铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化

doi:10.12307/2024.202

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (8): 1168-1173.doi: 10.12307/2024.202

• 皮肤粘膜组织构建 skin and mucosal tissue construction • 上一篇下一篇

铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化

沈江涌1，贺茜1，2，唐玉婷1，2，王建军1，2，刘金毅1，2，陈园园1，2，王昕艺1，2，刘彤1，2，孙浩原1，2

1宁夏医科大学总医院烧伤整形美容科，宁夏回族自治区银川市 750004；2宁夏医科大学，临床医学院，宁夏回族自治区银川市 750004

收稿日期:2022-12-20 接受日期:2023-02-08 出版日期:2024-03-18 发布日期:2023-07-18
通讯作者: 沈江涌，博士，副教授，主任医师，宁夏医科大学总医院烧伤整形美容科，宁夏回族自治区银川市 750004
作者简介:沈江涌，男，1976年生，宁夏回族自治区银川市人，汉族，博士，副教授，主任医师，主要从事病理性瘢痕形成的机制研究。贺茜，女，1995年生，湖南省湘潭市人，汉族，宁夏医科大学在读硕士，主要从事病理性瘢痕形成的机制研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81860555)，项目负责人：沈江涌；宁夏高等学校一流学科建设(宁夏医科大学国内一流建设学科临床医学)资助项目(NXYLXK2017A05)，项目负责人：沈江涌

RAS-selective lethal small molecule 3 inhibits the fibrosis of pathological scar fibroblasts

Shen Jiangyong1, He Xi1, 2, Tang Yuting1, 2, Wang Jianjun1, 2, Liu Jinyi1, 2, Chen Yuanyuan1, 2, Wang Xinyi1, 2, Liu Tong1, 2, Sun Haoyuan1, 2

1Department of Burn and Plastic Surgery, General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China; 2School of Clinical Medicine, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China

Received:2022-12-20 Accepted:2023-02-08 Online:2024-03-18 Published:2023-07-18
Contact: Shen Jiangyong, Department of Burn and Plastic Surgery, General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China
About author:Shen Jiangyong, MD, Associate professor, Chief physician, Department of Burn and Plastic Surgery, General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China He Xi, Master candidate, Department of Burn and Plastic Surgery, General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China; School of Clinical Medicine, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, No. 81860555 (to SJY); First-class Discipline Construction Project in Ningxia Colleges and Universities (Construction of Domestic First-Class Discipline Clinical Medicine in Ningxia Medical University), No. NXYLXK2017A05 (to SJY)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3：可以结合并使谷胱甘肽过氧化物酶4失活，介导谷胱甘肽过氧化物酶4所调节的铁死亡。
谷胱甘肽过氧化物酶4：其可以作为判断铁死亡的重要指标之一。

背景：病理性瘢痕主要表现为异常的细胞外基质积累和过度的成纤维细胞增殖，成纤维细胞过度增殖就会产生大量以胶原纤维为主的细胞外基质。因此深入探讨成纤维细胞纤维化在病理性瘢痕形成中的作用，将为揭示病理性瘢痕的机制和生物学治疗提供新思路。

目的：探讨铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3(RAS-selective lethal small molecule 3，RSL3)对人病理性瘢痕成纤维细胞纤维化的影响。
方法：收集10例宁夏医科大学总医院烧伤整形美容科提供的病理性瘢痕组织和同一个体正常皮肤组织，提取人病理性瘢痕成纤维细胞和人正常皮肤成纤维细胞用于后续实验；苏木精-伊红染色观察病理性瘢痕组织和正常皮肤组织的形态；倒置显微镜观察病理性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞的外观形态；免疫荧光实验验证所提取的细胞是否为成纤维细胞；用不同浓度的RSL3(1，3，5，7，9，11，13 μmol/L)干预细胞，CCK-8法检测RSL3作用于成纤维细胞的半数抑制浓度(IC50)；设置对照组(不做处理)和RSL3干预组(用7 μmol/L的RSL3干预细胞24 h)，qRT-PCR和Western blot检测谷胱甘肽过氧化物酶4、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的mRNA和蛋白的表达；检测细胞丙二醛浓度；划痕试验检测细胞划痕后24 h剩余划痕面积，并计算剩余划痕面积百分比。

结果与结论：①与正常皮肤组相比，病理性瘢痕组的谷胱甘肽过氧化物酶4高表达(mRNA：t=3.252，P < 0.01；蛋白：t=5.075，P < 0.01)；②与正常皮肤成纤维细胞组相比，病理性瘢痕成纤维细胞组的谷胱甘肽过氧化物酶4高表达(mRNA：t=10.32，P < 0.01；蛋白：t=26.22，P < 0.01)；③与对照组相比，RSL3干预组谷胱甘肽过氧化物酶4表达减少(mRNA：t=2.798，P < 0.05；蛋白：t=4.643，P < 0.01)，丙二醛浓度上升(t=2.917，P < 0.05)，Ⅰ型胶原蛋白(mRNA：t=15.84，P < 0.01；蛋白：t=4.610，P < 0.01)、Ⅲ型胶原蛋白(mRNA：t=28.86，P < 0.01；蛋白：t=7.713，P < 0.01)和α-平滑肌肌动蛋白(mRNA：t=2.671，P < 0.05；蛋白：t=7.417，P < 0.01)的表达减少，迁移能力减弱(t=14.06，P < 0.01)；④提示RSL3通过抑制谷胱甘肽过氧化物酶4的表达，进而抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化和迁移能力。

https://orcid.org/0000-0002-2214-5898(沈江涌)；https://orcid.org/0000-0001-7859-0221(贺茜)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 病理性瘢痕, 成纤维细胞, RSL3, 谷胱甘肽过氧化物酶4, α-平滑肌肌动蛋白, Ⅰ型胶原蛋白, Ⅲ型胶原蛋白, 铁死亡, 纤维化

Abstract: BACKGROUND: Abnormal extracellular matrix accumulation and excessive proliferation of fibroblasts are the main manifestations of pathological scars. Excessive proliferation of fibroblasts leads to the production of large amounts of collagen-based extracellular matrix. Therefore, to investigate the role of fibroblast fibrosis in the formation of pathological scar will provide a new idea for revealing the mechanism of pathological scar and biological therapy.
OBJECTIVE: To investigate the effect of RAS-selective lethal small molecule 3 (RSL3) on the fibrosis of human pathological scar fibroblasts.
METHODS: Then cases of pathological scar tissue and normal skin tissue samples from the same individuals, provided by the Department of Burn Plastic Surgery, General Hospital of Ningxia Medical University, were collected. Fibroblasts of human pathological scar and human normal skin were extracted and used in the following experiments. The general condition of the pathological scar tissue and the normal skin tissue was detected by hematoxylin-eosin staining. The appearance of fibroblasts from pathological scar and normal skin were observed by inverted microscope. The fibroblasts were verified by immunofluorescence assay. The cells were treated with different concentrations of RSL3 (1, 3, 5, 7, 9, 11, 13 μmol/L). The inhibitory concentration of RSL3 on fibroblasts was detected by cell counting kit-8. Control group (without treatment) and RSL3 intervention group (treated with 7 μmol/L RSL3 for 24 hours) were set up. The mRNA and protein expressions of glutathione peroxidase 4, type I collagen, type III collagen and α-smooth muscle actin were detected by qRT-PCR and western blot, respectively. Level of malondialdehyde in cells was detected. The residual scratch area was measured by cell scratch test after 24 hours to calculate the percentage of residual scratch area.
RESULTS AND CONCLUSION: The expression of glutathione peroxidase 4 in the pathological scar group was higher than that in the normal skin group (mRNA: t=3.252, P < 0.01; protein: t=5.075, P < 0.01). The expression of glutathione peroxidase 4 in the pathological scar fibroblast group was higher than that in the normal skin fibroblast group (mRNA: t=10.32, P < 0.01; protein: t=26.22, P < 0.01). Compared with the control group, the expression of glutathione peroxidase 4 was decreased (mRNA: t=2.798, P < 0.05; protein: t=4.643, P < 0.01), the content of malondialdehyde was increased (t=2.917, P < 0.05), the expression of type I collagen (mRNA: t=15.84, P < 0.01; protein: t=4.610, P < 0.01), type III collagen (mRNA: t=28.86, P < 0.01; protein: t=7.713, P < 0.01) and α-smooth muscle actin (mRNA: t=2.671, P < 0.05; protein: t=7.417, P < 0.01) were decreased in the RSL3 intervention group. Compared with the control group, the migration ability was weakened in the RSL3 intervention group (t=14.06, P < 0.01). To conclude, RSL3 can inhibit the expression of glutathione peroxidase 4 and then inhibit the ability of fibrosis and migration of pathological scar fibroblasts.

Key words: pathological scar, fibroblast, RSL3, glutathione peroxidase 4, α-smooth muscle actin, type I collagen, type III collagen, ferroptosis, fibrosis

中图分类号:

沈江涌, 贺茜, 唐玉婷, 王建军, 刘金毅, 陈园园, 王昕艺, 刘彤, 孙浩原. 铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(8): 1168-1173.

Shen Jiangyong, He Xi, Tang Yuting, Wang Jianjun, Liu Jinyi, Chen Yuanyuan, Wang Xinyi, Liu Tong, Sun Haoyuan. RAS-selective lethal small molecule 3 inhibits the fibrosis of pathological scar fibroblasts[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(8): 1168-1173.

图/表（结果） 6

2.1 病理性瘢痕成纤维细胞体外培养及鉴定显微镜下观察显示正常皮肤真皮乳头结构明显，胶原纤维排列有规律；而病理性瘢痕组织胶原纤维排列紊乱。病理性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞呈梭形，边界清晰；第2代病理性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞进行波形蛋白免疫荧光染色，镜下显示波形蛋白呈绿色显影且分布于胞质中，以上结果表明所培养的细胞为病理性瘢痕成纤维细胞，见图1。

2.2 检测正常皮肤和病理性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞和病理性瘢痕成纤维细胞中GPX4的表达取病理性瘢痕组织和同一个体正常皮肤组织检测GPX4 mRNA和蛋白表达水平，病理性瘢痕组织中GPX4 mRNA和蛋白的表达量要高于正常皮肤组织(mRNA：t=3.252，P < 0.01；蛋白：t=5.075，P < 0.01)。提取病理性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞检测GPX4 mRNA和蛋白的表达水平，病理性瘢痕成纤维细胞中GPX4 mRNA和蛋白的表达量要高于正常皮肤成纤维细胞(mRNA：t=10.32，P < 0.01；蛋白：t=26.22，P < 0.01)，见图2。

2.3 CCK-8检测RSL3对病理性瘢痕成纤维细胞的抑制率不同浓度(1，3，5，7，9，11，13 μmol/L)RSL3刺激病理性瘢痕成纤维细胞24 h后，CCK-8法检测病理性瘢痕成纤维细胞的活力并计算每组的抑制率，实验结果显示，5，7，9，11，13 μmol/L RSL3对病理性瘢痕成纤维细胞活力有不同程度的抑制，其中7 μmol/L RSL3对病理性瘢痕成纤维细胞的抑制率接近于50%，后期实验都用7 μmol/L RSL3干预细胞，见图3。

2.4 RSL3干预后病理性瘢痕成纤维细胞发生铁死亡 GPX4是判断细胞铁死亡的指标之一，GPX4降低，铁死亡发生；脂质过氧化是铁死亡的标志性事件，丙二醛是评价脂质过氧化的经典指标。与对照组相比，RSL3干预组丙二醛浓度增加(t=2.917，P < 0.05)，GPX4表达减少(mRNA：t=2.798，P < 0.05；蛋白：t=4.643，P < 0.01)，表明RSL3干预后引起病理性瘢痕成纤维细胞发生铁死亡，见图4。

2.5 RSL3干预后病理性瘢痕成纤维细胞纤维化的情况与对照组相比，RSL3干预组中Ⅰ型胶原蛋白(mRNA：t=15.84，P < 0.01；蛋白：t=4.610，P < 0.01)、Ⅲ型胶原蛋白(mRNA：t=28.86，P < 0.01；蛋白：t=7.713，P < 0.01)和α-平滑肌肌动蛋白(mRNA：t=2.671，P < 0.05；蛋白：t=7.417，P < 0.01)的mRNA和蛋白表达均减少，表明RSL3可抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化，见图5。

2.6 RSL3干预后病理性瘢痕成纤维细胞迁移情况 RSL3干预组划痕后24 h剩余划痕面积百分比明显大于对照组(t=14.06，P < 0.01)，见图6。

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引言

材料方法

1.1 设计体外细胞实验，组间比较采用两样本均数t检验。
1.2 时间及地点实验于2021-2022年在宁夏医科大学总医院完成。
1.3 材料

1.3.1 标本来源收集2021-2022年宁夏医科大学总医院烧伤整形美容科提供的10例病理性瘢痕和同一个体正常皮肤，一般资料见表1。研究方案的实施符合宁夏医科大学总医院相关伦理要求(伦理批号：2018-087)。供者及其监护人对标本的采集完全知情同意，并签署了“知情同意书”。

1.3.2 主要试剂及仪器蛋白提取试剂盒(凯基，江苏)；苏木精-伊红染色试剂盒(Solarbio，中国)； CCK-8(APExBIO，美国)；GPX4、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白引物(生工，上海)；DMEM-F12培养基(Hyclone，中国)；PBS(G-CLONE，中国)；胎牛血清(BI，以色列)；α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、β-actin抗体(ABclonal，中国)；Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)HcnRP(Affinity，中国)；RSL3(MCE，美国)；铁离子检测试剂盒(普利莱，中国)；丙二醛含量检测试剂盒(Solarbio，中国)；Ⅰ型胶原蛋白(Solarbio，中国)；40 g/L多聚甲醛(Biotopped，北京)；Triton X-100(Biotopped，北京)；电泳槽、电泳仪、电转仪及凝胶成像仪(BIO-RAD，美国)。
1.4 方法
1.4.1 苏木精-伊红染色观察病理性瘢痕组织和正常皮肤组织的大致形态将病理性瘢痕组织和正常皮肤组织包埋冰冻后切片，苏木精溶液浸泡3 min；蒸馏水流动冲洗干净，分化液浸泡2 min，伊红溶液浸泡30 s；在体积分数70%，80%，90%，100%的乙醇中浸泡5 s，二甲苯浸泡2 min，封固后用显微镜观察。
1.4.2 病理性瘢痕成纤维细胞分离及培养将病理性瘢痕组织和正常皮肤组织剪碎后用PBS清洗3次，每次10 min；加入0.125%TE消化酶(5 mL 0.25%胰蛋白酶和5 mL DPBS配置而成)过夜；用CoA胶原酶(Ⅰ型胶原蛋白)进行消化，37 ℃过夜；用PBS反复吹吸组织块后将组织和剩余液体过100目筛网；收集过筛后的组织悬液离心弃上清；加入含0.5%青链霉素和体积分数10%胎牛血清的DMED-F12培养基4 mL转入T25培养瓶中培养，取2-6代细胞用于后续实验。

1.4.3 免疫荧光检测成纤维细胞将第2代病理性瘢痕成纤维细胞和正常皮肤成纤维细胞接种于共聚焦小皿中，当细胞密度达40%-50%时加入40 g/L多聚甲醛室温孵育30 min、0.3%Tritonx-100孵育10 min、5%BSA孵育30 min、抗波形蛋白抗体孵育8 h、荧光二抗兔孵育2 h、DAPI孵育10 min，最后用激光共聚焦镜下观察。

1.4.4 CCK-8筛选RSL3的50%抑制率(IC50) 将5×103个病理性瘢痕成纤维细胞接种于96孔板中，分别为空白组(只有培养基)、对照组(有细胞和培养基)及1，3，5，7，9，11，13 μmol/L RSL3组，每组实验设6孔。培养箱中培养24 h，每孔加入10 μL的CCK-8溶液于培养箱中孵育1 h；用酶标仪检测波长为450 nm的吸光度(A)值；通过公式计算IC50 (%)= [(对照孔A-实验孔A)/(对照孔A-空白孔A)]×100%，寻找抑制率(%)为50%的浓度用于后续实验。

1.4.5 qRT-PCR检测GPX4、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达水平收集对照组、RSL3干预组的病理性瘢痕成纤维细胞(25T培养瓶)，按照RNA提取试剂盒中的说明书提取各组的总RNA，将RNA反转录成cDNA，运用qRT-PCR检测GPX4、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的mRNA表达水平。采用2-ΔΔCt计算法进行统计。基因引物序列和产物长度见表2，扩增条件见表3。

1.4.6 Western blot检测GPX4、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的蛋白表达水平收集对照组、RSL3干预组的病理性瘢痕成纤维细胞(25T培养瓶)，检测GPX4、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的蛋白表达水平。提取蛋白后定量，电泳设置90 V，电转设置0.3 A，牛奶封闭3 h，加入对应的GPX4(1∶1 000)、α-平滑肌肌动蛋白(1∶1 000)、Ⅰ型胶原蛋白(1∶1 000)及Ⅲ型胶原蛋白(1∶1 000)一抗过夜，以β-actin为内参(1∶10 000)，次日将膜放进Goat Anti-Rabbit IgG(H+L) HRP(1∶5 000)中孵育4 h后洗膜曝光，用Image Lab统计GPX4、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白及β-actin的灰度值，用目的灰度值/β-actin灰度值的比值进行统计分析。
1.4.7 丙二醛检测收集对照组和RSL3干预组的病理性瘢痕成纤维细胞(25T培养瓶)，把细胞收集到1.5 mL的EP小管中，按丙二醛含量检测试剂盒说明书中的体系进行加样，小管放入100 ℃水浴中60 min，离心后取200 μL上清液于96孔板，测定各样本在532 nm和600 nm处的A值。分别计算：
ΔA532 nm=A532 nm测定-A532 nm空白，ΔA600 nm=A600 nm测定-A600 nm空白，ΔA=ΔA532 nm-ΔA600 nm，丙二醛浓度=0.107 5×ΔA。
1.4.8 划痕实验检测RSL3干预后对细胞迁移能力的影响将2×105个病理性瘢痕成纤维细胞接种在6孔板中，直至细胞融合度达到80%时，用10 μL枪头在孔内划线，并用PBS洗涤3次，继续孵育24 h，用倒置显微镜分别拍摄对照组和RSL3干预组在0，24 h时划痕区域的照片，在3个随机且不重复的视野采集图片，运用Image J软件进行统计分析测量其划痕面积。
1.5 主要观察指标 ①GPX4、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的mRNA表达；②GPX4、α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的蛋白表达；③细胞丙二醛浓度；④细胞迁移能力。
1.6 统计学分析采用GraphPad Prism 6.0统计软件，结果以x±s表示，组间比较采用两样本均数t检验，P < 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法已经宁夏医科大学统计学专家审核。

讨论

病理性瘢痕是胶原等大量结缔组织基质的过度产生和沉积引起皮肤纤维化的疾病，可有灼痛、奇痒和挛缩等症状，影响外观，严重时可导致关节处活动受限[26]。目前，治疗病理性瘢痕的方法很多，包括手术、药物、压力、激光、放射、瘢痕内激素注射等，都有一定的疗效和改善外观的作用，但病理性瘢痕形成的具体分子机制尚不十分清楚，且疗效的个体差异性大还容易复发[27-28]。研究表明，病理性瘢痕的发生发展涉及到炎症、成纤维细胞、细胞外基质、细胞因子等多个因素，其中最关键的因素就是病理性瘢痕成纤维细胞的增殖和纤维化[29-31]。病理性瘢痕成纤维细胞能够产生大量含有胶原蛋白的细胞外基质，可促进创面的修复[32]；当伤口愈合过程中分子机制发生紊乱时，会出现成纤维细胞过度增殖、胶原过度堆积进而导致细胞纤维化的现象，最终导致病理性瘢痕的形成[33-34]。因此，深入研究病理性瘢痕成纤维细胞的具体分子机制能为寻找更有效的治疗方法提供一定的理论依据。
铁死亡是一种不同于凋亡、自噬、坏死的新型细胞调控死亡方式，其涉及多种生物学过程，如铁积累、脂质代谢和线粒体功能障碍等[35-37]。研究发现，铁死亡涉及许多疾病，如癌变、退行性疾病、心血管疾病、类风湿性关节炎等，促进某些癌症(直肠癌、胃癌等)和类风湿性关节炎等增生性疾病发生铁死亡能对疾病起到治疗的作用[19-22]。RSL3是一种铁死亡诱导剂，可通过降低GPX4的表达促进铁死亡的发生[23]，运用RSL3诱导铁死亡的研究越来越广泛进而已成为某些疾病的潜在治疗策略[25]。WU等[38]研究表明，RSL3可下调SLC7A11、GCLM和GCLC来诱导类风湿性关节滑膜成纤维细胞发生铁死亡，显著减轻类风湿性关节炎的进展；YE等[19]研究表明，RSL3可以显著增强吉西他滨在胰腺癌中的细胞毒作用，可能为胰腺癌的综合治疗提供新的策略；SUI等[20]研究表明，RSL3可促进细胞活性氧的积累来引发铁死亡，为直肠癌治疗提供了一种普遍且动态的细胞死亡形式。以上研究提示诱导疾病发生铁死亡可以起到治疗的作用，猜想诱导病理性瘢痕成纤维细胞发生铁死亡可能是治疗病理性瘢痕一种有前途的方法。然而，铁死亡和RSL3在病理性瘢痕中的作用尚无文献报道，且具体机制不清楚。课题组前期预实验发现GPX4在正常皮肤组织和病理性瘢痕组织中存在差异表达，猜测RSL3能通过影响GPX4的表达进而影响病理性瘢痕成纤维细胞的迁移和纤维化。研究结果显示，与正常皮肤组织相比，GPX4在病理性瘢痕组织中高表达；与正常皮肤成纤维细胞相比，GPX4在病理性瘢痕成纤维细胞中高表达，提示GPX4在正常皮肤组织和病理性瘢痕组织以及正常皮肤成纤维细胞和病理性瘢痕成纤维细胞中存在差异表达；RSL3干预病理性瘢痕成纤维细胞后导致丙二醛的含量增加、GPX4的表达减少，提示RSL3干预后可以诱导病理性瘢痕成纤维细胞发生铁死亡；与对照组相比，RSL3干预组α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白的mRNA和蛋白表达减少，提示RSL3干预后病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化被抑制；RSL3干预组成纤维细胞划痕面积减小百分比要小于对照组，提示RSL3干预可以抑制病理性瘢痕成纤维细胞迁移。
综上所述，RSL3可诱导病理性瘢痕成纤维细胞发生铁死亡进而抑制其迁移和纤维化，为防治病理性瘢痕的发生发展提供一定的理论依据。该研究只探讨了RSL3对病理性瘢痕成纤维细胞迁移和纤维化的影响，但还需进一步深入研究RSL3对病理性瘢痕成纤维细胞凋亡、侵袭等生物学过程的影响。未来可继续寻找和完善RSL3作用于病理性瘢痕成纤维细胞的重要分子机制，希望为治疗病理性瘢痕寻找新的突破点。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

铁死亡诱导剂RAS合成致死分子3抑制病理性瘢痕成纤维细胞的纤维化

RAS-selective lethal small molecule 3 inhibits the fibrosis of pathological scar fibroblasts

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