2.1   淫羊藿-骨质疏松症   淫羊藿又被称为仙灵脾、铁打杵，古籍最早发现于《神农本草经》，其具有强筋骨、补命门、祛风湿、壮肾阳等独特功效，临床常用于治疗男子阳痿遗精、小便不禁以及女子不孕等症[8]。作为中国历史悠久的中药淫羊藿，早已在古人的历史长河中临床运用了千年，李时珍在《本草纲目》提到：“其可强腰膝，补精气，强心力”[9]。现代研究表明，淫羊藿主要包括淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ、宝藿苷Ⅱ、淫羊藿次苷Ⅰ、淫羊藿次苷Ⅱ、去甲淫藿素、淫羊藿素、鞣质、挥发油、蜡醇等及其他生物活性成分[10]，其中研究最为广泛的是淫羊藿苷，同时现代药理学表明其具有降压(引起周围血管舒张)、降血糖、改善心脑血管、利尿、镇咳祛痰、抗衰老、抗肿瘤以及抗骨质疏松等作用[11]。
近年来随着骨质疏松患者不断增加，研究最多的则是淫羊藿用于防治骨质疏松[12]。淫羊藿提取物淫羊藿总黄酮与其他黄酮单体成分具有增加骨密度、诱导骨形成、保持骨代谢平衡等作用[13]。研究表明，淫羊藿总黄酮不仅能够刺激成骨细胞分化，而且可以加快成骨细胞的成熟速度[14]，此外还能抑制破骨细胞分化，通过加快成骨的速度来有效防治骨质疏松的发生，从而发挥抗骨质疏松的作用。姜涛等[15]在大鼠实验中发现，淫羊藿苷能够促进成骨细胞的分化，同时也能提高大鼠动物骨组织模型中ATG13及FIP200等不同蛋白的表达水平，从而起到治疗骨质疏松的作用。QIAN等[16]的结果表明，淫羊藿苷能够通过p53等信号通路调控PEDF，NPAT和HSP7等蛋白的表达，进一步诱导成骨细胞的分化。SUN等[17]研究表明，淫羊藿苷能够通过雌激素受体上调成骨细胞OPG/RANKL的表达，来促使成骨细胞的分化，进而防治或延缓骨质疏松发病。除以上研究之外，还有大量的细胞、动物实验已证明淫羊藿及其提取物可以促进成骨细胞的增殖分化，增强骨细胞成熟的速度，进而有效防治骨质疏松的发生。此外还有研究发现，中药淫羊藿还与骨髓间充质干细胞有着密切联系，其可通过调控骨髓间充质干细胞的增殖来促进成骨分化，进而起到治疗骨质疏松的作用。
2.2   骨髓间充质干细胞成骨分化防治骨质疏松   骨髓间充质干细胞最早是在哺乳动物的骨髓基质中被发现，是一种来源于中胚层的成体干细胞，它在外界的诱导下具有分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞和神经细胞等各种细胞的能力，同时也能够定向分化为成骨细胞并在骨代谢平衡维持中起着重要的调控作用[18]，若骨髓间充质干细胞分化失衡则会引发骨质疏松的发生。正常情况下，骨髓间充质干细胞需要经历从骨前体细胞、成骨细胞等不同分化最终演变为骨细胞的过程，然而随着年龄的增长，女性体内雌激素的减少，导致破骨细胞分化因子增加、骨代谢失衡以及骨髓间充质干细胞分化降低，进一步引起骨钙结合能力减弱，破骨细胞调控骨吸收作用增强，进而造成骨质丢失速度大大加快，最终加重骨质疏松症发生的风  险[19]。骨髓间充质干细胞研究的时间脉络图，见图3。



最近的研究发现，淫羊藿能够促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞增殖和分化，进而有效地防治骨质疏松[20]。XU等[21]的研究发现，淫羊藿苷通过miR-23a介导的Wnt/β-catenin信号通路的激活，进而上调碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)活性及骨唾液酸蛋白Ⅱ(Bone sialoprotein，BSP-II)和Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2，RunX2)的表达，最终诱导骨髓间充质干细胞向成骨分化。JIAO等[22]的研究表明，淫羊藿可能通过MAPK信号通路来促进成骨和软骨分化，从而诱导肌动蛋白应激纤维的形成，进一步促进骨髓间充质干细胞在体内和体外的迁移。李智奎等[23]在淫羊藿苷对SD大鼠的实验中发现，淫羊藿苷可通过诱导激活经典Wnt信号通路来提高Runt相关转录因子2、碱性磷酸酶和骨桥蛋白(osteopontin，OPN)等成骨分化相关基因的表达，从而促使大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化。综上所述，传统中药淫羊藿可能通过影响Runt相关转录因子2、碱性磷酸酶和骨桥蛋白等相关因子的变化、激活相关信号通路等方面来促使骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，起到治疗骨质疏松的作用，然而目前骨质疏松的发病机制还不明确。因此，下文将对相关信号通路进行阐述，归纳近年来中药淫羊藿调控骨髓间充质干细胞防治骨质疏松的分子机制，为补肾中药淫羊藿的临床应用提供依据。
2.3   淫羊藿调控相关信号通路影响骨髓间充质干细胞成骨分化   
2.3.1   淫羊藿调控经典Wnt/β-catenin信号通路   经典Wnt/β-catenin信号是一种高度保守的通路，是目前研究最为广泛的一条经典信号通路。近年来，经典Wnt/β-catenin信号异常激活在骨性疾病中的作用越来越突出，特别是在骨质疏松症[24]。在经典Wnt/β-catenin信号通路中，Wnt蛋白首先与细胞膜表面的卷曲蛋白受体(Frizzled)以及低密度脂蛋白受体相关蛋白5/6(low density lipoprotein receptor-related protein5/6，LRP5/6)互相结合形成复合体，促进Wnt信号通路的激活并将信号传导至细胞内，接下来活化后的Dsh 抑制APC-Axin-GSK3β复合体，使细胞内β-catenin大量堆积，然后伴随着游离的β-catenin转入至胞核内，接下来与T细胞因子/淋巴增强因子结合形成复合体，以达到激活下游靶基因c-myc、cylinD1等转录因子，发挥促进骨细胞的发育并防止细胞凋亡的调控作用[25]。除了经典信号通路之外，还有部分Wnt蛋白可通过其他非经典途径激活，例如Wnt/Ca2+途径、Wnt/平面细胞极性途径及Wnt/蛋白激酶A途径等。经典Wnt/β-catenin信号是调控骨形成和骨吸收重要的通路，随着人们对淫羊藿的不断深入研究发现[26]，淫羊藿可以通过激活经典Wnt/β-catenin信号通路中 β-catenin蛋白的表达来诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，达到防治骨质疏松的目的，见图4。



GAO等[27]的研究发现，淫羊藿苷通过激活wnt/β-catenin信号通路来促进β-catenin、c-myc的上调，进而诱导骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化，从而提高骨髓间充质干细胞在骨质疏松中的治疗作用。ZHANG等[28]实验表明，淫羊藿总黄酮可能通过刺激Wnt/β-catenin信号通路来提高β-catenin和CyclinD1 mRNA的表达，从而发挥促进人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用，这可能是防治骨质疏松的潜在选择。XU等[29]实验发现，淫羊藿总黄酮能够使Wnt/β-catenin信号通路活化，从而增加碱性磷酸酶和早期成骨细胞分化因子如Runt相关转录因2、Ⅰ型胶原蛋白和骨钙素的表达水平，同时降低脂质体增殖物激活受体γ2    (peroxisome proliferators-activated receptors-γ，PPARγ-2)和CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)的表达水平，进一步调控骨髓间充质干细胞成骨分化与成脂分化的平衡，可能是其治疗绝经后骨质疏松的重要途径之一。总之，淫羊藿促进骨髓间充质干细胞成骨分化主要是通过对 Wnt/β-catenin信号通路的调控，主要与 β-catenin蛋白、c-myc及CyclinD1因子等有关。
2.3.2   淫羊藿调控Notch信号通路的   Notch是一条广泛存在于脊柱与非脊柱动物组织细胞的信号通路，并具有高度保守性，通过介导细胞间信号在细胞增殖、分化和凋亡的过程中发挥至关重要的调控作用[30]。在真核哺乳动物中有Notch4，Notch3，Notch2，Notch 1等4种受体和Jagged1，Jagged2，DLL1，DLL3，DLL4等5种配体；另外Notch信号通路主要是以Notch受体及其配体(CSL与DSL蛋白)、Notch的调节蛋白和其他调节分子等为主。由于该信号通路的激活不需要胞内第二信使的参与，因此当Notch受体的胞外部分与配体相互结合后，经TACE、γ-分泌酶水解的作用下，引起Notch受体胞内区域(NICD)活化，并将信号传至细胞核内与CSL/CBF-1蛋白互相结合，从而与转录因子特异性结合后，最终促进HES(hairy/enhancer of split)家族、HEY(hairy/enhancer of split with YRPW motif familymembers)家族、HERP家族等相关基因的表达[31-32]。研究显示Notch信号通路在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中发挥着至关重要的作用[33]，见图5。



BIAN等[34]采用皮质酮和去卵巢术诱导大鼠骨质疏松实验发现，淫羊藿苷通过调节Delta(DLL1)和TACE(ADAM 17)表达，激活Notch信号通路，进一步促进去卵巢模型大鼠骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白、矮小相关转录因子2的分泌增加，促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，从而在骨质疏松中发挥着重要的调控作用。邓宇等[35]的实验表明，淫羊藿苷能够通过上调HES、Runt相关转录因2 mRNA表达以及增加Jagged-1，Notch1，CBF-1等蛋白表达，来进一步激活Notch信号通路，促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，进而改善骨质疏松的发生。徐娅等[36]的研究显示，淫羊藿苷能够通过阻断Notch信号通路，从而降低通路中关键蛋白Notch1、CBF1的表达，促进大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化，发挥延缓骨质疏松作用。综上所述，淫羊藿能够通过Notch信号通路促进骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化来发挥抗骨质疏松的作用，其主要与Notch通路具有活化或抑制的双重作用有关，通过激活或抑制来调控Jagged-1、Notch1及CBF-1等相关因子，促进骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化，从而发挥抗骨质疏松的作用。尽管目前已有细胞及动物实验来表明淫羊藿与骨质疏松的通路机制有着密切的联系，但仍需进一步深入探讨信号通路中不同蛋白因子的相互作用机制，才有望更加明确其信号通路的作用机制，为临床应用打下坚实的基础。
2.3.3   淫羊藿调控骨形态发生蛋白/Runx2/Osz信号通路   骨形态发生蛋白/Runx2/Osz信号是一条参与调控成骨细胞分化的重要通路，并且在骨代谢、形成及修复过程中发挥着关键作用。骨形态发生蛋白是转化生长因子β超家族成员，并且是骨生长的启动因子，具有促进骨髓间充质干细胞向成软骨、成骨、成牙本质等细胞分化的能力[37]；Runt相关转录因2能够促进成骨细胞向成熟成骨细胞的转变，是成骨细胞中的关键转录、调节因子[38]；而成骨细胞特异性转录因子(Osterix，Osx)信号可调控成骨细胞功能蛋白的表达，促进骨髓间充质干细胞向成骨转化，是Runt相关转录因2的下游关键性转录因子[39]。在骨形态发生蛋白/Runx2/Osz信号通路中，首先骨形态发生蛋白可与细胞膜表面的异二聚体受体(骨形态发生蛋白Ⅰ，Ⅱ)结合，进而磷酸化使Smads蛋白激活，接下来将Co-Smads、R-Smads蛋白与细胞核内OSE序列(成骨细胞特异性顺式作用元件)相结合，从而诱导Runt相关转录因2及其下游Osx的转录，进一步达到促进骨桥蛋白、Ⅰ型胶原基因和骨桥素等多种成骨细胞标志物的转录和表达，促进膜内和软骨内骨化成骨，从而起到抗骨质疏松的作用[40-41]，见图6。



訾慧等[42]在其实验中发现，淫羊藿素可能通过促进骨形态发生蛋白2、骨形态发生蛋白9蛋白，进而激活骨形态发生蛋白/Smads/Runx2/Osx信号通路，进一步提高对骨形态发生蛋白/Runx2/Osx信号通路下游相关基因成骨细胞特异性转录因子、Runt相关转录因2的调控，促进骨髓间充质干细胞的成骨转化。LIANG等[43]在淫羊藿总黄酮的实验发现，与对照组相比，20 mg/L淫羊藿总黄酮通过激活骨形态发生蛋白2/Runx 2/Osx信号通路，促使Ⅰ型胶原、骨钙素、骨桥蛋白表达增加来增加碱性磷酸酶活性和钙结节密度，进而促进骨髓间充质干细胞定向成骨分化，加快骨形成，有效延缓骨质疏松的进一步发展。研究报道，淫羊藿次苷Ⅰ能通过激活骨形态发生蛋白/Runx2/Osx信号通路，促进骨髓间充质干细胞定向成骨转化[44]，同时淫羊藿次苷Ⅰ代谢产物：淫羊藿次苷Ⅱ也能够促进对骨形态发生蛋白/Runx2/Osx信号通路下游基因的调控，从而进一步促进骨髓间充质干细胞定向成骨分化，这说明淫羊藿提取物淫羊藿次苷Ⅰ、Ⅱ均能通过 骨形态发生蛋白2/RunX2/Osx信号通路促使骨髓间充质干细胞成骨分化。总之，淫羊藿诱导骨髓间充质干细胞成骨分化主要是通过对骨形态发生蛋白/Runx2/Osx通路的调控，主要通过激活骨形态发生蛋白、Runt相关转录因2、成骨细胞特异性转录因子等上、下靶基因来促进骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白、骨桥蛋白等成骨基因的表达，进而促使骨髓间充质干细胞成骨分化。目前，对骨形态发生蛋白/Smads/Runx2/Osx信号通路在骨质疏松中作用机制认识尚浅，与其他不同信号通路之间的相互作用还有待深入研究，因此在今后研究中应深入探索 骨形态发生蛋白/Smads/Runx2/Osx信号通路在骨质疏松中的作用机制，为骨质疏松的治疗提供新的思路。
2.3.4   淫羊藿调控MAPK信号通路   丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)是一条广泛存在于真核细胞体内的信号通路，并且是细胞表面传导至细胞核内的重要载体。其主要是由细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2，ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(-Jun N-terminal kinase，JNK)和p38MAPK3种激酶所构成，其中ERK信号是最为经典的一条通路，主要调节细胞起始增殖和分化，并在成骨细胞中发挥重要的作用[45]；而p38MAPK通路目前主要有p38α/β/γ/δ种亚族，调控p38MAPK可促进骨髓间充质干细胞成骨分化[46]；另外JNK信号通路对成骨细胞的活性起着关键作用[47]。在受到外界刺激时，MAPKs信号也是通过三级酶促级联反应激活转录因子，MAPKK激酶(MAP3K)首先被激活，进而将MAPK激酶(MAP2K)磷酸化，接下来被磷酸化的MAP2K使得 MAPK磷酸化激活，继而促进Runt相关转录因2等成骨转录因子的表达，并同时激活 Smad1/5/8蛋白，然后将细胞外信号因子传至细胞内，从而促使细胞的分化，最终起到促进骨分化的作用[48-49]。据报道，MAPK信号通路在淫羊藿苷的刺激下将促使骨髓间充质干细胞成骨分化[50]，从而起到改善骨质疏松的作用，见图7。



QIN等[51]的实验结果表明，淫羊藿苷通过激活ERK和p38MAPK信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖，进而导致其下游转录因子ELK1和c-Myc的上调，为治疗骨质疏松提供了新的临床思路。WU等[52]的研究发现，淫羊藿苷可通过激活MAPK通路，磷酸化细胞外信号调节激酶、p38激酶和c-Jun氨基末端激酶，进而明显增强碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原蛋白、骨钙素和骨桥蛋白基因表达，发挥调控骨髓间充质干细胞的成骨分化的作用，最终达到治疗骨质疏松的目的。MAO等[53]的实验表明，淫羊藿提取物淫羊藿苷可通过抑制MAPK信号通路中ERK的表达和激活p38的表达，进而促进间充质干细胞C3H10T1/2向成骨细胞的分化，以达到改善骨质疏松的作用。总之，淫羊藿介导骨髓间充质干细胞成骨分化与通过对MAPK通路的调节是密不可分的，主要与ERK，p38MAPK，ELK1，c-Myc，JNK调控因子等有关。
2.3.5   淫羊藿调控OPG/RANK/RANKL信号通路   骨保护素(osteoprotegerin，OPG)是OPG/RANK/RANKL信号通路的上游因子，它可以通过与破骨细胞膜表面的RANK相竞争，进而阻断RANK与RANKL结合，进一步阻止信号传导过程，从而抑制骨吸收[54]。
OPG，RANK和RANKL共同构成了OPG/RANKL/RANK信号通路，并在骨重建中发挥着至关重要的作用[55-56]。OPG/RANK/RANKL信号通路可能与以下几条通路有着密切的联系[57-58]：①核转录因子κB信号通路：首先RANK与转化生长因子受体相关因子6相结合，进一步激活核转录因子κB诱导激酶，接下来让核转录因子κB复合物从细胞浆进入细胞核内，促进核内c-Fox表达增加，并与活化的T细胞核因子结合，从而促进骨钙素成熟分化；②AKT信号通路：最初RANK与转化生长因子受体相关因子6结合，促使磷脂酰肌醇活化，进一步诱导激活核转录因子κB信号通路，从而加速破骨细胞的分化；③JNK信号通路：是MAPK的主要通路之一，RANK开始与转化生长因子受体相关因子6相结合，激活ERK和JNK，进一步刺激JNK信号通路激活，并促进c-Jun/Fos激活蛋白1活化，然后使c-Jun磷酸化，同时提高了c-Fox表达，促进破骨前体细胞的分化；④钙调磷酸酶/活化T细胞核因子(CN/NFATc1)通路：其通路被活化后，促进破骨细胞相关基因的表达。因此，若能充分了解OPG-RANK-RANKL信号通路，今后将对防治骨质疏松具有重要作用。
骨髓间充质干细胞和成骨细胞可以分泌骨保护素，保持RANKL/OPG稳定，进而使得成骨细胞促进骨形成与破骨细胞调控骨吸收保持在稳态水平，从而维持骨代谢的平衡。吴峻等[59]的动物实验表明，淫羊藿苷能通过上调骨组织骨保护素mRNA表达并下调RANKL及RANK mRNA表达，增加去卵巢骨质疏松大鼠骨密度和骨矿含量，改善碱性磷酸酶及钙水平，从而抑制骨细胞及成骨细胞凋亡，以达到维持骨形成与骨吸收的稳定。吴祖锋等[60]研究发现，淫羊藿苷可明显上调大鼠骨保护素的蛋白水平，同时并下调RANKL/RANK的表达，从而进一步抑制破骨细胞的分化，达到治疗骨质疏松症的目的。马小妮等[61]实验发现，淫羊藿苷可以通过提高骨保护素及OPG/RANKL的比值，降低破骨细胞的活性，进而抑制骨吸收，起到防治抗骨质疏松的作用。综上所述，淫羊藿主要通过影响骨保护素、RANK及RANKL等相关因子，促进骨形成与骨吸收保持在稳态水平，因此在今后研究中应深入研究OPG-RANK-RANKL信号通路在骨质疏松中的作用，为骨质疏松的治疗提供新的思路。

[1] NOH JY, YANG Y, JUNG H. Molecular mechanisms and emerging therapeutics for osteoporosis. Int J Mol Sci. 2020;21(20):7623. [2] SOTORNIK I. Osteoporóza-epidemiologie a patogeneze [Osteoporosis-epidemiology and pathogenesis]. Vnitr Lek. 2016;62 Suppl 6:84-87.  [3] LIU W, YANG LH, KONG XC, et al. Meta-analysis of osteoporosis: fracture risks, medication and treatment. Minerva Med. 2015;106(4):203-214.  [4] COTTS KG, CIFU AS. Treatment of Osteoporosis. JAMA. 2018;319(10):1040-1041.  [5] 赵金龙,曾令烽,梁桂洪,等.基于信号通路的中药有效成分治疗骨质疏松机制研究进展[J].中草药,2020,51(23):6084-6094. [6] 项国梁,陈跃平,卓映宏.淫羊藿苷调控骨髓间充质干细胞相关分化机制及应用研究进展[J].中国中西医结合杂志,2020,40(8):1019-1024. [7] XIAO YP, ZENG J, JIAO LN, et al. Review for treatment effect and signaling pathway regulation of kidney-tonifying traditional Chinese medicine on osteoporosis. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2018;43(1):21-30.  [8] 华臻,杨俊锋,潘娅岚,等.补肾中药促进骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展[J].中华中医药杂志,2015,30(9):3222-3226. [9] 李建国,谢兴文,李鼎鹏,等.中药淫羊藿治疗骨质疏松症的研究进展[J].中国骨质疏松杂志,2018,24(3):389-393. [10] ZHAI YK, GUO X, PAN YL, et al. A systematic review of the efficacy and pharmacological profile of Herba Epimedii in osteoporosis therapy. Pharmazie. 2013;68(9):713-722. [11] 曾华婷,郭健,陈彦.淫羊藿素药理作用及其新型给药系统的研究进展[J].中草药,2020,51(20):5372-5380. [12] WANG L, LI Y, GUO Y, et al. Herba epimedii: an ancient chinese herbal medicine in the prevention and treatment of osteoporosis. Curr Pharm Des. 2016;22(3): 328-349.  [13] 陈克明.淫羊藿总黄酮的抗骨质疏松作用机制[J].中华中医药杂志,2017, 32(12):5485-5489. [14] 王洁,王萧枫.淫羊藿总黄酮的抗骨质疏松作用及其对调控成骨细胞分化及骨形成关键信号通路的影响[J].中医正骨,2017,29(1):45-48. [15] 姜涛,凌翠敏,陈庆真,等.淫羊藿苷通过提高自噬促进成骨细胞分化防治骨质疏松[J].中国组织工程研究,2021,25(17):2643-2649. [16] QIAN W, SU Y, ZHANG Y, et al. Secretome analysis of rat osteoblasts during icariin treatment induced osteogenesis. Mol Med Rep. 2018;17(5):6515-6525.  [17] SUN LJ, LI C, WEN XH, et al. Icariin stimulates hFOB 1.19 osteoblast proliferation and differentiation via OPG/RANKL mediated by the estrogen receptor. Curr Pharm Biotechnol. 2021;22(1):168-175. [18] WANG C, MENG H, WANG X, et al. Differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells in osteoblasts and adipocytes and its role in treatment of osteoporosis. Med Sci Monit. 2016;22:226-233. [19] HIKITA A, YANA I, WAKEYAMA H, et al. Negative regulation of osteoclastogenesis by ectodomain shedding of receptor activator of NF-kappaB ligand. J Biol Chem. 2006;281(48):36846-36855.  [20] YANG A, YU C, LU Q, et al. Mechanism of action of icariin in bone marrow mesenchymal stem cells. Stem Cells Int. 2019;2019:5747298. [21] XU Y, JIANG Y, JIA B, et al. Icariin stimulates osteogenesis and suppresses adipogenesis of human bone mesenchymal stem cells via miR-23a-mediated activation of the Wnt/β-catenin signaling pathway. Phytomedicine. 2021;85: 153485.   [22] JIAO F, TANG W, HUANG H, et al. Icariin promotes the migration of BMSCs in vitro and in vivo via the MAPK signaling pathway. Stem Cells Int. 2018;2018: 2562105. [23] 李智奎,孔俊博,赵王林.淫羊藿苷调控Wnt/β-catenin信号通路干预大鼠MSCs成脂成骨双向分化实验研究[J].中国免疫学杂志,2019,35(24):2985-2990. [24] MAEDA K, KOBAYASHI Y, KOIDE M, et al. The regulation of bone metabolism and disorders by wnt signaling. Int J Mol Sci. 2019;20(22):5525.  [25] 吴铭,张岩.调控骨髓间充质干细胞成骨分化的Wnt/β-catenin信号通路及相关因素[J].中国组织工程研究,2021,25(1):116-122. [26] JING H, SU X, GAO B, et al. Epigenetic inhibition of Wnt pathway suppresses osteogenic differentiation of BMSCs during osteoporosis. Cell Death Dis. 2018; 9(2):176.  [27] GAO J, XIANG S, WEI X, et al. Icariin promotes the osteogenesis of bone marrow mesenchymal stem cells through regulating sclerostin and activating the wnt/β-catenin signaling pathway. Biomed Res Int. 2021;2021:6666836.  [28] ZHANG JF, LI G, CHAN CY, et al. Flavonoids of Herba Epimedii regulate osteogenesis of human mesenchymal stem cells through BMP and Wnt/beta-catenin signaling pathway. Mol Cell Endocrinol. 2010;314(1):70-74. [29] XU YX, WU CL, WU Y, et al. Epimedium-derived flavonoids modulate the balance between osteogenic differentiation and adipogenic differentiation in bone marrow stromal cells of ovariectomized rats via Wnt/β-catenin signal pathway activation. Chin J Integr Med. 2012;18(12):909-917. [30] PENTON AL, LEONARD LD, SPINNER NB. Notch signaling in human development and disease. Semin Cell Dev Biol. 2012;23(4):450-457. [31] Xu Y, Li L, Tang Y, et al. Icariin promotes osteogenic differentiation by suppressing Notch signaling. Eur J Pharmacol. 2019;865:172794.  [32] MAJIDINIA M, SADEGHPOUR A, YOUSEFI B. The roles of signaling pathways in bone repair and regeneration. J Cell Physiol. 2018;233(4):2937-2948. [33] FAN JZ, YANG L, MENG GL, et al. Estrogen improves the proliferation and differentiation of hBMSCs derived from postmenopausal osteoporosis through notch signaling pathway. Mol Cell Biochem. 2014;392(1-2):85-93. [34] BIAN Q, HUANG JH, LIU SF, et al. Different molecular targets of Icariin on bMSCs in CORT and OVX -rats. Front Biosci (Elite Ed). 2012;4:1224-1236.  [35] 邓宇,陈廖斌.淫羊藿苷通过激活Notch信号通路促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究[J].中医学报,2017,32(12):2393-2398, 2403. [36] 徐娅,王攀攀,许青青.淫羊藿苷在促大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化过程中对Notch信号通路Notch1、CBF1蛋白表达的影响[A].中国中西医结合学会虚证与老年医学专业委员会、暨南大学.第十三次全国中西医结合虚证与老年医学学术研讨会论文集[C].中国中西医结合学会虚证与老年医学专业委员会、暨南大学:中国中西医结合学会,2013:9. [37] KIM HK, LEE JS, KIM JH, et al. Bone-forming peptide-2 derived from BMP-7 enhances osteoblast differentiation from multipotent bone marrow stromal cells and bone formation. Exp Mol Med. 2017;49(5):e328. [38] GOMATHI K, AKSHAYA N, SRINAATH N, et al. Regulation of Runx2 by post-translational modifications in osteoblast differentiation. Life Sci. 2020;245: 117389.  [39] LONG F, ORNITZ DM. Development of the endochondral skeleton. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2013;5(1):a008334. [40] MA HP, MA XN, GE BF, et al. Icariin attenuates hypoxia-induced oxidative stress and apoptosis in osteoblasts and preserves their osteogenic differentiation potential in vitro. Cell Prolif. 2014;47(6):527-539.  [41] 梁广胜,陈伟才,殷嫦嫦,等.淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程BMP-2/RunX2/Osx通路的影响[J].中国中西医结合杂志,2016, 36(5):614-618. [42] 訾慧,郑洪新,蒋宁.淫羊藿素通过BMP/Runx2/Osx信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化研究[J].中华中医药学刊,2020,38(7):212-215, 270. [43] LIANG GS, CHEN WC, YIN CC, et al. Effect of total ravonoids of herba epimedium on BMP-2/RunX2/Osx signaling pathway during osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2016;36(5):614-618.  [44] 訾慧,范颖,蒋宁.淫羊藿次苷Ⅰ及淫羊藿次苷Ⅱ通过BMP/Runx2/Osx信号通路促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究[J].中国骨质疏松杂志,2019,25(5):690-695. [45] LIU Y, WANG X, CHANG H, et al. Mongolian Medicine echinops prevented postmenopausal osteoporosis and induced ER/AKT/ERK pathway in BMSCs. Biosci Trends. 2018;12(3):275-281.  [46] ZHANG X, LI H, LIN C, et al. Synergetic topography and chemistry cues guiding osteogenic differentiation in bone marrow stromal cells through ERK1/2 and p38 MAPK signaling pathway. Biomater Sci. 2018;6(2):418-430. [47] ZHAO P, XIAO L, PENG J, et al. Exosomes derived from bone marrow mesenchymal stem cells improve osteoporosis through promoting osteoblast proliferation via MAPK pathway. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2018;22(12):3962-3970.  [48] 张玲莉,雷乐,吴伟.MAPK信号通路在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的作用[J].中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志,2021,14(1):75-81. [49] 周陈晨,吴祖平,邹淑娟.信号通路调控骨髓间充质干细胞成骨分化的研究[J].四川大学学报(医学版),2020,51(6):777-782. [50] YAO X, JING X, GUO J, et al. Icariin protects bone marrow mesenchymal stem cells against iron overload induced dysfunction through mitochondrial fusion and fission, PI3K/AKT/mTOR and MAPK pathways. Front Pharmacol. 2019;10:163.  [51] QIN S, ZHOU W, LIU S, et al. Icariin stimulates the proliferation of rat bone mesenchymal stem cells via ERK and p38 MAPK signaling. Int J Clin Exp Med. 2015;8(5):7125-7133.  [52] WU Y, XIA L, ZHOU Y, et al. Icariin induces osteogenic differentiation of bone mesenchymal stem cells in a MAPK-dependent manner. Cell Prolif. 2015;48(3): 375-384.  [53] MAO XY, BIAN Q, SHEN ZY, et al. Analysis of the osteogenetic effects exerted on mesenchymal stem cell strain C3H10T1/2 by icariin via MAPK signaling pathway in vitro. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 2012;10(11):1272-1278.  [54] UDAGAWA N, KOIDE M, NAKAMURA M, et al. Osteoclast differentiation by RANKL and OPG signaling pathways. J Bone Miner Metab. 2021;39(1):19-26.  [55] Ono T, Nakashima T. Recent advances in osteoclast biology. Histochem Cell Biol. 2018;149(4):325-341. [56] HE XF, ZHANG L, ZHANGg CH, et al. Berberine alleviates oxidative stress in rats with osteoporosis through receptor activator of NF-kB/receptor activator of NF-kB ligand/osteoprotegerin (RANK/RANKL/OPG) pathway. Bosn J Basic Med Sci. 2017;17(4):295-301. [57] ZHANG S, WANG X, LI G, et al. Osteoclast regulation of osteoblasts via RANK RANKL reverse signal transduction in vitro. Mol Med Rep. 2017;16(4):3994-4000.  [58] LIU W, ZHANG X. Receptor activator of nuclear factor-κB ligand (RANKL)/RANK/osteoprotegerin system in bone and other tissues (review). Mol Med Rep. 2015;11(5):3212-3218. [59] 吴峻.淫羊藿苷对去卵巢骨质疏松大鼠骨细胞凋亡及骨组织OPG、RANKL mRNA表达影响[J].辽宁中医药大学学报,2019,21(2):19-22. [60] 吴祖锋,袁垒,吴风晴,等.淫羊藿苷对骨质疏松症模型大鼠OPG/RANKL/RANK轴系统影响的实验研究[J].甘肃中医药大学学报,2016,33(3):4-7. [61] 马小妮,葛宝丰,陈克明,等.淫羊藿苷通过OPG/RANKL信号途径调节骨吸收的机理研究[J].中国骨质疏松杂志,2013,19(1):1-5.

[1]	朱 婵, 韩栩珂, 姚承佼, 周 倩, 张 强, 陈 秋. 人体唾液成分与骨质疏松/骨量低下[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(9): 1439-1444.
[2]	金 涛, 刘 林, 朱晓燕, 史宇悰, 牛建雄, 张同同, 吴树金, 杨青山. 骨关节炎与线粒体异常[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(9): 1452-1458.
[3]	张立创, 徐 浩, 马迎辉, 熊梦婷, 韩海慧, 鲍嘉敏, 翟伟韬, 梁倩倩. 免疫调控淋巴回流功能治疗类风湿关节炎的机制及前景[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(9): 1459-1466.
[4]	李 微, 朱汉民, 王 鑫, 高 雪, 崔 婧, 刘雨昕, 黄树明. 左归丸干预卵巢摘除骨质疏松模型小鼠骨形态发生蛋白2信号通路的变化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1173-1179.
[5]	王宝娟, 郑曙光, 张 琪, 李田洋. 苗药熏蒸治疗膝骨关节炎模型兔可延缓细胞外基质的破坏[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1180-1186.
[6]	王 景, 熊 山, 曹 金, 冯林伟, 王 信. 白细胞介素3在骨代谢中的作用及机制[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1260-1265.
[7]	肖 豪, 刘 静, 周 君. 脉冲电磁场治疗绝经后骨质疏松症的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1266-1271.
[8]	朱 婵, 韩栩珂, 姚承佼, 张 强, 刘 静, 邵 明. 针刺治疗帕金森病：动物实验显示的作用机制[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1272-1277.
[9]	黄晨玮, 费彦亢, 朱梦梅, 李鹏昊, 于 兵. 谷胱甘肽在干细胞“干性”及调控中的重要作用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1119-1124.
[10]	惠小珊, 白 京, 周思远, 王 阶, 张金生, 何庆勇, 孟培培. 中医药调控干细胞诱导分化的理论机制[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1125-1129.
[11]	安维政, 何 萧, 任 帅, 刘建宇. 肌源干细胞在周围神经再生中的潜力[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1130-1136.
[12]	范一鸣, 刘方煜, 张洪宇, 李 帅, 王岩松. 脊髓损伤后室管膜区内源性神经干细胞反应的系列问题[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1137-1142.
[13]	田 川, 朱向情, 杨再玲, 鄢东海, 李 晔, 王严影, 杨育坤, 何 洁, 吕冠柯, 蔡学敏, 舒丽萍, 何志旭, 潘兴华. 骨髓间充质干细胞调控猕猴卵巢的衰老[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 985-991.
[14]	胡 伟, 谢兴奇, 屠冠军. 骨髓间充质干细胞来源外泌体改善脊髓损伤后血脊髓屏障的完整性[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 992-998.
[15]	高俞锦, 彭双麟, 马治超, 陆 诗, 曹花月, 王 浪, 肖金刚. 糖尿病骨质疏松症模型小鼠脂肪干细胞的成骨能力[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 999-1004.

骨质疏松症是一种以全身骨量丢失、骨密度下降及骨微结构破坏为病理特点，且极易引起骨质脆性增加、骨折风险加大的慢性代谢性骨病。随着社会老龄化增加，其发病率亦日趋攀升，据流行病学调查显示[1]，在全球50周岁以上的人群中，有1/3女性和1/5男性都会经历骨质疏松所导致的骨折，其原因被认为是骨骼中成骨细胞调节骨形成和破骨细胞参与骨吸收的平衡活动被打破[2]。目前临床上常用治疗骨质疏松的主要有钙剂、维生素D、雌激素及其受体调节剂、甲状旁腺激素和双膦酸盐等药物[3]，尽管上述药物已经被证实在治疗骨质疏松方面颇有疗效，但单纯采用这些药物存在较多毒副反应、药物依从性差等问题，给个人生活及家庭产生巨大的影响[4]。因此对于骨质疏松发病机制及防治一直是国内外医学工作者广泛关注的热点话题。

中医认为骨质疏松属于“骨枯”“骨痿”范畴，其主要病机是肾虚血瘀[5]，而淫羊藿和骨碎补等补肾活血药物在防治骨质疏松不良反应以及疗效上具有一定的优势，并逐渐引起国内外研究者的关注。另外还发现淫羊藿具有用于骨组织工程的骨诱导潜力[6]，其骨诱导潜力可归因于在肌肉骨骼系统中的多种功能，该系统涉及抗骨质疏松症、成骨、抗破骨细胞生成、软骨生成、血管生成和抗炎等多种信号通路的调节。骨髓间充质干细胞具有稳定且自身免疫性低等优点，被称为是组织工程中的理想“种子细胞”，并且已在治疗骨质疏松上初现成效，如用淫羊藿苷的有效活性成分联合缓释支架材料，可以诱导骨髓间充质干细胞成骨分化，进而增强成骨细胞活性，并抑制破骨细胞的吸收，从而起到修复骨组织的作用[7]。目前对于其研究大多是以基础实验或单一信号通路为主，例如：淫羊藿调控骨髓间充质干细胞对单个信号通路的综述研究、淫羊藿调控骨髓间充质干细胞对某一信号通路的基础实验研究；或是淫羊藿调控骨髓间充质干细胞对骨质疏松的影响，而未涉及信号通路分子的阐述；虽然有相关综述报道，但大多表现在某一通路，或既往文献的部分研究，未能在图表上直观阐释淫羊藿调控骨髓间充质干细胞防治骨质疏松的作用机制。

文章通过归纳近年来淫羊藿调控骨髓间充质干细胞在该领域的相关研究，将骨髓间充质干细胞分化与相关信号通路联系在一起，从而进一步说明淫羊藿调控骨髓间充质干细胞治疗骨质疏松的分子及通路层面机制，为淫羊藿的临床应用及研发提供相应的理论依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

1.1   资料来源   
1.1.1   检索人及检索时间   第一作者在2021年6月进行检索。
1.1.2   检索文献时限   各数据库建库至2021年。
1.1.3   检索数据库   中国知网、维普、万方、中国生物医学文献数据库、PubMed、Embase及Web of Science数据库。
1.1.4   检索词   中文检索词：“淫羊藿、成骨分化、骨髓间充质干细胞、骨质疏松症、信号通路、Wnt /β-catenin、BMP/Runx2/Osz、MAPK”等，英文检索词：“Epimedium，Osteogenic  differentiation，Bone marrow mesenchymal stem cells，Osteoporosis，Signal path，Wnt/β-catenin，BMP/Runx2/Osz，MAPK”等，各中文检索词之间用逻辑词“并且、或者”进行组合，各英文检索词之间用逻辑词“and，or”进行组合。
1.1.5   检索文献类型   研究原著、综述、病例报告、基础或临床研究等。
1.1.6   手工检索情况   手工检索《中国组织工程研究》《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》《中国中西医结合杂志》《中草药》《中国骨质疏松杂志》《中华中医药杂志》等影响因子较高的中文杂志，所有杂志均从创刊号检索至2021年，同时查阅相关文章所附的参考文献。
1.1.7   检索策略   中英文数据库检索策略见图1。

1.1.8   检索文献量   初步检索到中文文献4 826篇，英文文献902篇。
1.2   入组标准
1.2.1   纳入标准   ①有关淫羊藿调控骨髓间充质干细胞在骨质疏松发病中作用机制的相关文献；②涉及骨质疏松中介导骨髓间充质干细胞的相关信号通路的研究；③有关淫羊藿及提取物治疗骨质疏松的相关报道。     
1.2.2   排除标准   剔除重复性研究文献、题目与主题不相关的文献、年代久远无法提供详细资料及数据的文献。
1.3   数据提取和文献质量评估   计算机综合检索到中文文献4 826篇，英文文献902篇相关文献，排除重复性研究和年代久远的文献，根据阅读标题及摘要进行筛查，最终根据标准纳入共61篇文章。认真阅读文章内容，总结及归纳有效信息，并撰写论文。文献检索流程图见图2。

3.1   既往他人在该领域研究的贡献和存在的问题   近年来，随着社会老龄化的加重，骨质疏松的发生有明显的上升趋势，骨质疏松严重影响中老年人的生活质量，已成为一个全世界面临的社会健康问题。骨形成与骨吸收之间的平衡被打破是此病主要发病机制，因此通过骨髓间充质干细胞促使成骨细胞分化、增殖是治疗骨质疏松的一个关键方法。随着传统中医药的发展和医学技术的深入创新，中药有效成分对骨质疏松的干预机制将不断被挖掘，骨质疏松的中药治疗将有更大的发展。淫羊藿潜在的促成骨分化作用也越来越被重视，尤其是成骨方面的作用得到了广泛的关注。目前对于其研究大多是以基础实验或单一信号通路为主，例如：淫羊藿调控骨髓间充质干细胞对单个信号通路的综述研究、淫羊藿调控骨髓间充质干细胞对某一信号通路的基础实验研究；或是淫羊藿调控骨髓间充质干细胞对骨质疏松的影响，而未涉及信号通路分子的阐述；虽然有相关综述报道，但大多表现在某一通路，或既往文献的部分研究，未能在图表上直观阐释淫羊藿调控骨髓间充质干细胞防治骨质疏松的作用机制。
3.2   作者综述区别于他人他篇的特点   文章通过总结近年来淫羊藿调控骨髓间充质干细胞的相关性研究发现，将骨髓间充质干细胞分化与Wnt /β-catenin，Notch，骨形态发生蛋白/Runx2/Osz，MAPK及OPG/RANK/RANKL等信号通路联系在一起，可以进一步说明淫羊藿调控骨髓间充质干细胞治疗骨质疏松的分子及通路层面机制，研究表明淫羊藿能够上调Wnt/β-catenin信号通路中的β-catenin蛋白受体及下游c-myc、CyclinD1靶点基因，能够激活DLL1，Jagged-1，Notch1及CBF-1等蛋白，活化Notch，ERK，p38MAPK及OPG-RANK-RANKL信号通路，并且能够影响骨形态发生蛋白/Smads/Runx2/Osx信号通路中骨形态发生蛋白、Runt相关转录因2、Osx表达、骨髓间充质干细胞成骨诱导COl1a1，OPN及OCN表达，从而诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，最终达到抗骨质疏松的作用，并为日后的研究提供一些思路。
3.3   综述的局限性   国内外众多学者研究发现淫羊藿抗骨质疏松仍存在一些局限性：①目前的研究缺少用中医药辨证论治的思维来探讨淫羊藿调控骨髓间充质干细胞防治骨质疏松的信号通路研究。②现有的研究大多数是以淫羊藿调控单一的信号通路来影响骨质疏松的发展进程，各信号通路与通路是否存在协同或拮抗作用？虽然部分研究结合了转录、蛋白组学等方法，但得到的结论仍然不能清楚。③目前，对于淫羊藿的研究大多数还处在细胞和动物实验水平，在临床试验方面的报道相对较少，因此今后的研究需要大量的基础实验及临床数据来证实。
3.4   综述的重要意义及未来的建议   骨质疏松的发病机制较为复杂，目前西医药物治疗未能取得较为满意的效果，而淫羊藿对机体或细胞具有多途径、多靶点作用的特点，Wnt/β-catenin，Notch，骨形态发生蛋白/Runx2/Osz，MAPK及OPG/RANK/RANKL等信号通路可能只是淫羊藿防治骨质疏松的部分途径，随着未来国内外研究淫羊藿诱导骨髓间充质干细胞向成骨分化作用与信号通路之间关系的不断深入，有望揭示骨质疏松更具体的作用机制，为淫羊藿调控骨髓间充质干细胞治疗骨质疏松提供可行性的方案，相信未来骨髓间充质干细胞在骨组织中可以发挥更为关键的作用。 
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

文题释义：
骨质疏松：是一种常见的以全身骨质结构破坏、骨密度及含量降低为特征的骨科疾病。
骨髓间充质干细胞：是在哺乳动物中所发现的一种具有分化成成骨、软骨、神经元以及成肌等作用的干细胞。近年来，骨髓间充质干细胞异常在骨质疏松中的作用越来越明显，它向成脂肪细胞分化过多和向成骨分化减少是骨质疏松形成的关键原因之一。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

近年来随着中国中医药的不断深入研究，发现淫羊藿具有调控骨骨髓间充质干细胞髓间充质干细胞的作用并在防治骨质疏松方面发挥着独特的优势。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

	阅读次数
	全文
	摘要