诱导性多能干细胞移植治疗小鼠系统性红斑狼疮

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1826

摘要/Abstract

摘要：

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文题释义：
系统性红斑狼疮的干细胞治疗：系统性红斑狼疮是一种累及多器官系统的炎症性自身免疫疾病，其发病机制与骨髓造血微环境的缺陷密切相关，且涉及多基因异常。造血干细胞和间充质干细胞治疗为系统性红斑狼疮提供了新的治疗思路，但治疗效果存在争议。研究证实系统性红斑狼疮患者自体来源间充质干细胞同样存在异常，增殖能力和分泌细胞因子能力低下，寻找干细胞新来源是解决临床应用限制的方向。
诱导性多能干细胞：是由体细胞经过重编程获得的一种多能干细胞，在基因表达、形态结构及表观遗传修饰等方面与胚胎干细胞相似，在获取技术与数量方面较其他类干细胞有优势，在疾病的细胞治疗方面可以避免免疫排斥和伦理问题，在再生医学与干细胞治疗领域具有更广阔的前景。

摘要
背景：自体间充质干细胞的生物学特性易受疾病本身影响，寻找不受疾病影响的低免疫原性干细胞成为研究热点。目前，自体来源诱导性多能干细胞移植治疗系统性红斑狼疮尚未见报道。
目的：评价自体成纤维细胞来源小鼠诱导性多能干细胞移植治疗系统性红斑狼疮的效果。
方法：将54只8周龄MRL/lpr小鼠随机分为3组，模型对照组不给予干细胞注射等处理，试剂对照组尾静脉注射PBS溶液，干细胞治疗组尾静脉注射自体皮肤成纤维细胞来源诱导性多能干细胞。细胞治疗4周，ELISA法检测各组小鼠血清肌酐、尿素氮、抗双链DNA抗体和抗核抗体水平；石蜡切片苏木精-伊红染色观察小鼠肾脏组织形态结构；考马斯亮蓝法检测尿蛋白浓度；流式细胞术检测小鼠外周血调节性T细胞百分率、脾脏树突状细胞百分率、脾脏Th1/Th2比值。
结果与结论：①与模型对照组和试剂对照组比较，干细胞治疗组血清肌酐、尿素氮、抗双链DNA抗体和抗核抗体水平降低，尿蛋白浓度降低，外周血调节性T细胞百分率、脾脏树突状细胞百分率以及脾脏Th1/Th2比值升高；②与模型对照组和试剂对照组比较，干细胞治疗组小鼠肾脏肾小球体积缩小，系膜细胞减少，肾小管上皮细胞变性改善，肾小管腔内管型减少；③上述结果说明，自体皮肤成纤维细胞来源诱导性多能干细胞移植可治疗系统性红斑狼疮小鼠，减轻肾组织损伤，改善肾功能并发挥免疫调节作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-3070-7088(马琳洁)

关键词: 诱导性多能干细胞, 系统性红斑狼疮, 干细胞移植, 体细胞重编程, 肾脏, 免疫功能, 调节性T细胞

Abstract:

BACKGROUND: The biological characteristics of autologous mesenchymal stem cells for transplantation of systemic lupus erythematosus (SLE) are susceptible to the disease. Cell therapy with low immunogenic stem cells that are not affected by the disease has become a research hotspot. To date, treatment of systemic lupus erythematosus with autologous induced pluripotent stem cell transplantation has not been reported.
OBJECTIVE: To evaluate the therapeutic effect of transplantation of induced pluripotent stem cells derived from autologous fibroblasts in mice with systemic lupus erythematosus.
METHODS: Fifty-four 8-week-old MRL/lpr mice were randomly divided into three groups. Model control group was not treated, reagent control group was injected with PBS solution through tail vein, and stem cell treatment group was injected with autologous induced pluripotent stem cells through tail vein. Serum creatinine, urea nitrogen, anti-double-stranded DNA antibodies and anti-nuclear antibodies were detected by ELISA at 4 weeks of cell treatment. Kidney tissue morphology was observed by hematoxylin-eosin staining on paraffin sections. Urinary protein concentrations were detected by Coomassie brilliant blue method. Flow cytometry was used to detect the percentage of regulatory T cells in peripheral blood, percentage of splenic dendritic cells, and ratio of splenic helper T1 cells to helper T2 cells.
RESULTS AND CONCLUSION: The levels of serum creatinine, urea nitrogen, anti-double-stranded DNA antibody and anti-nuclear antibody in the stem cell treatment group were lower than those in the model control and reagent control groups, while decreased urine protein concentration, increased percentages of regulatory T cells in peripheral blood, increased percentage of splenic dendritic cells, and increased splenic Th1/Th2 ratio were detected in the stem cell treatment group as compared with the other two groups. Compared with the model control and reagent control groups, there was decreased glomerular volume, reduced number of mesangial cells, degeneration of renal tubular epithelial cells and decreased tubular type in the stem cell treatment group. In summary, induced pluripotent stem cell transplantation from autologous skin fibroblasts for treat systemic lupus erythematosus can alleviate renal tissue damage, improve renal function and play an immunoregulatory role in mice.

Key words: induced pluripotent stem cells, systemic lupus erythematosus, stem cell transplantation, somatic cell reprogramming, kidney, immune function, regulatory T cells

中图分类号:

马琳洁，薛文涛，谭举朋. 诱导性多能干细胞移植治疗小鼠系统性红斑狼疮[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(33): 5286-5292.

Ma Linjie, Xue Wentao, Tan Jupeng. Induced pluripotent stem cell transplantation for systemic lupus erythematosus in a mouse model[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(33): 5286-5292.

图/表（结果） 2

2.1 MRL/lpr小鼠诱导性多能干细胞的鉴定 碱性磷酸酶染色结果显示，克隆样生长的细胞中分布着大量紫红色颗粒，即为碱性磷酸酶染色阳性，见图1A；细胞免疫荧光染色结果显示，细胞胞质内可见OCT4、SSEA-1和SOX2等多能性标记物呈阳性表达，见图1B-D；拟胚体分化荧光染色结果显示，形成拟胚体的细胞胞质内可见标记内胚层的AFP、标记中胚层的Desmin和标记外胚层的nestin呈阳性表达，见图1E。以上结果表明，从MRL/lpr小鼠皮肤成纤维细胞重编程获得的细胞具有诱导性多能干细胞的特性。

2.2 实验小鼠的数量分析 动物体内实验使用54只8周龄MRL/lpr小鼠和18只8龄C57BL/6小鼠，实验过程中无小鼠死亡，72只小鼠的实验结果均计入统计分析。

2.3 各组血清尿素氮、肌酐、抗双链DNA抗体和抗核抗体水平的比较 与正常对照组比较，模型对照组、试剂对照组和干细胞治疗组的血清肌酐、尿素氮、抗双链DNA抗体和抗核抗体水平升高，差异有显著性意义(P < 0.01)；与模型对照组及试剂对照组比较，干细胞治疗组4项指标降低，差异有显著性意义(P < 0.01)。以上结果说明诱导性多能干细胞治疗能降低MRL/lpr小鼠血清肌酐、尿素氮、抗双链DNA抗体和抗核抗体水平，见图2。

2.4 各组肾脏组织形态结构 正常对照组小鼠肾脏组织结构正常，见图3A；模型对照组和试剂对照组小鼠肾脏间质内可见肾小球体积增大，系膜细胞增生，肾小管上皮细胞呈空泡样变性，肾小管腔内出现管型，见图3B和3C；干细胞治疗组小鼠肾脏肾小球体积缩小，系膜细胞减少，肾小管上皮细胞变性改善，肾小管腔内管型减少，见图3D。苏木精-伊红染色结果说明诱导性多能干细胞治疗能减轻MRL/lpr小鼠肾脏组织损伤。

2.5 各组尿蛋白浓度的比较 与正常对照组比较，模型对照组、试剂对照组和干细胞治疗组尿蛋白浓度均升高，差异有显著性意义(P < 0.01)；与模型对照组及试剂对照组比较，干细胞治疗组的尿蛋白浓度降低，差异有显著性意义(P < 0.01)；模型对照组与试剂对照组比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，见图4。以上结果提示诱导性多能干细胞治疗改善了小鼠肾脏功能。

2.6 各组外周血调节性T细胞百分率的比较 与正常对照组比较，模型对照组、试剂对照组和干细胞治疗组的调节性T细胞百分率降低，差异有显著性意义(P < 0.05)；与模型对照组及试剂对照组比较，干细胞治疗组调节性T细胞百分率升高，差异有显著性意义(P < 0.05)；模型对照组与试剂对照组比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，见图5。以上结果提示诱导性多能干细胞治疗提高了外周血调节性T细胞的百分率。

2.7 各组脾脏树突状细胞百分率的比较 与正常对照组比较，模型对照组和试剂对照组的树突状细胞百分率降低，差异有显著性意义(P < 0.05)；与模型对照组及试剂对照组比较，干细胞治疗组树突状细胞百分率升高，差异有显著性意义(P < 0.05)；模型对照组与试剂对照组比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，见图6。以上结果提示诱导性多能干细胞治疗提高了脾脏树突状细胞百分率。

2.8 脾脏Th1/Th2比值的比较 与正常对照组比较，模型对照组和试剂对照组的Th1细胞百分率降低而Th2细胞百分率升高，干细胞治疗组的Th1细胞和Th2细胞百分率均升高，差异有显著性意义(P < 0.05)；与模型对照组及试剂对照组比较，干细胞治疗组Th1细胞百分率升高，差异有显著性意义(P < 0.05)；模型对照组Th1细胞和Th2细胞百分率与试剂对照组比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，见图7。与正常对照组比较，模型对照组和试剂对照组Th1/Th2比值降低，差异有显著性意义(P < 0.05)；与模型对照组和试剂对照组比较，干细胞治疗组Th1/Th2比值升高，差异有显著性意义(P < 0.05)。以上结果提示诱导性多能干细胞治疗提高了小鼠脾脏Th1细胞百分率和Th1/Th2比值。

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引言

系统性红斑狼疮是一种具有多样性的自身免疫性疾病，常累及包括肾脏、大脑、心脏、血液、骨骼肌和皮肤在内的多器官系统^[1]。系统性红斑狼疮的发病机制尚未完全明确，已被研究证实的主要机制是体液免疫与细胞免疫失衡，过度活跃的B淋巴细胞产生大量自身抗体、免疫复合物和细胞因子，使发生功能缺陷的调节性T淋巴细胞无法维持自身耐受，从而导致免疫介导的炎症及组织损伤^[2]。临床上治疗系统性红斑狼疮的传统方法是应用免疫抑制类药物和激素，虽然能控制多数患者的病情并改善预后，但关于疗效与安全性则存在争议，存在感染、骨质疏松、肿瘤和卵巢衰竭等不良反应，甚至部分患者因不能耐受药物而使疗效欠佳，进而影响患者的生活质量和生存时间^[3-4]。近年来，干细胞技术在临床医学中的广泛应用使细胞疗法成为系统性红斑狼疮治疗的新选择。

最早应用于系统性红斑狼疮临床治疗的是造血干细胞，随后间充质干细胞也被应用于难治性和重症系统性红斑狼疮的治疗，以骨髓间充质干细胞移植为主^[5-6]。间充质干细胞发挥治疗作用的主要机制是免疫调节和组织修复^[7]。研究报道，人骨髓间充质干细胞同种异体移植能有效控制难治性系统性红斑狼疮患者的病情并改善预后^[8]。骨髓间充质干细胞存在于造血微环境中，在血细胞发生及免疫调节中发挥重要作用^[9]。然而，来源于系统性红斑狼疮患者的骨髓间充质干细胞存在功能障碍，分泌细胞因子和免疫调节能力降低，增殖和分化能力也下降，细胞结构出现异常，细胞内氧化应激水平明显升高^[10]。动物模型实验研究也发现狼疮鼠自体骨髓间充质干细胞移植至体内后不能迁移到靶器官内，而同种异体之间移植间充质干细胞仍存在供体变异性、遗传不稳定性和免疫排斥反应^[11]，寻找干细胞新来源是解决临床应用限制的方向。

诱导性多能干细胞技术是当前干细胞研究领域的热点之一，近年来取得了迅猛的发展。最初，研究者利用反转录病毒作为载体将4种转录因子导入小鼠成纤维细胞诱导其重编程获得诱导性多能干细胞，其在分化潜能方面与成体干细胞高度相似，不涉及伦理问题和免疫排斥^[12]。相继有学者们成功将疾病患者体细胞重编程为诱导性多能干细胞，用于发病机制与药物评价的研究^[13-14]。还有研究将自体成纤维细胞来源的诱导性多能干细胞体外定向诱导或体内移植治疗器官损伤，效果优于间充质干细胞^[15-16]。于是，作者设想自体来源诱导性多能干细胞体内移植可能对系统性红斑狼疮有效。

该研究以广泛用于人类系统性红斑狼疮疾病治疗有效性研究的MRL/lpr小鼠和同源C57BL/6小鼠为研究对象，观察尾静脉注射自体来源诱导性多能干细胞对系统性红斑狼疮的治疗作用，为临床研究提供实验依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 于2018年2至11月在潍坊医学院实验中心完成。

1.3 材料 8周龄雌性MRL/lpr狼疮小鼠54只，SPF级，体质量(15±3) g，购于上海澎立生物医药技术有限公司；8周龄雌性C57BL/6小鼠18只，SPF级，体质量(16±2) g，购于北京华阜康实验动物技术有限公司。

1.4 实验方法

1.4.1 MRL/lpr小鼠自体来源诱导性多能干细胞的制备 参照文献[17]报道的方法，取18只8周龄MRL/lpr狼疮小鼠，每只采集皮肤标本1 cm²，在含有300 U/mL透明质酸酶(Sigma公司)和200 U/mLⅠ型胶原酶(Sigma公司)的DMEM培养基(Gibco公司)中消化6 h，然后用0.25%胰蛋白酶溶液(Sigma公司)消化20 min，1 500 r/min离心5 min，收集细胞接种于培养皿中，37 ℃、体积分数为5%CO₂培养箱(Shellab公司)中培养、传代，取第3代细胞接种于底部预先涂有明胶(Sigma公司)的一次性培养皿，应用携带Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc cDNAs的CytoTune^®-iPS仙台病毒重编程试剂盒(Thremo Fisher公司)转染48 h，使用KnockOut^TM血清替代物培养基(Gibco公司)培养30 d，获得诱导性多能干细胞样的细胞克隆，每隔7 d传代，取第3代细胞进行鉴定。

1.4.2 MRL/lpr小鼠诱导性多能干细胞的鉴定 参考文献[18-20]报道的方法，取第3代诱导性多能干细胞进行如下鉴定。

(1)碱性磷酸酶染色：40 g/L多聚甲醛固定5 min，PBS清洗3次，按照碱性磷酸酶染色试剂盒(Sigma公司)说明步骤进行操作，用染色液室温孵育细胞20 min，PBS清洗1次，倒置相差显微镜下观察并拍照，染色强度越高说明诱导性多能干细胞具有与胚胎干细胞相似的多能性。

(2)免疫荧光检测干细胞标志物：40 g/L多聚甲醛固定细胞5 min，用0.2% Triton X-100进行细胞膜打孔，PBS清洗3次，体积分数为10%山羊血清封闭30 min，PBS清洗3次，分别加入兔抗鼠OCT4单克隆抗体(1∶50)、兔抗鼠SSEA-1单克隆抗体(1∶100)和兔抗鼠SOX2单克隆抗体(1∶100)(Abcam公司)，4 ℃过夜，PBS漂洗3次，加入Alexa Fluor 555标记的山羊抗兔IgG(Abcam公司)，避光孵育1 h，PBS清洗3次，DAPI染核5 min，荧光显微镜下观察并拍照。

(3)拟胚体分化检测：将诱导性多能干细胞在培养皿中悬浮培养，每2 d换液1次，7 d后将形成的拟胚体接种于涂有明胶的培养皿内贴壁生长，7 d后收集细胞，40 g/L多聚甲醛固定10 min，PBS清洗3次，0.3% Triton X-100进行细胞膜打孔，分别用标记内胚层的小鼠抗甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(1∶200)、标记中胚层的小鼠抗Desmin单克隆抗体(1∶100)和标记外胚层的小鼠抗nestin单克隆抗体(1∶100) (Abcam公司)孵育，4 ℃过夜，PBS漂洗3次，加入Alexa Fluor 488标记的山羊抗鼠IgG(Abcam公司)，避光孵育1 h，PBS清洗3次，荧光显微镜下观察并拍照。

1.4.3 实验分组与治疗方法 将54只MRL/lpr小鼠用随机数字表分为模型对照组、试剂对照组和干细胞治疗组，每组18只。另取18只与MRL/lpr小鼠同源的8周龄C57BL/6小鼠设为正常对照组。正常对照组和模型对照组不给予干细胞注射等处理；试剂对照组经尾静脉注射PBS 150 μL，每周的周一和周四分别注射1次，连续注射4周，共注射8次；干细胞治疗组经尾静脉注射含1×10³个诱导性多能干细胞的PBS 150 μL，每周的周一和周四分别注射1次，连续注射4周，共注射8次。在最后一次注射14 d后进行各观察指标的检测。

1.4.4 小鼠血清肌酐、尿素氮、抗双链DNA抗体和抗核抗体的检测 每组各取6只小鼠，断尾取血300 μL，10 000 r/min离心收集血清，应用小鼠血清肌酐、尿素氮、抗双链DNA抗体、抗核抗体ELISA检测试剂盒(上海百蕊生物科技公司)在热电FC酶标仪(Thermo公司)上检测血清肌酐、尿素氮、抗双链DNA抗体和抗核抗体水平。

1.4.5 小鼠肾脏形态学观察 将1.4.4中6只小鼠处死，切取肾脏，40 g/L多聚甲醛固定24 h，制作石蜡切片，苏木精染液染色10 min，流水冲洗，伊红染液染色5 min，透明后中性树胶封固，光学显微镜下观察并拍照。

1.4.6 小鼠24 h尿蛋白的检测 将小鼠饲养于代谢笼内，收集小鼠24 h尿液，应用考马斯亮蓝法检测尿蛋白浓度。

1.4.7 小鼠外周血调节性T细胞百分率的检测 每组各取6只小鼠行内眦静脉取血50 μL，使用流式细胞仪检测外周血中调节性T细胞的百分率，方法如下：向 50 μL血液中加入CD4-FITC与CD25-PE(上海浩洋生物科技公司)，孵育30 min后加入1.5 mL破膜剂(Caltag公司)再孵育15 min，1 000 r/min离心3 min，去上清，加入100 μL流式缓冲液轻轻混匀，再加入Foxp3-PE-Cy5(Abcam公司)，避光孵育30 min，流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺T细胞百分率。

1.4.8 小鼠脾脏树突状细胞百分率的检测 每组取6只小鼠处死，切取30 mg脾脏，眼科剪将脾脏组织块剪碎，0.1%胶原酶Ⅳ(Sigma公司)消化，100目一次性细胞筛过滤，用淋巴细胞分离液(北京索莱宝科技公司)制备单个核细胞悬液，分别加入3 μL CD86-PE、CD80-PE、MHCⅡ-FITC(Abcam公司)，避光孵育30 min，用流式细胞仪检测CD80⁺CD86⁺MHCⅡ⁺细胞百分率。

1.4.9 小鼠脾脏辅助性T细胞1和辅助性T细胞2(Th1/Th2)比值的检测 取1.4.8中处死的小鼠脾脏30 mg，剪碎，0.1%胶原酶Ⅳ消化，淋巴细胞分离液制备单个核细胞悬液，加入CD4-FITC细胞膜染色以及干扰素γ-PE、白细胞介素4-APC(Abcam公司)细胞质染色，避光孵育30 min，流式细胞仪检测CD4⁺干扰素γ⁺细胞(Th1)和CD4⁺白细胞介素4⁺细胞(Th2)阳性率，计算Th1/Th2比值。

1.5 主要观察指标 ①MRL/lpr小鼠诱导性多能干细胞特性；②血清肌酐、尿素氮、抗双链DNA抗体和抗核抗体水平；③肾脏组织形态结构；④尿蛋白含量；⑤外周血调节性T细胞比例；⑥脾脏树突状细胞比例；⑦脾脏Th1/Th2比值。

1.6 统计学分析 采用SPSS 19.0软件对数据进行分析，Graphpad prism7软件作图，计量数据采用x(_)±s表示，多组内比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验；计数资料用率表示，组间比较用卡方检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

干细胞具有多向分化能力，在体外可诱导分化为不同类型细胞，使细胞替代疗法成为基础与临床研究的热点^[21]。诱导性多能干细胞的出现，既避免了胚胎干细胞的伦理问题，也解决了间充质干细胞获取数量有限和建系难的问题，其临床应用具有广阔前景^[22]。该研究将系统性红斑狼疮模型MRL/lpr小鼠作为研究对象，初步观察了模型小鼠自体皮肤成纤维细胞来源诱导性多能干细胞静脉输注治疗狼疮小鼠的效果。结果显示，尾静脉注射诱导性多能干细胞对肾脏具有保护作用，不仅改善了肾脏功能，还在一定程度上发挥了免疫调节作用，为今后的临床研究提供了实验参考。MRL/lpr小鼠模型的主要病理生理特征为肾小球肾炎和T淋巴细胞异常增生^[23]。鉴于此，该研究分别从肾脏结构与肾功能及免疫功能入手进行疗效评价。由于12周龄雌性MRL/lpr小鼠处于发病早期，14周左右开始出现肾脏病理变化，17周死亡^[24]；而皮肤成纤维细胞成功重编程为诱导性多能干细胞并进行鉴定需要约5周时间^[25]，故实验选取8周龄雌性MRL/lpr小鼠，采集小鼠皮肤分离成纤维细胞，重编程为诱导性多能干细胞，在13周龄时进行尾静脉注射治疗，为期2周，至15周龄时治疗结束，观察治疗效果。由于系统性红斑狼疮的肾脏损害原因主要是大量免疫复合物沉积在肾小球毛细血管壁上并激活补体，造成肾小球滤过功能障碍和肾小管上皮细胞损伤，进而发生肾功能异常^[26-27]。该研究取小鼠肾脏制作石蜡切片经苏木精-伊红染色后观察肾脏形态结构的变化，结果显示MRL/lpr小鼠肾脏可见明显的病理形态学改变，肾小球由于球内系膜细胞和基质的增生而体积增大，肾小管上皮细胞出现空泡变性，偶可见管腔内嗜酸性均质状管型，但并没有发现一些研究中所报道的炎性细胞聚集现象^[28]，可能原因是疾病早期炎症反应不明显；经诱导性多能干细胞尾静脉注射治疗后肾脏病变有了明显改善。为了进一步观察对肾脏功能的影响，结果显示MRL/lpr小鼠血清肌酐与尿素氮水平明显高于正常对照组，经诱导性多能干细胞治疗后，二者均有明显降低，但尚未降至正常水平，可能与细胞治疗次数少有关，使治疗作用小于疾病进展程度。

系统性红斑狼疮的发生与机体免疫失衡和自身耐受丧失密切相关^[29]。抗双链DNA抗体和抗核抗体等是系统性红斑狼疮的特异性指标，这些自身抗体与自身抗原结合，经血液循环沉积于肾脏引起肾损伤^[30]。抗双链DNA抗体水平也是用于衡量系统性红斑狼疮活动程度的重要指标^[31]。结果显示，MRL/lpr小鼠血清中2种抗体升高较多，经诱导性多能干细胞治疗后2种抗体水平出现降低，提示诱导性多能干细胞可能通过降低循环中自身抗体的浓度而减少免疫复合物的产生，进而发挥肾脏保护作用，还可能阻止了疾病进展。

研究表明，免疫调节已成为探讨系统性红斑狼疮发病机制和寻找治疗方法的核心问题之一^[32]。以往研究已证实间充质干细胞具有强大的免疫调节功能，可以调节淋巴细胞和树突状细胞的增殖^[33]，但关于诱导性多能干细胞的免疫调节能力鲜有报道。该研究检测了外周血调节性T细胞比例和脾脏中树突状细胞比例，结果显示诱导性多能干细胞进了调节性T细胞和树突状细胞的增殖。有研究报道，对免疫平衡发挥决定性作用的树突状细胞在系统性红斑狼疮疾病进展中存在功能障碍，介导T细胞增殖活性降低^[34]。为了明确增殖的树突状细胞是否具有正常的抗原呈递功能，进一步检测了小鼠脾脏辅助性T细胞亚群的比例即Th1/Th2比值。正常情况下，树突状细胞通过促进Th1细胞增殖和Th1/Th2平衡发挥免疫调节作用^[35]。该研究结果显示，MRL/lpr小鼠脾脏中Th1细胞比例降低，Th2细胞比例升高，Th1/Th2比值降低，经诱导性多能干细胞治疗后Th1和Th2细胞比例均升高，但对Th1细胞比例升高作用更明显，使Th1/Th2值也随之升高，提示诱导性多能干细胞可促进Th1细胞增殖，促进Th2细胞向Th1细胞转化，以平衡免疫紊乱。

综上所述，研究结果初步表明自体皮肤成纤维细胞来源的诱导性多能干细胞通过发挥肾脏保护和免疫调节作用治疗系统性红斑狼疮小鼠。今后将从干细胞体内分布和分泌功能研究其治疗机制，为系统性红斑狼疮的干细胞治疗提供科学依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程