明胶-胶原复合凝胶联合诱导因子调控大鼠骨髓间充质干细胞的肝向分化

doi:10.12307/2022.249

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (16): 2510-2515.doi: 10.12307/2022.249

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明胶-胶原复合凝胶联合诱导因子调控大鼠骨髓间充质干细胞的肝向分化

袁伊航，徐梦浛，牛旭锋

生物力学与力生物学教育部重点实验室，北京市生物医学工程高精尖创新中心，北京航空航天大学生物与医学工程学院，北京市 100083

收稿日期:2020-12-11 修回日期:2020-12-18 接受日期:2021-01-23 出版日期:2022-06-08 发布日期:2021-12-22
通讯作者: 牛旭锋，教授，生物力学与力生物学教育部重点实验室，北京市生物医学工程高精尖创新中心，北京航空航天大学生物与医学工程学院，北京市 100083
作者简介:袁伊航，女，1996 年生，北京市人，北京航空航天大学在读硕士，主要从事生物医用材料相关研究。
基金资助:
国家自然科学基金(11872097)，项目负责人：牛旭锋；北京市自然科学基金-海淀原始创新联合基金(L182017)，项目负责人：牛旭锋

Gelatin collagen composite hydrogel and inducible factor regulate differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells into hepatocyte-like cells

Yuan Yihang, Xu Menghan, Niu Xufeng

Key Laboratory of Biomechanics and Force Biology of Ministry of Education, Beijing Advanced Innovation Center for Biomedical Engineering, School of Biological Science and Medical Engineering, Beihang University, Beijing 100083, China

Received:2020-12-11 Revised:2020-12-18 Accepted:2021-01-23 Online:2022-06-08 Published:2021-12-22
Contact: Niu Xufeng, Professor, Key Laboratory of Biomechanics and Force Biology of Ministry of Education, Beijing Advanced Innovation Center for Biomedical Engineering, School of Biological Science and Medical Engineering, Beihang University, Beijing 100083, China
About author:Yuan Yihang, Master candidate, Key Laboratory of Biomechanics and Force Biology of Ministry of Education, Beijing Advanced Innovation Center for Biomedical Engineering, School of Biological Science and Medical Engineering, Beihang University, Beijing 100083, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 11872097 (to NXF), Beijing Natural Science Foundation-Haidian Original Innovation Joint Fund, No. L182017 (to NXF)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
凝胶：是高分子物质在一定条件下形成的具备空间网状结构的胶体物质，是一种特殊的分散体系，不具备流动性。凝胶制备通常通过交联来实现，常用作创伤敷料、药物载体和细胞载体等。
肝向分化：指干细胞向肝细胞方向分化，使细胞具备成为肝细胞的可能。

背景：体外人工肝系统已成为临床上非常有效且实用的肝衰竭治疗手段，但仍存在细胞来源有限和获得细胞的功能有限等问题。
目的：优化和筛选符合细胞生长需要的明胶-胶原复合凝胶，以复合凝胶为细胞生长的基底材料，探究诱导骨髓间充质干细胞肝向分化的方案。
方法：将明胶溶液与胶原溶液按照不同的体积比(1∶1、2∶1、4∶1)混合，分别制备明胶质量浓度为50，100，150，200 g/L的明胶-胶原复合凝胶，通过熔点、微观形貌、吸水率和孔隙率筛选溶液的体积比与明胶的质量浓度，进行后续实验。将大鼠骨髓间充质干细胞接种于复合水凝胶中(实验组)，以单独培养的细胞为对照，采用CCK-8法检测细胞增殖；采用两阶段分步诱导方案来诱导两组大鼠骨髓间充质干细胞的肝向分化，于诱导培养的3，7，14，21 d检测上清中白蛋白与尿素的水平。
结果与结论：①对比熔点、微观形貌、吸水率和孔隙率检测结果，当明胶溶液与胶原溶液按照4∶1体积比混合、明胶质量浓度为150 g/L时制备的复合凝胶最适宜用于细胞培养。②CCK-8检测显示，实验组培养1，3，5 d的细胞增殖活性低于对照组，此后两组间的差距逐渐减小，至10 d时已无差异。③肝向诱导分化实验显示，随着诱导时间的延长，两组白蛋白合成量逐渐增加，其中实验组14，21 d的白蛋白合成量高于对照组(P < 0.05)；两组诱导3-7 d内的尿素分泌量增幅较大，7 d后生成量趋于稳定，实验组14，21 d的尿素分泌量稍高于对照组，但差异无显著性意义(P > 0.05)。④结果表明，以明胶-胶原复合凝胶为细胞生长的基底材料联合诱导因子可诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞。
缩略语：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺：1-ethyl-3-(3-dimethyl aminopropyl) carbodiimide，EDC；N-羟基琥珀酰亚胺：N-hydroxysuccinimide，NHS

https://orcid.org/0000-0003-2669-2028 (牛旭锋)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 复合水凝胶, 人工肝, 骨髓间充质干细胞, 肝细胞, 诱导分化, 明胶, 胶原, EDC/NHS

Abstract: BACKGROUND: In vitro artificial liver system has become a very effective and practical treatment for liver failure, but there are still some problems such as limited source of cells and limited function of cells.
OBJECTIVE: To optimize and screen gelatin collagen composite hydrogel that meet the needs of cell growth, the hydrogel was used as the basal cell growth material to explore the scheme of inducing hepatic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells.
METHODS: Gelatin collagen composite hydrogel with gelatin concentration of 50, 100, 150, 200 g/L was prepared by mixing gelatin solution and collagen solution at different volume ratios (1:1, 2:1, 4:1). The volume ratio of the solution and the gelatin concentration were selected for subsequent experiments by melting point, microstructure, water absorption and porosity. Rat bone marrow mesenchymal stem cells seeded in composite hydrogel were used as experimental group; rat bone marrow mesenchymal stem cells cultured alone were used as controls. Cell proliferation was detected by CCK-8 assay. The two-step induction regimen was used to induce the hepatic differentiation of two groups of rat bone marrow mesenchymal stem cells. The levels of albumin production and urea secretion in the supernatant were tested at 3, 7, 14, and 21 days after induced culture.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) After testing the melting point, microscopic morphology, water absorption and porosity of the experimental groups with different ratios, the composite gel was most suitable for cell culture when the 150 g/L gelatin solution was mixed with collagen solution at 4:1 volume ratio. (2) CCK-8 assay showed that the proliferation activity of the experimental group was lower than that of the control group at 1, 3 and 5 days, and the difference between the two groups gradually decreased, and there was no difference at 10 days. (3) Experiment of hepatic differentiation showed that with the extension of induction time, the amount of albumin secretion in the two groups increased gradually, and the amount of albumin in the experimental group was higher than that in the control group at 14 and 21 days (P < 0.05). The amount of urea secretion in the two groups increased significantly within 3-7 days of induction, and stabilized after 7 days. The amount of urea secretion in the experimental group was slightly higher than that in the control group at 14 and 21 days, but the difference was not significant (P > 0.05). (4) The results showed that gelatin collagen composite hydrogel could induce rat bone marrow mesenchymal stem cells to differentiate into hepatocyte-like cells.

Key words: composite hydrogel, artificial liver, bone marrow mesenchymal stem cells, hepatocytes, induced differentiation, gelatin, collagen, EDC/NHS

中图分类号:

袁伊航, 徐梦浛, 牛旭锋. 明胶-胶原复合凝胶联合诱导因子调控大鼠骨髓间充质干细胞的肝向分化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(16): 2510-2515.

Yuan Yihang, Xu Menghan, Niu Xufeng. Gelatin collagen composite hydrogel and inducible factor regulate differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells into hepatocyte-like cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(16): 2510-2515.

图/表（结果） 7

2.1 凝胶熔点检测及配方筛选实验发现，明胶∶胶原体积比为 1∶1 的第一组在反应后无法在细胞培养条件下维持凝胶状态，不符合实验要求，故排除该组材料配比。
2.2 傅里叶红外光谱检测结果及配方筛选交联后同一大组内不同明胶浓度的红外谱图特征峰差异不大，故每大组各选取一个代表性样本谱图进行展示，见图1。经过交联的材料样本的红外谱图中，酰胺A键的特征吸收峰均较交联前有所增大，这说明各实验组的样本在加入EDC/NHS后均发生了交联反应，形成了分子间酰胺键，增强了材料的稳定性。

2.3 吸水率检测结果及配方筛选样本经筛选后测得的含水率，见表2。

在明胶和胶原体积比不变时，材料含水率随明胶质量浓度的增高总体呈下降趋势，部分浓度间差异不明显；而在明胶质量浓度不变时，明胶在混合凝胶中占比较高的实验组含水率较高。用于细胞培养时，含水率较高的材料吸水性能较好，能被培养基更充分地浸润，从而增强材料的细胞相容性；另一方面，含水率较高也能侧面反映出材料的孔隙率更大，更有利于细胞的吸附和生长。综合以上考量，排除第二组材料配比，后续实验中仅对第三组进行进一步表征。
2.4 扫描电镜表征结果及配方筛选样本孔隙率和孔隙结构结果，见图2。材料孔隙率随明胶质量浓度的升高显著减小，当明胶质量浓度为200 g/L时，由于明胶浓度过高材料表面已无明显的连通孔隙；当明胶质量浓度为50，100，150 g/L时，凝胶的孔隙分布与大小随明胶质量浓度的提高而逐渐均匀化，50 g/L组的孔隙结构松散且不规则、有大片连通破损的沟壑状结构；100 g/L组总体孔隙比较均匀，但仍有部分孔隙破损；150 g/L组孔隙大小一致且均匀分布，无明显可见的破损结构。出于细胞培养考虑，希望材料表面应在孔隙率较高的情况下尽量平整，故选取明胶与胶原体积比为4∶1、明胶质量浓度为150 g/L为制备凝胶的最终配方。

2.5 明胶-胶原复合凝胶的细胞毒性检测结果按筛选出的最终凝胶配方制备凝胶材料，随后预处理材料并用CCK-8检测材料的细胞毒性，结果，见图3。

实验组第1，3，5，7，10天相对于对照组的细胞活性比值分别为28.25%，53.10%，85.33%，88.41%，92.98%。采用明胶-胶原复合凝胶作为基底培养的大鼠骨髓间充质干细胞的活性略低于直接采用培养基培养的对照组，其中接种细胞的前5 d二者差值较大，5 d后差值逐渐缩小。结合二者细胞活性比值分析，在接种细胞后实验组与对照组的细胞活性差异逐渐减小，说明采用复合凝胶培养的细胞增殖速度高于对照组；接种后第5天，实验组的细胞活性为对照组的85.33%，随后至第10天已达对照组的92.98%，两组细胞活性已基本无差异。添加明胶-胶原复合凝胶的实验组在接种细胞初期的相容性略低于对照组，但实验组后续促进细胞增殖的能力较强，接种5 d后的细胞活性与对照组无明显差异，证明其细胞毒性较低。
2.6 肝向诱导实验白蛋白分泌水平检测结果空白组培养至21 d时细胞形态无变化且部分凋亡，故未展示其白蛋白分泌水平。实验组与对照组诱导不同时间点的白蛋白分泌水平检测结果，见图4。

两组在诱导开始的第1周内白蛋白分泌量较低，而在1周后快速增多，其中实验组第14，21天的白蛋白分泌量高于对照组。与正常肝细胞单位时间单个细胞白蛋白分泌量[约10 pg/(细胞·h)]相比[40-41]，诱导后1周内两组均与正常值有极显著差异；诱导第14天时，实验组和正常合成水平已无明显差异，而对照组仍和正常水平有显著差异；诱导第21天时，两组与正常水平均无明显差异。该结果说明，两组肝向诱导的大鼠骨髓间充质干细胞在加入诱导因子后均可分泌白蛋白，其合成量随诱导时间增加而逐渐增大；实验组定向诱导的大鼠骨髓间充质干细胞白蛋白分泌量增长更快。上述结果证明，实验所用的分步诱导方案能使大鼠骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化并行使物质合成功能，且明胶-胶原复合凝胶可促进其分化和白蛋白分泌。
2.7 肝向诱导实验尿素分泌水平检测结果空白组培养至21 d时细胞形态无变化且部分凋亡，故未展示其尿素分泌水平。实验组与对照组的尿素分泌水平检测结果，见图5。

由图5可知，两组在诱导开始初期尿素生成量增幅较大，诱导7 d后生成量趋于稳定，且两组间增长差异不大。与正常肝细胞单位时间单个细胞尿素生成水平[约8 pg/(细胞·h)]相比[42-43]，诱导第7天时，两组尿素生成量与正常值间差异较第3天时已显著减小，诱导14 d后与正常水平无明显差异。诱导7 d后，实验组尿素生成量在各时间点数值上均略高于对照组，但差异无显著性意义(P > 0.05)。上述结果证明，实验所用的分步诱导方案和明胶-胶原复合凝胶培养可使大鼠骨髓间充质干细胞向肝样细胞分化并生成尿素。
2.8 凝胶生物相容性由CCK-8实验结果可知，明胶-胶原复合凝胶具有良好的生物相容性。

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引言

胶原作为细胞外基质的主要成分常用作基底材料或微球载体[1-4]，以便细胞增殖分化和保持功能[5-11]。明胶是胶原的部分水解产物，存在细胞结合位点，酶解产物无毒且易被吸收[12-14]，因其良好的生物活性、温和的加工条件和易于修饰等特点而被广泛应用于组织工程领域[15]。将明胶和胶原按照不同比例复合可调节材料的孔隙率和力学强度[16]。交联是材料改性的常用手段[17]，在对生物材料的物质形态、各项力学强度、降解速率等性能有所要求时，除将多种材料进行混合外，也常通过交联的方式对材料进行改性，使其性能更符合要求。1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethyl aminopropyl) carbodiimide，EDC]和N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide，NHS)可作为化学交联剂，其细胞毒性低且无色无味，不额外增加交联产物的分子质量，是良好的生物材料交联剂[18-19]。肝移植存在供体来源受限和供体免疫原性的问题[20]。微米级的类器官和微组织在短时间内很难形成具有一定体积且结构功能完整的人工组织补体[21-22]。体外人工肝生物反应器因其短期内可进行细胞大量扩增的功能而有着不可替代的地位[23-24]，但因肝细胞数量不足、细胞活性低功能差和生物安全等问题而受限。骨髓间充质干细胞是理想的干细胞源[25-28]，其经过多种细胞因子诱导形成的肝细胞系具备再增殖性和治疗潜力[29-32]，可通过免疫应答来刺激细胞增殖并抑制凋亡[33]，主要反映在代谢产物检测和基因表达上[34-38]。实验将以大鼠骨髓间充质干细胞为干细胞源，研究其在明胶-胶原复合凝胶上的肝向分化能力，从而为体外人工肝的材料选择及细胞源选择提供可行的方案。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计材料与细胞学体外实验，析因设计，细胞相容性的显著性分析采用t检验。
1.2 时间及地点实验于2018年6月至2019年10月在北京航空航天大学生物与医学工程学院完成。
1.3 材料 A型明胶粉末(猪皮，sigma，USA)；碱性成纤维细胞生长因子重组蛋白、肝细胞生长因子重组蛋白、大鼠鼠尾Ⅰ型胶原溶液(R&D，USA)；牛血清白蛋白、低糖DMEM(Gibco，USA)；CCK-8试剂盒(碧云天，中国)；PBS(Solarbio，USA)；地塞米松、EDC、NHS(Sigma，USA)；胰蛋白酶(含EDTA，Genview，USA)；大鼠白蛋白ELISA试剂盒
(南京森贝伽，中国)；尿素ELISA试剂盒(南京森贝伽，中国)。
实验动物：1月龄雄性SD大鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0006。
1.4 方法
1.4.1 复合凝胶的明胶与胶原浓度配比实验设计了不同质量浓度的明胶及不同明胶-胶原比例分组，见表1。

根据分组，按比例向明胶溶液中加入胶原溶液，交联剂选用20 g/L的EDC/NHS，按照明胶-胶原混合溶液∶EDC∶NHS=12∶ 1∶1 的体积比加入。检查各组复合凝胶能否在细胞培养环境下保持凝胶状态，并对仍能成胶的实验组的性能进行进一步表征。
1.4.2 傅里叶红外光谱分析利用傅里叶红外光谱分析验证明胶-胶原复合凝胶的交联情况。由于明胶是胶原的部分降解产物，所以二者的化学结构类似，主干的典型波段都由酰胺Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ键和酰胺 A 键构成。若发生交联反应，分子间的氨基和羧基将形成酰胺键，其特征吸收峰应增大。
1.4.3 吸水率检测称量各样品的干质量md后，用 PBS使冻干样品溶胀，待样品充分吸水后称量其湿质量mw，计算其含水率，含水率(%)=(mw-md)/mw×100%。
溶胀后的含水率即可反映其吸水率，从而侧面反映其孔隙率。孔隙率较高的材料通常细胞黏附性和相容性较好。为了更好地进行细胞培养，选取吸水率较高的材料组别进行进一步表征。
1.4.4 扫描电镜检测材料孔隙率在扫描电镜下观察材料表面结构，从而比较各组材料的孔隙率差异，选取孔隙率较高、孔隙更规则的材料组别进行进一步表征。
1.4.5 骨髓间充质干细胞的原代培养与传代培养取1月龄雄性SD大鼠2只，采用引颈法处死，剥出股骨和胫骨，通过PBS漂洗、离心、分步加入培养基和Percoll工作液后重悬细胞、密度梯度离心等步骤获得细胞沉淀。向细胞沉淀中加入培养基，放入到体积分数5%CO2细胞培养箱中进行培养，每3 d用同种培养基换液。当皿中细胞融合度达到80%-90%时进行传代，按不同比例分装到各个培养皿，加入含有体积分数10%胎牛血清的低糖DMEM培养基将液体总量补足，放置于培养箱中进行培养，每隔3 d换液一次。
1.4.6 细胞搭载前的材料预处理进行细胞培养之前需对材料进行消毒和提高细胞相容性的预处理。先用体积分数75%乙醇溶液浸泡材料2 h，再用PBS浸泡2 h并重复3次，以尽量去除残留的乙醇溶液。用培养基浸泡材料并放于培养箱中过夜，使材料充分浸润。
1.4.7 明胶-胶原复合凝胶与干细胞共培养实验
CCK-8实验检测材料细胞毒性：将明胶-胶原复合凝胶涂布于24孔板底部，以未涂布的孔作为对照组，每组设4个复孔，向每孔接种 1 mL大鼠骨髓间充质干细胞悬液，细胞浓度为5×108 L-1，在37 ℃、体积分数5%CO2培养箱内培养。预设培养目标时间(1，3，5，7，10 d)后，除去孔中原有培养基，换液为每孔500 μL含10%CCK-8的培养基，避光孵育3 h；显色后，用移液枪从各孔中吸取100 μL上清液转移入 96 孔板，用酶标仪测定其在 450 nm 处的吸光度A值。通过比较实验组和对照组培养上清 A值的差异，即可得出材料的细胞毒性。
肝向诱导实验：明胶-胶原复合凝胶涂布于6孔板底，每孔接种 1 mL大鼠骨髓间充质干细胞悬液，细胞浓度为5×108 L-1，作为实验组；将骨髓间充质干细胞接种于空的6孔板内，作为对照组。当两组融合度达到60%-70%时开始第一阶段的诱导，加入20 µg/L的碱性成纤维细胞生长因子、10 µg/L的肝细胞生长因子，每2 d换液一次；诱导第6天时进行第二阶段诱导，加入10 µg/L的碱性成纤维细胞生长因子、20 µg/L的肝细胞生长因子、100 nmol/L的地塞米松，每2 d换液一次，持续诱导至第21天。以未添加材料与未肝向诱导的大鼠骨髓间充质干细胞为空白组，添加含体积分数10%胎牛血清的低糖DMEM培养基进行培养，每2 d换液一次。开始诱导后的第3，7，14，21天对细胞分化的情况进行表征，选取白蛋白和尿素作为对应功能的标志产物[39]。物质的合成均采用对应ELISA试剂盒对细胞培养上清进行分析。由于在预实验中仅依添加凝胶材料培养时细胞呈不定向分化，其具体分化特征难以逐一表征，故正式实验中不设纯材料组。
1.5 主要观察指标明胶-胶原复合凝胶的熔点、微观形貌、吸水率、孔隙率及细胞毒性，以及对骨髓间充质干细胞肝向诱导分化的影响。
1.6 统计学分析每个实验至少重复3次，每组设至少3个平行样，所有数据来源于独立的分离培养。检测计算结果均采用x±s的形式表示。显著性分析通过 SPSS 21.0软件进行t检验统计处理，P < 0.05视为差异有显著性意义。

讨论

常用的水凝胶基底材料有胶原、明胶、海藻酸钠、壳聚糖、聚乙烯醇、聚丙烯酸等，由于胶原具备细胞结合位点，胶原和明胶均具有良好的生物相容性和可降解性、制备条件温和易于加工等特性，二者的应用相对更为广泛。胶原在细胞外基质中以纤维晶体的形式存在，为细胞的生长环境提供力学支持，并辅助细胞的迁移和发育，动物体内Ⅰ-Ⅲ型胶原的含量最高，在生物领域和医药领域中应用最为广泛的是Ⅰ型胶原。
实验以明胶和胶原两种天然生物材料为主，通过对浓度配比和交联条件的测试与筛选，从而制备出一种满足细胞培养需求的复合凝胶材料。该凝胶材料吸水性能佳、孔隙率高，在细胞培养环境下仍能维持自身形态，且其细胞毒性较小，有一定的促进细胞增殖能力，说明材料符合骨髓间充质干细胞诱导分化的基底材料要求。
肝细胞生长因子能够刺激肝细胞增殖，在肝脏受到损害后启动肝再生的功能，同时还能调节多种细胞生长、运动和形态变化，在创伤愈合、器官再生、形态变化等方面发挥重要作用。碱性成纤维细胞生长因子能刺激细胞增殖，促进受损内皮和血管再生，具有较强的促修复功能。地塞米松是一种人工合成的皮质类固醇，能够促进肝细胞成熟，维持肝细胞功能，同时还具有抗毒、抗炎、免疫抑制等作用。
在目前的相关研究中，通过单细胞体外培养发育成类器官团块的研究所采用的培养基配方及诱导分化方案更优，所获得类器官的基因表达结果更接近成熟肝细胞，但功能上仍存在一定差距[5]。实验采用以肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和地塞米松为诱导因子的两个阶段分步诱导方案，可以成功实现大鼠骨髓间充质干细胞的肝向诱导，且明胶-胶原复合凝胶作为细胞基底可以促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖和肝向分化，该方案由体外诱导培养中成功获得了肝样细胞，其功能上基本接近正常细胞水平，但与成熟肝细胞相比仍具有一定差异。
在搭载细胞的体外人工肝研究中，如何实现肝细胞的大规模扩增和长期功能维持是当前亟待解决的问题。此次实验中探索得到的诱导培养方案可以通过大鼠骨髓间充质干细胞定向诱导获得肝样细胞，利用干细胞的增殖特性解决了前期扩增问题。胶原和明胶的等电点均可通过不同的制备工艺来调整[44]，可通过其带电性进一步改善材料特性，从而为细胞提供更好的物质呈递效果。在后续研究中，可利用明胶和胶原的上述特点，探究获得成熟肝细胞的培养方法，同时实现利用生物反应器对肝细胞进行大规模培养。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

明胶-胶原复合凝胶联合诱导因子调控大鼠骨髓间充质干细胞的肝向分化

Gelatin collagen composite hydrogel and inducible factor regulate differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cells into hepatocyte-like cells

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