干细胞治疗慢性颞叶癫痫动物的疗效：基于动物实验的系统评价

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2134

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (1): 152-158.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2134

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干细胞治疗慢性颞叶癫痫动物的疗效：基于动物实验的系统评价

刘亚丽1，王欢2，3，4，闫琼2，3，4，王刚1，侯博儒1，王登峰1，马彬2，3，任海军1

1兰州大学第二医院神经外科，甘肃省兰州市 730000；2兰州大学循证医学中心，兰州大学基础医学院，甘肃省兰州市 730000；3甘肃省循证医学与临床转化重点实验室，甘肃省兰州市 730000；4兰州大学第一临床医学院，甘肃省兰州市 730000

收稿日期:2019-11-21 修回日期:2019-11-23 接受日期:2020-02-19 出版日期:2021-01-08 发布日期:2020-11-20
通讯作者: 任海军，主任医师，兰州大学第二医院神经外科，甘肃省兰州市 730000
作者简介:刘亚丽，女，1981年生，2006年兰州大学毕业，医师，主要从事功能神经外科或癫痫外科方面的研究。王欢，女，1995年生，兰州大学本科在读，主要从事临床医学和动物实验方面的研究。闫琼，女，1996年生，兰州大学本科在读，主要从事临床医学和动物实验方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81873184)

Therapeutic effect of stem cells in chronic temporal lobe epilepsy: a systematic review of animal studies

Liu Yali1, Wang Huan2, 3, 4, Yan Qiong2, 3, 4, Wang Gang1, Hou Boru1, Wang Dengfeng1, Ma Bin2, 3, Ren Haijun1

1Department of Neurosurgery, Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; 2Evidence-Based Medicine Center, School of Basic Medical Sciences, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; 3Key Laboratory of Evidence-Based Medicine and Knowledge Translation of Gansu Province, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; 4The First Clinical Medical College of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China

Received:2019-11-21 Revised:2019-11-23 Accepted:2020-02-19 Online:2021-01-08 Published:2020-11-20
Contact: Ren Haijun, Chief physician, Department of Neurosurgery, Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China
About author:Liu Yali, Physician, Department of Neurosurgery, Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China Wang Huan, Evidence-Based Medicine Center, School of Basic Medical Sciences, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; Key Laboratory of Evidence-Based Medicine and Knowledge Translation of Gansu Province, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; The First Clinical Medical College of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China Yan Qiong, Evidence-Based Medicine Center, School of Basic Medical Sciences, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; Key Laboratory of Evidence-Based Medicine and Knowledge Translation of Gansu Province, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; The First Clinical Medical College of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81873184

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
干细胞：是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，可来源于骨髓、脐带、脂肪组织等。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为3类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。
系统评价：运用减少偏倚的策略，严格评价和综合针对某一具体问题的所有相关研究。Meta分析可能但不一定是这个过程的一部分。系统评价制作过程严谨、科学，具有良好的重复性，可为某一领域和专业提供大量新信息和新知识，在循证医学证据分级体系中被认为是临床研究证据中最高级别的证据。

背景：干细胞是一种治疗慢性颞叶癫痫的新方法，且已广泛用于治疗各种癫痫动物模型，但各个实验研究中的疗效评价并不一致。
目的：系统评价干细胞治疗慢性颞叶癫痫动物模型的有效性，为临床治疗提供实验依据和新思路。
方法：计算机检索PubMed、Web of Science、EMBASE、中国期刊全文数据库(CNKI)、中国学术期刊数据库(万方)，纳入国内外已发表的干细胞治疗慢性颞叶癫痫的动物实验，检索年限自各数据库建库至2018年5月。由2名研究者独立提取文献资料、进行文献质量评价，并采用CERQual工具对证据质量进行评估。
结果与结论：最终纳入8篇动物实验，包括284个慢性颞叶癫痫动物。纳入研究之间存在较大的异质性，则进行定性系统评价。干细胞治疗使慢性颞叶癫痫动物在癫痫发作频率及持续时间方面有一定的改善，能促进大部分癫痫动物的恢复，其他研究指标包括对动物学习记忆功能的影响、干细胞的迁移、分化及融合，但由于纳入研究的实验设计缺乏严谨性、结果特征存在差异、证据质量不足等方面的局限性，尚不能确定干细胞治疗的确切疗效。因此，在临床试验施行之前，有必要进行高质量的临床前研究进一步评估干细胞移植对慢性颞叶癫痫的疗效及其向临床转化的可行性，以降低其结果向临床转化时的风险。
https://orcid.org/0000-0001-8814-6300(刘亚丽)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 干细胞, 脑, 颞叶, 癫痫, 动物, 实验, 系统评价, Meta分析

Abstract: BACKGROUND: Stem cell therapy has emerged as a novel treatment for chronic temporal lobe epilepsy that has been widely used in various animal models of epilepsy. However, there is yet no consensus in the therapeutic effect in existing experimental studies.
OBJECTIVE: To systemically evaluate the therapeutic efficacy of stem cell therapy in animal models of chronic temporal lobe epilepsy, providing experimental evidence and new ideas for further clinical trials.
METHODS: A systematic search of CNKI, WanFang, PubMed, Embase and Web of Science was performed for animal studies related to stem cell therapy for chronic temporal lobe epilepsy published from inception to May 2018. Two reviewers independently extracted data, assessed methodological quality and evaluated evidence quality by using CERQual tool.
RESULTS AND CONCLUSION: Eight animal studies were eligible for inclusion, including 284 animals suffering chronic temporal lobe epilepsy. Between-study heterogeneity was substantial, so a qualitative description was performed. Stem cell therapy has some improvement in the seizure frequency and duration of chronic temporal lobe epilepsy in animals, which can promote the recovery from epilepsy in most animals. Other outcomes include memory and learning, stem cell migration, differentiation and integration. The exact efficacy of stem cells cannot be determined due to the lack of rigor, characterization, and evidence quality. We therefore do not have absolute confidence to recommend the clinical use of stem cell therapy for chronic temporal lobe epilepsy. Thus, it is necessary to conduct high-quality preclinical studies to further evaluate the efficacy of stem cell transplantation for chronic temporal lobe epilepsy and its clinical conversion risk before implementation of clinical trials.

Key words: stem cells, brain, temporal lobe, epilepsy, animals, experiment, systematic review, meta-analysis

中图分类号:

刘亚丽, 王欢, 闫琼, 王刚, 侯博儒, 王登峰, 马彬, 任海军. 干细胞治疗慢性颞叶癫痫动物的疗效：基于动物实验的系统评价[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(1): 152-158.

Liu Yali, Wang Huan, Yan Qiong, Wang Gang, Hou Boru, Wang Dengfeng, Ma Bin, Ren Haijun. Therapeutic effect of stem cells in chronic temporal lobe epilepsy: a systematic review of animal studies[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(1): 152-158.

图/表（结果） 4

2.1 文献检索结果初检共获得相关文献897篇，其中中文78篇，英文819篇。按照PICOs原则初筛(阅读题目及摘要)得到49篇文献，进一步阅读全文后，最终纳入8篇动物实验，其中中文文献1篇，英文文献7篇。文献筛选结果见图1。

2.2 纳入研究的基本特征及质量评价
2.2.1 纳入研究的基本特征最终纳入8个对照研究[19-26]，其中3个为随机对照实验[20-21，24]，实验动物数量介于16-60之间[22-23]，干细胞的治疗剂量介于0.5-200 μL之间不等[21，25-26]。就慢性颞叶癫痫模型的构建方法而言，5个研究采取注射毛果芸香碱的方法建立匹罗卡品模型[21，23-26]，其中4个研究采取腹腔注
射[21，23-24，26]；2个研究采取海马CA3区或腹腔注射海人酸的方法建立海人酸模型[19-20]；2个研究在动物梨状皮质或海马CA3区植入电极给予脉冲刺激建立点燃模型[22，24]。
纳入的8个动物实验所采用干细胞的种类和来源均不一致，见表1，包括源于SD大鼠骨髓组织的间充质干细胞[20]，源于F344大鼠胚胎[19]、人多能干细胞(H7 hPSCs)培养分化[21]、Wistar大鼠胚胎[22]、C57BL/6小鼠胚胎的内侧神经节隆起细胞[23]，源于死亡胎儿脑组织的人类神经干细胞[24]，源于CD1小鼠胚胎的GABA前体细胞[25]，源于C57BL/6小鼠骨髓的骨髓单个核细胞[26]。此外，移植类型有所不同，包括异基因移植[22-23，25]、同种细胞移植[19-20，26]，异种细胞移植[21，24]。

2.2.2 偏倚风险评估结果在纳入的8个对照实验中[19-26]，仅3个研究进行了随机分组[20-21，24]，但其具体的随机化方法以及是否采取适当的方法来实现随机序列的不可预测性均不清楚。仅3个研究报告对饲养者或研究者实施盲
法[21，25-26]，3个研究报告对结果测量者实施盲法[21，24-25]。此外，无研究报告是否对动物进行随机化安置，仅2个研究对结局指标进行随机评估[19-20]，5个研究的数据报告完整[20-21，24-26]，见图2。

2.2.3 证据质量评估结果 7个结局指标中，证据质量为“低”或“极低”。证据质量降级的原因包括原始研究的内在真实性不足、可概括性差及数据的不可合并性及不可转化性，见表2。
2.3 系统评价结果
2.3.1 结果概述大部分研究报告了主要测量指标，包括癫痫发作频
率[20-21，23-26]、持续时间[21，23-26]，其中5个研究基于匹罗卡品模型[21，23-26]，1个基于海人酸模型[20]，1个研究基于点燃模型[24]。虽然癫痫发作频率大多基于脑电图进行测量，但其测量时点均不相同，介于干细胞移植后第1天到移植后第3个月之间[19，21，26]。此外，虽然大部分研究对发作频率进行了定量描述，但其数据单位均有所不同，包括
次/d[20-21，24-25]、次/7 d[26]、次/20 d等[23]。因此，鉴于纳入研究在结局指标测量方面存在较大异质性，并未对不同研究间数据进行Meta分析。
2.3.2 癫痫发作频率、持续时间及幅度 6个研究报告癫痫发作频率[20-21，23-26]，5个研究与生理盐水组或安慰剂组进行比较[20-21，23-24，26]，其中4个研究显示：相比较于生理盐水组或安慰剂组，干细胞移植组动物的癫痫发作频率明显减
少[21，23-24，26]，绝大多数动物癫痫发作逐渐停止，活动逐渐恢复正常；但王林杰等[20]研究显示：相比较于生理盐水组，干细胞移植组大鼠癫痫发作频率未得到改善。此外，VENTURIN等[26]研究表明：相比较于成纤维细胞组，干细胞组大鼠癫痫发作频率明显减少，且移植后7-14 d(P < 0.001)较1-7 d
(P < 0.01)降低更明显。HUNT等[25]研究显示：相比较于空白对照组，干细胞移植至海马的小鼠癫痫发作频率降低了92%，其中约50%的小鼠癫痫发作完全消除(移植后2个月，P < 0.01)，而移植至基底外侧杏仁核的小鼠发作频率无明显降低(移植后2个月，P=0.98)。
5个研究报告癫痫持续时
间[21，23-26]，其中2个研究显示：与安慰剂组对比，干细胞移植组动物的癫痫发作持续时间明显缩短[23-24]；3个研究显示：无论与生理盐水组、安慰剂组、空白对照组还是成纤维细胞组相比，干细胞移植组动物癫痫发作持续时间并未缩短[21，25-26]，差异无显著性意义。
仅1个研究在移植后第2周运用脑电图监测癫痫发作幅度[20]，其结果显示：相比较于生理盐水组，干细胞移植组大鼠癫痫发作幅度(移植后14 d)未得到改善。
2.3.3 学习和记忆功能 4个研究报告学习和记忆功能[21，24-26]，其中3个研究基于匹罗卡品模型[21，25-26]，1个研究基于点燃模型[24]，其判校标准包括水迷宫实验和Y迷宫实验及新物体识别实
验[21，24-26]，测量时点在不同研究间差异较大，介于干细胞移植后第16天到移植后第3个月之间[21，24，26]。
1个研究显示：与生理盐水组对比，干细胞移植组大鼠能较快到达且长时间停留在平台区[26]，即学习和记忆功能明显改善(移植后16 d)。2个研究显示：与安慰剂组对比，干细胞移植组癫痫动物的学习和记忆功能未得到改善[21，24]。此外，HUNT等[25]研究显示：与安慰剂组对比，干细胞移植到海马的小鼠学习和记忆功能有改善，但移植到基底外侧杏仁核的小鼠无改善(移植后60 d)。
2.3.4 干细胞迁移、融合和分化虽然大部分研究均基于免疫组织化学方法报告干细胞迁移[19，21-25]、干细胞融
合[21-22，25-26]、干细胞分化[19，21-25]，但其测量时点均不相同，介于干细胞移植后第1天到移植后4个月[21，26]。此外，动物模型包括匹罗卡品模型[21，23，25]、海人酸模型[19]、点燃模型[22，24]，干细胞所移植的位置包括海马各区[19，21，24-25]、齿状回[23]、基底外侧杏仁核[22，25]、横向内嗅皮层[23]。
6个研究报告干细胞迁移[19，21-25]，
所有研究均显示：将干细胞移植到慢性颞叶癫痫动物后，干细胞广泛迁移到注射部位周围，甚至部分干细胞还会迁移到远处其他大脑区域，如从基底外侧杏仁核迁移到脑皮质[22](移植后3-5 d)。此外，2个研究报告迁移距
离[21，24]，从注射部位共迁移了1.6 mm[21]
(在移植后2周)、(1.44±0.18) mm[24](在移植后8周)。
4个研究报告干细胞融合[21-22，25-26]，其中3个研究显示：将干细胞移植到慢性颞叶癫痫动物后干细胞融合到宿主大
脑[21-22，26]；1个研究显示：干细胞移植后融合到宿主海马网络[25]。
6个研究报告干细胞分化[19，21-25]，其中4个研究将不同来源的内侧神经节隆起细胞(MGE)移植到慢性颞叶癫痫动物后，干细胞均可分化为各种亚型GABA能中间神经元，表达GABA和其他神经元标记(如NeuN等)[19，21-23]，并且WALDAU等[19]研究表明：干细胞还可分化为NeuN+神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞(移植后3个月)。此外，LEE等[24]研究表明：将人类神经干细胞移植到慢性颞叶癫痫动物后，干细胞分化为少突胶质细胞和星形胶质细胞(移植后4-8周)。HUNT等[25]研究显示：将源于CD1小鼠胚胎的GABA前体细胞移植到慢性颞叶癫痫动物后，干细胞逐渐具有中间神经元的形态学特征并分化为功能性抑制神经元。干细胞分化为移植区域特异性神经元，以修复和替代受损的神经元，部分重建细胞环路和功能来阻断癫痫的发生与发展[14]。

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引言

颞叶癫痫是临床最常见的一种耐药性癫痫[1](约30%的癫痫具有耐药
性[2])，病灶多来自颞叶内侧结构如海马、杏仁核[3]。目前，临床上通常采用手术切除病灶，但存在一些问题，如手术后记忆、认知功能受损或手术后依旧不能控制癫痫的发作等[4]。
干细胞是一类具有分化成多种细胞谱系能力的细胞[5]，可来源于骨髓、胚胎、脂肪组织等。目前，干细胞治疗癫痫的临床研究尚处于探索阶段[6]，HLEBOKAZOV等[7]的一期临床研究显示：对难治性癫痫患者而言，相较于单纯抗癫痫药物的治疗，联合自体骨髓间充质干细胞移植可较好地减少癫痫发作的频率、降低其耐药性，且无明显不良反应。在动物实验方面，干细胞移植已受到广泛关注并用于治疗各种癫痫动物模型[8-9]，尤其是针对慢性颞叶癫痫的治疗探索[10]。研究显示，干细胞可能通过选择性、区域性替换受损神经元或增加抑制性神经元的作用(如释放抑制性神经递质和增加抑制性突触反应)，以恢复正常的神经回路来抑制癫痫的发生发展、逆转其认知缺陷，且具有只作用于癫痫病灶而不累及其他区域的优势[11-13]。虽然目前干细胞疗法取得了一定进展，但仍有一些问题未得到解决[14-15]，例如如何确定移植的最佳时期、移植后干细胞的存活能力和整合功能、移植后是否产生免疫排斥反应或肿瘤及如何处理干细胞分化潜能的不确定性和不可控性等。因此，该研究全面收集国内外已发表的干细胞治疗慢性颞叶癫痫的动物实验，探讨干细胞移植对颞叶癫痫发作的影响及其对病灶神经细胞的作用，为今后临床治疗颞叶癫痫提供实验依据和新思路。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 文献检索计算机检索PubMed、Web of Science、EMBASE、中国期刊全文数据库(CNKI)、中国学术期刊数据库(万方)5个数据库，检索年限为各数据库自建库至2018年5月。中文检索词：颞叶癫痫、癫痫、干细胞、万能细胞等；英文检索词：temporal lobe epilepsy、temporal epilepsy、medial temporal lobe epilepsy、stem cell、derived stem cell等。
1.2 纳入与排除标准
1.2.1 纳入标准
疾病及动物种属：纳入所有慢性颞叶癫痫的动物模型，不限制动物物种和种属，对于动物建模方式亦不限制。
干预措施和对照措施：干细胞 vs. 阴性对照(如安慰剂、生理盐水等)、干细胞 vs. 其他对照(如成纤维细胞等)，不限制干细胞的种类、来源以及移植的位置。
结局指标：①主要结局指标：癫痫发作频率、持续时间和幅度；记忆和学习结果；②次要结局指标：细胞迁移、细胞融合和细胞分化。
研究类型：纳入对照研究，不限制其分组方法。
1.2.2 排除标准 ①非干预类动物实验；②非对照研究；③动物疾病模型或干预措施不符合的研究；④结局指标不包括上述主要结局指标以及数据不完整的研究；⑤重复发表的研究；⑥基于动物组织、器官或细胞等的体外实验；⑦同时纳入动物和人体的实验；⑧除中文和英文以外的研究。
1.3 文献质量评价
1.3.1 偏倚风险评估由2名研究员(刘亚丽、王欢)基于SYRCLE动物实验偏倚风险评估工具(SYRCLE’s risk of bias tool for animal studies)[16]，从包括“选择性偏倚、实施偏倚、测量偏倚、失访偏倚、报告偏倚和其他偏倚”6个方面共10个条目，独立评价纳入研究的内在偏倚风险，并交叉核对，不同意见通过协商或由第三方(任海军)裁决。评估结果以“是” “否”和“不确定”分别代表“低偏倚风险、高偏倚风险和不确定偏倚风险”。
1.3.2 证据质量评估 CERQual(Confidence in the Evidence from Reviews of Qualitative research)工具是在Cochrane协作网的支持下开发，借鉴了定量系统评价分级工具GRADE的基本原则[17]，用于定性系统评价证据分级的评估工
具[18]。
动物实验系统评价的结果是否可以进行临床转化，与其证据质量的高低关系密切。该研究采用CERQual工具，基于以下4个方面：①方法学局限性(methodological limitation)；②相关性(relevance)；③结果一致性(coherence)；④数据充分性(adequacy of data)，评价该系统评价的证据质量。在系统评价中，单独对以上4个部分进行评价后，再综合各部分的评价结果给出证据等级——高、中、低、极低。具体来说，即先将所有系统评价结果的初始证据级别视为高级别，然后依据上述4个方面进行降级，得出定性系统评价单个合成结果的最终证据级别[18]。
1.4 结局指标由2位培训合格的研究员(王欢、闫琼)提取资料，并交叉核对，如遇分歧则由第三方(马彬)裁决。按照事先制定的全文数据提取表，结局指标包括：①纳入研究的基本特征：实验动物的种属及模型种类、干细胞的来源、样本量、干预方式等；②纳入研究的主要结局指标：癫痫发作的频率、持续时间及振幅、对学习记忆功能的影响、干细胞迁移、分化及融合等。
1.5 统计学分析若纳入动物实验间无临床异质性和方法学异质性时，则采用RevMan 5.3软件进行Meta分析；若纳入动物实验间存在临床异质性和方法学异质性，或定性报告其测量指标时，则采用定性描述的方法对证据进行综合。

讨论

3.1 干细胞治疗慢性颞叶癫痫动物的疗效
3.1.1 证据概要该研究对符合纳入标准的8个动物实验进行系统评价。由于纳入的8个动物实验在实验设计、疾病模型构建方法、干细胞的剂量、种类和来源，以及结局指标的测量时点等方面均存在较大的异质性，使得纳入的动物实验间的结果数据不能进行定量合并分析，仅进行定性描述。尽管纳入研究包括多种癫痫动物模型，但是任何一种也无法完全替代癫痫患者，无法完全展现癫痫患者的临床特征，其测量结果与真实结果间必然存在一定的偏差。另外，对于干细胞治疗慢性颞叶癫痫动物的疗效，虽然大部分研究显示干细胞移植可明显减少癫痫发作频率，改善癫痫持续时间，但在学习记忆功能方面无明显改善。虽然大部分研究对癫痫发作频率和持续时间进行定量描述，但因数据测量时点和数据单位均有所不同，不能进行数据合并，也降低了其论证强度。此外，由于大部分纳入研究未严格实施随机原则、分配隐藏、动物随机化安置及对饲养者/研究者或结果评估者实施盲法，存在包括选择性偏倚、实施偏倚和测量偏倚等多种偏倚的可能，会在很大程度上影响结局指标的准确性和真实性。因此，目前尚不能得出干细胞治疗慢性颞叶癫痫动物的确切疗效。
基于CERqual的评价结果显示，大部分结局指标的证据质量为“低”或“极低”，证据质量的低下显著降低了动物实验向临床转化的可能性。而且，限于目前纳入的动物实验在实验设计方法、结果特征差异、证据质量等方面的局限性，需非常慎重解释每个纳入研究的结果。因此，基于该研究所纳入的动物实验结果，尚无法得到可靠的证据以确定是否能够或有必要进一步开展临床研究。故在临床试验施行之前，有必要进行高质量的临床前研究进一步评估干细胞移植对慢性颞叶癫痫的疗效以降低其结果向临床转化的风险。
3.1.2 研究间异质性来源及其影响当纳入研究间在研究对象、干预措施及结局指标等方面具有足够的同质性时，才能实施Meta分析以得出有意义的合并证据。但该研究纳入的8个动物实验在实验设计方案、动物种属、疾病模型建立方法、干细胞的种类、来源及剂量、建模后干细胞移植的时间、结局指标测量的时间点和数据类型等方面，均存在较大异质性，导致无法采用Meta分析方法对不同实验间的数据进行合并分析，只能以定性描述的形式呈现每个纳入研究的结果。对于主要结局指标癫痫发作频率和持续时间，虽然大部分研究进行定量描述，但其测量时点和数据单位均不同，使得纳入研究在结局指标测量方面存在较大异质性，导致未能对癫痫发作频率和持续时间相关数据进行合并分析得出确切效果。异质性是影响目前研究结果的重要因素，在很大程度上会降低结果的真实性，今后的研究需要在实验设计、干预措施实施及结局指标测量标准方面进一步改进和规范。
3.1.3 内在真实性基于SYRCLE偏倚风险评估工具，对纳入研究进行偏倚风险评估。对于选择性偏倚，仅37.5%的研究进行随机分组，且其具体的随机化方法以及是否采取适当的方法来实现随机序列的不可预测性均不清楚，使得受试动物在某些重要影响结局的特征方面存在差异，从而影响结局指标测量的真实性和准确性。因此，今后的动物实验应更加重视对随机分配和隐蔽分组方法的开展和实施。就实施偏倚和测量偏倚而言，无研究报告是否对动物进行随机化安置，仅37.5%的研究对动物饲养者/研究者和结局测量人员施盲，仅25%的研究对结局指标进行随机评估。鉴于动物实验的特殊性，除盲法(对动物饲养者/研究者、结果测量人员)的科学实施会在一定程度上控制实施和测量偏倚外，动物的随机化安置和结果的随机化评估也是影响此类偏倚的措施之
一[27]。因此，今后的动物实验研究需更加重视对动物随机化安置和结果随机化评估的应用。此外，WHO早在2005年就开始临床试验注册[28-29]，但截至目前尚无相关政策针对动物实验开展注册，也就无法准确、客观地判断目前已发表的动物实验是否存在选择性结果报告。因此，建议今后在协会或国家等层面制定相关政策，以推动动物实验研究注册，以有效控制选择性结果报告。
3.1.4 外部真实性将动物实验向临床试验转化时，应慎重考虑的外部真实性的方面包括：①癫痫动物模型并不能完全替代临床患者，不能真实模拟患者的全部特征；②没有使用灵长类动物评估干细胞治疗慢性颞叶癫痫的疗效；③癫痫动物模型的选择不同(动物实验中针对每一类疾病都应选择最适当的动物模型，但由于地域差异及资源可及性等原因，当前同一主题的不同动物实验对动物模型的选择不同)；④临床患者的病史可能影响慢性颞叶癫痫的发病及进展过程，这可能会间接影响干细胞的疗效，但在动物实验中无法评价这一效应。
3.2 纳入研究的局限性该研究是首个基于动物实验系统评价干细胞治疗慢性颞叶癫痫疗效的研究，并首次基于CERQual工具评估每个结局指标的证据质量，可以合理评估动物实验研究的真实性及在其他领域的可应用性。该系统评价的局限性主要包括：①仅纳入中文及英文研究，可能会导致一定的语言偏倚；②未进行补充检索(如灰色文献)，可能会导致发表偏倚的产生；③该系统评价纳入的研究质量普遍不高，5个研究未提及随机分配，5个研究未提及盲法，或没有采用盲法；④某些文章中的部分资料未做详细交代。
3.3 结论与分析综上所述，该研究得出保守而合理的结论：干细胞移植能降低大部分癫痫动物的发作频率、缩短其癫痫持续时间，可能改善癫痫动物的学习和记忆功能，其潜在机制可能与干细胞的分化和融合功能有关。虽然干细胞治疗能改善大部分癫痫动物的症状及促进癫痫的恢复，但由于纳入研究的实验设计缺乏一定的严谨性、结果特征存在差异及证据质量不足等，其全面疗效尚不能确定。因此，要进一步确定干细胞治疗颞叶癫痫的全面疗效，降低其临床结果向临床转化时的风险，需要设计合理、评价正确、偏倚风险更小的动物实验及更高质量的研究。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

干细胞治疗慢性颞叶癫痫动物的疗效：基于动物实验的系统评价

Therapeutic effect of stem cells in chronic temporal lobe epilepsy: a systematic review of animal studies

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