弧刃针刀治疗冻结肩模型兔炎症因子及组织形态的反应

doi:10.12307/2022.115

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (5): 706-711.doi: 10.12307/2022.115

• 组织构建实验造模 experimental modeling in tissue construction • 上一篇下一篇

弧刃针刀治疗冻结肩模型兔炎症因子及组织形态的反应

王世辉1，程杨1，2，朱赟洁1，2，程少丹2，毛剑莹2

1上海中医药大学，上海市 201203；2上海中医药大学附属光华医院，上海市 200052

收稿日期:2020-10-09 修回日期:2020-10-12 接受日期:2020-12-19 出版日期:2022-02-18 发布日期:2021-10-28
通讯作者: 程杨，硕士，医师，上海中医药大学附属光华医院，上海市 200052
作者简介:王世辉，男，1994年生，山东省济宁市人，汉族，上海中医药大学在读硕士，主要从事颈肩腰腿痛疾病的微创治疗与研究。
基金资助:
上海市科委课题(19401935000)，项目负责人：程少丹

Effect of arc edge needle-scalpel therapy on inflammatory factors and histomorphology of the frozen shoulder in rabbit models

Wang Shihui1, Cheng Yang1, 2, Zhu Yunjie1, 2, Cheng Shaodan2, Mao Jianying2

1Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; 2Guanghua Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200052, China

Received:2020-10-09 Revised:2020-10-12 Accepted:2020-12-19 Online:2022-02-18 Published:2021-10-28
Contact: Cheng Yang, Master, Physician, Guanghua Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200052, China
About author:Wang Shihui, Master candidate, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China
Supported by:
a grant from Shanghai Municipal Science and Technology Committee, No. 19401935000 (to CSD)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
弧刃针刀：又称弧刃针灸针，是针灸针、手术刀和注射针相结合的产物，其形体中空，远端为V形弧刃结构，能够优化传统切割方式，精准定位病灶，具有微创闭合性松解、减张减压、经络刺激等作用，操作简便，疗效显著。
冻结肩：又称为五十肩，好发于中老年人，主要表现为关节疼痛和功能障碍，肩关节各个方向活动受限，冻结肩的发病机制尚未阐明，且治疗方法较多，尚未达成统一共识，临床以保守治疗为主。

背景：弧刃针刀临床治疗冻结肩疗效显著，对于其治疗机制尚缺乏基础研究。
目的：通过观察弧刃针刀疗法对兔冻结肩模型血清中炎症因子以及肌腱、滑膜形态结构的影响，探讨弧刃针刀疗法干预冻结肩的可能机制。
方法：48只雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、电针组、弧刃针刀Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组，每组8只，除空白组外其余各组均采用持续机械劳损加冰敷法制备兔冻结肩模型。成模3 d后，电针组选取肩髃、曲池穴行电针干预，每周3次，连续4周；弧刃针刀各组均分别在结节间沟、大圆肌起始部、冈上肌腱与肌腹结合部3处行弧刃针刀干预，均每周1次，其中弧刃针刀Ⅲ组共干预4次，Ⅰ组干预前2次，Ⅱ组干预后2次。在各组均干预结束3 d后，采用超声检测兔右肩关节腔后隐窝侧积液宽度；ELISA法检测兔血清中白细胞介素1β、NLRP3和Caspase-1水平；苏木精-伊红染色、Masson染色后观察兔肱二头肌长头肌腱和滑膜的组织形态；免疫组化法观察白细胞介素1β蛋白在滑膜中的表达。实验方案经上海中医药大学动物实验伦理委员会批准(批准号为191213015)。
结果与结论：①与空白组相比，超声观察可见模型组肩关节腔后隐窝侧呈现大量积液，干预后，弧刃针刀Ⅰ、Ⅲ组积液宽度明显小于电针组和Ⅱ组；②与模型组相比，电针组及弧刃针刀各组血清中白细胞介素1β、NLRP3和caspase-1水平均明显降低(P < 0.01)，弧刃针刀Ⅰ组血清中白细胞介素1β、NLRP3水平低于Ⅱ组(P < 0.05)；③苏木精-伊红及Masson染色可见电针组、弧刃针刀Ⅱ组部分肌腱纤维增生断裂、滑膜增厚、纤维化程度加重，弧刃针刀Ⅰ、Ⅲ组可减少肌腱纤维增生和滑膜增厚，改善组织炎症纤维化的病理状态；④与模型组相比，电针组及弧刃针刀各组滑膜中白细胞介素1β表达均显著降低(P < 0.01)，其中弧刃针刀Ⅰ、Ⅲ组显著低于Ⅱ组(P < 0.01)；⑤结果说明，弧刃针刀疗法可以降低兔冻结肩模型血清中白细胞介素1β、NLRP3和caspase-1水平以及白细胞介素1β蛋白在滑膜组织中的表达，促进损伤组织修复，从而起到抑制冻结肩局部无菌性炎症的作用；而且弧刃针刀早期干预疗效更佳。

https://orcid.org/0000-0001-6411-8452 (王世辉)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 冻结肩, 弧刃针刀, 白细胞介素1β, 炎性小体, 兔, 动物模型

Abstract: BACKGROUND: Arc edge needle-scalpel therapy has a significant clinical effect in the treatment of frozen shoulder; however, there is still a lack of basic research on the therapeutic mechanism.
OBJECTIVE: To observe the effect of arc edge needle-scalpel therapy on serum inflammatory factors and the morphology and structure of tendon and synovium in a rabbit frozen shoulder model, and to explore the possible mechanism of arc-edge needle knife therapy in the intervention of frozen shoulder.
METHODS: Forty-eight male New Zealand rabbits were randomly divided into blank group (n=8), model group (n=8), electroacupuncture group (n=8), and arc edge needle-scalpel groups I, II, III (n=8 per group). The rabbit frozen shoulder model was made by the method of continuous mechanical strain and ice compress in all groups except for the blank group. After the establishment of the model, the electroacupuncture group was treated with electroacupuncture at Jianyu and Quchi, 3 times a week for 4 continuous weeks. Arc edge needle-scalpel groups I, II, III were treated with arc edge needle-scalpel at internodular groove, the beginning of teres major, and junction between supraspinatus tendon and muscle belly, once a week: four sessions in arc edge needle-scalpel group III, first two sessions in arc edge needle-scalpel group I, and latter two sessions in arc edge needle-scalpel group II. At 3 days after intervention termination, the width of effusion in the posterior recess of the right shoulder joint was detected by ultrasound, the contents of interleukin-1β, NLRP3 and caspase-1 in serum were detected by ELISA method, the histomorphology of long head tendon and synovium of biceps brachii was observed using hematoxylin-eosin and Masson staining, and the expression of interleukin-1β protein in synovium was observed by immunohistochemical method. The study was approved by the Animal Experimental Ethics Committee (approval No. 191213015).
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the blank group, after modeling, a large amount of fluid was observed on the posterior recess side of the shoulder cavity in the model group. After intervention, the width of effusion in the arc edge needle-scalpel groups I and III was significantly smaller than that in the electroacupuncture group and arc edge needle-scalpel group II. Compared with the model group, the levels of interleukin-1β, NLRP3 and caspase-1 in the serum were significantly lower in the electroacupuncture group and arc edge needle-scalpel groups I, II, III (P < 0.01). The levels of interleukin-1 β and NLRP3 in the serum of the arc edge needle-scalpel group I were significantly lower than those of the arc edge needle-scalpel group II (P < 0.05). Under hematoxylin-eosin and Masson staining, electroacupuncture group and arc edge needle-scalpel group II showed partial tendon fiber hyperplasia and rupture, synovium thickening and fibrosis; arc edge needle-scalpel groups I and III showed reduced tendon fiber proliferation and synovium thickening, and improved pathological state of tissue inflammation and fibrosis. Compared with the model group, the expression of interleukin-1β in synovium was significantly lowered in the electroacupuncture group and arc edge needle-scalpel groups I, II, III (P < 0.01), while the expression of interleukin-1β in synovium in the arc edge needle-scalpel groups I, III was significantly lower than that in the arc edge needle-scalpel groups II (P < 0.01). To conclude, arc edge needle-scalpel therapy can reduce the levels of interleukin-1β, NLRP3 and caspase-1 in serum and the expression of interleukin-1β protein in synovium, and promote the repair of damaged tissue in the rabbit frozen shoulder model, so as to inhibit local aseptic inflammation of the frozen shoulder.

Key words: frozen shoulder, arc edge needle-scalpel, interleukin-1β, inflammatory body, rabbit, animal model

中图分类号:

王世辉, 程杨, 朱赟洁, 程少丹, 毛剑莹. 弧刃针刀治疗冻结肩模型兔炎症因子及组织形态的反应[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(5): 706-711.

Wang Shihui, Cheng Yang, Zhu Yunjie, Cheng Shaodan, Mao Jianying. Effect of arc edge needle-scalpel therapy on inflammatory factors and histomorphology of the frozen shoulder in rabbit models[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(5): 706-711.

图/表（结果） 7

2.1 实验动物数量分析实验选用新西兰兔48只，分为6组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。
2.2 超声检测兔右肩关节腔后隐窝侧积液宽度干预结束2 d后，对各组兔右肩关节腔后隐窝侧行超声检测发现，空白组无液性暗区；模型组液性暗区宽度最大，达2.6 mm；干预后，电针组和弧刃针刀各组兔右肩关节腔后隐窝侧宽度均小于模型组，且<2 mm；其中弧刃针刀Ⅰ组兔右肩关节腔后隐窝侧宽度最小，为0.9 mm，Ⅱ组兔右肩关节腔后隐窝侧宽度最大，为1.9 mm，见图1。

2.3 弧刃针刀对兔血清中白细胞介素1β、NLRP3和caspase-1水平的影响 ELISA检测结果显示，和空白组比较，模型组的3种指标在血清中质量浓度均明显升高(P < 0.01)；干预治疗后，与模型组比较，电针组和弧刃针刀各组的3种指标水平均明显降低(P < 0.01)；弧刃针刀Ⅰ组血清中白细胞介素1β、NLRP3水平与空白组相比差异无显著性意义(P > 0.05)；电针组血清中caspase-1水平与空白组相比差异无显著性意义(P > 0.05)；与弧刃针刀Ⅱ组相比，弧刃针刀Ⅰ组血清中白细胞介素1β、NLRP3水平明显减少(P < 0.05)，见表1。

2.4 弧刃针刀对兔肱二头肌长头肌腱和滑膜组织形态的影响
(1)苏木精-伊红染色：空白组肌腱纤维整齐排列，染色均匀；模型组肌腱纤维排列紊乱，蜷曲断裂，细胞增生，炎性细胞浸润，染色不均；电针组肌腱纤维排列呈波形改变，细胞增生，染色尚均；弧刃针刀Ⅰ组肌腱细胞基本沿纤维走行分布，染色均匀；弧刃针刀Ⅱ组肌腱纤维排列呈波浪状，部分纤维蜷曲断裂，染色不均；弧刃针刀Ⅲ组肌腱纤维局部呈波形改变，纤维束间裂隙较大，染色均匀，见图2。

空白组滑膜细胞一两层，排列整齐，染色均匀；模型组滑膜细胞增生，排列紊乱，滑膜深层结构致密，炎性细胞浸润和血管增生，部分血管内可见大量的红细胞；电针组滑膜细胞增生，排列紊乱，局部可见血管增生；弧刃针刀Ⅰ组滑膜细胞形态正常，排列较整齐，染色均匀；弧刃针刀Ⅱ组滑膜细胞增生，排列紊乱，局部呈簇状，滑膜深层结构致密，血管增生，血管内可见少量红细胞；弧刃针刀Ⅲ组滑膜轻度增生，未见炎性细胞浸润，局部可见血管增生，见图3。

(2)Masson染色：正常组滑膜见少量纤维，颜色较浅；模型组滑膜重度纤维化，纤维呈蓝色，染色着色深，滑膜内血管增生，血管内红细胞淤积，血管周围纤维化；电针组滑膜局部纤维化，纤维染色着色较深，滑膜细胞轻度增生；弧刃针刀Ⅰ组、Ⅲ组滑膜纤维化程度显著减轻，未见细胞增生，弧刃针刀Ⅲ组轻度血管增生；弧刃针刀Ⅱ组轻中度纤维化，纤维染色着色较深，可见细胞增生，见图4。

2.5 弧刃针刀对兔滑膜中白细胞介素1β 蛋白的影响空白组滑膜中几乎不表达白细胞介素1β，与空白组相比，模型组滑膜中白细胞介素1β显著表达，呈棕黄色(P < 0.01)。与模型组相比，治疗各组滑膜中白细胞介素1β表达均显著降低 (P < 0.01)，其中弧刃针刀Ⅰ、Ⅲ组与Ⅱ组相比，差异有显著性意义(P < 0.01)，见表2，图5。

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引言

冻结肩(frozen shoulder，FS)，又称为粘连性肩关节囊炎，它是一种软组织疾病，主要表现为肩关节疼痛、僵硬和功能活动丧失。冻结肩一般人群患病率为2%-5%，多见于40-60岁的中老年人[1-2]。冻结肩多为原发性，但也可继发于创伤、糖尿病、心脏病、高脂血症、帕金森病以及甲状腺疾病等[3]。冻结肩具有自愈倾向，但近期研究表明，冻结肩病程可长达10年[4-5]。HAND等[6]发现超过50%的冻结肩患者即使经过几年的治疗仍留有疼痛和功能障碍，冻结肩成为影响人们生活质量的一个重要疾病。
冻结肩的发病机制至今仍未阐明，目前主要认为炎症因素、纤维化因素、神经纤维增生以及代谢紊乱等在疾病的发病过程中起重要作用[7]，尤以炎症因素为主。白细胞介素1β是免疫反应的重要炎症递质，在慢性炎症的病理发展过程中起主导作用。研究表明，白细胞介素1β等炎症递质的表达增加在冻结肩的发病机制中占有重要地位[8-10]。通常来说，白细胞介素1β是通过依赖炎症体的途径产生。炎症体主要由识别炎症的受体(NACHT，NLRP3)、衔接蛋白(ASC)和效应蛋白(caspase-1)组成的一种多聚体蛋白复合物。蛋白复合物形成后，NLRP3炎症体激活caspase-1，caspase-1进而蛋白水解白细胞介素1β前体为白细胞介素1β，产生炎症反应[11]，且既往研究证实了炎症小体在炎症和免疫疾病发病机制中的中心作用[12]。
弧刃针刀(arc edge needle-scalpel，AENS)是中西医结合的产物，将中医中“针灸针”“埋线”与西医中“手术刀”“注射器”有机结合，不仅发挥了中医“针灸”疏经通络、调畅气血的作用，又具有西医“手术刀”微创松解的作用[13]。弧刃针刀临床治疗冻结肩有确切疗效，但对于其治疗机制尚缺乏基础研究。此次实验通过持续机械劳损加冰敷制备兔冻结肩模型，采用弧刃针刀分期治疗，同时与电针治疗做对照，干预结束后通过大体观察，超声检测兔右肩关节积液，ELISA法检测兔血清中白细胞介素1β、NLRP3和Caspase-1水平，病理学评价肌腱和滑膜的组织形态以及免疫组化法检测白细胞介素1β蛋白在兔滑膜中的表达水平，以期探索弧刃针刀疗法干预兔冻结肩的可能机制。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物观察。
1.2 时间及地点实验于2018年6月至2019年12月在上海中医药大学完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物清洁级、健康雄性新西兰兔共48只，体质量2.0-3.0 kg，由上海市松江区车墩实验动物良种场提供，许可证号：SCXK(沪)2017-0003。新西兰兔饲养于上海中医药大学实验动物中心，单笼饲养，饲养温度20-25℃，湿度45%-60%，正常饮水摄食。
1.3.2 主要试剂和仪器白细胞介素1β、NLRP3 和 caspase-1 试剂盒(上海博谷生物科技有限公司)；苏木精-伊红染色液(艾佳生物科技股份有限公司)；Masson染液(北京索莱宝科技有限公司)；白细胞介素1β兔抗(武汉三鹰生物技术有限公司)；制冰机(IMS-20，郑州南北制冰机有限公司)；彩超诊断仪(ARIETTA70，日本日立公司)；酶标仪(DENLEY DRAGON Wellscan MK3，赛默飞世尔科技)；光学显微镜(AE41，麦克奥迪实业集团有限公司)。其他均为实验室常备仪器。
1.4 实验方法
1.4.1 实验分组、造模和干预 48只新西兰兔适应性饲养5 d后，随机分为空白组(n=8)和造模组(n=40)。造模组采用持续机械劳损加冰敷的方法制备兔冻结肩模型[14-18]，具体方法如下：①脱毛：造模组兔实施右肩部外侧脱毛，脱毛面积约为7 cm×7 cm；②固定：使家兔呈俯卧位，两后肢和左前肢固定在自制兔台上，右前肢上臂与水平摇床相连；③持续劳损：以240次/min的频率，1.5 cm的振幅摇动兔右肩关节，每天持续4 h，连续3 d；④冰敷：于劳损造模结束后开始，用自制冰袋外敷兔右肩部，且在冰块融化时及时更换，每天持续4 h，连续3 d。造模后家兔精神状态变差，皮毛无光泽，患肩可见充血肿胀，出现瘀斑，后有不同程度缓解，行走跛行，活动不利，提示造模成功[16]。

模型制备成功后随机分为模型组、电针组、弧刃针刀Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组，每组8只，其中电针组于造模成功3 d后行电针干预：根据李忠仁主编的《实验针灸学》兔穴位定位及其解剖位置[19]，选取肩髃、曲池穴行电针干预，毫针
(0.20 mm×25 mm)直刺约1 cm后接上电针仪，以2/100 Hz的疏密波、2 mA的电流强度刺激上述穴位，时间为20 min，每周3次，连续4周。弧刃针刀Ⅰ组：造模成功3 d后干预，每周1次，共干预2次；弧刃针刀Ⅱ组：造模成功17 d后干预，每周1次，共干预2次；弧刃针刀Ⅲ组：造模成功3 d后干预，每周1次，共干预4次。弧刃针刀干预操作如下：①固定：将模型兔固定，对兔患肩部进行触诊；②定位：分别在结节间沟、大圆肌起始部、冈上肌腱与肌腹结合部3处进行定位；③消毒：患侧肩部常规消毒；④进针：选取规格0.7mm×38 mm的弧刃针刀，使针体与皮肤垂直，快速进弧刃针刀；⑤松解：对病灶点进行松解，体会手下感觉，松解过程中可听到“咔嚓”声响，当感觉有落空感或突破感时停止；⑥出针：快速出针，出针后予以按压，防止出血。
1.4.2 标本采集及处理在各组均干预结束3 d后，进行实验取材，具体操作如下：①麻醉：取材前一日兔禁食，以3%戊巴比妥钠行兔腹腔麻醉(30 mg/kg)；②取血：切开兔腹腔，暴露腹主动脉，取血5 mL后用止血钳夹住腹主动脉，血液常温静置2 h后放入离心机中离心，离心速度为3 000 r/min，时间为15 min，后取上清液置入冻存管中，编号后于-80 ℃冰箱中保存待测；③取肌腱、滑膜：剪开兔右肩关节皮肤，充分暴露右肩关节，取下肱二头肌长头肌腱，在冰面上生理盐水漂洗干净，滤纸吸干，固定于40 g/L多聚甲醛溶液中，同时打开右肩关节腔，观察有无关节积液以及滑膜情况，并取下滑膜，固定于40 g/L多聚甲醛溶液中。
1.4.3 检测指标及方法
(1)超声检测兔右肩关节腔后隐窝侧积液宽度：在各组均干预结束2 d后采用彩超诊断仪检测，高频线阵探头频率为7-12 MHz。检测前，对兔右肩关节充分备皮，使右肩关节外展外旋，将涂有耦合剂的探头置于实验兔右肩周部，主要观测家兔右肩关节腔后隐窝侧内无回声区范围，并对图像进行保存。
(2)ELISA法检测兔血清中的白细胞介素1β、NLRP3和caspase-1的水平：取出96孔板，设置标准品组、空白组、待测样品组以及复孔，分别加入100 μL的标准品溶液， 100 μL的蒸馏水，100 μL的待测样本。随后加酶标溶液，温育，洗板，显色，终止，读板，最终对数据进行分析。
(3)苏木精-伊红染色观察肱二头长头肌腱和滑膜形态：常规石蜡切片脱蜡水化后用苏木精-伊红染色液染色，根据颜色深浅用体积分数80%的乙醇分化，二甲苯透明，中性树胶封固后进行镜检。
(4)Masson染色观察滑膜形态：常规石蜡切片脱蜡水化后用Weigert 铁苏木素染色液染色10 min，1%盐酸乙醇分化水洗，Masson蓝化液返蓝5 min后水洗，丽春红品红染色液染色10 min，弱酸工作液洗1 min，磷钼酸溶液洗2 min，弱酸工作液1 min，苯胺蓝染色液中染色2 min，弱酸工作液洗 1 min，脱水透明后封固，镜检。
(5)IHC检测白细胞介素1β蛋白在滑膜组织中的表达水平：常规石蜡切片脱蜡水化后去内源性过氧化氢酶，抗原修复，封闭，抗体孵育后显色，复染分化返蓝，脱水，透明封固，光镜下观察并拍片。用ImageJ软件定量评估蛋白阳性表达率。
1.5 主要观察指标 ①干预结束后进行大体观察；②超声检测兔右肩关节积液情况；③ELISA法检测兔血清中白细胞介素1β、NLRP3和Caspase-1水平；④病理学评价肌腱和滑膜的组织形态；⑤免疫组化法检测白细胞介素1β蛋白在兔滑膜中的表达水平。
1.6 统计学分析运用统计学软件SPSS 24.0对实验数据分析，结果以x±s表示。计量资料符合正态性分布且方差齐，采用单因素方差分析，不符合正态分布采用非参数用 Kruskal-Wallis H秩和检验。以P < 0.05为差异有显著性意义，以P < 0.01为差异有非常显著性意义。

讨论

冻结肩以肩关节疼痛和功能障碍为主要特征，疼痛是冻结肩最主要的临床症状之一，常呈渐进性加重，患者多主诉夜间疼痛加剧。长期的疼痛不仅影响患者的功能活动，还易使患者产生负面情绪，比如焦虑、抑郁等。临床冻结肩常用超声作为辅助诊断工具，超声作为一种定性诊断工具被临床工作者所熟知，其定性测量尤为重要，比如回声、结构的外观，以及与临床结果的比较[20]。
现在越来越多的基础实验纳入超声检测，比如类风湿关节炎、骨关节炎以及冈上肌肌腱炎等疾病的基础实验多把超声检测作为评价造模与疗效的一项标准。郑擎等[21]证实在兔早期类风湿性关节炎的诊断中，超声检测比血清学检查更为敏感。吴长洁等[22]对类风湿关节炎兔双膝股胫关节行常规超声检查，测量滑膜最大厚度，观察滑膜内血流信号，并结合滑膜病理进行相关性分析，结果显示常规超声和超声造影都能反映类风湿关节炎滑膜病理变化，能动态观察滑膜情况。此次实验通过超声检测发现模型组兔患肩关节腔存在大量积液，其与临床诊断冻结肩的影像学结果相吻合，提示兔冻结肩模型制备成功。
不同类型的炎症细胞因子，如白细胞介素1β、白细胞介素6、白细胞介素17和肿瘤坏死因子α，均可以加速骨关节炎的软骨退化、滑膜炎症和疾病进展[23]。研究发现，白细胞介素1β、白细胞介素6等炎症递质在冻结肩患者中的表达发生改变[24]。慢性炎症细胞包括肥大细胞，T、B细胞以及巨噬细胞已在冻结肩患者的肩关节囊活检中被发现，而病变的肩关节囊显示出失调的白细胞介素1β等细胞因子，被认为是推动炎症进程的重要因素。CHEN等[25]分析中国汉族人群中42例冻结肩患者和50例健康对照者中白细胞介素1β rs1143627、基质金属蛋白酶3 rs650108、转化生长因子β1 rs1800469和生长分化因子5 rs143383的等位基因和基因型频率，同时检测两组患者血清中白细胞介素1β的表达水平。研究发现白细胞介素1βrs1143627 CC基因型与冻结肩发病风险相关(P=0.022)，且白细胞介素1β在冻结肩组中的表达水平明显高于对照组(P < 0.001)，结果表明白细胞介素1β与冻结肩易感性相关，在中国汉族人群冻结肩的发病机制中可能起到关键作用。
炎症体是一种多聚体蛋白复合体，它能协调宿主抵抗感染性病原体相关分子和非感染性生理损伤过程中释放的危险相关分子[26]。炎症小体的临床重要性已在以炎症和组织损伤为特征的疾病中得到证实，比如关节的几种病理就与异常炎症小体参与有关，其中包括痛风、类风湿性关节炎和幼年特发性关节炎等[27]。NLRP3是一种细胞内复合物，其介导细胞对外源性和内源性病原体的反应，调节促炎细胞因子的释放，主要是白细胞介素1β。此次实验中模型组血清中白细胞介素1β、NLRP3、caspase-1水平明显升高，弧刃针刀干预后的白细胞介素1β、NLRP3、caspase-1水平明显降低，弧刃针刀Ⅰ组血清中白细胞介素1β、NLRP3水平与空白组相比无统计学意义，提示弧刃针刀可通过抑制细胞炎性因子分泌起到保护肩关节的作用。
针刀是中西医结合的产物，融合多种治疗方法，既有中医治疗痹病通络活血的思想，又有现代医学微创治疗慢性疼痛疾病的理念。郭长青等[28]研究表明针刀疗法可以改善兔肩周炎模型局部组织病理变化，减少滑膜增厚和肌腱纤维增生，促进组织的修复。弧刃针刀作为传统针刀的继承和创新，其针体粗末有刃，刺激强度大，可以通络活血、行气止痛；同时还能松解筋缩，剥离筋僵，起到“解结”的作用。王学昌等[29]采用弧刃针刀治疗73例重症(度)冻结肩患者，每周1次，3次为1个疗程；治愈69例，好转3例，无效1例，有效率达98.63%。程少丹等[13]采用弧刃针刀配合手法治疗中度冻结肩，取得显著疗效。早期研究发现电针兔肩周炎模型肩髃穴可抑制炎症反应[16]，故此次研究以电针组作为阳性对照组，探讨弧刃针刀对兔冻结肩模型的治疗作用。超声、病理学、免疫组化等结果表明弧刃针刀和电针作用相同，都可抑制兔冻结肩模型炎症因子表达，改善关节肌腱和滑膜病理变化，缓解关节组织损伤。弧刃针刀Ⅰ组兔肩关节腔积液宽度、血清中白细胞介素1β、NLRP3水平以及滑膜组织中白细胞介素1β蛋白表达均显著低于Ⅱ组，苏木精-伊红、Masson染色弧刃针刀Ⅰ组肌腱、滑膜病变明显优于Ⅱ组，表明弧刃针刀干预越早，疗效更显著。但通过弧刃针刀Ⅰ组和Ⅲ组的比较发现，随着治疗次数的增加，疗效并未有显著改善。
综上所述，采用持续机械劳损加冰敷可以成功制备兔冻结肩模型，其病理以炎症纤维化为主。弧刃针刀疗法可以降低兔冻结肩模型血清中白细胞介素1β、NLRP3和caspase-1水平以及白细胞介素1β蛋白在滑膜组织中的表达，促进损伤组织修复，从而起到抑制冻结肩局部无菌性炎症的作用。弧刃针刀早期干预，疗效更佳。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

弧刃针刀治疗冻结肩模型兔炎症因子及组织形态的反应

Effect of arc edge needle-scalpel therapy on inflammatory factors and histomorphology of the frozen shoulder in rabbit models

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