类表皮生长因子域7促进颅脑损伤模型大鼠脑微循环的修复与重建

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1491

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (35): 5619-5625.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1491

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类表皮生长因子域7促进颅脑损伤模型大鼠脑微循环的修复与重建

徐鹏翔1，李强1，许琼冠1，罗孟亚男2，成凯1，谢镇明1，付宙锋1

(海南医学院第二附属医院，1神经外科，2放射治疗科，海南省海口市 570311)

收稿日期:2019-05-18 出版日期:2019-12-18 发布日期:2019-12-18
通讯作者: 许琼冠，主治医师，海南医学院第二附属医院神经外科，海南省海口市 570311
作者简介:徐鹏翔，1981年生，男，江西省金溪县人，硕士，主治医师。
基金资助:
海南省自然科学基金项目(817332)，项目负责人：徐鹏翔

Epidermal growth factor-like domain 7 promotes the repair and reconstruction of cerebral microcirculation in rat models of craniocerebral injury

Xu Pengxiang1, Li Qiang1, Xu Qiongguan1, Luo Mengyanan2, Cheng Kai1, Xie Zhenming1, Fu Zhoufeng1

(1Department of Neurosurgery, 2Department of Radiotherapy, the Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570311, Hainan Province, China)

Received:2019-05-18 Online:2019-12-18 Published:2019-12-18
Contact: Xu Qiongguan, Attending physician, Department of Neurosurgery, the Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570311, Hainan Province, China
About author:Xu Pengxiang, Master, Attending physician, Department of Neurosurgery, the Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570311, Hainan Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Hainan Province, No. 817332 (to XPX)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
血管新生：是指在原有血管上以芽生形式形成新血管的过程，成年人的脉管系统在生理状况下极为稳定，但当遭受到譬如脑外伤等外来因素影响时，此过程则显得非常活跃。
类表皮生长因子域7：是一种新的内皮细胞源性血管生长因子，在大多数正常成年组织中表达下调或不表达。

摘要
背景：研究表明血管内皮细胞受损与创伤性脑损伤的血脑屏障功能障碍密切相关，类表皮生长因子域7(EGF-like domain 7，EGFL7)是促进血管生成的重要因子，尚不可知EGFL7能否通过激活脑血管新生从而促进大脑创伤修复。
目的：探讨EGFL7促进脑损伤后大鼠损伤脑组织中血管新生的具体机制。
方法：健康成年雄性SD大鼠42只，随机分为2组，颅脑损伤组(n=36)运用改良Feeney法撞击大鼠脑硬膜建立颅脑损伤模型，假手术组(n=6)仅暴露完整脑硬膜；依照损伤后取标本时间分为颅脑损伤1，6，24 h以及3，7，14 d共6个亚组，每亚组各6只。经过神经功能损伤评分可用后，取挫伤灶及周围脑组织进行后续实验。另取18只SD大鼠随机分为3组，建立颅脑损伤模型，颅脑损伤1 h后运用立体定向注射仪分别向大鼠脑室内注射腺病毒rAd-vector、rAd-EGFL7及rAd-EGFL7+PI3K/Akt通路抑制剂LY294002，每组6只。干预12 h后取材检测。
结果与结论：①RT-PCR、Western blot及免疫组织化学染色检测显示：颅脑损伤大鼠脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调，且随损伤后时间的增加而上调，EGFL7在颅脑损伤3 d达到最大(P < 0.05)，EGFL7与CD34两者的表达趋势相一致，微血管生成数目在颅脑损伤7 d到达最高；②大鼠颅脑损伤后1 h颅内rAd-EGFL7微量注射12 h后，损伤脑组织中EGFL7、CD34表达显著上调(P < 0.05)，同时pAkt、cyclin D1显著增加，FOXO1显著下降(P < 0.05)；③大鼠颅脑损伤后颅内同时注射rAd-EGFL7和PI3K/Akt信号通路抑制剂12 h后，EGFL7表达变化不明显，但CD34表达显著受抑制(P < 0.05)，同时微血管生成数目显著减少(P < 0.05)；④结果证实，EGFL7在脑损伤组织中表达上调，其高表达可能与损伤脑组织中血管生成相关。EGFL7过表达激活PI3K/Akt信号通路从而促进损伤脑组织中的血管新生。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0003-1544-5005(许琼冠)

关键词: 类表皮生长因子域7, CD34, 颅脑损伤, PI3K/Akt信号, 血管新生, 改良Feeney法, 脑损伤修复, 神经功能障碍

Abstract:

BACKGROUND: Vascular endothelial cell damage is shown to be closely related to blood brain barrier function disorder after traumatic brain injury. Epidermal growth factor-like domain 7 (EGFL7) is an important factor to promote angiogenesis. Whether EGFL7 can promote traumatic brain injury repair by activating angiogenesis remains unknown.
OBJECTIVE: To explore the mechanisms by which EGFL7 promotes angiogenesis after traumatic brain injury in rats.
METHODS: Forty-two healthy adult male rats were randomly divided into craniocerebral injury group (n=36, craniocerebral injury model was established by impacting rat dura mater with modified Feeney method) and sham group (n=6, only complete dura mater was exposed) and the rats were divided into six subgroups according to the sample time after injury: 1 hour, 6 hours, 24 hours, 3 days, 7 days and 14 days, 6 rats in each subgroup. The contusion lesion and the surrounding brain tissue were obtained after the neurological injury score was available. Another 18 rats were selected and randomized into three groups (n=6/group) to establish craniocerebral injury model. rAd-vector, rAd-EGFL7 and combined PI3K/Akt pathway inhibitor rAd-EGFL7+LY294002 was respectively injected into the ventricles of rats at 1 hour after injury. Samples were obtained at 12 hours later.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) RT-PCR, western blot assay and immumohistochemical staining results showed that the EGFL7 and CD34 were significantly up-regulated in rat brain after craniocerebral injury (P < 0.05). The expression of EGFL7 peaked on day 3 (P < 0.05), and the expression of CD34 had the same trend with EGFL7. The number of angiogenesis peaked on day 7. (2) After 12 hours of the rAd-EGFL7 microinjection in rat brain at 1 hour post-injury, the expression levels of EGFL7, CD34, pAkt and cyclin D1 were significantly up-regulated and the FOXO1 expression was significantly down-regulated (all P < 0.05). (3) Microinjection of rAd-EGFL7 and PI3K/Akt inhibitor in rat brain at 1 hour post-injury, the EGFL7 expression was not significantly changed, but the CD34 expression was significantly inhibited (P < 0.05), and the number of angiogenesis was significantly decreased (P < 0.05). (4) To conclude, up-regulated EGFL7 in the injured brain tissue may be related to angiogenesis after traumatic brain injury. Overexpression of the EGFL7 promotes the angiogenesis in the injured brain tissue through activating PI3K/Akt signaling.

Key words: EGF-like domain 7, CD34, traumatic brain injury, PI3K/Akt signaling, angiogenesis, modified Feeney method, cerebral injury repair, neurological dysfunction

中图分类号:

徐鹏翔，李强，许琼冠，罗孟亚男，成凯，谢镇明，付宙锋. 类表皮生长因子域7促进颅脑损伤模型大鼠脑微循环的修复与重建[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(35): 5619-5625.

Xu Pengxiang1, Li Qiang1, Xu Qiongguan1, Luo Mengyanan2, Cheng Kai1, Xie Zhenming1, Fu Zhoufeng1 . Epidermal growth factor-like domain 7 promotes the repair and reconstruction of cerebral microcirculation in rat models of craniocerebral injury[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(35): 5619-5625.

图/表（结果） 2

2.1 实验动物数量分析纳入大鼠60只，TBI-14 d组和rAd-EGFL7+LY294002组各死亡1只，剩余58只均计入最终结果分析。

2.2 各组大鼠神经功能变化颅脑损伤后神经功能损伤评分均随着时间的推移而逐渐下降(P < 0.05)，神经功能逐渐恢复。与rAd-vector组比较，rAd-EGFL7组颅脑损伤的神经功能损伤评分显著下降(P < 0.05)，表现出神经功能改善。与rAd-EGFL7组比较，rAd-EGFL7+LY294002组抑制PI3K/Akt信号后，颅脑损伤的神经功能损伤评分显著上升(P < 0.01)，表现出对EGFL7改善神经功能具有显著的抑制作用，见表3。

2.3 EGFL7、CD34在颅脑损伤后脑组织中表达上调RT-PCR及Western blot结果显示，与假手术组相比，TBI模型组损伤脑组织中EGFL7的mRNA转录及蛋白表达水平显著上调(P < 0.05)，且随损伤后时间的延长，EGFL7的表达逐渐增加，并在TBI-3 d达到最大值(图1A，B)。与之相似的，TBI模型组损伤脑组织中CD34 mRNA表达水平显著上调(P < 0.05)，CD34与EGFL7的表达趋势相一致，即CD34 mRNA水平随损伤后时间的延长而逐渐增加，并在TBI-7d达到最大值，见图1C。

免疫组织化学染色结果显示，与假手术组相比，TBI模型组损伤脑组织中CD34蛋白表达水平及分布逐渐增加，且在TBI-7 d达到最大，而在TBI-14 d则减少到TBI 0-6 h水平，见图1D。免疫组织化学染色结果以胞浆/核呈棕黄色或棕褐色染色为阳性细胞，每只大鼠随机选取5张非连续切片，并于200倍光学显微镜下随机选择3个视野观察计数，最终结果取平均值，结果显示TBI模型组损伤脑组织中MVD数目逐渐增多，在TBI-7 d到达最大，较TBI-1 h显著增加(P < 0.05)，在TBI-14 d又恢复到TBI-6 h水平，较TBI- 7 d时显著减少(P < 0.05)，见图1E。结果表明，EGFL7在TBI大鼠颅脑损伤后脑组织中表达上调，其表达趋势与血管生成因子CD34的表达一致，提示TBI大鼠颅脑损伤后脑组织中高表达的EGFL7可能与血管再生过程有关。

2.4 EGFL7过表达活化PI3K/Akt信号据文献报道，EGFL家族成员均属于血管生成因子，在体外实验中，EGFL可通过激活PI3K信号通路诱导内皮细胞迁徙，促进血管形成^[15]。为了验证在颅脑损伤模型中过表达EGFL7是否激活了PI3K/Akt信号通路，在注射rAd-EGFL7的颅脑损伤大鼠的损伤脑组织中检测PI3K/Akt信号关键基因pAkt、cyclin D1、FOXO1的表达。RT-PCR及Western blot结果显示，与对照rAd-vector相比，在大鼠脑损伤1 h，过表达EGFL7后损伤脑组织中的Akt及cyclin D1 mRNA转录水平及pAkt、cyclin D1蛋白水平显著增加(P < 0.05)，同时FOXO1的转录及蛋白翻译水平显著减少(P < 0.05)，见图2。结果表明过表达EGFL7后，颅脑损伤大鼠损伤脑组织中的PI3K/Akt信号通路被激活。

2.5 EGFL7激活PI3K/Akt信号促损伤后脑组织中血管新生前面的实验结果表明，EGFL7可激活颅脑损伤大鼠脑组织中的PI3K/Akt信号，因此实验猜测：颅脑损伤大鼠脑组织中上调的EGFL7能够通过激活PI3K/Akt信号促进损伤脑组织中的血管生成。为了验证这个猜测，在TBI-1 h脑损

伤模型中注射rAd-EGFL7的同时加入10 μL的10 μmol/L LY294002(PI3K/Akt信号通路抑制剂)，并在损伤脑组织中检测PI3K/Akt信号关键基因及CD34的表达。Western blot结果显示，EGFL7过表达后血管生成因子CD34表达上调，且PI3K/Akt信号被活化，即Akt、cyclin D1表达增加，而FOXO1表达下降，但使用抑制剂LY294002抑制PI3K/Akt信号通路后，CD34表达显著下降，见图3A。免疫组织化学染色结果显示，过表达EGFL7促进颅脑损伤大鼠脑组织血管生成因子CD34表达，而抑制PI3K/Akt信号通路后，这种促进作用被抑制，颅脑损伤大鼠脑组织中CD34的表达显著减少，见图3B。微血管密度计数结果显示，EGFL7促进颅脑损伤大鼠损伤脑组织血管生成，抑制PI3K/Akt信号通路后，损伤脑组织血管生成显著减少(P < 0.05)，见图3C。以上结果表明，EGFL7高表达可通过活化PI3K/Akt信号从而促进颅脑损伤大鼠损伤脑组织的血管生成。

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引言

创伤性脑损伤(traumatic brain injury，TBI)是现代社会危及公民，特别是年轻人生命及健康的疾病之一^[1-2]。研究发现，创伤性脑损伤后的血脑屏障功能障碍是脑损伤中极为显著的一个特征，主要表现为损伤灶周围“半暗带”的形成，这与血管内皮细胞损伤密切相关^[3-5]，但目前创伤性脑损伤中的血管新生过程及分子机制仍不甚清楚。

据报道，类表皮生长因子域7(EGF-like domain 7，EGFL7)是一种新的内皮细胞源性血管生长因子，在大多数正常成年组织中表达下调或不表达，而在生理或病理性血管生成过程中，EGFL7可重新被激活而参与血管生成^[6-7]。EGFL7表达缺失可影响内皮细胞的正确空间排布^[8-10]，表明EGFL7参与协调内皮细胞间的相互作用和局部迁移，以确保主要血管的形成，但EGFL7在颅脑损伤脑血管新生中是否发挥作用仍不清楚。

脑血管新生是一个极为复杂且极难研究的临床科学问题，在血管新生过程中有多种分子及信号通路参与其中，如PI3K/Akt信号通路，该通路除了调控细胞存活、细胞增殖等外^[11-12]，还能调控血管的发育和血管管腔的形成^[13-14]，同时EGFL家族可通过激活PI3K信号诱导内皮细胞迁移，促进血管形成^[15]，因此研究EGFL7是否通过调控PI3K/Akt通路参与血管生成变得十分重要。

课题团队在前期研究中证实，EGFL7高表达可促进内皮细胞迁移形成较多的管道样结构，而将EGFL7基因进行沉默后，上述管道样结构消失^[16]。为进一步研究EGFL7基因在脑组织中的表达，以及颅脑损伤发生后脑组织血管新生的过程和作用机制，实验拟构建大鼠颅脑损伤模型，通过在颅脑损伤模型中过表达EGFL7及抑制PI3K/Akt通路，来探讨EGFL7调控血管生成的具体机制，为治疗颅脑损伤提供新的方向和理论基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点于2018年5月至2019年7月在海南医学院第二附属医院完成。

1.3 材料选取2月龄SD雄性大鼠60只，体质量150- 180 g，SPF级，由广州赛业公司提供，动物生产许可证号：SCXK(粤)2013-0032。

1.4 实验方法

1.4.1 动物分组及颅脑损伤模型制备分组及造模信息见表1。致伤后的大鼠出现四肢抽搐、呼吸暂停等症状，给予人工呼吸并在呼吸恢复正常后注射庆大霉素以预防感染；假手术组仅暴露完整脑硬膜，不采用颅脑打击器撞击颅骨。颅脑损伤模型制备成功后，于1，6，24 h以及3，7，14 d采集损伤的脑组织标本，所有大脑标本大体观察可见损伤处有局灶性脑挫伤灶，分别命名为TBI-1 h、TBI-6 h、TBI-24 h、TBI-3 d、TBI-7 d和TBI-14 d组，每组6只。

然后选取剩余18只SD大鼠，在适应性饲养1周后，随机分为3组：rAd-vector组、rAd-EGFL7组及rAd-EGFL7+ LY294002组，每组6只。同上述方法建立颅脑损伤模型，颅脑损伤1 h后运用立体定向注射仪分别向大鼠脑室内注射10 μL滴度为1.87×10⁸的过表达EGFL7腺病毒载体rAd-EGFL7(广州锐博公司)、阴性对照rAd-vector(广州锐博公司)以及rAd-EGFL7联合PI3K/Akt通路抑制剂LY294002(10 μmol/L，Calbiochem，USA)，LY294002给药方式及剂量参考Tu等^[18]报道的方法，干预12 h后取材。

1.4.2 神经功能损伤(NSS)评分颅脑损伤后大鼠均有不同程度的瞳孔改变、肢体抽搐、意识障碍，伤后各项反射消失并在30 min内恢复认为模型制作成功。在颅脑损伤后各个时间点，按Leinhase等^[19]报道的标准化神经严重程度评分：①无神经缺损体征，0分；②提鼠尾离地面约1尺，观察前肢情况，正常大鼠两前肢对称地伸向地面。对侧前肢屈曲，评为1分；③将动物置平滑地板上，分别推左(或右)肩向对侧移动，检查抵抗运动的阻力，正常大鼠两侧阻力明显对称，前肢屈曲及对侧抵抗推力下降，评为2分；④将动物两前肢置一金属网上，观察两前肢的张力，正常大鼠两前肢的张力明显对称，向对侧转圈，评为3分；⑤严重意识障碍，评为4分。根据以上评分，满分10分，分数越高，说明动物的行为障碍越严重。

1.4.3 实时荧光定量PCR检测构建的颅脑损伤模型经过神经功能损伤评分可用后，各组随机取4只大鼠处死，予以体积分数4%水合氯醛腹腔注射，待麻醉后快速断头取脑，锐性分离挫伤灶及周围脑组织约50 mg，快速放入冻存管中密封后，置于-80 ℃冰箱中保存备用。实验时取出各组脑组织，分别采用Trizol和RT-PCR试剂盒(Invitrogen, USA)提取总RNA反转录合成模板cDNA，PCR引物序见表2。每个样本3个复孔，按两步法PCR扩增。反应结束后确认RT-PCR的扩增曲线及熔解曲线是否满足要求，仪器软件中自动输出Ct值，计算相对表达量采用2^-^??Ct方法。

1.4.4 Western blot实验于-80 ℃冰箱中取出已备好的各组脑组织，分别提取总蛋白并测定蛋白浓度，处理好的待测样品取50 μg蛋白进行SDS-PAGE(8%分离胶，5%浓缩胶)电泳分离，转膜，将分离的蛋白电转移至PVDF膜上。封闭液室温封闭1 h，经鼠抗人EGFL7，CD34，pAkt，cyclin D1，FOXO1，GAPDH一抗孵育后，4 ℃过夜。TBST充分洗膜后，加入山羊抗鼠二抗(1∶2 000)室温孵育1 h，TBST清洗后ECL显色液显色照相，并通过ImageJ软件进行灰度分析统计。

1.4.5 CD34免疫组织化学染色各组随机取2只大鼠处死，冠状剖取损伤灶周围脑组织，取出的全脑置于40 g/L多聚甲醛中固定48 h后，以挫伤灶为中心，前后1 mm作两道垂直切口，切取厚约2 mm 左右的标本脱水包埋切片。按如下步骤进行：①切片置于60 ℃恒温烘箱烤20 min；②二甲苯脱蜡2次×10 min；梯度乙醇脱水，每次5 min；③将切片浸入EDTA(pH 8.0)溶液进行高压热修复，冷却后PBS洗3次×3 min，在标本上滴加灭活内源性过氧化物酶，室温10 min；④PBS洗3次×3 min，正常羊血清工作液封闭，室温放置10 min，滤纸吸掉，滴加一抗4 ℃孵育过夜；⑤次日PBS洗去一抗，滴加生物素标记二抗，37 ℃孵育30 min；⑥PBS洗去二抗，DAB(武汉博士德)显色，镜下控制反应时间，显色满意后蒸馏水洗涤终止反应；⑦苏木精复染，依次脱水-透明-干燥-封固，最后在显微镜下进行观察；⑧CD34定位于内皮细胞胞浆，每张切片采集(×200倍)图像，并通过通过ImageJ进行形态学统计分析，计算平均吸光度值。

1.4.6 微血管密度检测采用CD34免疫组织化学染色法标记损伤灶周围皮质区脑组织中的血管内皮细胞，并以此作为判定血管的依据。以胞浆/核呈棕黄色或棕褐色染色为阳性细胞。每只大鼠随机选取5张非连续切片，于光学显微镜下(×200倍)观察并计数被染色的血管数目。微血管计数：采用Veidner计数标准^[20]，计数CD34因子抗体染色的单细胞或细胞团，有无管腔形成不限，只要与周围血管和组织有清楚的分离即认为是可计数的微血管。每张切片先在低倍镜(×40倍)下选3个微血管数最多的区域，再在高倍镜(×200倍)下计数微血管数，均值即为微血管密度。

1.5 主要观察指标 ①荧光定量PCR及Western blot检测EGFL7、血管生成因子CD34及PI3K/Akt信号通路相关基因的mRNA及蛋白的表达水平；②免疫组织化学染色观察血管生成因子CD34在脑损伤组织中的表达及分布；③微血管密度方法观察脑损伤组织中的微血管数目。

1.6 统计学分析各组数值符合正态分布，数据均以x(_)±s表示，用SPSS 20.0软件处理数据，两间样本数据使用t 检验进行统计分析；多组间样本数据使用单因素方差分析，并通过LSD检验对所得数据进行事后检验，P < 0.05表示差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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血管新生是指在原有血管上以芽生形式形成新血管的过程，成年人的脉管系统在生理状况下极为稳定，但当遭受到譬如脑外伤等外来因素影响时，此过程则显得非常活跃^[21-23]。脑损伤发生后，血管新生是脑微循环修复重建的重要病理生理过程，脑血管新生过程十分复杂，涉及多个环节及多种因子多个信号通路。现有研究表明EGFL7参与调控血管的形成，但EGFL7在颅脑损伤脑血管新生中的功能及作用机制并不清楚。通过经改良Feeney法构建颅脑损伤大鼠颅脑损伤模型，采集颅脑损伤模型大鼠脑损伤后1，6，24 h以及3，7，14 d的脑组织标本，运用RT-PCR及Western blot及免疫组织化学染色等检测方法得出，颅脑损伤后的EGFL7高表达可能与损伤脑组织中血管生成相关。为进一步探索其中的具体机制，对脑损伤1 d的大鼠进行颅脑损伤微量注射干预：EGFL7过表达或抑制PI3K/Akt信号，结果显示，大鼠损伤脑组织中过表达EGFL7能促进血管生成因子CD34的表达，且PI3K/Akt信号通路被激活，而抑制PI3K/Akt则有相反的结果，表明颅脑损伤后EGFL7表达增加，并通过激活PI3K/Akt信号以缓解组织损伤。

FOXO1是PI3K/Akt信号通路重要的下游重靶点，通过维持正常细胞的增殖、凋亡和存活来调控细胞的稳态，在多种原发性肿瘤和癌细胞系中PIK3CA和AKT1过表达，而FOXO1表达受抑制，FOXO1的激活可诱导多种癌细胞系的凋亡和增殖抑制^[24-25]。实验结果显示，过表达EGLF7后损伤脑组织中pAkt等表达增加而FOXO1显著受抑，说明PI3K/Akt信号被激活，通过下调FOXO1的表达从而解除由其抑制的相关下游基因的表达，从而促进血管内皮细胞的增殖。此外，与单独过表达EGFL7相比，损伤脑组织中抑制PI3K/Akt信号后，EGFL7表达变化不明显，但血管生成因子CD34表达显著受抑制，且微血管密度显著减少，而这些结果均与神经功能损伤评分结果相一致。以上结果表明，在脑损伤大鼠的脑组织中，EGFL7活化PI3K/Akt信号促大鼠损伤后血管新生。

近年来的研究成果显示，颅脑损伤后存在大量的血管新生过程，这些过程可能在创伤脑组织修复及继发性脑组织损伤中起重要作用，因而促进血管新生的研究有望成为创伤性颅脑损害治疗的新途径^[4]。迄今为止已有多种在创伤后脑组织中表达增加的血管再生调节因子被报道，如血管内皮生长因子^[26]、基质金属蛋白酶系^[27]、血管生成素1等^[28]。目前，已有通过注射外源性血管内皮生长因子促进缺血区血管再生实验研究的相关报道^[29]，此外，Akt/FOXO1与mTOR靶蛋白在大鼠脑损伤后功能恢复中发挥作用，但其并未涉及脑血管和内皮细胞方面的内容^[30]。实验的研究结果：EGFL7活化PI3K/Akt/FOXO1信号促进脑血管新生，将为脑外伤后血管再生方面的药物干预研究提供新的选择。

综上所述，实验证明EGFL7基因在颅脑损伤大鼠的损伤脑组织中的表达上调，并促进损伤脑组织血管新生，这个过程是通过激活PI3K/Akt信号通路来发挥作用的，这个结果将有助于进一步阐明脑外伤后血管再生的机制，为治疗颅脑损伤及促进脑血管新生提供新的理论基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

类表皮生长因子域7促进颅脑损伤模型大鼠脑微循环的修复与重建

Epidermal growth factor-like domain 7 promotes the repair and reconstruction of cerebral microcirculation in rat models of craniocerebral injury

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