神经生长因子干预大鼠骨骼肌卫星细胞增殖及α-肌动蛋白的表达

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.3513

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (13): 2030-2035.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.3513

• 干细胞因子及调控因子 stem cell factors and regulatory factors • 上一篇下一篇

神经生长因子干预大鼠骨骼肌卫星细胞增殖及α-肌动蛋白的表达

颜南，司晓凤，曾亮，田伟，单广东，熊礼硕，杨炜杰，王正东

沈阳医学院，辽宁省沈阳市 110034

收稿日期:2020-05-28 修回日期:2020-05-29 接受日期:2020-06-29 出版日期:2021-05-08 发布日期:2020-12-28
通讯作者: 王正东，博士，副教授，沈阳医学院基础医学院解剖学教研室，辽宁省沈阳市 110034
作者简介:颜南，女，1978年生，辽宁省营口市人，汉族，博士，副教授，主要从事神经损伤机制的研究。司晓凤，女，1992年生，辽宁省瓦房店人，汉族，医师，主要从事冠心病的基础与临床研究。
基金资助:
辽宁省科学技术计划项目(2017225060)，项目负责人：王正东

Nerve growth factor interferes with proliferation and alpha-actin expression of skeletal muscle satellite cells in rats

Yan Nan, Si Xiaofeng, Zeng Liang, Tian Wei, Shan Guangdong, Xiong Lishuo, Yang Weijie, Wang Zhengdong#br#

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Shenyang Medical College, Shenyang 110034, Liaoning Province, China

Received:2020-05-28 Revised:2020-05-29 Accepted:2020-06-29 Online:2021-05-08 Published:2020-12-28
Contact: Wang Zhengdong, MD, Associate professor, Shenyang Medical College, Shenyang 110034, Liaoning Province, China
About author:Yan Nan, MD, Associate professor, Shenyang Medical College, Shenyang 110034, Liaoning Province, China Si Xiaofeng, Physician, Shenyang Medical College, Shenyang 110034, Liaoning Province, China
Supported by:
the Science and Technology Program of Liaoning Province, No. 2017225060 (to WZD)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
骨骼肌卫星细胞：是一种未分化的细胞，来源于胚胎中胚层干细胞，位于骨骼肌细胞基底膜和浆膜肌纤维之间。正常情况下这些细胞处于静止状态，在外界刺激或应激状态下，骨骼肌卫星细胞可分化、增殖、融合形成多核细胞，生成新的肌纤维。骨骼肌卫星细胞在生长、修复等生理过程中起着至关重要的作用。
神经生长因子：是一种内源性神经营养素，参与哺乳动物神经元的发育、维持和再生。神经生长因子和脑源性神经营养因子是胚胎和成年运动神经元的存活、增殖和分化的关键，在运动神经元免受变性改变中发挥着重要保护作用。在体内外条件下的神经营养因子能够维持神经元的发育、存活和功能，对中枢神经系统的胆碱能神经元具有营养和分化活性。

背景：临床研究证实，向神经受损部位注射神经生长因子可改善骨骼肌的运动功能。
目的：观察神经生长因子对大鼠原代骨骼肌卫星细胞增殖的影响。
方法：采用组织块培养法培养大鼠原代骨骼肌卫星细胞。将第3代骨骼肌卫星细胞分3组培养：对照组加入培养液，低、高浓度组分别加入含10，20 U/mL神经生长因子的培养液。培养2，4，6 d时，倒置相差显微镜与苏木精-伊红染色观察细胞形态，免疫组化染色观察细胞α-肌动蛋白表达；培养1，2，3，4 d后，采用CCK-8法检测细胞增殖活性。
结果与结论：①倒置相差显微镜显示，随着培养时间的增加，各组骨骼肌卫星细胞数量逐渐增多，细胞形态由圆形逐渐变为细长的梭形、纺锤形或多角形，并逐渐融合并沿同一个方向排列，并且高浓度组细胞数量多于低浓度组、对照组(P < 0.05)；②苏木精-伊红染色显示，各组骨骼肌卫星细胞轮廓清晰可见，密集分布，胞核较大且深染，组间无明显差异；③免疫组化染色显示，各组均可见α-肌动蛋白阳性表达，3组间α-肌动蛋白阳性表达吸光度值比较差异无显著性意义(P > 0.05)；④CCK-8检测显示，低、高浓度组细胞活力高于对照组 (P=0.000)；⑤结果表明，高、低浓度的神经生长因子均能促进骨骼肌卫星细胞的增殖，但对α-肌动蛋白表达无影响。
https://orcid.org/0000-0002-5462-4455(王正东)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 骨, 骨骼肌, 卫星细胞, 因子, 神经生长因子, 细胞培养, 肌动蛋白, 细胞增殖

Abstract: BACKGROUND: Clinical studies have confirmed that the injection of nerve growth factor into the nerve damage site can improve the motor function of skeletal muscle.
OBJECTIVE: To observe the effect of nerve growth factor on the proliferation of primary skeletal muscle satellite cells in rats.
METHODS: The original generation of rat skeletal muscle satellite cells were cultivated by the tissue block method, and the third generation of skeletal muscle satellite cells were divided into three groups. The control group was added with culture medium; the low concentration group and the high concentration group were added with culture medium containing 10, 20 U/mL nerve growth factors, respectively. At 2, 4 and 6 days after culture, the cell morphology was observed by inverted phase contrast microscope and hematoxylin-eosin staining, and the expression of α-actin was observed by immunohistochemistry. At 1, 2, 3, and 4 days after culture, CCK-8 assay was used to detect the cell proliferation activity.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Inverted phase contrast microscope displayed that with the increase of culture time, the number of skeletal muscle satellite cells in each group increased gradually, and the cell morphology gradually changed from round to fusiform, spindle or polygonal, and gradually fused and arranged along the same direction, and the number of cells in high concentration group was more than that in low concentration group and control group
(P < 0.05). (2) Hematoxylin-eosin staining showed that the outline of satellite cells in skeletal muscle of each group was clear and densely distributed, and the nucleus was large and deeply stained; there was no significant difference among groups. (3) Immunohistochemical results showed that the expression of α-actin in skeletal muscle in each group was positive, but there was no statistical difference in the optical density of α-actin positive particles in each group (P > 0.05). (4) The CCK-8 assay results showed that cell viability of low and high concentration groups was higher than that of control group (P=0.000). (5) Above results confirm that high and low concentrations of nerve growth factors could promote the proliferation of skeletal muscle satellite cells, but had no effect on the expression of α-actin in skeletal muscle satellite cells.

Key words: bone, skeletal muscle, satellite cell, factor, nerve growth factor, cell culture, actin, cell proliferation

中图分类号:

颜南, 司晓凤, 曾亮, 田伟, 单广东, 熊礼硕, 杨炜杰, 王正东. 神经生长因子干预大鼠骨骼肌卫星细胞增殖及α-肌动蛋白的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(13): 2030-2035.

Yan Nan, Si Xiaofeng, Zeng Liang, Tian Wei, Shan Guangdong, Xiong Lishuo, Yang Weijie, Wang Zhengdong. Nerve growth factor interferes with proliferation and alpha-actin expression of skeletal muscle satellite cells in rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(13): 2030-2035.

图/表（结果） 5

2.1 各组细胞生长状态从图1可以看出，随着培养时间的增加，各组骨骼肌卫星细胞数量逐渐增多，低、高浓度组细胞生长速度较快，细胞形态由圆形逐渐变为细长的梭形、纺锤形或多角形，并逐渐融合并沿同一个方向排列。高浓度组培养2，4，6 d的细胞数量多于低浓度组、对照组(P < 0.05)，低浓度组培养4，6 d的细胞数量多于对照组(P < 0.05)，见表1。

2.2 各组细胞增殖随着培养时间的增加，各组骨骼肌卫星细胞活力显著增加；相同时间点下，低、高浓度组细胞活力高于对照组 (P=0.000)，低、高浓度组比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见图2。

2.3 各组细胞形态苏木精-伊红染色显示，各组骨骼肌卫星细胞轮廓清晰可见，密集分布，胞核较大且深染，细胞质染成粉色；同一组别下，不同时间点间细胞形态差异不大；同一时间点下，3组间细胞形态也无明显差别，见图3。

2.4 各组细胞α-肌动蛋白表达将细胞浆呈现棕黄色色素沉着视为阳性细胞。各组均可见阳性细胞，各组骨骼肌α-肌动蛋白表达均为阳性；同一时间下，3组间阳性颗粒色素沉着无明显差异，见图4。

用图像分析程序Image J测量各组免疫反应的阳性表达信号强度，结果显示各组α-肌动蛋白阳性颗粒吸光度值无差异(P=0.338 9)；同一组别下，随着时间的增加，α-肌动蛋白的平均吸光度值有下降的趋势，但各时间点比较差异无显著性意义(P > 0.05)；相同时间点下，3组间两两比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见表2。

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引言

骨骼肌是体积最大的人体组织，各种物理、化学及生物学因素等均能导致骨骼肌损伤及肌肉细胞的凋亡和坏死，部分严重的骨骼肌损伤甚至影响运动能力，因此骨骼肌损伤受到广泛关注。随着技术的发展，骨骼肌组织能够在受损后修复重建[1-2]。有学者推测骨骼肌卫星细胞是休眠的成肌细胞[3]，经过多年研究最终确定骨骼肌卫星细胞与肌肉再生中出现的成肌细胞间的联系。移植实验证明，骨骼肌卫星细胞为可自我更新的干细胞[4]。其他生肌潜力细胞的出现对骨骼肌卫星细胞的确切作用产生了质疑[5-6]，这些研究也进一步加深了对骨骼肌卫星细胞生物学的理解。骨骼肌卫星细胞是损伤后肌肉再生所需的干细胞，受损后被激活，经过增殖和分化形成骨骼肌[7]。骨骼肌卫星细胞具有双向分化潜能，不仅能分化为骨骼肌细胞，还具有分化为褐色脂肪细胞的能力[8-10]。
骨骼肌卫星细胞是一种未分化的细胞，来源于胚胎中胚层干细胞，位于骨骼肌细胞基底膜和浆膜肌纤维之间[11]，正常情况下这些细胞处于静止状态，在外界刺激或应激状态下，骨骼肌卫星细胞可分化、增殖、融合形成多核细胞，生成新的肌纤维[12-13]。研究表明，骨骼肌卫星细胞在创伤后骨骼肌纤维的修复和再生过程中起着重要作用[11]，但在肌肉再生过程中调节骨骼肌卫星细胞命运和决定分化的表观遗传机制尚不完全清楚[14]。众所周知，骨骼肌瘫痪是因为失去了神经的支配。以往的研究表明，神经生长因子能促进神经元生长，对脊髓损伤后神经功能恢复有影响[15-16]。临床上通过向神经受损部位注射神经生长因子来改善骨骼肌的运动功能[17]。神经生长因子使神经纤维得到修复，神经纤维可以促进骨骼肌的再生。研究发现，大鼠坐骨神经注射神经生长因子后，萎缩肌肉的结构和功能得到了改善[18]。在体外培养骨骼肌细胞时，加入神经生长因子能否刺激骨骼肌细胞的增殖呢？
原代骨骼肌卫星细胞通常用于体外研究，目前酶消化法是分离原代骨骼肌肌卫星细胞最常用的方法。酶消化法由多个复杂步骤组成[19]，获得的细胞数量少，如果消化过度将导致细胞损伤和生长不良。为避免酶消化法的缺点，实验采用组织块培养法分离大鼠骨骼肌卫星细胞，希望探索并建立一种更简便、全面的促进原代骨骼肌卫星细胞增殖的方法，最终为研究外源性化合物对骨骼肌细胞的影响提供足够的细胞[20]。

材料方法

1.1 设计对比观察细胞实验。
1.2 时间及地点实验于2015年3月至2019年12月在沈阳医学院中心实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 主要实验试剂注射用鼠神经生长因子[舒泰神(北京)]；CCK-8试剂盒(诺唯赞，中国)；胎牛血清(BI，美国)；PBS(Hyclone，美国)；青霉素、链霉素、Cell Freezing
Medium-DMSO(诺唯赞，中国)。
1.3.2 主要实验仪器 SeriesⅡ 3110 CO2培养箱(Thermo，美国)；XSZ-D2倒置显微镜(重庆光学仪器，中国)；JD100电子天平(沈阳龙腾电子，中国)；PMC-880MINI离心机(TOMY SEIKO，日本)；JW-1024医用低速离心机(安徽嘉文仪器，中国)；3K30高速低温离心机(Sigma，德国)；IMS-40全自动雪花制冰机(常熟雪科电器，中国)；DK-8AXX电热恒温水槽(上海一恒科技，中国)。
1.3.3 实验动物取1周龄SD大鼠2只，体质量5-10 g，雌雄不拘，由沈阳医学院实验动物中心提供，动物生产许可证SCXK(辽)2015-0001。动物处理获得沈阳医学院实验动物福利伦理委员会批准。
1.4 实验方法
1.4.1 培养骨骼肌卫星细胞颈脱位法处死大鼠，放入体积分数75%乙醇浸泡2 min消毒。无菌环境下分离后腿腓肠肌肌肉组织，用剪刀将腓肠肌肌肉切成1 mm×1 mm×1 mm左右组织块，PBS洗涤3次；弃去废液，加入少量含体积分数10%胎牛血清的DMEM，移入培养瓶中，加DMEM溶液至体积10 mL；置入37 ℃、体积分数5%CO2的培养箱中培养。
1.4.2 实验分组将第3代骨骼肌卫星细胞分组培养：对照组加入培养液，低、高浓度组分别加入含10，20 U/mL神经生长因子的培养液。
1.4.3 细胞生长状态将第3代骨骼肌卫星细胞加入25 cm2细胞培养瓶中，每瓶1×106个细胞，按1.4.2分组。培养第2，4，6天，倒置显微镜下观察各组细胞生长状态，并应用细胞计数板对细胞进行计数。
1.4.4 CCK-8法筛选细胞活力用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基培养细胞至足量后，消化制成1×108 L-1的细胞悬液，按100 μL/孔液体量接种于96孔培养板，培养24 h
细胞贴壁后按1.4.2分组处理，每孔加入培养液100 μL，每组3复孔[21-22]。培养1，2，3，4 d后，加入CCK-8试剂10 μL，
2 h后用酶标仪测定各孔在450 nm波长处的吸光度值(A)。将各测试孔的A值减去调零孔A值或对照孔A值。各重复孔的A值取平均数。细胞活力=(加药细胞A值-空白A值)/(对照孔A值-空白孔A值)。空白孔为不含细胞的培养液。
1.4.5 苏木精-伊红染色观察细胞形态按1.4.2分组培养2，4，6 d后，取出各组细胞爬片，PBS洗涤3次，每次1 min；
体积分数95%乙醇固定20 min，PBS洗涤3次，每次1 min；
苏木精染液染核2.0-3.0 min，自来水洗涤；若镜下观察细胞核染色过深，用1%盐酸乙醇溶液分色数秒，自来水洗涤，浸入伊红染液染胞质1 min，自来水洗涤，吹干或自然晾干细胞爬片后，中性树胶封固。
1.4.6 免疫组化染色观察细胞α-肌动蛋白表达按1.4.2分组培养2，4，6 d后，取出各组细胞爬片，PBS洗涤1次，在室温用40 g/L多聚甲醛溶液固定30 min；PBS清洗1次，加入1%的Triton X-100 30 μL，室温孵育10 min；PBS冲洗3次，每次5 min；体积分数30%H2O2∶甲醇(1∶50)室温孵育30 min，以灭活内源性过氧化物酶；PBS清洗2次，5%BSA溶液进行封闭；去除多余液体，添加1∶200抗α-肌动蛋白多克隆抗体(ABclonal)于4 ℃过夜；PBS洗涤2次，滴加生物素化山羊抗兔IgG，室温作用30 min；PBS清洗3次，滴加试剂SABC，室温作用20 min；PBS清洗3次。取1 mL蒸馏水，加DAB试剂盒中A、B、C试剂各1滴，混匀后加至细胞孔中，室温显色，显微镜下控制反应时间。苏木精轻度复染，系列乙醇脱水，二甲苯透明，中性树脂封固后光学显微镜下观察并拍照。每组每个图片在100倍显微镜下随机选取4个视野拍照，利用Image J软件扫描图片上阳性颗粒的平均灰度值。
1.5 主要观察指标各组骨骼肌卫星细胞的生长状态、增殖、形态与α-肌动蛋白表达。
1.6 统计学分析各组数据结果用x±s表示，用GraphPad Prism 6.0软件绘制统计图。采用SPSS 20.0软件进行统计学处理，用单因素方差分析进行组间比较，方差齐时多组间两两比较均采用Bonferroni检验进行显著性分析，方差不齐时采用Dunnett’s T3检验进行显著性分析，以P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

骨骼肌的再生细胞来源于肌卫星细胞，肌卫星细胞被激活后增殖分化成成肌细胞并表达特异性蛋白，融合到肌管中，最后成为肌纤维[10]。骨骼肌卫星细胞位于肌膜之间，与基底膜紧密相连，并能抵抗普通酶的消化[23]。两步酶消化法是最常用的分离方法，第一步是胶原酶消化细胞结合的结缔组织，第二步是肌卫星细胞被胶原酶消化释放[24]。酶消化方法是多步骤的复杂过程，细胞很容易受到污染，很难控制消化时
间[25]，如消化时间不够，细胞未完全消化，细胞产量低；如消化过度，细胞可能会受损伤。组织块方法相对简单、成本较低，然而产量相对较高，整个过程耗时较长[26]。实验采用组织块法成功培养大鼠后肢肌肉骨骼肌卫星细胞，培养的骨骼肌卫星细胞呈梭形或纺锤状。骨骼肌组织中含有大量的异质细胞，大多数异质细胞为红细胞和成纤维细胞[27]。差速黏附法是基于纤维母细胞与骨骼肌卫星细胞黏附贴壁的时间不同，成纤维细胞黏附力较强，而骨骼肌卫星细胞的附着能力相对较弱，经过一定时间的培养后，大部分成纤维细胞黏附，而卫星细胞仍处于静止的悬浮状态，当转移到新的培养皿中可以获得相对纯净的骨骼肌卫星细胞。用明胶、胶原蛋白、聚赖氨酸、层粘连蛋白或纤维连接蛋白可促进粘连[28]。使用聚赖氨酸预涂层培养皿可有效去除异质细胞，显著提高骨骼肌卫星细胞的纯度。差速黏附法虽可获得相对较纯的骨骼肌卫星细胞，但获得的细胞数量相对组织块法少得多，获得骨骼肌卫星细胞的传代次数及增殖能力随着时间的延长而降低。相对而言，组织块法获得的骨骼肌卫星细胞数量多，虽混杂较多类型其他细胞，但有些混杂细胞能够促进肌卫星细胞的增殖生长。培养3 d后，骨骼肌卫星细胞进入对数生长期，原代骨骼肌卫星细胞可体外传代培养7-9代，随后扩散能力逐渐下降，形态改变，表现出衰老细胞的特征。研究表明，骨骼肌卫星细胞用于组织工程应在5代以内。肌动蛋白在有真核生物中高度保守，是构成细胞骨架微管的主要成分。α-肌动蛋白广泛表达于骨骼肌组织并调节其收缩功能，为肌细胞中重要的结构和功能蛋白[20]。实验中各组α-肌动蛋白在骨骼肌卫星细胞中均有表达并与对照组无差异，说明神经生长因子对α-肌动蛋白的表达没有影响，可用来研究外源性化合物或其他物理因素的刺激(例如，热应力、极冷和电离辐射等)对骨骼肌卫星细胞增殖能力或发展的影响。另外，骨骼肌卫星细胞具有较强的增殖、分化和自我更新能力，在许多领域具有广阔的应用前景。
骨骼肌卫星细胞在失神经骨骼肌生长、修复等生理过程中起着至关重要的作用，因此进一步研究骨骼肌卫星细胞损伤后的修复与重建在临床治疗中具有重要而广阔的前景。由于体外培养的骨骼肌卫星细胞数量较少，所以希望找到一种在体外培养更多骨骼肌卫星细胞的方法。神经生长因子是一种内源性神经营养素，参与哺乳动物神经元的发育、维持和再生。此前有文献报道，神经生长因子和脑源性神经营养因子是胚胎和成年运动神经元存活、增殖和分化的关键[29]，在运动神经元免受变性改变中发挥着重要保护作用。在体内外条件下的神经营养因子能够维持神经元的发育、存活和功能；另外，神经生长因子对中枢神经系统的胆碱能神经元具有营养和分化活性，但具体机制仍需进一步探讨。研究表明，神经生长因子可以促进周围神经的修复和再生[30]。通过在培养基中加入神经生长因子来模拟局部注射的方式，对小鼠进行局部给药治疗周围神经损伤比全身给药更安全有效，小剂量连续给药效果最好。维持足够浓度的神经生长因子是修复受损神经的必要条件，在神经损伤修复过程中营造良好的微环境，有利于神经损伤后的再生。实验发现神经生长因子确实促进了骨骼肌卫星细胞的增殖，但培养4，6 d以后细胞数量的增加较少，可能是由于细胞数量达到一定程度会出现接触抑制作用或是因为神经生长因子的作用在后期会减弱。神经生长因子可控制神经元的存活，促进神经元的分化，决定轴突的生长方向，为轴突提供营养，所以推测肌肉细胞增殖的原因是神经生长因子促进了运动神经纤维的再生。
结果表明，组织块培养法更适合于干细胞的培养，对人角膜上皮细胞培养的研究得到了相同结果[31-33]。首先，组织块培养法不仅操作简单，而且避免了污染，同时也避免了体外胚胎干细胞培养相关的伦理问题。最重要的是在修复骨骼肌损伤和失神经的同时，组织块培养法在一定程度上保留少量神经纤维，从而保留少量的运动终板，这有利于受损骨骼肌运动功能的修复。研究表明周围神经损伤后，在损伤部位局部应用神经生长因子可降低运动终板的变性程度，促进运动终板的再生，运动终板的状态影响骨骼肌肌卫星细胞的增殖[34]。分离、纯化山羊和鸡的骨骼肌卫星细胞发现，骨骼肌卫星细胞具有多潜能，可诱导成成肌细胞和脂肪细胞[35]。骨骼肌的肌肉损伤诱导肌肉再生，有助于肌细胞的形成和维持。骨骼肌卫星细胞作为肌源性干细胞具有增殖、分化和自我更新的能力，参与肌肉的形成和损伤的修复[7，36]。
骨骼肌卫星细胞移植治疗肌肉萎缩症等疾病虽然还有一些问题需要进一步的解决，但目前其已经显示出了良好的临床应用前景。研究表明，神经生长因子可以促进神经终板的再生，影响骨骼肌卫星细胞的增殖，因此有理由相信随着研究的深入，一定可以为肌营养不良、肌肉萎缩等疾病的临床的治疗打开新的大门。
实验结果存在一定的局限性，所用的细胞为第3代肌卫星细胞，没有对不同代数骨骼肌卫星细胞的增殖能力进行系统深入的培养和研究，不同代数细胞的增殖能力和对神经生长因子的反应可能有所不同。还需调整实验中的细胞数目并多次重复实验，针对神经生长因子的浓度设计更多分组，进行长期持久的实验，从而增加实验结果的可靠性，更充分地验证实验结论。
目前失神经损伤是一种常见的创伤性疾病，发病率极高且逐年递增[4]。骨骼肌卫星细胞对骨骼肌的生长和再生至关重要。此次实验探索为失神经损伤研究提供一个细胞模型，通过在细胞培养基中加入神经生长因子促进骨骼肌卫星细胞的数量在短时间内增加，为体外研究提供大量的骨骼肌卫星细胞，尤其是骨骼肌卫星细胞的移植提供方便[37]。
研究表明，骨骼肌卫星细胞不仅具有较强的体外适应和增殖能力，而且具有低免疫原性、低免疫排斥反应等特点[38]，移植后能长期存活。将肌卫星细胞移植到失神经肌肉可减轻失神经骨骼肌萎缩[39-40]。实验也存在许多不足之处：①实施时间较短，需要更多的时间来进行验证；②神经生长因子促进大鼠骨骼肌卫星细胞的增殖机制未知[41]，神经生长因子的最佳作用时间、最佳浓度、最佳给药方式等问题还有待进一步探讨。周围神经损伤导致的肌肉萎缩是一个极其复杂的生理过程，其修复效果和骨骼肌的恢复状况与损伤程度及治疗密切相关。显微外科修复技术取得了长足的进步，通过恢复神经连续性，促进和诱导营养关系，为神经再生创造有利条件。在神经再生过程中，缺乏神经营养因子可能导致神经功能衰竭。因此，设想神经生长因子以特定的浓度比例混合或与其他物理和化学治疗方法结合来治疗这一领域的疾病。研究发现，神经生长因子通过激活细胞信号调节激酶(ERK)1/2和磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B途径调节神经元的存活和分化[42-44]，促进周围神经形态和功能的恢复。如果能开发出以神经生长因子为基础的新型药物治疗失神经肌肉萎缩，为临床新药的开发提供新思路，为此类疾病的患者带来希望。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

神经生长因子干预大鼠骨骼肌卫星细胞增殖及α-肌动蛋白的表达

Nerve growth factor interferes with proliferation and alpha-actin expression of skeletal muscle satellite cells in rats

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