人脐带间充质干细胞治疗后失代偿期乙型肝炎肝硬化患者的免疫功能和预后

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.17.012

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (17): 2696-2701.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.17.012

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人脐带间充质干细胞治疗后失代偿期乙型肝炎肝硬化患者的免疫功能和预后

方雪晴¹，张骏飞²，宋海燕²，陈照林²，董静²，潘劲劲²，陈曦²，刘波²，陈从新²

¹安徽医科大学附属解放军临床学院，安徽省合肥市 230001；²解放军第一○五医院感染病科，安徽省合肥市 230001

修回日期:2017-01-26 出版日期:2017-06-18 发布日期:2017-06-29
通讯作者: 陈从新，主任医师，教授，博士生导师，解放军第一○五医院感染病科，安徽省合肥市 230001
作者简介:方雪晴，女，1991年生，安徽省无为县人，汉族，安徽医科大学在读硕士，主要从事病毒性肝炎及终末期肝病研究。
基金资助:
南京军区面上课题(15MS048)：miR-132修饰的骨髓间充质干细胞治疗休克肝的研究；解放军第105医院科研课题(2013YG04)：促肝细胞生长因子诱导人骨髓间充质干细胞与肝细胞定向分化的表观遗传学研究

Effects of human umbilical cord mesenchymal stem cell therapy on the immune function and prognosis in patients with decompensated liver cirrhosis due to hepatitis B

Fang Xue-qing¹, Zhang Jun-fei², Song Hai-yan², Chen Zhao-lin², Dong Jing², Pan Jin-jin², Chen Xi², Liu Bo², Chen Cong-xin²

¹Clinical College of PLA of Anhui Medical University, Hefei 230001, Anhui Province, China; ²Department of Infection, No. 105 Hospital of PLA, Hefei 230001, Anhui Province, China

Revised:2017-01-26 Online:2017-06-18 Published:2017-06-29
Contact: Chen Cong-xin, Chief physician, Professor, Doctoral supervisor, Department of Infection, No. 105 Hospital of PLA, Hefei 230001, Anhui Province, China
About author:Fang Xue-qing, Studying for master’s degree, Clinical College of PLA of Anhui Medical University, Hefei 230001, Anhui Province, China
Supported by:
the General Project of Nanjing Military Region of PLA, No. 15MS048; the Scientific Research Project of No. 105 Hospital of PLA, No. 2013YG04

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
间充质干细胞移植治疗肝硬化：失代偿期肝硬化患者机体免疫功能紊乱，移植间充质干细胞可能通过旁分泌机制抑制T、B淋巴细胞的增殖和CD3⁺CD8⁺T细胞的增殖、分化，上调Treg细胞，抑制炎症性细胞因子的合成，减轻肝组织炎症程度，减少肝细胞坏死、凋亡，延缓病情进展，为良好预后提供可能。

摘要
背景：大量体内外实验显示，间充质干细胞对淋巴细胞等免疫细胞有明显的免疫抑制作用。
目的：探讨人脐带间充质干细胞对失代偿期乙型肝炎肝硬化患者免疫功能及预后的影响。
方法：将118例失代偿期乙型肝炎肝硬化患者随机分为2组，对照组(n=59)进行内科常规治疗；观察组(n=59)在内科常规治疗的基础上进行人脐带间充质干细胞移植，在入院1周内分2次进行，先经肝固有动脉注射10 mL干细胞悬液，然后经静脉注射10 mL干细胞悬液，细胞总数为(4.0-4.5)×10⁸。于治疗前、治疗1，4周后，检测血清白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、白细胞介素10、转化生长因子β水平，以及外周血淋巴细胞亚群比例；治疗后12周，检测两组MELD评分、Child-Pugh分级变化；随访观察肝衰竭、并发症及生存情况。

结果与结论：①观察组治疗后1，4周的血清白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平低于对照组(P < 0.05或P < 0.001)，白细胞介素10、转化生长因子β水平高于对照组(P < 0.05或P < 0.001)；②观察组治疗后1周的CD3⁺CD4⁺T细胞、CD4⁺CD25⁺Treg细胞比例高于对照组(P < 0.001)，CD3⁺CD8⁺T细胞、CD3^-CD19⁺B细胞低于对照组(P < 0.05或P < 0.001)；治疗后4周的CD3⁺T 细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞、CD4⁺CD25⁺Treg细胞比例高于对照组(P < 0.05或P < 0.001)，CD3⁺CD8⁺T细胞、CD3^-CD19⁺B细胞比例低于对照组(P < 0.05或P < 0.001)；③观察组MELD评分、Child-Pugh分级低于对照组(P < 0.05)；④观察组未发生肝衰竭，对照组5例出现肝衰竭；观察组并发症发生率低于对照组(P < 0.05)；观察组随访52周的累计死亡率低于对照组(P < 0.05)；⑤结果表明，人脐带间充质干细胞移植可减轻失代偿期乙型肝炎肝硬化的炎症反应，改善肝脏功能，降低肝衰竭发生率和死亡率。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

ORCID:0000-0003-3907-4077(陈从新)

关键词: 干细胞, 移植, 间充质干细胞, 脐带, 失代偿期肝硬化, 细胞因子, 淋巴细胞亚群, 预后

Abstract:

BACKGROUND: A large number of experiments in vivo and in vitro have shown that mesenchymal stem cells may obviously inhibit the lymphocytes and other immunocytes.

OBJECTIVE: To investigate the effect of human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation on the immune function and prognosis of patients suffering decompensated liver cirrhosisn due to hepatitis B.

METHODS: 118 patients with decompensated cirrhosis due to hepatitis B were randomly divided into control group (n=59) and observation group (n=59). The two groups all received normal medical treatment, and in addition, the observation group also received human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation. (4.0-4.5)×10⁸ stem cells were transplanted twice by intervention via proper hepatic artery (10 mL) and intravenous infusion (10 mL) within 1 week after admission. The levels of serum interleukin-6, tumor necrosis factor-α, interleukin-10, transforming growth factor-β and the percentage of lymphocyte subsets in the peripheral blood were determined in the two groups before and 1, 4 weeks after treatment. The model for end-stage liver disease (MELD) score and Child-Pugh score of 118 patients after treatment for 12 weeks were observed and recorded, and liver failure, complications and survival during follow-up period in the two groups were observed.

RESULTS AND CONCLUSION: After treatment for 1 and 4 weeks, the levels of serum interleukin-6 and tumor necrosis factor-α in the observation group were significantly lower than those in the control group (P < 0.05 or P < 0.001), but the levels of serum interleukin-10 and transforming growth factor-β in the observation group were significantly higher than those in the control group (P < 0.05 or P < 0.001). After treatment for 1 week, the percentages of CD3⁺CD4⁺T cell and CD4⁺CD25⁺Treg cells in the observation group were significantly higher than those in the control group (P < 0.001), but the percentages of CD3⁺CD8⁺ T cells and CD3^-CD19⁺ B cells were significantly lower than those in the control group (P < 0.05 or P < 0.001). After treatment for 4 weeks, the percentages of CD3⁺ T cell ,CD3⁺CD4⁺ T cells and CD4⁺CD25⁺ Treg cells in the observation group were significantly higher than those in the control group (P < 0.05 or P < 0.001), but the percentages of CD3⁺CD8⁺ T cell and CD3^-CD19⁺ B cells were significantly lower than those in the control group (P < 0.05 or P < 0.001). After treatment for 12 weeks, the MELD and Child-Pugh scores in the observation group were significantly lower than those in the control group (P < 0.05). During the follow-up period, none of the cases in the observation group developed liver failure, but five cases in the control group did. In addition, the incidence of complications and cumulative mortality in the observation group were significantly lower than those in the control group (P < 0.05). These results show that the human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation may alleviate liver inflammation and improve liver function, and then may reduce the incidence of hepatic failure and mortality for patients with decompensated cirrhosis due to hepatitis B.

Key words: Umbilical Cord, Mesenchymal Stem Cell Transplantation, Liver Cirrhosis, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

方雪晴，张骏飞，宋海燕，陈照林，董静，潘劲劲，陈曦，刘波，陈从新. 人脐带间充质干细胞治疗后失代偿期乙型肝炎肝硬化患者的免疫功能和预后[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(17): 2696-2701.

Fang Xue-qing, Zhang Jun-fei, Song Hai-yan, Chen Zhao-lin, Dong Jing, Pan Jin-jin, Chen Xi, Liu Bo, Chen Cong-xin. Effects of human umbilical cord mesenchymal stem cell therapy on the immune function and prognosis in patients with decompensated liver cirrhosis due to hepatitis B[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(17): 2696-2701.

图/表（结果） 1

2.1 参与者数量分析 在随访4周时，观察组有1例失访；对照组有1例死亡，2例失访。随访12周时，观察组有2例死亡，2例失访；对照组有3例死亡，3例失访。随访52周时，观察组有8例死亡，2例失访；对照组有15例死亡，4例失访。随访过程中死亡及失访病例均纳入分析，死亡及失访患者均按照无效处理，见图1。

2.2 两组基线情况 按年龄、性别、治疗前谷丙转氨酶、总胆红素、白蛋白、凝血酶原时间、Meld评分、Child-Pugh评分将两组患者进行分层比较，差异均无显著性意义(P < 0.05)，见表1。

2.3 两组血清细胞因子水平变化情况 治疗前，两组血清白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、白细胞介素10、转化生长因子β水平比较差异无显著性意义(P > 0.05)；与对照组相比，观察组治疗后1，4周的血清白细胞介素6、肿瘤坏死因子α下降更明显(P < 0.001)，血清白细胞介素10、转化生长因子β水平上升更显著(P < 0.05)，见表2。

2.4 两组外周血淋巴细胞亚群测定结果 治疗前，两组CD3⁺T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞、CD3⁺CD8⁺T细胞、CD4⁺CD25⁺Treg细胞、CD3^-CD16⁺NK细胞、CD3^-CD19⁺B细胞比例比较差异无显著性意义(P > 0.05)；与对照组相比，观察组治疗后1周的CD3⁺CD4⁺T细胞、CD4⁺CD25⁺Treg细胞上升更显著(P < 0.001)，CD3⁺CD8⁺T细胞和CD3^-CD19⁺B细胞下降更显著(P < 0.001或P < 0.05)；两组CD3⁺T细胞和CD3^-CD16⁺NK细胞比例差异均无显著性意义(P > 0.05)。与对照组相比，观察组治疗后4周的CD3⁺T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞、Treg细胞上升更显著(P < 0.05或P < 0.001)，CD3⁺CD8⁺T细胞和CD3^-CD19⁺B细胞下降更显著(P < 0.001或P < 0.05)；两组CD3^-CD16⁺NK细胞比例比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见表3。

2.5 两组患者MELD和Child-Pugh评分变化情况 与对照组相比，观察组治疗后12周的MELD和Child-Pugh评分显著下降(P < 0.05)，见表4。

2.6 随访期间两组患者生存情况、发生肝衰竭例数及并发症情况 ①随访期间，观察组死亡及失访15例，对照组死亡及失访28例，死亡原因为肝肾综合征、感染、上消化道大出血、肝性脑病等严重并发症；两组患者1年生存率分别为74.6%(44/59)和52.5%(31/59)，组间比较差异有显著性意义(χ²=4.365，P=0.037)，见图2；②随访52周，观察组未发生肝衰竭，对照组有5例发生肝衰竭，组间比较差异无显著性意义(P=0.057)；③随访52周，观察组消化道出血5例，感染5例，肝性脑病3例，顽固性腹水2例；对照组消化道出血4例，感染12例，肝性脑病5例，顽固性腹水5例，肝肾综合征3例，观察组并发症发生率低于对照组(P < 0.05)。

2.7 不良反应 观察组未发生与细胞移植相关的不良反应。

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引言

乙型肝炎病毒(HBV)感染病理表现为肝细胞坏死、凋亡，纤维组织增生，肝脏长期经历慢性的炎症、坏死、纤维增生后可发生纤维化，接着可能进展为肝硬化^[1]。肝硬化接下来可逐渐发展至失代偿，最终可能导致肝功能衰竭。目前，国内外多数学者着眼于如何有效减轻肝脏损伤、促进肝细胞再生及逆转肝纤维化，并认为间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)可能成为一种治疗肝硬化等终末期肝病的新手段^[2-7]。

MSCs是一类发源于中胚层的多能干细胞，广泛分布于人或动物的各种成体组织和器官，如骨髓、脐带(血)、皮下或内脏脂肪、外周血等^[8-9]，具有强大的自我更新能力和分化为各种中胚层和内外胚层细胞的潜能^[10]，在特定条件下可被诱导分化为肝样细胞^[11]。MSCs治疗是一种介入性治疗，细胞进入受损肝组织，可能起到减轻肝脏损伤、促进肝脏再生、抗肝纤维化的作用^[12]。自2002年至今，大量体内外实验显示了MSCs可能通过旁分泌途径抑制T、B淋巴细胞的增殖和分化，发挥免疫抑制作用^[6^，^13-19]。Wang等^[7]利用同种异体骨髓MSCs移植治疗难治型原发性胆汁性肝硬化患者，6个月后检测发现，外周血CD3⁺CD8⁺T细胞比例上调，CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺T细胞下调，血清白细胞介素10水平升高，可能MSCs由此发挥对难治型原发性胆汁性肝硬化患者的免疫调节作用。还有学者利用脐血MSCs治疗51例失代偿期肝硬化患者(44例乙型肝炎肝硬化、4例酒精性肝硬化和3例难治型原发性胆汁性肝硬化)，结果发现治疗后患者外周血总T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞和CD3⁺CD4⁺/ CD3⁺CD8⁺T细胞比值显著上升，CD3⁺CD8⁺T细胞细胞则显著下降，CD3⁺CD4⁺/ CD3⁺CD8⁺T细胞更接近健康对照组水平^[6]。

近年来，脐带来源MSCs因取材便利、增殖分化能力更强、适合体外大量培养等优势，成为临床上用于治疗肝硬化等终末期肝病的理想来源。关于人脐带MSCs应用于失代偿期肝硬化临床治疗的研究，多局限于一些小样本、短期的疗效观察，缺乏严格的对照及对其免疫调节作用的研究。课题采用人脐带MSCs经肝动脉途径和静脉途径移植治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化，旨在了解其对患者体内免疫状态及转归的影响。

材料方法

1.1 设计 前瞻性队列研究。

1.2 时间及地点 试验于2013年1月至2016年5月在解放军第一○五医院感染科完成。

1.3 对象

纳入标准：入组患者均符合2010年修订的《慢性乙型肝炎防治指南》中的失代偿期肝硬化诊断标准^[20]：既往有乙型肝炎病史或HBsAg阳性超过6个月，现HBsAg和(或)HBV DNA仍为阳性者；经B超、CT、MRI检查提示肝脏缩小，肝脏边缘不规则，伴有脾脏肿大；Child B级或Child C级；谷丙转氨酶> 40 U/L，总胆红素>20 µmol/L；依从性较好者。

排除标准：< 18岁、孕妇或哺乳期妇女；合并甲、丙、戊、丁型肝炎病毒感染者；合并自身免疫性疾病、酒精性肝硬化；合并肝脏或其他恶性肿瘤者；凝血功能严重障碍(PT > 25 s)；合并自发性腹膜炎等严重感染者或活动性消化道出血；不愿参加试验和签署知情同意书者；严重心脏、肺功能衰竭，极高危高血压及其他严重疾病不能耐受治疗者。

纳入失代偿期乙型肝炎肝硬化住院患者532例，其中符合入选条件并签署知情同意书和手术同意书入组治疗的患者118例，其中男84例，女34例，年龄32-71岁，按照1∶1的比例随机(分层区组随机化)分为2组，观察组59例，对照组59例。

1.4 方法

1.4.1 脐带MSCs的制备 收集安徽医科大学附属解放军临床学院足月妊娠健康胎儿产后脐带1例，尽早将新鲜脐带放入预先备好的含青霉素和链霉素的无菌PBS中冲洗2次，去除脐带中的血液，将脐带剪成1 mm²左右的碎块，再放入含体积分数10%胎牛血清、体积分数5%马血清、青霉素和链霉素的低糖DMEM细胞培养基中，在37 ℃、体积分数5%CO₂温箱中培养，每隔3 d将未贴壁细胞洗去，10 d后培养基中有成纤维样细胞集落形成，用胰蛋白酶消化，1∶3传代，最后得到高纯度的干细胞，制成细胞悬液^[21-22]。

1.4.2 分组治疗

对照组：采取内科综合治疗，主要包括保肝、退黄、抗病毒、抗感染等对症治疗，必要时利尿、输白蛋白，有出血时予以止血，肝性脑病者注射门冬氨酸鸟氨酸；同时给予促肝细胞生长素120 mg/d静脉注射4周；另所有患者入院后1周内静脉输注等量人血白蛋白2次。

观察组：在上述内科治疗基础上，加脐带间充质干细胞移植治疗，每位患者总共移植约含细胞数(4.0-4.5)×10⁸；①所有患者均于入院1周内移植MSCs；②在介入条件下，经皮穿刺股动脉插管至肝固有动脉，注射对比剂，将备好的约占细胞总数一半的细胞悬液(10 mL)缓慢注入肝内(1 mL/min)，术毕拔管，穿刺点加压包扎12 h，穿刺侧下肢制动8 h；③术后经静脉灌注途径将另一半细胞悬液(10 mL)缓慢输入患者体内。

1.5 主要观察指标 ①治疗前及治疗后1，4周，采集静脉血检测血清细胞因子(白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、白细胞介素10、转化生长因子β)和淋巴细胞亚群(CD3⁺T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞、CD3⁺CD8⁺T细胞、CD4⁺CD25⁺Treg细胞、CD3^-CD16⁺NK细胞、CD3^-CD19⁺B细胞)；②治疗前、治疗后12周，行终末期肝病模型MELD评分和Child-Pugh评分，MELD评分：9.6×In[肌酐(mg/dL)]+3.8×In[胆红素(mg/dL)]+11.2×In(国际标准化率)+6.4；Child-Pugh分级：根据计分标准将每例患者分值相加，5-6分为A级，7-9分为B级，10-15分为C级，结果取整数。分数越高效果越差；③随访观察两组患者死亡例数、肝衰竭发生例数和并发症情况。每2周电话随访1次，了解并详细记录患者近况。

1.6 统计学分析 应用SPSS 13.0软件处理数据。各组计量资料以x(_)±s表示，治疗前后比较采用配对t 检验，组间比较采用成组t 检验，偏态分布的计量资料以M(IQR)表示，采用秩和检验；计数资料以百分率表示，行χ²检验。累计死亡率采用Kaplan-Meier(KM)法计算。P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

研究发现，HBV感染并未直接造成肝细胞坏死，而是由CD8⁺杀伤性T细胞(CTL)和NK细胞免疫介导的肝脏炎症导致肝组织损伤^[23]。国内外大量文献报道，MSCs不仅定向分化为肝样细胞，还可能通过旁分泌途径发挥免疫调节和炎症抑制作用^[2-4]，减轻肝脏炎症情况，改善肝功能^[10-11]，这些发现为治疗肝脏炎症损伤严重的肝硬化患者提供了新的方向。研究用脐带MSCs移植治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化，通过检测治疗前后体内血清细胞因子水平和外周血淋巴细胞亚群比例的变化，同对照组比较，进而评价脐带MSCs移植对肝硬化患者免疫状态产生怎样的作用，并随访了解其对患者预后的影响。

Zhou等^[24]报道转化生长因子β是一个负调节免疫细胞因子，可能通过促进CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞形成或抑制Th17细胞分化而起到免疫抑制作用。Di Nicola等^[13]研究发现，自体或同种异基因MSCs和DCs或外周血淋巴细胞诱导的T细胞共培养时，可抑制T细胞分化和CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞的增殖，而这种抑制作用很可能是通过分泌细胞因子转化生长因子β1来实现的。Akiyama等^[14]将MSCs通过尾静脉注入小鼠体内，结果外周血转化生长因子β和Treg细胞明显升高，且外周CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞数量均显著降低。试验中，患者接受脐带MSCs移植后，血清转化生长因子β水平明显升高，Treg细胞上调，CD3⁺CD8⁺T细胞下调，这些结果证实了MSCs可能通过旁分泌转化生长因子β发挥免疫抑制作用。

白细胞介素10是公认的负向调节免疫、抑制炎症的细胞因子。有研究报道脐血间充质干细胞可明显抑制异体外周血T淋巴细胞的增殖，而且可能是通过旁分泌白细胞介素10达到负向免疫调节作用。Banas等^[25]同样发现MSCs可通过分泌白细胞介素10而减轻肝衰竭大鼠肝内炎症细胞浸润，改善凋亡诱导的肝损伤。白细胞介素10还可通过抑制白细胞介素6等炎性细胞因子的合成，进一步抑制Th1细胞活化，减少Th1细胞分泌肿瘤坏死因子，减轻炎症反应。Chen等^[26]报道经骨髓MSCs治疗，肝硬化大鼠体内白细胞介素10水平升高，血清肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白细胞介素1β、白细胞介素17A水平下降，外周血Treg细胞上升，病理学分析还发现肝组织淋巴细胞浸润明显减轻。研究结果显示了失代偿期肝硬化患者经干细胞移植后，血清白细胞介素10明显升高，炎性因子白细胞介素6和肿瘤坏死因子α下降，CD3⁺CD8⁺T细胞和CD3^-CD19⁺B细胞下降，显著改善患者体内免疫激进状态。

大量文献报道，MSCs很可能通过旁分泌抑制性细胞因子白细胞介素10、转化生长因子β，上调Treg细胞，抑制T、B淋巴细胞的增殖和分化^[2-5]，而试验结果也显示白细胞介素10、转化生长因子β分别与Treg细胞正相关，更进一步证实了MSCs免疫调节作用的旁分泌机制，这对控制局部炎症和减轻组织损伤有重要作用。炎性细胞因子白细胞介素6和肿瘤坏死因子α可促进细胞毒性T细胞的分化，而细胞毒性T细胞的主要功能是特异性直接杀伤靶细胞。试验表明，接受脐带MSCs治疗后，患者体内血清白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平明显下降，CD3⁺CD8⁺T细胞和CD3^-CD19⁺B细胞下调，并发现白细胞介素6、肿瘤坏死因子α分别与CD3⁺CD8⁺T细胞正相关，这些结果均显示了MSCs可明显抑制肝硬化患者体内的免疫功能。

2009年，Kharaziha等^[27]将8例肝硬化患者的自体骨髓MSCs经外周静脉或门静脉注入各自体内(4例乙型肝炎肝硬化、1例丙型肝炎肝硬化、1例酒精性肝硬化、2例原因不明肝硬化)，24周后MELD评分、国际标准比值INR和肌酐均明显下降，显著改善肝脏功能。随后，国内外一些临床试验陆续显示，MSCs能降低肝硬化患者的MELD评分和Child-Pugh评分，改善肝功能^[21]。研究显示，与对照组相比，观察组治疗后12周的MELD评分、Child-Pugh分级显著下降，随访期间治疗组累计死亡率、肝衰竭发生率和并发症发生率均低于对照组，这些结果表明了脐带MSCs可明显改善肝功能，提高患者生存率，有助于患者预后。

Gholamrezanezhad等^[28]研究发现，注入体内的MSCs先在肺内聚集，其后在肝脏、脾内才逐渐增加，10 d后肝内亦仅占13.0%-17.4%。曾有学者以荧光标记法检测发现，经尾静脉、门静脉途径植入大鼠体内的MSCs定居于肝内的数量与肝脏损伤有关，而与移植途径无关。因而，对于MSCs改善肝功能及预后的作用除了因其本身可分化为肝样细胞，代替肝脏功能，更加可能主要是其及时减轻肝脏损伤，延缓了病情进展所致。试验选择的研究对象基本为严重肝脏损伤，可使MSCs移植时进入肝内的细胞数相对较多，提高其治疗效率，减少浪费。

综上所述，失代偿期肝硬化患者的机体免疫功能紊乱，而移植MSCs可能通过旁分泌机制抑制T、B淋巴细胞的增殖和T8细胞的增殖、分化，上调Treg细胞，抑制炎症性细胞因子的合成，从而减轻肝组织炎症程度，减少肝细胞坏死、凋亡，延缓病情进展，为良好预后提供可能。当然，这还需要大规模、多中心的临床试验的进一步验证。

人脐带间充质干细胞治疗后失代偿期乙型肝炎肝硬化患者的免疫功能和预后

Effects of human umbilical cord mesenchymal stem cell therapy on the immune function and prognosis in patients with decompensated liver cirrhosis due to hepatitis B

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