脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖影响的分子机制

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0694

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (1): 61-67.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0694

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脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖影响的分子机制

李响¹，吴志贤¹，刘宏伟²，梁杰¹，莫自增¹

¹广东医科大学附属医院整形外科，广东省湛江市 524001；²暨南大学附属第一医院整形外科，广东省广州市 510630

修回日期:2018-08-03 出版日期:2019-01-08 发布日期:2018-11-28
通讯作者: 梁杰，硕士，教授，硕士生导师，广东医学大学附属医院整形外科，广东省湛江市 524001
作者简介:李响，女，1981年生，吉林省吉林市人，汉族，2018年暨南大学毕业，博士，主治医师，主要从事瘢痕治疗、自体脂肪移植研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81372065)，项目负责人：刘宏伟

Molecular mechanism underlying the effect of adipose-derived stem cells on the proliferation of keloid fibroblasts

Li Xiang¹, Wu Zhixian¹, Liu Hongwei², Liang Jie¹, Mo Zizeng¹

¹Department of Plastic Surgery, Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Zhanjiang 524001, Guangdong Province, China; ²Department of Plastic Surgery, First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 510630, Guangdong Province, China

Revised:2018-08-03 Online:2019-01-08 Published:2018-11-28
Contact: Liang Jie, Master, Professor, Master’s supervisor, Department of Plastic Surgery, First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou 510630, Guangdong Province, China
About author:Li Xiang, MD, Attending physician, Department of Plastic Surgery, Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, Zhanjiang 524001, Guangdong Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81372065 (to LHW)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
脂肪来源干细胞：是从脂肪组织中分离得到具有多向分化潜能和干细胞免疫表型的细胞，如CD44和CD90呈阳性表达，CD45呈阴性表达。脂肪来源干细胞通过多种调节机制，包括分泌促进血管再生和皮肤细胞再分化的细胞因子，分泌抗纤维化细胞因子和生长因子等，在皮肤伤口愈合中发挥治疗作用。
瘢痕疙瘩成纤维细胞：瘢痕疙瘩是皮肤伤口愈合或不明原因所致皮肤损伤愈合后所形成的过度生长的异常瘢痕组织。瘢痕疙瘩成纤维细胞是创伤愈合过程中的主要效应细胞，瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移、增殖、分泌胶原及凋亡等生物学行为参与皮肤损伤后的创面修复。因此，通过抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移和增殖，对于抑制增生性瘢痕形成具有重要的临床意义。

摘要
背景：脂肪来源干细胞已广泛用于组织填充修复，但是其对皮肤瘢痕抑制和修复的作用机制还不清楚。
目的：探讨脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物活性的影响及分子机制。
方法：取第3代人脂肪来源干细胞，分别以0，3×10⁴，6×10⁴，1.2×10⁵/孔接种于Transwell小室的上室(0为对照组，只含细胞培养液)，取第4代对数生长期的瘢痕疙瘩成纤维细胞，以6×10⁴/孔接种于下室(脂肪干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞比例分别为0.5∶1，1∶1和2∶1)，进行人脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养，培养24 h取下室瘢痕疙瘩成纤维细胞进行相关指标检测。
结果与结论：①人脂肪来源干细胞能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、迁移和胶原合成能力，并且随着脂肪干细胞所占比例的升高，抑制作用显著增强；②人脂肪来源干细胞能够显著促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡，并且随着脂肪干细胞所占比例的升高，促进作用显著增强；③Western blot 检测显示人脂肪来源干细胞能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞p-ERK、Bcl-2和β-catenin 蛋白表达；④结果表明，脂肪来源干细胞通过抑制ERK/β-catenin通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移，并促进凋亡。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-7036-5596(李响)

关键词: 脂肪干细胞, 瘢痕疙瘩成纤维细胞, 共培养, 细胞增殖, 细胞凋亡, ERK通路, 干细胞, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Adipose-derived stem cells have been widely used for tissue filling and repair, but the mechanism underlying skin scar inhibition and repair is still unclear.
OBJECTIVE: To explore the effect of adipose-derived stem cells on biological activity of keloid fibroblasts and its molecular mechanism.
METHODS: Passage 3 human adipose-derived stem cells were seeded into the upper Transwell chamber at the density of 0, 3×10⁴, 6×10⁴, 1.2×10⁵ per well (0 indicates control group). Passage 4 keloid fibroblasts at logarithmic growth phase were inoculated into the lower chamber at the density of 6×10⁴ per well, and co-cultured with human adipose-derived stem cells at the ratio of 1:0.5, 1:1 and 1:2, respectively. After 24-hour co-culture, keloid fibroblasts from the lower chamber were used for index measurement.
RESULTS AND CONCLUSION: Human adipose-derived stem cells markedly inhibited the proliferation, migration and collagen synthesis of keloid fibroblasts, and the inhibitory effect was significantly enhanced as the proportion of adipose-derived stem cells increased. Human adipose-derived stem cells also markedly promoted cell apoptosis in keloid fibroblasts, and this effect was enhanced as the proportion of adipose-derived stem cells increased. Western blot results showed that human adipose-derived stem cells significantly suppressed keloid fibroblasts p-ERK, Bcl2 and β-catenin protein expression. Overall, adipose-derived stem cells can inhibit the proliferation and migration but promote apoptosis of keloid fibroblasts by inhibiting the ERK/β-catenin pathway.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Stem Cells, Adipose Tissue, Keloid, Fibroblasts, Coculture Techniques, Cell Proliferation, Apoptosis, Tissue Engineering

中图分类号:

R459.9

李响，吴志贤，刘宏伟，梁杰，莫自增. 脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖影响的分子机制[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(1): 61-67.

Li Xiang, Wu Zhixian, Liu Hongwei, Liang Jie, Mo Zizeng. Molecular mechanism underlying the effect of adipose-derived stem cells on the proliferation of keloid fibroblasts[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(1): 61-67.

图/表（结果） 2

2.1 脂肪干细胞流式鉴定结果 通过流式细胞仪检测第3代脂肪来源干细胞的免疫表型：CD44和CD90的阳性率分别为97.7%和94.6%，CD45呈阴性表达，符合国际上对脂肪干细胞表面标志物的认定，见图1。通过酶消化法从脂肪组织中分离的细胞即为脂肪来源干细胞，而且培养至第3代具有脂肪干细胞特性，可用于其他相关实验研究。

2.2 脂肪干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响 由图2可见，与对照组相比，脂肪干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养24 h后，瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖能力受到明显抑制(P < 0.05)。此外，随着共培养体系中脂肪干细胞比例的升高，脂肪干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制作用逐渐增强(P < 0.05)。

2.3 脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响 羟脯氨酸的含量能反映细胞或者组织中胶原蛋白合成情况。由图3可见，与对照组相比，脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养24 h后，瘢痕疙瘩成纤维细胞的胶原合成能力受到明显抑制(P < 0.05)，并且随着共培养体系中脂肪干细胞比例的升高，脂肪干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的抑制作用增强(P < 0.05)。

2.4 脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移能力的影响 与对照组相比，脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养24 h后，瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移能力受到明显抑制(P < 0.05)，并且随着共培养体系中脂肪干细胞比例的升高，脂肪干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移的抑制作用增强(P < 0.05)，见图4。

2.5 脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响 与对照组相比，脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养24 h后，瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡率显著升高(P < 0.05)，并且随着共培养体系中脂肪干细胞比例的升高，脂肪干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的促进作用增强(P < 0.05)，见图5。

2.6 脂肪干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞相关蛋白表达的影响 与对照组相比，脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养后，瘢痕疙瘩成纤维细胞的中p-ERK、Bcl-2和β-catenin蛋白表达量明显下调(P < 0.05)，表明ERK/ β-catenin通路被抑制，细胞凋亡通路被激活，见图6。

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引言

材料方法

1.1 设计 细胞学实验观察。

1.2 时间及地点 实验于2016年10月至2017年8月在广东医科大学附属医院临床医学研究中心完成

1.3 材料 胶原酶Ⅰ(美国Sigma公司)；Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒(杭州联科生物技术股份有限公司)；Tranwell小室(美国Corning公司)；ERK、p-ERK、Bcl-2、β-catenin抗体(美国CST公司)；羟脯氨酸检测试剂盒-消化法(南京建成生物工程研究所)；HRP标记羊抗兔IgG、CCK8试剂盒(中国碧云天生物技术)；流式细胞仪(FACSCanto Ⅱ，美国BD公司)；多功能凝胶成像系统、多功能酶标仪(美国Bio-Rad公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 细胞的分离培养 脂肪组织标本由广东医科大学附属医院整形外科提供，术前签署知情同意书。采用酶消化法分离培养脂肪来源干细胞：通过抽脂术抽取患者脂肪组织，将脂肪用PBS冲洗3-5次，加入适量Ⅰ型胶原酶(0.125%)，37 ℃酶解30-60 min，期间每隔10 min振荡1次；消化后加入等体积的含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液终止消化，过滤(200目)，滤液经过1 200×g离心5-10 min，去上清，留取细胞沉淀；用完全培养基重悬细胞后，加入红细胞裂解液室温孵育5 min去除红细胞，离心取细胞沉淀，加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM完全培养基，接种于细胞培养瓶，37 ℃、体积分数为5%CO₂培养箱培养；每2 d换1次培养液，按适当的比例传代培养。实验用传至第3-5代的脂肪来源干细胞。

瘢痕疙瘩临床标本7例，来源于广东医科大学附属医院整形外科门诊及住院手术患者，均根据临床和病理诊断证实，即对瘢痕疙瘩组织进行苏木精-伊红染色，显微镜下可见真皮层明显增厚，胶原纤维束粗大，皮肤附属器消失。术前签署知情同意书，标本取材符合广东医科大学附属医院的相关伦理要求。所有患者均无其他全身器质性病变，排除患有感染和溃疡的皮肤或其他皮肤疾病患者，在手术切除前未接受其他治疗。所有组织均取自患者上肢皮肤瘢痕疙瘩，收集样品的长度和宽度约为0.5 cm。采用组织块培养法进行原代培养，无菌条件下取手术切除的瘢痕疙瘩组织，去除表皮后切成1 mm³的小块，置于细胞培养皿，待细胞贴壁后加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM完全培养基，于37 ℃、体积分数为5%CO₂培养箱培养，每2 d换1次培养液，细胞长满后胰酶消化传代，实验用传至第3-8代的瘢痕疙瘩成纤维细胞。

1.4.2 流式细胞仪检测脂肪干细胞表面标志物 取第3代脂肪来源干细胞，胰酶消化离心后制成细胞浓度为1×10⁹ L^-1的细胞悬液，取1 mL细胞悬液，分别加入5 μL荧光标记的流式抗体(CD44-FITC，CD90-PE，CD45-FITC)以及5 μL相对应的同型对照IgG1-FITC，IgG1-PE，4 ℃避光孵育1 h，离心后用洗涤缓冲液洗涤2次，PBS重悬细胞后，流式细胞仪检测细胞表面标志物。

1.4.3 细胞共培养 用Transwell小室进行共培养，Transwell小室膜孔径为0.4 μm。取第3代人脂肪来源干细胞，分别以3×10⁴/孔，6×10⁴/孔，1.2×10⁵/孔接种于Transwell小室的上室(脂肪干细胞﹕瘢痕疙瘩成纤维细胞比例分别为0.5∶1，1∶1和2∶1)，取第4代对数生长期的瘢痕疙瘩成纤维细胞，以6×10⁴/孔接种于下室6孔板中，Transwell上下室均使用含体积分数为1%胎牛血清的DMEM培养液(对照组上室只加细胞培养液，不含脂肪来源干细胞)，进行人脂肪组织来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养，培养24 h取下室瘢痕疙瘩成纤维细胞检测。

1.4.4 CCK8法检测脂肪干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞活力的影响 按1.4.3细胞共培养方法进行人脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养24 h，收集下室(6孔板)中的瘢痕疙瘩成纤维细胞，每孔加入10 μL CCK8溶液培养2 h，于酶标仪450 nm下测定各孔吸光度值(A₄₅₀)，计算细胞增殖率。

1.4.5 细胞胶原合成能力检测 按1.4.3细胞共培养方法进行人脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养24 h，收集下室(6孔板)中的细胞培养液，按照羟脯氨酸检测试剂盒说明书进行检测。取细胞培养液0.25 mL(或标准应用液)，加入0.05 mL消化液，37 ℃水浴3 h，加入0.5 mL试剂一，混匀后室温静置10 min，加入0.5 mL试剂二，混匀后静置5 min，加入1 mL试剂三，60 ℃水浴15 min，离心后取上清于550 nm处测定吸光度值。

1.4.6 Transwell检测瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移能力 将膜孔径为12 μm的Transwell小室于37 ℃温育，取对数生长期的第4代瘢痕疙瘩成纤维细胞，0.25%胰酶消化离心，调整细胞浓度为2×10⁸ L^-1，取100 μL细胞悬液种植于Transwell小室内，下室24孔板中加入500 μL含体积分数为1%胎牛血清的DMEM完全培养基，其中分别含有1×10⁴，2×10⁴，4×10⁴个第3代人脂肪来源干细胞(脂肪干细胞﹕瘢痕疙瘩成纤维细胞比例分别为0.5∶1，1∶1和2∶1)，培养24 h后，取出Transwell小室，吸干上室液体，加入约800 μL甲醇固定30 min，吸干固定液，移到预先加入约800 μL Giemsa染液的孔中，室温染色15-30 min，清水浸泡冲洗数次，晾干后封固，光镜观察计数。

1.4.7 流式细胞仪检测脂肪干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响 通过Annexin V-APC/7-AAD双染法检测脂肪干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响。按1.4.3细胞共培养方法进行人脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养，培养24 h取下室瘢痕疙瘩成纤维细胞，按照细胞凋亡检测试剂盒操作说明书，以Annexin缓冲液重悬细胞，加入5 μL稀释的Annexin V-APC工作液在冰上孵育15-20 min，再加入5 μL稀释的7-AAD工作液对细胞进行复染，冰上孵育5 min后立即上流式细胞仪进行检测。

1.4.8 Western blot检测ERK/β-catenin信号通路蛋白表达 通过Western blot检测脂肪干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞ERK信号通路的影响。按1.4.3细胞共培养方法进行人脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养24 h，取细胞裂解后的上清蛋白液，使用BCA蛋白测定试剂盒对上清液的总蛋白进行蛋白定量，将蛋白样品加入电泳上样缓冲液，煮沸变性后于10% SDS-PAGE电泳分离蛋白质，转膜后加入5%脱脂奶粉室温封闭1 h，加入1∶300稀释的兔抗(p-ERK，ERK，Bcl-2，β-catenin)，4 ℃孵育过夜，用TBST洗膜3次，加入1∶5 000稀释的HRP标记的羊抗兔IgG，室温孵育1 h，TBST洗膜3次，加入发光液显色后于凝胶成像系统拍照，用ImageJ2x软件进行灰度值分析。

1.5 主要观察指标 ①CCK8法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞活力；②羟脯氨酸法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成量；③Transwell法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移能力；④流式细胞仪检测瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡率；⑤Western blot检测瘢痕疙瘩成纤维细胞p-ERK，ERK，Bcl-2，β-catenin蛋白表达。

1.6 统计学分析 实验至少重复3次，采用SPSS 20.0软件对实验数据进行分析，数据以x(_)±s表示。多组间比较采用单因素方差分析(one-way-ANOVA)，进一步两两比较采用LSD检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

人体皮肤在遭受外伤破坏后，伤口修复是一个复杂的过程，最后形成皮肤瘢痕。这一过程与成纤维细胞、内皮细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等多种细胞的功能相关^[10-12]，其中成纤维细胞的生物学行为被认为是瘢痕形成过程中的关键因素。国内外大量研究表明，构成瘢痕疙瘩组织的成纤维细胞具有过度增殖的能力，并伴随着胶原蛋白的不完全凋亡和异常合成，可诱导瘢痕疙瘩组织持续增生^[13-16]。因此，抑制成纤维细胞增殖并诱导瘢痕疙瘩组织中的细胞凋亡，可以减少瘢痕疙瘩组织增生并延缓疾病进展，这对于改善和治疗瘢痕疙瘩非常重要。因此，了解瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物学特性对于瘢痕疙瘩的治疗具有重要意义。

脂肪来源干细胞是从脂肪组织中分离出来的具有多潜能分化能力的间充质干细胞^[17]。国外研究表明，脂肪来源干细胞已被用作动物模型和少数临床试验中受损器官再生的治疗。脂肪来源干细胞通过分泌白细胞介素6、白细胞介素8、白细胞介素10等白细胞介素和其他适合诱导组织再生的蛋白质修复改善组织^[18-21]。脂肪来源干细胞通过多种调节机制，包括分泌促进血管再生和皮肤细胞再分化的细胞因子、分泌抗纤维化细胞因子和生长因子等，在皮肤伤口愈合中发挥治疗作用^[22-23]。最新研究表明，脂肪来源干细胞能够抑制肾纤维化组织中COL1A1，转化生长因子β1，结缔组织生长因子和ACTA2的mRNA表达水平发挥治疗肾纤维化的作用^[24]。脂肪来源干细胞是否能够通过分泌细胞因子抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和迁移从而发挥修复皮肤瘢痕的作用至今无明确报道。

实验采用酶消化法分离出人脂肪来源干细胞，并采用组织贴壁法成功分离培养出人瘢痕疙瘩成纤维细胞。通过Transwell共培养，探讨脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的作用分子机制。经过深入分析得出以下结论：脂肪来源干细胞分泌某些能透过Transwell膜的物质，通过ERK/β-catenin/Bcl-2信号通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和迁移，促进瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡，这为脂肪来源干细胞在治疗瘢痕疙瘩方面的应用提供了实验基础。

瘢痕疙瘩组织学突出表现为细胞外大量胶原的分泌和沉积^[25]。皮肤瘢痕与纤维样肿瘤在病理学上都属于纤维结缔组织病变，细胞外有大量的胶原沉积^[26]。研究表明，骨髓间充质干细胞和真皮间充质干细胞均能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原的合成和α-SMA的表达^[27]。此次实验研究结果表明，脂肪来源干细胞能够在体外抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原的合成，这一研究结果与以往的研究报道相吻合。

瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移、增殖、分泌胶原及凋亡等生物学行为参与皮肤损伤后的创面修复。因此，通过抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移和增殖，对于抑制瘢痕疙瘩形成具有重要的意义^[28]。国内有研究表明，抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中基质金属蛋白酶的表达能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移能力，从而治疗瘢痕疙瘩^[29]。也有研究表明，抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中mTOR蛋白表达能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移能力，从而抑制瘢痕疙瘩的发展^[30]。干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞迁移能力的影响未见报道。此次实验结果表明，脂肪来源干细胞能够在体外抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的迁移，促进瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡，这与以往的研究报道相吻合，提示脂肪来源干细胞可能通过抑制成纤维细胞的迁移和促进成纤维细胞的凋亡，从而促进创面愈合并且抑制瘢痕的形成。

ERK是细胞外调节蛋白激酶的缩写，属于MAPK(丝裂原活化蛋白激酶)家族的亚族之一，包括ERK1和ERK2，是将信号从表面受体传导至细胞核的关键，广泛参与细胞增殖、分化、凋亡等调节过程^[31-33]。ERK信号通路在生长因子介导的细胞增殖过程中发挥重要作用。研究表明，ERK活化后通过促进Cyclin D1表达以及其与CDK4结合而促进细胞周期进展，促进细胞增殖分化。ERK持续激活可以阻止细胞凋亡的发生，抑制ERK的活化能够促进细胞凋亡的发生^[34]。国内研究表明，A型肉毒毒素、血管紧张素Ⅱ和氧化苦参碱均可抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞内ERK的磷酸化水平发挥抗瘢痕疙瘩作用^[35-38]。脂肪干细胞是否调控瘢痕疙瘩成纤维细胞内ERK的磷酸化水平还不清楚。有研究表明，Bcl-2对病理性瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活性及细胞凋亡有显著影响，体外过表达Bcl-2能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖，促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡^[38]。作者前期研究结果表明，异泽兰黄素通过抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞JNK磷酸化水平和Bcl-2的蛋白表达水平，进而促进瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡^[39]。此次研究结果表明，脂肪来源干细胞能够抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞ERK的磷酸化水平，抑制ERK通路的活化，从而抑制了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，促进了瘢痕疙瘩成纤维细胞的凋亡。这些研究结果与前人的研究结果一致。该研究揭示了脂肪来源干细胞抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移的分子机制，但脂肪来源干细胞是否通过分泌细胞因子来发挥调控作用，以及分泌哪些细胞因子来影响瘢痕疙瘩成纤维细胞的生物学行为，还需要后续实验进一步研究。

综上所述，通过Transwell共培养，探讨脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的作用分子机制，并通过免疫印迹实验证明了ERK/β-catenin/Bcl-2信号通路在脂肪来源干细胞促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡中发挥重要作用。ERK/β-catenin/Bcl-2信号通路可能会成为脂肪来源干细胞治疗瘢痕疙瘩的新靶点，为瘢痕疙瘩的临床靶向治疗开辟新的思路。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖影响的分子机制

Molecular mechanism underlying the effect of adipose-derived stem cells on the proliferation of keloid fibroblasts

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