置显微镜下观察。
1.4.3 沙苑子苷A对软骨细胞活力的影响实验分组：空白组、实验组(不同浓度的沙苑子苷A浓度梯度：0.625，1.25，2.5，5，10，20，40，80，160 μmol/L)。将1×108 L-1浓度的软骨细胞接种于96孔板中，每孔100 μL。待细胞在培养皿底部贴壁生长达60%的生长汇合度后，分别用0，0.625，1.25，2.5，5，10，20，40，80，160 μmol/L沙苑子苷A处理细胞24 h，每孔加入CCK-8溶液10 μL，孵育2 h，酶标仪测定吸光度值(A值)，并计算细胞活力。细胞活力 (%)=(实验组-标准组) / (空白组-标准组)×100%。
1.4.4 实验分组及处理实验分组：空白组、硝普钠诱导组、硝普钠+沙苑子苷A组。将软骨细胞接种至孔板中。待细胞贴壁生长融合度达到80%，先用含5 μmol/L沙苑子苷A的完全培养基预处理硝普钠+沙苑子苷A组12 h。
然后，硝普钠诱导组和硝普钠+沙苑子苷A组再加入1.5 mmol/L硝普钠处理12 h。
1.4.5 沙苑子苷A对诱导凋亡软骨细胞活力的影响每孔加入10 μL的CCK-8溶液，孵育2 h，使用酶标仪测量A值，并计算细胞活力。
1.4.6 沙苑子苷A对诱导软骨细胞凋亡的影响收集各组细胞上清液，加入胰酶消化贴壁细胞。离心，去上清，PBS洗涤细胞2次，每组细胞加入Annexin Ⅴ-FITC/PI染料，混匀，避光孵育20 min，使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
1.4.7 沙苑子苷A对软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、Sox9的影响采用免疫荧光检测方法。每孔加入PBS洗涤细胞3遍，加入1 mL 40 g/L的多聚甲醛处理20 min；加入1 mL 0.5%TritonX-100处理20 min提高细胞膜通透性；加入1 mL体积分数5%山羊血清对软骨细胞封闭40 min；将500 μL的一抗Ⅱ型胶原蛋白/SOX9抗体(稀释浓度为1∶200)滴加在爬片上，放入4 ℃的孵化箱中孵化过夜；将500 μL的荧光二抗(稀释浓度为1∶100)滴加在爬片上，孵育1 h；最后每组滴加500 μL DAPI(稀释浓度为1 ∶ 100)孵育5 min；以上每一步骤完成后均用PBS清洗3遍；然后封固，避光荧光显微镜下观察，使用Image J测量荧光强度。
1.4.8 沙苑子苷A对软骨细胞相关凋亡蛋白及通路蛋白的影响采用Western blot检测方法。在细胞培养箱中取出培养板，将其放置在冰盒上，PBS缓慢洗涤细胞2次。加入PIPA细胞裂解液裂解细胞；按照BCA蛋白定量测定法检测各组蛋白浓度；然后进将蛋白样品和蛋白质预染Marker添加到样品槽后，开始电泳。配置好转膜液，将蛋白转至PVDF膜，转膜结束后放入5%脱脂奶粉中封闭，然后加入内参蛋白GAPDH抗体(1∶20 000)和目的蛋白Bax(1∶2 000)、Bcl-2、Caspase-3、基质金属蛋白酶13、Wnt3a、Wnt5a和β-catenin抗体(稀释浓度均为1∶1 000)孵育；加入二抗GoatAnti-Rabbit lgG (H+L)HRP抗体(1∶5 000)室温孵；最后曝光成像。
1.5 主要观察指标 ①细胞形态观察；②细胞甲苯胺蓝染色结果；③软骨细胞活力；④软骨细胞凋亡情况；⑤软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SOX9的表达；⑥凋亡软骨细胞相关蛋白的表达；⑦软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达。
1.6 统计学分析采用 Graphpad prism 9.5.1 软件进行统计学分析，所有数据均以x±s表示。对每个组的数据进行 One-way ANOVA 检验分析组间差异，若 P < 0.05则表明差异有显著性意义。该文章的统计学方法已经西南医科大学附属中医医院生物统计学专家审核。

讨论

关节软骨由软骨细胞及细胞外基质组成的，当软骨细胞功能下降、生存能力减弱时，关节软骨会失去正常的结构和功能，进而进一步发展为骨关节炎；此时软骨呈现低细胞性，且常出现空隙，并认为是软骨细胞的凋亡，也是骨关节炎发生和发展的基本特点之一[12]。软骨细胞可通过控制细胞外基质的合成和降解，对维持关节软骨的功能和结构起着重要作用。细胞外基质发挥着软骨组织的支架作用，其中Ⅱ型胶原蛋白是其主要成分，Ⅱ型胶原蛋白不仅在维持组织的软骨结构方面扮演着重要的角色，还参与软骨细胞的迁移、信号传导、增殖和凋亡等方面[13]。SOX9属于SOX蛋白家族成员，在软骨组织和生殖细胞中表达，也能调节软骨特异性的 Ⅱ型胶原蛋白的表达[14]。在肢体发育过程中，提高SOX9水平有助于抑制软骨细胞的肥大，并能够抑制软骨细胞的凋亡[15-16]。软骨细胞的凋亡与多种基因密切相关，其中Bcl-2家族成员可通过调节线粒体膜通透性来调控凋亡信号，因该家族成员的结构和功能的不同，可被分为抗凋亡或促生存成员、多结构域促凋亡成员和仅支持BH3促凋亡成员3类，其中抗凋亡成员包括Bcl-2、Bcl-Xl、Bcl-w等；而促凋亡成员则有Bax和Bak等[17-18]。Caspase家族是细胞凋亡中的关键分子，参与调控细胞凋亡[19]。Caspase-3作为Caspase家族的一员，当抑制其表达时软骨细胞的凋亡率也显著降低[20]。因此，软骨细胞凋亡的增加，常伴随促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的表达增强、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达下降[21]。基质金属蛋白酶具有水解Ⅱ型胶原蛋白的三重螺旋结构的特殊功能，维持正常软骨细胞外基质合成和降解之间的平衡[22]，其中基质金属蛋白酶13在骨关节炎软骨细胞的调节中起核心作用[23]，可通过特异性裂解胶原分子来破坏关节软骨的结构，导致软骨细胞凋亡和细胞外基质的降解，最终导致软骨受损[24]。
目前越来越多的研究者致力于研究骨关节炎软骨细胞的病理生理以寻找治疗骨关节炎的新方法。并以“肾主骨”理论为指导，探讨中医药对软骨细凋亡的作用机制。沙苑子在古今名方中运用广泛[25-29]，沙苑子苷A是沙苑子中特征性黄酮，是沙苑子黄酮主要成分，在2020年版《中国药典》中沙苑子苷A是对沙苑子药材和饮片的质控成分[8，30]，有研究者通过探讨其与细胞凋亡的相关性，证明沙苑子苷A具有提高肺上皮细胞存活率、抗小鼠小胶质细胞凋亡、降低视网膜感光细胞凋亡以及对肝细胞具有保护和抗凋亡作用[7-9]，推测沙苑子苷A可修复软骨细胞损伤，抑制软骨细胞凋亡。此次实验结果表明，沙苑子苷A干预后软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、Sox9的表达明显提高，调节细胞相关凋亡蛋白的表达，从而抑制软骨细胞凋亡，促进软骨组织修复，与推测结果一致。
Wnt/β-catenin信号通路在软骨细胞成熟和形成过程中起重要作用，已然成为骨关节炎研究的热点。既往研究证实Wnt通路在正常软骨中受到抑制，而其活化则可能促进骨关节炎的发生[31]。Wnt3a、Wnt5a是涉及骨关节炎发生发展的主要效应因子[32-33]。此外，该通路的异常激活还会引发异常基因和蛋白的表达，其中包括基质金属蛋白酶和蛋白聚醣酶在骨关节炎模型中的过度表达[33]，并且导致软骨细胞异常分化和软骨细胞外基质降解，而抑制它可以减少软骨细胞凋亡和软骨降解。Wnt/β-catenin信号通路是研究细胞程序性死亡的主要通路之一，也是目前体外研究软骨细胞凋亡重要的信号通路，该信号通路在软骨细胞生长过程中的作用明确，与细胞凋亡有着密切的联系。既往研究表明硝普钠能够诱发软骨细胞凋亡并刺激Wnt/β-catenin信号通道的活跃，这与此次实验中诱导的凋亡模型结果相契合。此次实验结果表明，软骨细胞经硝普钠凋亡诱导后，可增加Wnt3a、Wnt5a、β-catenin的表达，而通过沙苑子苷A的干预可以有效抑制硝普钠处理的骨关节炎软骨细胞中Wnt3a、Wnt5a和β-catenin的表达，表明沙苑子苷A可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路减少细胞凋亡，缓解骨关节炎进展。
此次研究的局限性：研究仅进行了细胞实验观察，缺少动物模型的进一步验证；结果虽然表明沙苑子苷A抑制软骨细胞凋亡作用可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的表达有关，但未设立通路激动剂和抑制剂实验进行对比或者反证。
综上所述，实验表明沙苑子苷A对软骨细胞凋亡具有一定的抑制作用，其机制可能是通过调节凋亡相关蛋白、促进软骨细胞调节因子表达及抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

沙苑子苷A对关节软骨细胞凋亡的影响

Effect of Complanatoside A on the apoptosis of articular chondrocytes

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