抗坏血酸作用下兔骨髓间充质干细胞外基质分泌与结构改变

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0460

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (9): 1325-1331.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0460

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抗坏血酸作用下兔骨髓间充质干细胞外基质分泌与结构改变

姚植业^1，2，刘玉梅²，陈燕玲²，陈亮²，何少茹²，张展松³

¹汕头大学医学院，广东省汕头市 515041；²广东省人民医院/广东省医学科学院，广东省广州市 510080；³广东省心血管病研究所，广东省广州市 510080

修回日期:2017-10-18 出版日期:2018-03-28 发布日期:2018-04-03
通讯作者: 何少茹，博士，主任医师，博士生导师，广东省人民医院/广东省医学科学院，广东省广州市 510080
作者简介:姚植业，男，1992年生，广东省汕头市人，汉族，在读硕士，主要从事新生儿危重症疾病的诊治以及组织工程技术诊疗儿童重度气道狭窄的基础与临床研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81671529)；广东省自然科学基金(2016A030313793)

Ascorbic acid influences on extracellular matrix and structure of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells

Yao Zhi-ye^{1, 2}, Liu Yu-mei², Chen Yan-ling², Chen Liang², He Shao-ru², Zhang Zhan-song³

¹Shantou University Medical School, Shantou 515041, Guangdong Province, China; ²Guangdong General Hospital/Guangdong Academy of Medical Science, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China; ³Guangdong Cardiovascular Institute, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China

Revised:2017-10-18 Online:2018-03-28 Published:2018-04-03
Contact: He Shao-ru, M.D., Chief physician, Doctoral supervisor, Guangdong General Hospital/Guangdong Academy of Medical Science, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China
About author:Yao Zhi-ye, Master candidate, Shantou University Medical School, Shantou 515041, Guangdong Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81671529; the Natural Science Foundation of Guangdong Province, No. 2016A030313793

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
抗坏血酸：又称维生素C，为酸性己糖衍生物，是烯醇式己糖酸内酯，主要来源新鲜水果和蔬菜，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素，在生物体内，抗坏血酸是一种抗氧化剂，保护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶。
细胞外基质：是由细胞合成并分泌到胞外，分布在细胞表面或细胞之间的大分子，主要是一些多糖和蛋白或蛋白聚糖。这些分子构成复杂的网架结构，不仅是支撑组织、细胞生长的支架，还能诱导和调控细胞的黏附、生长、增殖和分化。

摘要
背景：细胞外基质对干细胞的影响是目前组织工程学的研究热点，而关于自身细胞外基质的合成、分泌及对细胞的影响却少有研究报道。
目的：体外培养兔骨髓间充质干细胞，观察抗坏血酸对其细胞外基质与整体结构改变的影响。
方法：通过差速贴壁法分离获取兔骨髓间充质干细胞，流式细胞技术检测CD44、CD45、CD31的表达。将兔骨髓间充质干细胞用含抗坏血酸(20 mg/L)的培养基进行干预，观察细胞形态、大体结构、超微结构及组织学改变，RT-PCR检测细胞外基质相关基因的表达。
结果与结论：①经流式细胞学分析，第2代骨髓间充质干细胞中95%以上的细胞表达CD44，而CD45与CD31的表达极低；②抗坏血酸干预后，骨髓间充质干细胞增殖良好，细胞间界限难以分辨，干预10-14 d后，形成了“膜片状”结构；③苏木精-伊红染色后可见细胞分层排列，Masson 染色后可见大量细胞外基质成分，透射电镜下可见胞内含大量内质网与“囊泡样”结构；④与未经抗坏血酸干预的对照组相比较，经抗坏血酸干预的实验组纤维连接蛋白的mRNA表达显著升高(P < 0.05)，而Ⅰ型胶原的mRNA表达虽稍提高，但两组间差异无显著性意义；⑤结果表明，抗坏血酸促进了兔骨髓间充质干细胞的增殖转化、细胞外基质的合成分泌、膜片状结构的形成，在组织工程应用中具有巨大潜能。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-1375-7382(姚植业)

关键词: 抗坏血酸, 干细胞, 骨髓间充质干细胞, 细胞增殖, 细胞接触抑制, 细胞转化, 细胞外基质, 纤连蛋白, Ⅰ型胶原, 细胞外基质稳态, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: The effect of extracellular matrix on stem cells is the focus of tissue engineering. However, there are few reports about the synthesis and secretion of extracellular matrix as well as its effects on cells.
OBJECTIVE: To isolate, culture and identify rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs), and to explore the changes of extracellular matrix and whole structure under the intervention of ascorbic acid.
METHODS: Rabbit BMSCs were isolated by differential adherent method of the bone marrow, and the expression of CD44, CD45 and CD31 was identified by flow cytometry. The BMSCs were cultured in the culture medium containing 20 mg/L ascorbic acid. Then the cell morphology, gross structure, ultrastructure, and histological changes of BMSCs were observed. The expression of extracellular matrix related genes was detected by RT-PCR.
RESULTS AND CONCLUSION: Over 95% passage 2 BMSCs could express CD44, but the expression levels of CD45 and CD31 were extremely low. Intervention with ascorbic acid enhanced the proliferation of BMMSCs with unclear cell boundaries. A cell-sheet structure formed at 10-14 days after intervention. Hematoxylin-eosin staining results showed a layered cell arrangement, and Masson staining findings showed a large amount of extracellular matrix composition. Abundant endoplasmic reticula and vesicle-like structure were observed under the transmission electron microscope. RT-PCR findings showed that ascorbic acid significantly increased the expression of fibronectin mRNA in the BMSCs (P < 0.05), but slightly increased the mRNA expression of collagen type I. All these findings indicate that ascorbic acid not only increases the proliferation and transformation of rabbit BMSCs, but also promotes the synthesis and secretion of extracellular matrix, which has great potential in tissue engineering applications.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Bone Marrow, Mesenchymal Stem Cells, Ascorbic Acid, Cell Proliferation, Extracellular Matrix, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

姚植业，刘玉梅，陈燕玲，陈亮，何少茹，张展松. 抗坏血酸作用下兔骨髓间充质干细胞外基质分泌与结构改变[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(9): 1325-1331.

Yao Zhi-ye, Liu Yu-mei, Chen Yan-ling, Chen Liang, He Shao-ru, Zhang Zhan-song. Ascorbic acid influences on extracellular matrix and structure of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(9): 1325-1331.

图/表（结果） 2

2.1 骨髓间充质干细胞的形态及流式细胞学检测结果 经全骨髓贴壁筛选法培养3 d，显微镜下可见呈梭形或不规则形贴壁生长的细胞，散在分布于瓶壁，并可见少量圆形未贴壁的漂浮细胞，见图1A。培养8-10 d时可见细胞形成集落，细胞密度达90%左右，按照 1∶3比例传代后细胞生长旺盛，第1代细胞可见典型“鱼群样”细胞集落，见图1B。经流式细胞学分析，第2代细胞中95%以上的细胞表达CD44，而CD45与CD31的表达极低，均少于1%，见图2。

2.2 抗坏血酸干预后骨髓间充质干细胞的形态与整体结构 抗坏血酸干预后，实验组镜下可见骨髓间充质干细胞增殖良好，细胞密度增加，随时间进展，镜下可见细胞间隙消失，细胞密度增大，镜下难以辨认细胞层次，而未经抗坏血酸干预的对照组细胞未见进一步的扩展增殖，细胞密度未见明显改变，后期细胞变得稀疏，逐渐出现细胞变大、椭圆等细胞老化的表现，见图3。干预10-14 d可见实验组培养皿边缘形成卷曲的透明“薄膜”，镜下结构显示不清，用细胞刮及无菌镊可将膜片夹起，大体为半透明薄膜，对照组细胞则未能形成膜片状结构，用细胞刮在培养皿上刮划未见明显改变。

2.3 抗坏血酸干预后骨髓间充质干细胞薄膜的苏木精-伊红染色与Masson染色结果 苏木精-伊红染色后，胞核染成蓝色，胞质及细胞外基质成分染成粉红色；细胞间呈“层层叠叠”状排列结构，见图4A，C。Masson染色后，胞核染成蓝黑色，被大量染成蓝色的胶原成分所包绕，见图4B，D。

2.4 抗坏血酸干预后骨髓间充质干细胞的超微结构 透射电镜下观察可见细胞间连接紧密，实验组细胞器丰富，可见大量线粒体结构，表明细胞增殖活跃；除此之外，还可见大量粗面内质网/高尔基体及致密的囊泡样结构^[12](图5B，C)，为骨髓间充质干细胞分泌功能增强的结构基础。而对照组细胞内的细胞器稀疏(图5E，F)。

2.5 RT-PCR检测抗坏血酸干预后细胞外基质相关基因的表达 与未经抗坏血酸干预的对照组相比较，经抗坏血酸干预后，纤维连接蛋白的mRNA表达显著升高(P < 0.05)，而Ⅰ型胶原的mRNA表达虽稍提高，但两组间差异无显著性意义，见表6和图6。

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引言

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)在体外表现出活跃的增殖和分化能力，是组织工程种子细胞研究的热点^[1]。近年来，如何获取数量更多、纯度更高、保持干细胞特性的骨髓间充质干细胞，越来越成为科学家们研究的焦点。三维微环境培养是将具有三维结构的支架与细胞在体外共培养，使细胞能在三维支架中迁移、生长，形成细胞-支架复合物，最大程度地模拟体内微环境。Pedersen团队将骨髓间充质干细胞与三维生物支架材料联合培养以促进组织工程血管化的进程^[2]。骨髓间充质干细胞作为一种原始多能干细胞，其分化受到遗传基因及周围环境等多种因素的调控，其中细胞周围的生物、化学、物理环境，是现今研究骨髓间充质干细胞定向分化的热点^[3]。

细胞外基质是由细胞合成并分泌到胞外、分布在细胞表面或细胞之间的大分子，主要是一些多糖和蛋白或蛋白聚糖。这些分子构成复杂的网架结构，不仅是支撑组织、细胞生长的支架，还能诱导和调控细胞的黏附、生长、增殖和分化^[4-6]。研究表明，碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1及抗坏血酸等因子可以促进细胞合成分泌细胞外基质^[7]。

抗坏血酸作为一种人体不可缺乏的营养因子，是机体氧化还原反应中重要的还原剂，还作为辅酶参与调节机体多个重要的生命过程，在疾病防治或医学研究中都有着重要的应用。在组织工程膜片的研究中，抗坏血酸作为一种促膜因子，诱导着细胞膜片的合成^[8-9]。不同浓度梯度的抗坏血酸可促进不同组织来源间充质干细胞的细胞外基质的分泌和合成^[10]，但其对于细胞本身结构的改变，以及所形成细胞外基质的具体组分尚未有深入的研究。

实验探讨在抗坏血酸作用下兔骨髓间充质干细胞的结构变化及细胞外基质分泌情况，进一步丰富组织工程种子细胞与材料学的运用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 细胞学水平体外观察实验。

1.2 时间及地点 实验于2016年8至12月在广东省人民医院医学研究所中心实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物普通级雄性新西兰大白兔5只，2月龄，体质量1.5-2.0 kg，购自南方医科大学实验动物中心，许可证号：SCXK(粤)2011-0015，实验操作过程对动物的处置符合广东省人民医院伦理学标准。

1.3.2 实验试剂和仪器 抗坏血酸(Sigma，USA)；骨髓间充质干细胞培养试剂盒(Cyagen，USA)；α-MEM培养基、0.25%-EDTA胰酶(Gibco，USA)；鼠抗兔CD31抗体(Novusbio，USA)；鼠抗兔CD44、鼠抗兔CD45抗体、FITC标记的羊抗鼠IgG二抗、鼠抗兔IgG1阴性对照一抗、大鼠IgG1阴性对照二抗(AbD，USA)；高速离心机(Beckman Coulter， USA)；倒置相差显微镜、光学显微镜(Olympus，Japan)；细胞流式仪(BD，USA)；CFX-实时荧光定量基因扩增仪(Bio-Rad，USA)；RNAiso Plus RNA提取试剂盒、反转录试剂盒Code：RR036A、荧光定量试剂盒Code：DRR420A(TaKaRa，Japan)。

1.4 实验方法

1.4.1 兔骨髓间充质干细胞的原代与传代培养 无菌穿刺抽吸兔股骨骨髓，与α-MEM培养基混合后，1 500 r/min离心，获取细胞沉淀，再与骨髓间充质干细胞培养基(含体积分数为10%胎牛血清)混匀，接种到培养瓶中，2 d后首次换液，以后每3 d换液1次，镜下观察细胞形态及增殖情况；在第10天左右，当细胞密度达到90%时，用0.25%胰酶-EDTA消化液消化获得细胞悬液，按照1︰3密度传代，继续用骨髓间充质干细胞培养基培养。

1.4.2 流式细胞学鉴定骨髓间充质干细胞的表面标志物^[11] 取第2代骨髓间充质干细胞沉淀，加入2 mL PBS吹打冲洗后再次离心获得细胞沉淀，将细胞沉淀用PBS混匀后分装入4个EP管，向其中3个EP管中分别加入鼠抗兔CD44、鼠抗兔CD45、鼠抗兔CD31、鼠抗兔IgG1阴性对照等一抗，剩余1个EP管不加一抗，作为空白对照，室温下孵育30 min后，每个EP管中加入PBS终止孵育，4 ℃ 2 000 r/min离心5 min获取细胞沉淀，除空白对照外，其余各管加入FITC标记的二抗，常温下避光孵育30 min，加入PBS终止孵育，4 ℃ 2 000 r/min离心5 min获取细胞沉淀，加入100 μL PBS混匀后上流式细胞仪检测。

1.4.3 抗坏血酸对骨髓间充质干细胞的干预 取第3代骨髓间充质干细胞悬液，调整细胞浓度为1×10⁹ L^-1，将细胞悬液接种到10 cm培养皿中，待细胞贴壁后，弃去骨髓间充质干细胞培养基，用PBS润洗后，实验组更换为等量的含抗坏血酸的α-MEM(20 mg/L)诱导液^[10]，对照组继续用骨髓间充质干细胞培养基培养，以后每3 d换液1次，定期观察细胞形态及大体改变，干预14 d为实验终点取细胞行各项指标检测。

1.4.4 苏木精-伊红染色与Masson染色 抗坏血酸干预10-14 d后，用镊子获取成形细胞膜片，制成石蜡切片，并分别进行苏木精-伊红染色(脱蜡-苏木精染核-盐酸分化-脱水Ⅰ-伊红复染-脱水Ⅱ-透明-封固)与Masson染色(脱蜡-苏木精染核-盐酸分化-Masson丽春红酸性液染色-磷钼酸水溶液分化-甲胺蓝染色-透明-封固)，显微镜下观察干预后细胞形态与整体结构的改变。

1.4.5 透射电镜观察 获取抗坏血酸干预14 d后的细胞膜片，经戊二醇固定后，送华银检测中心行透射电镜观察细胞内超微结构的改变。

1.4.6 RT-qPCR检测细胞外基质相关基因表达 获取抗坏血酸干预14 d后的细胞膜片，RNAiso Plus提取细胞RNA，反转录获得cDNA，进行qRT-PCR反应检测细胞外基质相关基因的表达。引物序列见表1(由Servicebio公司设计)，反转录反应液配制、反应条件以及RT-qPCR反应液配制、反应条件见表2-5。在PCR反应中，将未干预的骨髓间充质干细胞作为对照组。PCR由荧光定量PCR仪自动采集目的基因与内参基因的Ct值。实验组和对照组组间的目的基因相对表达量(即实验组目的基因相对表达量相对于对照组的倍数)用2^-^??Ct表示。

1.5 主要观察指标 ①骨髓间充质干细胞的形态；②骨髓间充质干细胞表面标志物的表达；③抗坏血酸干预后的骨髓间充质干细胞形态和大体结构；④抗坏血酸干预后骨髓间充质干细胞薄膜苏木精-伊红与Masson染色结果及透射电镜下的细胞超微结构；⑤RT-qPCR检测抗坏血酸干预后细胞外基质相关基因的表达。

1.6 统计学分析 应用统计软件SPSS 20.0进行分析。数据采用x(_)±s表示，两组间比较采用两独立样本t 检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

细胞外基质包括纤维粘连蛋白、胶原Ⅰ-Ⅳ、层粘连蛋白等多种成分，是细胞自身合成分泌的，不仅为细胞和组织提供结构支持，也是细胞生长所必须的微环境，能够调节细胞的发育和分化。既往认为生物化学因素影响着细胞的分化，现今认为生物物理信号也是调节细胞分化的重要因素。

2006年，Engler等^[13]在不同硬度的细胞外基质二维模型上培养骨髓间充质干细胞，发现在不同的硬度梯度上，骨髓间充质干细胞朝着神经细胞、肌细胞、成骨细胞等不同形态变化，而且不同细胞的标志性蛋白也有所升高。Pek等^[14]将其实验扩展到三维培养模式，发现与前者相同的结论。在三维培养这一领域上，Wingate等^[15]研究团队还发现骨髓间充质干细胞具有向血管内皮细胞和血管平滑肌细胞分化的趋势。细胞外基质通过其硬度的不同，在细胞对力学刺激感受和信息传导过程中起重要作用，通过Rho家族蛋白、蛋白激酶C、整合素等多条信号通路来影响着细胞的分化途径，决定其“生命旅程”^[16]。

既往在细胞培养过程中添加明胶、聚丙烯酰胺水凝胶等各种人工合成胶原成分研究细胞外基质对细胞分化的影响^[17]，对于细胞本身合成的细胞外基质对细胞分化的影响却少有研究报道。研究表明，碱性成纤维细胞生长因子与胰岛素样生长因子1等细胞因子具有促进细胞外基质表达的作用^[18-19]。Krishnamoorthy团队报道了一种新型的两性肽材料(motifs KTTKS)具有促进细胞合成胶原与纤连蛋白等细胞外基质的功能^[20]。但这些多是来源困难、价格高昂的细胞因子或生物材料。

抗坏血酸作为一种抗氧化剂，具有强化细胞存活，促进增殖与并保留细胞免疫表型与分化活性能力的作用^[21-24]。 Wei等^[10]在不同来源骨髓间充质干细胞中添加不同浓度梯度的抗坏血酸后，促进了骨髓间充质干细胞的增殖。在本实验中，兔骨髓间充质干细胞在低质量浓度(20 mg/L)抗坏血酸的作用下，与对照组相比，骨髓间充质干细胞出现了增殖活跃现象。抗坏血酸通过提升骨髓间充质干细胞端粒酶的活性^[10]，促进细胞增殖，透射电镜下可见线粒体等功能性细胞器增多。在后续的培养中，细胞间接触更为紧密，甚至出现细胞“爬层”现象，在组织学中可见“层层叠叠”状结构。骨髓间充质干细胞是一种单层贴壁生长的多能干细胞，在细胞增殖过程中，当细胞间的板层伪足相接触时^[25]，细胞的向前运动则会因基因信号通路的激活而逐渐减弱^[26]，发生运动方向的改变，这一现象称为“接触抑制”，本实验在抗坏血酸的作用下，细胞接触抑制的现象明显改善，出现了类似“细胞转化”的表现。

在培养10-14 d时，大体可见形成薄层半透明膜状结构，且在无需消化酶的作用下，即可将细胞结构完整剥离，组织学上可见大量的胶原细胞外基质成分。透射电镜下同样也观察到了粗面内质网与致密的囊泡样结构，作为细胞合成大量细胞外基质的结构基础。在20世纪80年代，已有研究报道抗坏血酸具有促进皮肤成纤维细胞合成胶原多肽的功能^[27]，随着研究进展，在软骨细胞、间充质干细胞等多种细胞中发现抗坏血酸具有同样的作用。抗坏血酸作为一种重要的还原剂及辅助因子^[28]，在影响细胞外基质胶原蛋白合成的多条信号通路中起到重要作用^[29-30]，也是内质网合成胶原蛋白过程中PLOD、P3H、P4H等酶的重要辅助因子^[31-33]。Wu等^[34]研究中，抗坏血酸还可通过促进MMP-2的活性和各型胶原的沉积形成细胞外基质的重构，从而维持一个三维立体的微环境^[35]，这也与本实验形成三维结构的膜片状结构所契合。

从基因的表达到蛋白的合成修饰及分泌后的功能表达，抗坏血酸维持着细胞外基质的稳态^[36-37]。抗坏血酸通过转化生长因子β促进骨髓间充质干细胞的细胞外基质相关基因的转录表达^[38]，致使细胞外基质的合成增加和降解减少^[39]，从而调节着细胞的生长、分化与迁移的过程。

抗坏血酸干预后，兔骨髓间充质干细胞在纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原的基因表达上则出现了不同。Kim等^[40]在抗坏血酸影响脂肪前体细胞脂肪化的实验中，出现了Col-Ⅰ(α1)沉积的减少，Col-Ⅴ (α1)与Col-Ⅵ (α2)蛋白的增多，表明抗坏血酸通过不同细胞外基质的表达影响脂肪前体细胞的分化。可见抗坏血酸对于细胞外基质不同组分的合成调节作用还存在着特异性差异，从而影响细胞向不同方向的分化。

除此之外，抗坏血酸干预后兔骨髓间充质干细胞由散在的细胞形成三维立体的膜片状结构。在组织工程学中，支架材料的选择一直是困扰科学家的一个重要问题，既要有一定的生物相容性，又要求材料具有一定的可塑性^[41]；本实验形成的细胞“膜片”，无疑就是骨髓间充质干细胞的一个天然支架材料，且完整地保留了细胞间的微环境。细胞膜片在角膜上皮修复、缺血坏死组织血管化重建等方面均有应用^[8^，^42]。与既往通过特殊理化材料制备的细胞膜片相比，单用抗坏血酸则显著降低了成本及技术难度。

综上所述，在抗坏血酸的作用下，兔骨髓间充质干细胞的增殖能力明显增强，且出现了抵抗“接触抑制”现象的转化作用。与此同时，促进了细胞外基质的分泌合成，且细胞整体形成一个“膜片”状结构，在组织工程学中的研究具有重大意义。抗坏血酸对于不同细胞外基质组分的合成则表现出一定的特异性，其对于细胞的分化及在组织工程学中的应用，仍有待进一步研究。

文章的不足之处：实验对于抗坏血酸影响细胞外基质合成分泌的实验中，仅检测了纤连蛋白与Ⅰ型胶原这两种细胞外基质成分的基因表达，未能完全明确抗坏血酸对于细胞外基质成分的影响。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

抗坏血酸作用下兔骨髓间充质干细胞外基质分泌与结构改变

Ascorbic acid influences on extracellular matrix and structure of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells

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