微囊化转基因骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养后的成骨分化潜能

doi:10.12307/2022.565

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (24): 3852-3857.doi: 10.12307/2022.565

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微囊化转基因骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养后的成骨分化潜能

尤武林1，黄桂成2，王建伟1

1南京中医药大学无锡附属医院关节骨科，江苏省无锡市 214071；2南京中医药大学，江苏省南京市 210023

收稿日期:2019-06-18 接受日期:2021-07-25 出版日期:2022-08-28 发布日期:2022-01-22
通讯作者: 王建伟，主任医师，教授，南京中医药大学无锡附属医院关节骨科，江苏省无锡市 214071
作者简介:尤武林，男，1983年生，安徽省颍上县人，汉族，2013年西安交通大学医学院毕业，博士，副主任医师，主要从事退行骨关节疾病的基础与临床研究，未来将长期致力于关节外科快速康复方面研究。
基金资助:
江苏省中医药科技发展计划项目(YB201943)，项目负责人：尤武林；无锡市卫健委中青年拔尖人才资助计划(BJ2020062)，项目负责人：尤武林；无锡市“科教强卫”青年医学人才资助项目(QNRC011)，项目负责人：尤武林

Osteogenic differentiation potential of microencapsulated transgenic bone marrow mesenchymal stem cells cocultured with osteoblasts

You Wulin1, Huang Guicheng2, Wang Jianwei1

1Department of Orthopedics, Wuxi Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine, Wuxi 214071, Jiangsu Province, China; 2Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, Jiangsu Province, China

Received:2019-06-18 Accepted:2021-07-25 Online:2022-08-28 Published:2022-01-22
Contact: Wang Jianwei, Chief physician, Professor, Department of Orthopedics, Wuxi Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine, Wuxi 214071, Jiangsu Province, China
About author:You Wulin, MD, Associate chief physician, Department of Orthopedics, Wuxi Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine, Wuxi 214071, Jiangsu Province, China
Supported by:
Science and Technology Planning Project of Traditional Chinese Medicine of Jiangsu Province, No. YB201943 (to YWL); Top Talent Support Program for Young and Middle-Aged People of Wuxi Health Committee, No. BJ2020062 (to YWL); Qiangwei by Science and Technology in Wuxi City Youth Medical Talent Funded Project, No. QNRC011 (to YWL)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
微囊：是一种球状微型容器，其外膜为一种半透膜，具有良好的免疫隔离作用，能解决免疫排斥反应和细胞来源不足的缺陷，在保护囊中细胞的同时允许细胞因子、营养物质等通过。因此，在细胞共培养中，微囊能够延长目的细胞的存活时间。
成骨微环境：主要由成骨细胞、生长因子、细胞外基质等构成，其中成骨细胞是重要组成部分，它可分泌多种生长因子以及钙基质等，这些调节分子对间充质干细胞向成骨细胞定向分化具有重要的促进作用。

背景：随着转基因技术的迅速发展，基因治疗和微囊化技术结合，形成微囊化基因给药技术。微囊化除了为干细胞生长提供良好的三维微环境，保证干细胞的大规模体外培养外，还可利用选择透过性膜将移植物与宿主免疫系统隔离，有效避免同种异体移植过程中的免疫排斥反应。
目的：观察微囊化转基因骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养后的增殖活性及成骨分化潜能。
方法：采用脉冲式高压静电微囊制备仪制备出APA-Foxc2-BMSCs微囊复合体，行吖啶橙/溴化乙锭双染色；共培养微囊化转基因骨髓间充质干细胞和成骨细胞，共培养3周，MTT检测细胞增殖能力；共培养1周，行碱性磷酸酶活性定量检测；共培养1，2周，行碱性磷酸酶定性检测及von Kossa染色；共培养2周，Western blot、Real time PCR检测成骨因子表达。
结果与结论：①吖啶橙/溴化乙锭染色见微囊内70%-80%的细胞染成绿色，镜下未见细胞逃出微囊及在囊外染色；破囊后重新培养的骨髓间充质干细胞生长良好；②微囊化共培养组碱性磷酸酶染色见胞浆内出现较多的棕褐色阳性颗粒，碱性磷酸酶活性显著升高，出现钙基质沉积；③微囊化共培养组Ⅰ型胶原、血小板衍生生长因子蛋白和mRNA表达显著升高；④结果表明，微囊化转基因骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养可增强骨髓间充质干细胞增殖活性，促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

https://orcid.org/0000-0002-2840-7094 (尤武林)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 骨髓间充质干细胞, 微囊化, 成骨细胞, 共培养, 增殖, 成骨分化

Abstract: BACKGROUND: With the rapid development of transgenic technology, gene therapy and microencapsulation technology are combined to form microencapsulated gene delivery technology. In addition to providing a good three-dimensional microenvironment for the growth of stem cells and ensuring the large-scale in vitro culture of stem cells, microencapsulation can also use selective permeability membranes to isolate the graft from the host immune system, and effectively avoid immune rejection during allogeneic transplantation.
OBJECTIVE: To observe proliferation activity and osteogenetic differentiation potential after coculture of microcapsuled genetically modified bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and osteoblasts.
METHODS: APA-Foxc2-BMSCs microcapsule complexes were prepared using pulsed high voltage electrostatic microcapsule preparation instrument. Acridine orange/ethidium bromide staining was conducted. Microencapsulated transgenic BMSCs and osteoblasts were cocultured. At 3 weeks after coculture, MTT assay was performed to detect cell proliferation. At 1 week, quantitative detection of alkaline phosphatase activity was performed. At 1 and 2 weeks, qualitative detection of alkaline phosphatase and von Kossa staining were conducted. At 2 weeks, western blot assay and real time PCR were performed to measure osteogenic factor expression.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Acridine orange/ethidium bromide staining demonstrated that 70%-80% of the cells in the microcapsule dyed green fluorescence. Under the microscope, cells did not escape from the microcapsule or stain outside the capsule. After breaking capsule, cultured BMSCs grew well again. (2) In the microencapsulated coculture group, alkaline phosphatase staining showed many tan particles in the cytoplasm. Alkaline phosphatase activity was significantly increased, and calcium matrix deposition appeared. (3) In the microencapsulated coculture group, expression of type I collagen, platelet-derived growth factor protein and mRNA significantly increased. (4) The results suggest that microcapsuled transgenic BMSCs cocultured with osteoblasts can strengthen BMSCs proliferation activity and promote BMSCs osteogenic differentiation.

Key words: bone marrow mesenchymal stem cells, microencapsulated, osteoblasts, coculture, proliferation, osteogenic differentiation

中图分类号:

尤武林, 黄桂成, 王建伟. 微囊化转基因骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养后的成骨分化潜能[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(24): 3852-3857.

You Wulin, Huang Guicheng, Wang Jianwei. Osteogenic differentiation potential of microencapsulated transgenic bone marrow mesenchymal stem cells cocultured with osteoblasts[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(24): 3852-3857.

图/表（结果） 11

2.1 微囊化骨髓间充质干细胞的生长形态如图1所示，光镜下观察载骨髓间充质干细胞的微胶囊形态完整、球形度好、表面光洁、囊与囊之间不粘连、分散性好，囊内细胞清晰可见，细胞在微囊内分布较均匀。如图2所示，微囊内细胞基本呈绿色，囊内细胞基本为活细胞，且细胞的存活率较高，微囊化并没有影响细胞存活。

2.2 化学破囊后的骨髓间充质干细胞再培养如图3所示，在荧光显微镜下可见骨髓间充质干细胞的细胞核、染色质着绿色并呈正常的长梭形结构，破囊后重新培养的骨髓间充质干细胞生长良好。

2.3 破囊后骨髓间充质干细胞茜素红染色结果将破囊后的骨髓间充质干细胞培养2周，对细胞进行成骨分化诱导培养。成骨诱导2，3 周利用茜素红染色观察钙结节，可见破囊后骨髓间充质干细胞有钙结节形成，且随着时间的延长而增加，见图4。

2.4 微囊化骨髓间充质干细胞和成骨细胞共培养共培养24 h时，微囊化骨髓间充质干细胞贴附在底部，成骨细胞降于骨髓间充质干细胞表面，两种细胞不直接接触。共培养期间底部贴壁细胞逐渐生长、融合，其细胞数量与微囊化骨髓间充质干细胞组无明显差别，而计数发现微囊内细胞密度与初始共培养时相比未有明显增高，见图5。

2.5 各组细胞增殖结果各组细胞增殖均经历潜伏期、对数生长期及平台期。共培养组骨髓间充质干细胞与其他两组相比，增殖明显加快，差异有显著性意义(P < 0.05)，其余两组相比，细胞增殖差异无显著性意义(P > 0.05)，见图6。

2.6 微囊化共培养对胞内碱性磷酸酶活性的影响在共培养的第 1，7，10，15天，各组细胞碱性磷酸酶活性变化见图7。

骨髓间充质干细胞组碱性磷酸酶活性一直处于较低水平，微囊化骨髓间充质干细胞组碱性磷酸酶活性水平和骨髓间充质干细胞组无明显差异，而经过成骨细胞的诱导，微囊化共培养组碱性磷酸酶活性呈现逐渐升高的趋势，明显高于其他两组，见图7。这说明共培养期间成骨细胞分泌的一些重要生长因子，透过微胶囊持续作用于骨髓间充质干细胞，促进骨髓间充质干细胞逐渐向成骨细胞分化，而微胶囊材料本身对骨髓间充质干细胞胞内碱性磷酸酶活性无显著影响。
共培养第 7，14天时进行碱性磷酸酶定性染色，微囊化共培养组细胞的胞浆内出现较多的棕褐色阳性颗粒，呈阳性表达；而骨髓间充质干细胞组以及微胶囊骨髓间充质干细胞组碱性磷酸酶表达则较低，呈弱阳性，见图8。

2.7 微囊化共培养对钙沉积的影响培养至第3周时，对各组细胞进行von Kossa染色，见图9。

共培养组贴壁细胞可见呈不规则形态、被染成黑色的结节以及分散的黑色颗粒，即von Kossa染色呈阳性；骨髓间充质干细胞组以及微囊化骨髓间充质干细胞组染色呈阴性，这说明经共培养诱导后的贴壁细胞可以分泌钙基质，出现钙基质沉积，这进一步证明了微囊化共培养使得骨髓间充质干细胞已经向成骨细胞方向分化，并具有成骨细胞的分泌功能，而微胶囊材料本身则对钙沉积无显著影响。
2.8 Western blot 及Real time PCR检测成骨因子的表达共培养2周，Western blot及Real time PCR 检测各组均有Ⅰ型胶原、血小板衍生生长因子的蛋白及mRNA表达，共培养组表达最高，与其他两组比较差异有显著性意义(P < 0.01)，见图10，11。

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引言

骨髓间充质干细胞因其具有多向分化潜能而常被用作组织工程的种子细胞[1-2]，其分化受到周围组织微环境的调控，而且在宿主体内，其修复效果不理想，并常伴有并发症[3]。
随着转基因技术的迅速发展，人们将微囊化技术和基因治疗结合，形成微囊化基因给药技术，微囊化除了为干细胞生长提供良好的三维微环境，保证干细胞的体外大规模培养外，还可利用选择透过性膜将移植物与宿主免疫系统隔离，有效地避免异体移植过程中的免疫排斥反应。骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化是一个复杂的过程，体外的定向诱导体系应建立于体内转化机制的基础上，即体外模拟体内“成骨微环境”[4]，才能获得具有正常生理功能的分化细胞。转基因骨髓间充质干细胞微囊化后，可持续分泌组织再生所需生长因子；同时，共微囊化利用其他细胞分泌的细胞因子促进骨髓间充质干细胞分化，增加细胞间信号传导。微囊内细胞呈高密度生长，利于保持其正常分泌功能[5]，并提高了囊内生长因子的浓度，使得囊内外浓度差增加，推动力增大，更有利于生长因子等向微囊外传递。DING等[6]用微囊包裹骨形态发生蛋白2基因转染的骨髓间充质干细胞，结果表明微囊化转基因干细胞生长良好，能持续分泌骨形态发生蛋白2并促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。BABISTER等[7]将 Sox-9基因转染的人间质祖细胞用微囊包裹后移植入宿主体内，可以促进软骨结构的形成，预示其有用于治疗骨折和骨缺损等疾病的前景。
该研究提出一种非接触式微囊化转基因的骨髓间充质干细胞体外定向分化为成骨细胞的新体系，利用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化转基因骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养，观察骨髓间充质干细胞生长增殖活性及成骨分化潜能。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计体外细胞实验，两组间均数比较采用 t 检验，多组间均数比较采用单因素方差分析。
1.2 时间及地点实验于2019年1-6月在南京中医药大学实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 2月龄健康纯种新西兰大白兔4 只，雌雄不限，体质量(3.0±0.3) kg，由南京中医药大学实验动物中心提供，实验动物使用许可证号：SYXK(苏)2018-0049。实验前适应性喂养1周。
1.3.2 实验试剂低糖DMEM、胎牛血清、胰蛋白酶、MTT (Gibco公司，美国)；海藻酸钠、多聚赖氨酸、柠檬酸钠、乳酸钙(Sigma公司，美国)；兔抗Ⅰ型胶原抗体、兔抗血小板衍生生长因子抗体(Santa Cruz 公司，美国)；抗β-actin二抗(Santa Cruz公司，美国)；碱性磷酸酶检测试剂盒(武汉博士德试剂公司，中国)；海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊发生器(上海理工大学研制)。
1.4 实验方法
1.4.1 骨髓间充质干细胞培养与鉴定采用全骨髓密度梯度离心法提取、培养骨髓间充质干细胞，并通过流式细胞仪检测表面抗原(CD34、CD44)和成脂、成骨诱导分化能力鉴定。

1.4.2 基因转染[8] 取生长状态良好的第 3 代骨髓间充质干细胞，待细胞达80%融合时，调整细胞浓度为1×109 L-1，用重组慢病毒LV-GFP以感染复数为10，50，100，200，300 转染细胞，3 d后倒置荧光显微镜下观察细胞荧光表达。40倍镜下，每孔细胞随机取3个视野，计数绿色荧光蛋白阳性细胞，计算绿色荧光蛋白阳性细胞百分率(即转染效率)，取均值。根据感染后细胞状况及转染率确定最佳感染复数，以最佳感染复数加入 Foxc2 基因慢病毒载体转染骨髓间充质干细胞，转染3 d。

1.4.3 海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化转基因骨髓间充质干细胞(APA-Foxc2-BMSCs)复合体的制备采用脉冲式高压静电微囊制备仪制备APA-Foxc2-BMSCs微囊复合体[9]。将Foxc2基因转染的骨髓间充质干细胞以1.5%海藻酸钠溶液重悬，调整细胞密度至1×106个/孔，加入注射器形成液滴，滴入2.0%CaCl2 溶液中形成胶珠；置于0.05%多聚赖氨酸溶液中反应5-10 min，浸入0.03%海藻酸钠溶液中5-10 min，PBS清洗，置于55 mmol/L柠檬酸钠溶液中使微囊液化，制备微囊化转基因骨髓间充质干细胞。微囊化骨髓间充质干细胞的计数方法：吸取1 mL微囊悬液，镜下见大多数微囊内的细胞已经释放出来，过200目筛网，去除微囊碎片，离心后重悬，应用细胞计数板计数，所得细胞数与微囊总体积之比即为骨髓间充质干细胞的浓度。
1.4.4 吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染色精确称取吖啶橙、溴化乙锭各1 mg，分别溶于10 mL pH 7.2的PBS中，使之配成100 mg/L的储备液，4 ℃保存，用前等量混合；取200 μL微囊化骨髓间充质干细胞悬液，加10 μL吖啶橙和溴化乙锭混合液，混匀后孵育30 s；取上述混合液1滴于洁净玻片上，加盖后立即置于荧光显微镜下观察。
1.4.5 破囊后细胞再培养取5 mL含微囊化骨髓间充质干细胞的低糖DMEM培养液，静置待微囊沉入管底，弃上清；加入5 mL破囊液破囊，30 s后终止；弃液，加入新鲜低糖DMEM培养液混悬，培养24 h后进行吖啶橙/溴化乙锭染色，荧光显微镜观察。
1.4.6 破囊后骨髓间充质干细胞成骨诱导将破囊后的骨髓间充质干细胞按1×104个/孔接种于24孔板中，待细胞70%融合时，换成骨诱导培养基(地塞米松1×10-8 mol/L、抗坏血酸50 mg/L，β-磷酸甘油钠10 mmol/L)诱导培养；2 d换液1次，共培养3周；按清洗-乙醇固定-染色程序进行茜素红染色。
1.4.7 微囊化骨髓间充质干细胞和成骨细胞的共培养将第5代成骨细胞[南京中医药大学实验室提供，购自基尔顿生物科技(上海)有限公司]消化并以 1×104/cm2的密度接种培养皿中，第3天时弃上清，加入预培养24 h的微囊化骨髓间充质干细胞，数量为成骨细胞的10倍，添加骨髓间充质干细胞培养液进行微囊化共培养3周，即微囊化共培养组。另设置单纯骨髓间充质干细胞组、微囊化骨髓间充质干细胞组。所有体系每 3 d半量换液1次，共培养组换液时保留全部微囊。
1.4.8 MTT 法检测骨髓间充质干细胞增殖情况共培养3周，收集各组骨髓间充质干细胞，用0.25%胰蛋自酶消化，加入 20 μL MTT溶液，孵育 4 h，终止培养，吸去孔内培养液，每孔加入150 μL二甲基亚砜，低速振荡10 min，使结晶物充分溶解，采用酶标仪检测490 nm波长处吸光度值，空白孔只加培养基并调零，连续检测 7 d，绘制生长曲线。
1.4.9 共培养骨髓间充质干细胞的成骨分化能力共培养1，7，10，15 d，取各组骨髓间充质干细胞，胰酶消化，超声破碎、离心后，行碱性磷酸酶活性定量检测；共培养7，14 d时，将各组骨髓间充质干细胞进行碱性磷酸酶定性染色；共培养3周，将各组骨髓间充质干细胞进行von Kossa染色。
1.4.10 Western blot、Real time PCR检测成骨因子表达共培养14 d，提取各组细胞总蛋白、离心、转膜、封闭，加入兔一抗Ⅰ型胶原、血小板衍生生长因子抗体，内参为β-actin，4 ℃过夜，洗膜，加入二抗后孵育 1 h，清洗、发光、显影及定影，图像分析仪分析目的蛋白条带灰度值。
共培养14 d，提取细胞总RNA，反转录为cDNA，利用PCR反应体系实时定量PCR操作，检测Ⅰ型胶原、血小板衍生生长因子表达，结果用mRNA的相对表达量表示，以GAPDH作为内参基因。引物序列，见表1。

1.5 主要观察指标 ①微囊化及破囊后骨髓间充质干细胞的生长状态；②微囊化骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化情况。
1.6 统计学分析采用SPSS 19.0统计软件分析，数据以x±s表示，两组间均数比较采用 t 检验，多组间均数比较采用单因素方差分析，P ≤ 0.05 为差异有显著性意义。

讨论

骨髓间充质干细胞被认为是细胞和基因治疗的理想靶细胞，其具有很强的增殖能力，且易于外源基因转染和表达。将转基因骨髓间充质干细胞微囊包裹后共培养，不仅可表达目的基因，也起到免疫隔离作用。实验证明，以外源基因为模板，免疫隔离细胞为微加工器，通过此方法生产治疗性重组蛋白的设想是可行的[10-11]。在实验中，微囊化细胞活力检测是一项重要指标，因为微囊化后细胞仍然存活是细胞移植治疗的前提条件。该实验采用吖啶橙/溴化乙锭双染色法检测微囊化细胞活力。骨髓间充质干细胞利用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹制成微囊复合体后，采用吖啶橙/溴化乙锭双染色证实微囊内的骨髓间充质干细胞状态良好，存活率为70%-80%。破囊后骨髓间充质干细胞培养具有明显规律性，表现为潜伏期、对数增长期、停滞期，与以往报道的骨髓间充质干细胞生长特性一致。
目前诱导骨髓间充质干细胞定向分化以条件诱导法、直接接触共培养法、非接触Transwell共培养诱导法3种较为常见[12-15]。每种方法均存在问题，条件培养法具有一定的毒性，与细胞接触会导致骨髓间充质干细胞发生变异，使用过程中存在一定的风险；直接接触共培养法是在一个体系中共培养诱导细胞与骨髓间充质干细胞，两种细胞紧密接触，不易分离，从而使骨髓间充质干细胞的纯度显著降低，临床应用中难度较大；Transwell虽然对骨髓间充质干细胞诱导过程中实现了两种细胞的分离，但无法大规模培养。对于成骨细胞与骨髓间充质干细胞共培养体系而言，由于细胞的增殖速度不同，成骨细胞增殖较快，培养液中的大量养分被其消耗，导致骨髓间充质干细胞无法良好增殖。作者通过微囊化技术共培养骨髓间充质干细胞和成骨细胞，利用MTT法检测细胞增殖良好。
该研究所用微囊是一种球状微型容器，囊膜壁壳由天然或合成的高分子材料制成，将药物、生物活性物质或活细胞包裹在内，形成具有半透性或密封囊的微小粒子。实验利用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹骨髓间充质干细胞，结果证明该微囊能有效防止外界免疫细胞的攻击。在一定条件下，贴壁培养纯化后的骨髓间充质干细胞可分化为成骨细胞、成软骨细胞[16-17]。该研究观察微囊化对骨髓间充质干细胞生长分化性状的影响，主要通过细胞生长形态和成骨分化等特性来判断。将微囊化骨髓间充质干细胞成骨诱导
后[9]，镜下显示细胞呈多角型改变，茜素红染色出现钙结节，微囊破膜后骨髓间充质干细胞具有成骨潜力。高纯度海藻酸钠制成的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊生物相容性好，稳定性增加，微囊结构存在相当多空隙[18]，骨髓间充质干细胞镶嵌在空隙中生长，生长良好，可保障后续实验使用。微囊化骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养期间，细胞分泌的一些重要生长因子促进骨髓间充质干细胞逐渐向成骨细胞分化，影响胞内定量碱性磷酸酶活性变化。
成骨细胞早期分化时，碱性磷酸酶阳性表达是其重要标志之一[19]。成骨分化程度与碱性磷酸酶活性正相关[20]，正常骨髓间充质干细胞中碱性磷酸酶表达较少，碱性磷酸酶高表达与细胞分化程度增高相一致。成骨细胞具有分泌多种蛋白及因子的作用，较常见的可分泌骨形态发生蛋白、碱性成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子等。研究表明，骨形态发生蛋白在体外培养下可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化 [21-22]。微囊化骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养后，在分泌的多种生长因子作用下，骨髓间充质干细胞于体外定向分化为成骨细胞。
总之，实验表明海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹转基因骨髓间充质干细胞后细胞成活良好，骨髓间充质干细胞在微囊内增殖分化，而干细胞特性没有发生改变，这为下一步体内移植实验提供了理论依据。
然而，微囊化转基因骨髓间充质干细胞的生长及分化或信号传导、调控研究较少；对于安全性的问题如微囊的回收效率、破损率等研究缺乏；干细胞分化的具体机制尚不明晰，体内实验文献较少。因此，后续实验将对微囊化干细胞移植深入研究。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

微囊化转基因骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养后的成骨分化潜能

Osteogenic differentiation potential of microencapsulated transgenic bone marrow mesenchymal stem cells cocultured with osteoblasts

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