富血小板纤维蛋白调控细胞凋亡修复大鼠膝骨关节炎损伤软骨

doi:10.12307/2024.511

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (32): 5167-5171.doi: 10.12307/2024.511

• 软骨组织构建 cartilage tissue construction • 上一篇下一篇

富血小板纤维蛋白调控细胞凋亡修复大鼠膝骨关节炎损伤软骨

侯增涛1，董志伟1，张金锋1，杨晓慧2，范筱2

1青岛市中医医院(青岛市海慈医院)，青岛大学附属青岛市海慈医院，骨关节外科与创伤外科中心，山东省青岛市 266033；2康复大学青岛医院(青岛市市立医院)骨关节外科，山东省青岛市 266011

收稿日期:2023-08-26 接受日期:2023-10-14 出版日期:2024-11-18 发布日期:2023-12-29
通讯作者: 范筱，博士，主治医生，康复大学青岛医院(青岛市市立医院)骨关节外科，山东省青岛市 266011 杨晓慧，护师，康复大学青岛医院(青岛市市立医院)骨关节外科，山东省青岛市 266011
作者简介:侯增涛，男，1978年生，山东省桓台县人，汉族，2014年青岛大学毕业，博士，副主任医师，主要从事骨与关节损伤的相关研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(82205149)，项目负责人：范筱；山东省医药卫生科技发展计划(202104070089)，项目负责人：侯增涛

Platelet-rich fibrin regulates apoptosis to promote cartilage repair in rats with knee osteoarthritis

Hou Zengtao1, Dong Zhiwei1, Zhang Jinfeng1, Yang Xiaohui2, Fan Xiao2

1Bone and Joint Surgery and Trauma Surgery Center, Qingdao Traditional Chinese Medicine Hospital (Qingdao Hiser Hospital), Qingdao Hiser Hospital Affiliated to Qingdao University, Qingdao 266033, Shandong Province, China; 2Department of Bone and Joint Surgery, Qingdao Hospital (Qingdao Municipal Hospital), University of Health and Rehabilitation Sciences, Qingdao 266011, Shandong Province, China

Received:2023-08-26 Accepted:2023-10-14 Online:2024-11-18 Published:2023-12-29
Contact: Fan Xiao, MD, Attending physician, Department of Bone and Joint Surgery, Qingdao Hospital (Qingdao Municipal Hospital), University of Health and Rehabilitation Sciences, Qingdao 266011, Shandong Province, China Yang Xiaohui, Senior nurse, Department of Bone and Joint Surgery, Qingdao Hospital (Qingdao Municipal Hospital), University of Health and Rehabilitation Sciences, Qingdao 266011, Shandong Province, China
About author:Hou Zengtao, MD, Associate chief physician, Bone and Joint Surgery and Trauma Surgery Center, Qingdao Traditional Chinese Medicine Hospital (Qingdao Hiser Hospital), Qingdao Hiser Hospital Affiliated to Qingdao University, Qingdao 266033, Shandong Province, China
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, No. 82205149 (to FX); Shandong Province Medical and Health Technology Development Plan, No. 202104070089 (to HZT)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin，PRF)：在2001年由法国科学家Choukroun等发现，是继富血小板血浆后第2代血小板浓缩制品，被定义为自体白细胞和富血小板纤维生物材料。其制备过程中未使用任何外源性添加物，避免了免疫排斥反应、交叉感染现象以及凝血功能障碍出现的风险，且其制备技术简化为一步离心。
富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)：是自体全血经离心后得到的血小板浓缩物。PRP中含有大量生长因子及蛋白质。

背景：富血小板纤维蛋白作为第2代血小板浓缩物具有操作简单、无抗凝剂、生物活性高等优点，已在创面修复、骨缺损修复、肌腱软组织修复等领域应用，并被证实具有一定的组织修复促进作用。

目的：研究富血小板纤维蛋白对膝骨关节炎大鼠关节软骨组织的修复作用。
方法：36只SD大鼠随机分为正常组、模型组和富血小板纤维蛋白组，每组12只；正常组大鼠不做任何处理；模型组大鼠制备膝骨关节炎模型，术后每周给予生理盐水关节腔注射1次；富血小板纤维蛋白组大鼠制备膝骨关节炎模型，术后每周给予自体富血小板纤维蛋白关节腔注射1次；连续治疗5周后取材。采用苏木精-伊红染色观察软骨组织形态，采用Tunel染色检测软骨细胞凋亡，采用ELISA检测炎性因子含量，采用Western blot及RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白和mRNA的表达。

结果与结论：①模型组软骨组织受损严重，富血小板纤维蛋白组软骨组织形态较模型组有显著改善；②模型组软骨细胞凋亡较多；富血小板纤维蛋白组Tunel染色阳性染色平均吸光度值显著降低(P < 0.01)；③与正常组比较，模型组和富血小板纤维蛋白组的白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α含量显著增加(P < 0.01)；与模型组比较，富血小板纤维蛋白组的白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α含量显著减少(P < 0.01)；④与正常组比较，模型组和富血小板纤维蛋白组Bax和Caspase-3蛋白和mRNA的相对表达量显著增加(P < 0.01)，而Bcl-2蛋白和mRNA的相对表达量显著减少(P < 0.01)；与模型组比较，富血小板纤维蛋白组Bax和Caspase-3蛋白和mRNA的相对表达量显著减少(P < 0.01)，而Bcl-2蛋白和mRNA的相对表达量显著增加(P < 0.01)；⑤结果说明，富血小板纤维蛋白可通过抑制促炎因子表达而抑制软骨细胞凋亡，从而促进膝骨关节炎大鼠软骨组织修复。

https://orcid.org/0009-0000-6164-4887(侯增涛)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 膝骨关节炎, 富血小板纤维蛋白, 炎症, 凋亡, 血小板浓缩物

Abstract: BACKGROUND: Platelet-rich fibrin (PRF) is a second generation platelet concentrate with the advantages of simple operation, no anticoagulant, and high bioactivity, which has been applied in the fields of trauma repair, bone defect repair, and tendon soft tissue repair, and has been proved to have a certain tissue repair-promoting effect.
OBJECTIVE: To study the repair effect of PRF on articular cartilage tissue in rats with knee osteoarthritis.
METHODS: Thirty-six Sprague-Dawley rats were randomly divided into normal group, model group, and PRF group, with 12 rats in each group. Rats in the normal group did not undergo any treatment. In the model group, animal models of knee osteoarthritis were prepared and rat models were then given physiological saline into the joint cavity once a week after surgery. Rat models of knee osteoarthritis were also prepared in the PRF group, and autologous PRF was injected into the joint cavity once a week after surgery. After 5 weeks of continuous treatment, tissue samples were taken. Hematoxylin-eosin staining was used to observe the morphology of cartilage tissue. Tunel staining was used to detect chondrocyte apoptosis, ELISA was used to detect inflammatory factor levels. Western blot and RT-PCR were used to detect Bcl-2, Bax, and Caspase-3 expression in protein and mRNA levels, respectively.
RESULTS AND CONCLUSION: The model group had severe cartilage tissue damage, while the PRF group had significantly improved cartilage tissue morphology compared with the model group. The model group had more apoptotic chondrocytes. Compared with the model group, the mean absorbance of Tunel positive staining in the PRF group significantly decreased (P < 0.01). The levels of interleukin-1β, interleukin-6 and tumor necrosis factor-α were significantly increased in the model group and PRF group compared with the normal group (P < 0.01) and were significantly decreased in the PRF group compared with the model group (P < 0.01). The relative expressions of Bax and Caspase-3 at protein and mRNA levels were significantly increased in the model group and PRF group compared with the normal group (P < 0.01), while the relative expressions of Bcl-2 at protein and mRNA were significantly decreased (P < 0.01). Compared with the model group, the relative expression of Bax and Caspase-3 at protein and mRNA levels were significantly decreased in the PRF group (P < 0.01), while the relative expressions of Bcl-2 at protein and mRNA levels were significantly increased (P < 0.01). To conclude, PRF can inhibit chondrocyte apoptosis by inhibiting the expression of pro-inflammatory factors, thereby promoting cartilage tissue repair in knee osteoarthritis rats.

Key words: knee osteoarthritis, platelet-rich fibrin, inflammation, apoptosis, platelet concentrate

中图分类号:

侯增涛, 董志伟, 张金锋, 杨晓慧, 范筱. 富血小板纤维蛋白调控细胞凋亡修复大鼠膝骨关节炎损伤软骨[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(32): 5167-5171.

Hou Zengtao, Dong Zhiwei, Zhang Jinfeng, Yang Xiaohui, Fan Xiao. Platelet-rich fibrin regulates apoptosis to promote cartilage repair in rats with knee osteoarthritis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(32): 5167-5171.

图/表（结果） 7

2.1 实验动物数量分析实验选用的36只SD大鼠，均无脱失，全部进入结果分析。
2.2 苏木精-伊红染色结果正常组关节软骨表面光滑平整，结构完整，形态规则，潮线清晰且完整；模型组关节软骨被破坏，表面失去光滑平整形态，结构不完整，软骨细胞排列紊乱，潮线中断且不清晰；PRF组关节软骨形态较模型组改善，虽有部分破坏但表面较光滑，软骨细胞排列较整齐，见图1。

2.3 Tunel染色结果 Tunel阳性染色呈棕褐色，正常组Tunel阳性染色较少，模型组和PRF组Tunel阳性染色较多。与正常组比较，模型组和PRF组Tunel阳性染色平均吸光度值显著增高(P < 0.01)；与模型组比较，PRF组Tunel阳性染色平均吸光度值显著减少(P < 0.01)，见图2，表2。

2.4 ELISA检测结果与正常组比较，模型组和PRF组软骨组织中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α含量均显著增高(P < 0.01)；与模型组比较，PRF组软骨组织中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α含量均显著降低 (P < 0.01)，见表3。

2.5 Western Blot检测结果正常组Bcl-2蛋白表达较多，而Bax和Caspase-3蛋白表达较少；模型组和PRF组Bcl-2蛋白表达较少，而Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达较多。与模型组比较，PRF组Bcl-2蛋白相对表达量显著增多，而Bax蛋白和Caspase-3蛋白相对表达量显著减少(P < 0.01)，见图3，表4。

2.6 RT-PCR检测结果与正常组比较，模型组和PRF组Bcl-2 mRNA相对表达量显著减少，而Bax 和Caspase-3 mRNA相对表达量显著增多(P < 0.01)；与模型组比较，PRF组Bcl-2 mRNA相对表达量显著增多，而Bax和Caspase-3 mRNA相对表达量显著减少(P < 0.01)，见表5。

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引言

骨关节炎是一种严重影响患者生活质量的关节退行性疾病，好发于负重大、活动多的关节，如手、髋、膝、脊柱等，其中以膝骨关节炎最为常见。研究表明，普通人群中大约有1/3的老年人存在膝骨关节炎，是导致老年人膝关节畸形、肿胀、疼痛甚至功能丧失的重要病因[1]。近年来，随着中国人口老龄化的加剧，膝骨关节炎的发病率亦日益增高。
目前认为，膝骨关节炎以关节软骨退行性变和继发性骨质增生为特征，其最早的病理变化发生在关节软骨[2-3]。临床上，保守治疗膝骨关节炎以口服非类固醇类药物以及氨基葡萄糖类药物应用最广泛，虽可以一定程度上缓解关节疼痛，但对于关节软骨修复并无显著作用，不能改善膝骨关节炎的退行性改变，无法延缓膝骨关节炎的进展。近年来，自体血液提取物的生物疗法成为治疗膝骨关节炎的新手段。研究表明，自体血液提取物，尤其是血小板浓缩物中含有大量的生长因子，具有极高的生物活性，且无免疫排斥风险和伦理学问题[4-5]。目前，常用于治疗膝骨关节炎的血小板浓缩物包括富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)、富血小板纤维蛋白(platelet-rich Fibrin，PRF)等。临床研究已证实，自体PRP关节腔注射对膝骨关节炎有明显的改善作用，可缓解膝骨关节炎患者的疼痛症状并在一定程度上改善关节功能[6-7]，
但是，PRP的提取需要使用抗凝剂，不利于组织修复与再生，影响其生物活性及临床疗效，限制了PRP的临床应用。PRF作为第2代血小板浓缩物具有操作简单、无抗凝剂、生物活性高等优点，已在创面修复、骨缺损修复、肌腱软组织修复等领域应用，并被证实具有一定的组织修复促进作用[8-9]。PRF中含有大量生长因子，包括血小板衍生生长因子、转化生长因子β、血管内皮生长因子等，具有有良好的抗炎、抗氧化应激以及抗凋亡作用。最新研究表明，PRF对炎症以及细胞凋亡有显著的调控作用，可有效抑制炎症反应及细胞凋亡，发挥良好的细胞保护作用[10-11]。但是，PRF对膝骨关节炎病理过程中的炎症和细胞凋亡的调控作用尚不清楚。
因此，该项研究利用PRF治疗大鼠膝骨关节炎以明确其对膝骨关节炎病理过程中炎症及细胞凋亡的调控作用，为PRF治疗膝骨关节炎提供理论依据，同时为进一步研究PRF治疗膝骨关节炎的机制提供研究基础。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。结果数据行单因素方差分析或秩和检验，并进行LSD分析或Game’s-Howell分析。
1.2 时间及地点实验于2022年6月至2023年3月在青岛市海慈医疗集团实验动物中心完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物及分组 36只体质量为(200±20) g的6月龄SPF级SD大鼠，雌雄不限，购于上海斯莱克实验动物公司，许可证号：SCXK(沪)2019-0006。大鼠饲养于青岛市海慈医疗集团实验动物中心，光照、黑暗各12 h，室温20-22 ℃，45%相对湿度，正常饲养7 d后进行实验。实验方法及过程符合青岛市海慈医疗集团伦理委员会要求(批号：20230918)。
1.3.2 主要试剂及仪器苏木精-伊红染色试剂盒(索莱宝，北京)；Tunel检测试剂盒、苏木素染液(Servicebio，武汉)；DAB显色试剂盒、白细胞介素1β ELISA试剂盒、白细胞介素6 ELISA试剂盒、肿瘤坏死因子α ELISA试剂盒(博士德，武汉)；Bax一抗、Bcl-2一抗、Caspase-3一抗(abcam，美国)；辣根过氧化酶二抗(碧云天)；qPCR相关试剂盒(诺唯赞，南京)；光学显微镜(LEICA，德国)、Image-lab图像分析系统和Image-Pro图像分析系统(BIORADHERCULES，美国)。
1.4 实验方法

1.4.1 大鼠膝骨关节炎模型制备根据参考文献制备大鼠膝骨关节炎模型[12]：将1%戊巴比妥钠以70 mg/kg剂量经腹腔注射麻醉大鼠。麻醉成功后，去除一侧后肢膝关节处毛发，局部以体积分数75%乙醇消毒，于膝关节内侧作1 cm直切口，暴露膝关节内的前交叉韧带，使用眼科剪将其剪断，行前抽屉试验示阳性后冲洗切口，缝合伤口，无菌敷料包扎。术后每日驱赶大鼠活动2次，每次30 min，连续活动4周后进行干预。

1.4.2 自体PRF制备使用一次性无菌无添加剂的真空塑料采血管从大鼠尾静脉采血3 mL，立即进行离心(700 r/min；60×g；3 min)。离心后仅获得2层：底部的红细胞和管顶部的液体PRF，分别约为7∶2，用5 mL无菌注射器抽取上层的PRF溶液备用。
1.4.3 动物分组与处理采用随机数表法将大鼠随机分为正常组、模型组和PRF组，每组12只。正常组大鼠正常饲养，不做任何处理；模型组大鼠制备膝骨关节炎模型，连续活动4周后给予生理盐水0.3 mL关节腔注射，每周1次，连续干预5周；PRF组大鼠同样制备膝骨关节炎模型，连续活动4周后给予PRF 0.3 mL关节腔注射，每周1次，连续干预5周。
1.4.4 取材干预5周后，每组取6只大鼠采用全身灌注取材，将股骨浸泡于40 g/L多聚甲醛中，经脱钙处理后进行包埋，制成石蜡包块；剩余6只大鼠直接取材，取股骨软骨放入EP管中，-80 ℃保存。
1.4.5 苏木精-伊红染色将5 μm厚软骨组织石蜡切片脱蜡入水，浸泡于苏木素染色液中染色5 min，冲洗后1%盐酸乙醇分化5 s，返蓝，浸入伊红染液中染色3 min，PBS冲洗后乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封固后于光学显微镜下观察。
1.4.6 Tunel染色将5 μm厚软骨组织石蜡切片脱蜡入水，滴加蛋白酶K工作液，37 ℃温箱孵育20 min。洗涤3次，每次5 min，滴加内源性过氧化物酶阻断剂，室温避光孵育20 min，洗涤3次，每次5 min，稍甩干后滴加buffer常温孵育10 min，去掉平衡液，根据试剂盒说明书滴加Recombinant TdT enzyme、Biotin-dUTP Labeling Mix、Equilibration Buffer混合液，37 ℃温箱孵育1 h，加Streptavidin-HRP反应液，37 ℃温箱孵育30 min，DAB显色，苏木素复染细胞核，脱水透明封固，显微镜观察。
1.4.7 ELISA检测取新鲜软骨组织研磨后，按照ELISA试剂盒说明书操作，使用酶标仪在450 nm处测吸光度值，计算髓组织中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平。
1.4.8 Western Blot检测取新鲜软骨组织充分研磨后加入裂解液，应用BCA法计算蛋白浓度，行蛋白质定量。然后依次进行蛋白变性、SDS-PAGE 凝胶电泳分离、转膜、封闭后，加入一抗(Bax、Bcl-2、Caspase-3，稀释比例为1∶1 000)和辣根过氧化酶二抗(1∶1 000)，漂洗后开始显影，凝胶扫描成像系统进行分析。
1.4.9 qPCR检测取新鲜软骨组织，充分研磨后提取总RNA并检测其浓度，设计引物序列，设置反转录反应体系，RNA反转录为cDNA，实时荧光定量PCR反应，变性96 ℃ 15 s、退火50 ℃ 40 s、延伸75 ℃ 30 s，循环40次，检测相关mRNA表达情况。引物序列详见表1。

1.5 主要观察指标 ①大鼠软骨组织形态；②软骨细胞凋亡情况；③软骨组织炎性因子水平；④软骨组织Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA和蛋白表达。
1.6 统计学分析采用SPSS 22.0统计分析数据，以x±s表示数据。正态分布数据行单因素方差分析，方差齐则LSD分析，方差不齐则Game’s-Howell分析；不符合正态分布数据行秩和检验，以P < 0.05为差异有显著性意义。该研究的统计学方法已经青岛大学附属海慈医院统计学专家审核。

讨论

作为常见的关节退行性疾病，关节软骨损伤是膝骨关节炎发生和发展的重要病理因素。软骨细胞作为软骨组织的特化性细胞，对于维持软骨组织正常的形态结果及生理功能有极其重要的作用[13]。研究发现，膝骨关节炎患者的软骨组织中可观察到明显的软骨破坏及软骨细胞凋亡，软骨细胞凋亡是导致软骨组织受损的重要病理反应[14]。进一步研究发现，炎症是诱发软骨细胞凋亡进而导致软骨细胞损伤发生发展为膝骨关节炎的重要病理机制[15-16]。膝骨关节炎患者的关节液中存在大量的促炎因子，包括白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α等，使患者的膝关节长期处于慢性炎症环境[17-18]。此次研究结果亦证实，膝骨关节炎大鼠的软骨组织中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α含量显著增高，提示膝骨关节炎大鼠的软骨组织中存在显著的炎症反应。慢性炎症环境导致的软骨细胞凋亡是膝骨关节炎持续性进展的重要病理因素。动物实验证实，膝骨关节炎模型动物的软骨组织存在大量促炎细胞因子表达上调以及Bax、Bcl-2以及Caspase家族表达紊乱的现象，促炎细胞因子可通过多条凋亡相关信号通路诱导Bax高表达和Bcl-2低表达继而影响Caspase家族蛋白表达，最终导致细胞凋亡发生[19-21]。
此次研究结果进一步证实，随着膝骨关节炎大鼠的膝关节软骨组织中存在大量的促炎因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的同时，软骨组织中Bax表达和Caspase-3异常增高，而Bcl-2表达异常减少，大量软骨细胞凋亡，发生关节软骨损伤，这与上述前期研究的结果相一致。这提示通过抑制炎症继而调控软骨细胞凋亡是改善膝骨关节炎发生发展的重要思路，针对膝骨关节炎的慢性炎症及软骨细胞凋亡进行干预可有效改善关节软骨组织形态与结构，延缓关节软骨退变，达到延缓膝骨关节炎发展的目的。
PRF作为第2代血小板浓缩物，较第1代血小板浓缩物——PRP具有更简单的制备方法，离心过程中不需要抗凝剂，可产生三维纤维蛋白基质，其中的多种生长因子缓慢释放，可促进组织损伤修复[22-25]。目前，PRF已在口腔医学领域、创面修复领域以及整形修复医学领域广泛应用，具有操作简单、价格低廉、来源于自身血液生物安全性高、缓释多种生长因子且修复作用明确的优点。临床研究证实，PRF可以有效修复髁突缺损骨质，缓解颞下颌骨关节炎患者的临床症状，包括疼痛、张口度等情况[26]。动物实验发现，PRF可以有效修复膝骨关节炎模型兔的软骨损伤，改善软骨组织形态，提升软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白的含量[27]。
此次研究结果发现，PRF关节腔注射治疗可有效降低膝骨关节炎大鼠软骨组织中促炎因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α含量，改善软骨组织形态，促进膝骨关节炎大鼠软骨修复。现已证实，PRF中的多种生物活性因子对于成纤维细胞分化、抑制炎症、促进细胞外基质及胶原蛋白合作和血管新生均有显著调控作用[28-30]。因此，包括多种生长因子在内的生物活性因子是PRF促进软骨损伤修复延缓膝骨关节炎的重要物质基础，推测PRF抑制膝骨关节炎炎症的作用与其中生物活性因子有关。炎症对软骨细胞凋亡有重要的调控作用。研究表明，Bax/Caspase3信号通路是细胞凋亡的重要信号通路之一，也是炎症诱导软骨细胞凋亡主要途径[31]。炎症作为细胞凋亡的启动因素，白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α等促炎因子可促进促凋亡因子Bax表达并抑制抗凋亡因子Bcl-2表达，从而导致Bax/Bcl-2失衡，激活Bax/Caspase3信号通路，导致大量Caspase3表达并活化，发挥促进细胞凋亡的作用[32]。因此，此次进一步研究了PRF对膝骨关节炎大鼠软骨组织中凋亡相关因子Bax、Bcl-2以及Caspase-3表达的影响，结果发现，PRF可显著调控膝骨关节炎大鼠软骨组织中Bax、Bcl-2以及Caspase-3的异常表达，抑制软骨细胞凋亡。鉴于白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α对Bax/Caspase3凋亡关键信号通路的调控作用，作者认为PRF改善膝骨关节炎大鼠软骨组织形态与抑制炎症调控软骨细胞凋亡有关。这进一步丰富了PRF促进软骨损伤修复的相关作用机制。
但是，此次研究亦存在不足之处：主要包括未研究PRF中生长因子成分对软骨损伤修复的作用，亦未从细胞水平研究PRF对软骨细胞凋亡的调控作用，这均是日后进一步研究的重点。总而言之，PRF可以通过抑制炎症调控软骨细胞凋亡继而促进膝骨关节炎软骨损伤修复，具有良好的临床应用前景。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

富血小板纤维蛋白调控细胞凋亡修复大鼠膝骨关节炎损伤软骨

Platelet-rich fibrin regulates apoptosis to promote cartilage repair in rats with knee osteoarthritis

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