转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

doi:10.12307/2022.767

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (30): 4862-4866.doi: 10.12307/2022.767

• 牙髓及牙周膜干细胞 Dental pulp and periodontal ligament stem cells • 上一篇下一篇

转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

艾力麦尔旦·艾尼瓦尔1，木合塔尔·霍加2，王玲1

1新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)口腔外科门诊，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830011； 2深圳市罗湖区人民医院·深圳大学附属第三医院口腔中心，广东省深圳市 518001

收稿日期:2021-09-09 接受日期:2021-11-04 出版日期:2022-10-28 发布日期:2022-03-29
通讯作者: 王玲，主任医师，副教授，硕士生导师，新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)口腔外科门诊，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830011
作者简介:艾力麦尔旦·艾尼瓦尔，男，1992年生，维吾尔族，2019年新疆医科大学口腔医学院毕业，硕士，医师，主要从事牙槽外科及口腔种植方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81560180)，项目负责人：木合塔尔·霍加

Effect of transforming growth factor-beta 3 and bone morphogenetic protein-2 on proliferation and osteogenic differentiation of dental pulp stem cells

Ailimaierdan·Ainiwaer1, Muhetaer·Huojia2, Wang Ling1

1Department of Oral Surgery, First Affiliated Hospital (Affiliated Stomatological Hospital) of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China; 2Oral Center, Shenzhen Luohu People’s Hospital, The Third Affiliated Hospital of Shenzhen University, Shenzhen 518001, Guangdong Province, China

Received:2021-09-09 Accepted:2021-11-04 Online:2022-10-28 Published:2022-03-29
Contact: Wang Ling, Chief physician, Associate professor, Master’s supervisor, Department of Oral Surgery, First Affiliated Hospital (Affiliated Stomatological Hospital) of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
About author:Ailimaierdan·Ainiwaer, Master, Physician, Department of Oral Surgery, First Affiliated Hospital (Affiliated Stomatological Hospital) of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81560180 (to MH)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
牙髓干细胞：通过酶解组织块法从新西兰大白兔前磨牙牙髓中获得的间充质来源成体干细胞，与颌面部诸骨有相同的胚胎学来源，具有多向分化潜能，冻存数年后仍保持良好的增殖和分化能力，是组织工程常用的可以建立细胞库的干细胞。
转化生长因子β3：是一类多效能生长因子，参与细胞增殖和分化等过程并发挥重要调控作用。

背景：转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞的增殖和成骨向分化能力对比相关研究甚少。
目的：探讨相同质量浓度转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞成骨向分化的作用及其初步机制。
方法：采用酶解组织块法从新西兰大白兔牙髓组织中分离培养牙髓干细胞；将第3代牙髓干细胞分为空白组、骨形成蛋白2(80 μg/L)组和转化生长因子β3(80 μg/L)组，采用MTT法检测各组细胞的增殖活力；培养第7，14天行碱性磷酸酶活性定量检测，Runt相关转录因子2、骨涎蛋白免疫细胞化学染色，RT-qPCR法检测成骨相关基因的表达；培养第14，21天进行茜素红染色观察矿化结节形成能力。
结果与结论：①骨形成蛋白2组和转化生长因子β3组的牙髓干细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性均高于空白组(P < 0.05)；转化生长因子β3组第7天碱性磷酸酶活性高于骨形成蛋白2组(P < 0.05)；②转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组Runt相关转录因子2、骨涎蛋白表达均高于空白组(P < 0.05)，其中转化生长因子β3组第7天Runt相关转录因子2蛋白表达高于骨形成蛋白2组(P < 0.05)；③转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白、骨桥蛋白和Osx基因表达量高于空白组(P < 0.05)，第7天转化因子β3组碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2基因的表达高于骨形成蛋白2组(P < 0.05)；④转化生长因子β3组与骨形成蛋白2组矿化结节较空白组明显；⑤结果表明，转化生长因子β3与骨形成蛋白2均能促进牙髓干细胞增殖和成骨向分化；转化生长因子β3对牙髓干细胞成骨早期促进作用优于骨形成蛋白2。
缩略语：转化生长因子β3：transforming growth factor β3，TGF-β3；骨形成蛋白2：bone morphogenetic protein，BMP-2

https://orcid.org/0000-0002-7564-2169 (艾力麦尔旦·艾尼瓦尔)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 转化生长因子β3, 骨形成蛋白2, 牙髓干细胞, 增殖, 成骨分化

Abstract: BACKGROUND: Less is reported about the effect of transforming growth factor-beta 3 and bone morphogenetic protein-2 on the proliferation and osteogenic differentiation of dental pulp stem cells.
OBJECTIVE: To explore the effect of transforming growth factor-beta 3 and bone morphogenetic protein-2 on the osteogenic differentiation of dental pulp stem cells and its preliminary mechanism.
METHODS: Dental pulp stem cells were isolated from the pulp tissue of New Zealand rabbit by the enzymatic digestion method. Dental pulp stem cells at passage 3 were divided into the blank group, bone morphogenetic protein-2 group (80 μg/L) and transforming growth factor-beta 3 group (80 μg/L). The cell proliferation activity in each group was tested by MTT assay. After 7 and 14 days of culture, alkaline phosphatase activities were measured. Runt-related transcription factor 2 and bone sialoprotein protein expression levels were conducted by immunocytochemical staining. Osteogenesis-related gene expression was tested through RT-qPCR method. Alizarin red S staining was conducted after 14 and 21 days of culture to observe mineralized nodules.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Dental pulp stem cell proliferation activity and alkaline phosphatase activity were higher in the bone morphogenetic protein-2 and transforming growth factor-beta 3 groups than those in the blank group (P < 0.05). The alkaline phosphatase activity of the transforming growth factor-beta 3 group on day 7 was higher than that of the bone morphogenetic protein-2 group (P < 0.05). (2) The expression levels of Runt-related transcription factor 2 and bone sialoprotein in the transforming growth factor-beta 3 group and the bone morphogenetic protein-2 group were higher than those in the blank group (P < 0.05). The protein expression of Runt-related transcription factor 2 in the transforming growth factor-beta 3 group on day 7 was higher than that in the bone morphogenetic protein-2 group (P < 0.05). (3) The expression levels of alkaline phosphatase, type I collagen A1, Runt-related transcription factor 2, osteocalcin, osteopontin and Osx genes in the transforming growth factor-beta 3 group and bone morphogenetic protein-2 group were higher than those in the blank group (P < 0.05). On day 7, the expression levels of alkaline phosphatase, type I collagen A1, and Runt-related transcription factor 2 genes of transforming growth factor-beta 3 group were higher than those of bone morphogenetic protein-2 group (P < 0.05). (4) The mineralized nodules in the transforming growth factor-beta 3 group and bone morphogenetic protein-2 group were more obvious than those in the blank group. (5) The results show that transforming growth factor-beta 3 and bone morphogenetic protein-2 can improve the proliferation and osteogenic differentiation of dental pulp stem cells. The osteogenic induction ability of transforming growth factor-beta 3 on dental pulp stem cells was better than that of bone morphogenetic protein-2 at the early stage of osteogenesis.

Key words: transforming growth factor-beta 3, bone morphogenetic protein-2, dental pulp stem cells, proliferation, osteogenic differentiation

中图分类号:

艾力麦尔旦·艾尼瓦尔, 木合塔尔·霍加, 王玲. 转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(30): 4862-4866.

Ailimaierdan·Ainiwaer, Muhetaer·Huojia, Wang Ling. Effect of transforming growth factor-beta 3 and bone morphogenetic protein-2 on proliferation and osteogenic differentiation of dental pulp stem cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(30): 4862-4866.

图/表（结果） 6

2.1 牙髓干细胞形态培养48 h即可观察到牙髓组织周围爬出的牙髓干细胞，见图1A，牙髓干细胞贴壁生长，原代牙髓干细胞形态多呈梭形或纺锤形，五六天后细胞长满培养皿80%-90%。传代培养第3代后的牙髓干细胞形态基本趋于一致，为梭形，见图1B。

2.2 各组牙髓干细胞生长曲线 TGF-β3、BMP-2组第3，5天细胞增殖活性均高于空白组(P < 0.05)，第7天3组细胞增殖活性无差异(P > 0.05)，说明第3-5天为牙髓干细胞对数增长期，第5天后进入生长平台期，见图2。

2.3 各组牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性实验第7，14天TGF-β3、BMP-2组碱性磷酸酶活性均高于空白组(P < 0.05)，第7天 TGF-β3组碱性磷酸酶活性高于BMP-2组(P < 0.05)，第14天碱性磷酸酶活性较第7天有所下降，说明牙髓干细胞已进入矿化阶段，见表2。

2.4 各组牙髓干细胞免疫细胞化学染色结果实验第7，14天TGF-β3组与BMP-2组Runt相关转录因子2、骨涎蛋白表达阳性率均高于空白组(P < 0.05)，第7天TGF-β3组Runt相关转录因子2蛋白表达阳性率高于BMP-2组，第14天TGF-β3组与BMP-2组骨涎蛋白表达量高于空白组但两组无明显差异，见图3。

2.5 各组牙髓干细胞RT-qPCR检测结果 TGF-β3组与BMP-2组各基因表达量始终高于空白组(P < 0.05)；各组培养第7天 TGF-β3组碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2基因的表达高于BMP-2组(P < 0.05)；各组培养第14天TGF-β3组与BMP-2组之间各基因表达量无显著差异，见图4。

2.6 各组牙髓干细胞茜素红染色结果培养第14天，TGF-β3组与BMP-2组茜素红染色出现矿化结节，空白组无结节；培养第21天3组均出现矿化结节，空白组、BMP-2组和TGF-β3组矿化结节数分别为1.86±0.27，2.63±0.38，2.98±0.43，TGF-β3组与BMP-2组矿化结节数量和大小均高于空白组(P < 0.05)，但TGF-β3组与BMP-2组之间无明显差异，见图5。

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引言

颌面部创伤、肿瘤等疾患引起的各类颌面部骨缺损严重影响患者的咬合、咀嚼功能和美观[1]。颌骨缺损的修复重建一直是颌面外科医师面临的难题。自体骨移植是目前公认的修复颌骨缺损的首选治疗方法，但其缺点如供区骨量不足、供区骨形态与受区不符、免疫排斥、创伤大等限制其应用。骨替代品如同种异体骨、异种异体骨和人工合成骨等虽然也是不错的选择，但存在免疫排异、吸收率高、价格贵等缺点，从而影响其广泛应用[2-3]。近年来学者们尝试从组织工程的角度寻找促进自身骨再生从而刺激骨愈合、修复各类骨缺损的方案[4-5]。

牙髓干细胞是外胚间充质来源的具有多向分化潜能的成体干细胞，与颌面部诸骨具有相同的胚胎发育起源。随着组织工程和再生医学的日益发展，在各类生长因子和支架材料的诱导下牙髓干细胞成骨向分化相关的研究愈来愈深入[6-7]。转化生长因子β3(transforming growth factor β3，TGF-β3)是多效能生长因子，参与细胞增殖和分化等过程并发挥重要调控作用[8-9]。课题组前期研究已证实TGF-β3能够以浓度依赖的方式促进牙髓干细胞的成骨向分化，以80 μg/L质量浓度最佳[10]。骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein，BMP-2)同样也是转化生长因子家族的一员，在诱导成骨方面发挥重要作用[8，11]，但BMP-2对牙髓干细胞增殖和分化的影响相关研究甚少。该研究在前期实验基础上，用80 μg/L的TGF-β3与相同质量浓度的BMP-2干预牙髓干细胞，探讨二者对牙髓干细胞增殖和成骨分化的作用效果及其机制。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计细胞学体外实验，各组数据比较采用student-t检验和方差分析。
1.2 时间及地点实验于2019年9-12月在新疆医科大学第一附属医院科技楼干细胞研究实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物健康新西兰幼兔3只，三四周龄，体质量1.5-2.0 kg，雌雄不限，由新疆医科大学实验动物中心提供，使用许可证编号：SYXK(新)2015-0001；生产许可证号：SCXK(新)2015-0004。
1.3.2 实验试剂和仪器胎牛血清、磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline，PBS)、青链霉素、胰蛋白酶、高糖DMEM培养基(Hyclone，美国)；TGF-β3、BMP-2(Peprotech，美国)；碱性磷酸酶活性测定试剂盒(南京建成，中国)；甲基噻唑基四唑(MTT)、茜素红S(Sigma，美国)；Runt相关转录因子2、骨涎蛋白一抗(北京博奥森，中国)；核酸定量仪、CO2恒温孵箱(Thermo，美国)；倒置显微镜(Leica，德国)。
1.4 实验方法
1.4.1 牙髓干细胞分离及培养盐酸利多卡因快速过量注射法将新西兰大白兔处死，取其上下颌骨置于预先配置的高倍双抗液中浸泡30 min，在无菌操作台上将颌骨移置于培养皿中，PBS冲洗3次，无菌条件下分离出颌骨内牙齿并剪除根尖1 mm牙体组织，拔髓针从根尖方向拔出牙髓，将牙髓置于新的培养皿中，PBS冲洗3次，参照课题组前期实验用酶解组织块法分离获得原代牙髓干细胞[10]，原代细胞每两三天换液1次，待细胞长满培养皿80%-90%后首次传代培养。

1.4.2 实验分组将第3代牙髓干细胞分为3组：空白组为含体积分数为10%胎牛血清、1%双抗的DMEM高糖培养液常规培养，TGF-β3组、BMP-2组在空白组培养液中分别加入80 μg/L TGF-β3或80 μg/L BMP-2。
1.4.3 MTT实验取第3代牙髓干细胞，以5 000个/孔接种于4块96孔板中，每板细胞随机分为空白组、TGF-β3组、BMP-2组，每组设4个复孔(其中1孔为空白对照)，各组培养1，3，5，7 d后，分别取1块培养板，弃培养液，根据 MTT试剂盒操作步骤操作并采用酶标仪在490 nm处测各孔吸光度值，每组重复测3次并计算各组平均值，以培养时间为横轴，吸光度平均值为纵轴绘制细胞生长曲线。
1.4.4 碱性磷酸酶活性检测第3代牙髓干细胞以1×104个/孔接种于2块24孔板中，每板细胞随机分为空白组、TGF-β3组、BMP-2组，每组设3个复孔，培养第7，14天取1块板，弃培养液，按照碱性磷酸酶试剂盒操作步骤操作，采用酶标仪在490 nm处检测各组细胞吸光度值，每组重复测3次，取平均值，计算各组碱性磷酸酶活性(金氏单位)。
1.4.5 免疫细胞化学染色第3代牙髓干细胞以1×104个/孔接种于2块24孔板中，每板细胞随机分为空白组、TGF-β3组、BMP-2组，每组设3个复孔，培养第7，14天各取1块培养板，PBS冲洗后用40 g/L多聚甲醛固定1 h，羊血清封闭30 min，加入Runt相关转录因子2和骨涎蛋白一抗(稀释比例均为1∶400)4 ℃过夜，PBS冲洗后滴加二抗室温孵育1 h，滴加DAB显色，苏木精复染，自来水冲洗后镜下观察细胞染色情况。胞质内出现棕黄色不溶性色源颗粒为阳性结果，颜色越深阳性程度越强。显微镜(×200)下随机取中段5个视野，用cellSens Dimension软件分析各组细胞阳性率。
1.4.6 实时荧光定量PCR(Real-time reverse transcriptase quantitative PCR，RT-qPCR) 取第3代牙髓干细胞以1×106个/孔接种于2块6孔板中，每板细胞随机分为空白组、TGF-β3组、BMP-2组，分别在培养第7，14天各取1块板，用Trizol法提取细胞总RNA，反转录试剂盒反转录成cDNA，反转录反应条件为：25 ℃ 5 min，50 ℃ 15 min，85 ℃ 5 min，4 ℃ 10 min，将β-actin作为内参对照。反转录后的RNA用实时荧光定量PCR测定各组细胞碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白、骨桥蛋白和Osx的表达量，绘制熔解曲线，数据用2-ΔΔCt进行分析，用GraphPad Prism 7.0软件进行绘图。实验所有引物均由广州天一辉远公司设计合成，引物序列见表1。

1.4.7 茜素红染色取第3代牙髓干细胞以2×106个/孔接种于2个6孔板中，每板细胞随机分为空白组、TGF-β3组、BMP-2组，每组设2个复孔，每两三天换液1次，分别培养到第14，21天弃培养液，PBS冲洗3次，用40 g/L多聚甲醛室温固定1 h，弃固定液，PBS冲洗3次，加入1 mL 1%的茜素红染液，37 ℃放置40 min，PBS冲洗，移置超净台内自然干燥，在显微镜下观察各组矿化结节形成情况，每组镜下(×100)随机选取5个视野，利用cellSens Dimension软件统计矿化结节数量。
1.5 主要观察指标 ①牙髓干细胞的增殖活力；②牙髓干细胞碱性磷酸酶活性；③牙髓干细胞中Runt相关转录因子2、骨涎蛋白的表达；④牙髓干细胞中碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1、Runt相关转录因子2、骨钙蛋白、骨桥蛋白和Osx基因的表达；⑤牙髓干细胞矿化结节形成情况。
1.6 统计学分析应用GraphPad Prism 7.0软件处理实验数据并进行统计学分析，计量资料以x±s表示，各组数据比较采用student-t检验和方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

牙髓干细胞是具有多向分化能力的成体干细胞，其向成骨方向分化的能力已得到广泛认可[12-13]。TGF-β和BMP 均为转化生长因子超家族中的2个亚家族。TGF-β3是TGF-β的一个亚型，其在组织创伤修复、软骨愈合、瘢痕修复、纤维组织形成方面的研究比较成熟[14-16]。近年来随着生物支架材料的不断更新换代，TGF-β3在生物支架材料的支撑下促进和诱导间充质来源成体干细胞的增殖和成骨、软骨向分化方面的研究愈来愈深入[17-18]，特别是在成骨的早期阶段其作用比较显著[19]，但TGF-β3的作用最佳浓度存在较大的差异。DENG等[20]发现25 μg/L的TGF-β3能够诱导人骨髓间充质干细胞向成骨向分化从而刺激骨再生。课题组前期研究证实80 μg/L的TGF-β3促进牙髓干细胞的成骨分化，其机制有Smad通路的参与[10，21]。TGF-β3在10-100 μg/L范围内可促进幼兔颅盖骨来源成骨细胞的增殖和成骨，其中以10 μg/L的TGF-β3效果最佳[22]。LI等[23]证实TGF-β3通过激活MAPK通道促进牙周膜干细胞的成骨向分化，其成骨效果在TGF-β3质量浓度为500 μg/L时最佳。BMP-2是BMP亚家族40多个成员中与成骨关系最密切的一员，参与并调控骨形成发育和重建过程。BMP-2能够与矿化液联合作用于牙髓干细胞促进其成骨向分化[24]。有研究证实用BMP-2持续诱导牙髓干细胞在成骨早期提高碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2的表达，促进牙髓干细胞的成骨，随着诱导时间增加BMP-2则抑制碱性磷酸酶的表达[25]。有学者发现100 μg/L的BMP-2通过上调碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2、Osx的表达来促进骨髓间充质干细胞的成骨向分化[26]。

牙髓干细胞在各类生长因子、药物以及物理和化学作用下增殖能力会发生变化。牙髓干细胞的对数生长期约为5 d，之后即进入平台期，该研究用相同质量浓度的TGF-β3和BMP-2诱导牙髓干细胞，结果发现TGF-β3和BMP-2在牙髓干细胞对数增长期具有明显促细胞增殖的作用，TGF-β3组和BMP-2组牙髓干细胞进入平台期后的增殖活性仍高于空白组，说明TGF-β3和BMP-2均能促进牙髓干细胞的增殖。TGF-β3与BMP-2均属于TGF-β家族的生长因子，有研究证实二者具有协同作用[27]，该研究未设置TGF-β3与BMP-2联合诱导组，后期研究将进一步探讨两者以相同或不同浓度联合作用于牙髓干细胞对其增殖能力的影响。

碱性磷酸酶是成骨细胞的典型标志酶，成骨细胞成骨早期即在细胞基质内分泌丰富的碱性磷酸酶。Ⅰ型胶原A1也是成骨细胞重要的特异性蛋白，Runt相关转录因子2在成骨分化早期活跃表达，其下游基因是Osx，而骨钙蛋白和骨涎蛋白则在成骨晚期表达明显[28-29]。该研究结果显示TGF-β3组第7天碱性磷酸酶表达量高于BMP-2组，TGF-β3组和BMP-2组第14天碱性磷酸酶表达较第7天低但均高于空白组，随着诱导时间的增加碱性磷酸酶表达有所下降，这可能是因为TGF-β3和BMP-2在成骨早期促进牙髓干细胞基质内碱性磷酸酶分泌，成骨后期则抑制碱性磷酸酶的形成。PCR结果显示成骨早期基因碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原A1和Runt相关转录因子2在第7天表达量均较BMP-2组高，说明TGF-β3在牙髓干细胞成骨分化早期阶段的成骨诱导作用优于BMP-2。成骨形成最后阶段是体外形成矿化结节，实验结果显示TGF-β3组和BMP-2组体外矿化结节形成能力均优于空白组，说明TGF-β3和BMP-2均能促进牙髓干细胞的体外矿化。

有学者将TGF-β3和BMP-2联合作用于骨髓间充质干细胞并发现两者联合应用时促成骨作用优于单独诱导，其机制可能是TGF-β3促进了细胞基质BMP-2的分泌并加强其诱导作用来实现的[27]。HE等[30]研究证实慢病毒介导的TGF-β3和BMP-2对大鼠骨髓间充质干细胞成骨向分化的联合促进作用。周武等[31]也报道了TGF-β和BMP-2联合能明显促进小鼠MC3T3-E1细胞增殖分化及成骨作用。而TGF-β3和BMP-2联合作用于牙髓干细胞的研究甚少，课题组后期研究将进一步探讨两者联合对牙髓干细胞增殖和成骨分化的作用，以及两者最佳浓度和机制。

综上所述，TGF-β3和BMP-2均对牙髓干细胞的增殖和成骨向分化有一定的促进意义，TGF-β3在成骨分化早期诱导牙髓干细胞成骨作用优于BMP-2。该研究为利用生长因子诱导牙髓干细胞促进其成骨从而修复颌面部骨缺损提供了一定的理论基础。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

转化生长因子β3与骨形成蛋白2对牙髓干细胞增殖和成骨分化的影响

Effect of transforming growth factor-beta 3 and bone morphogenetic protein-2 on proliferation and osteogenic differentiation of dental pulp stem cells

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