J2对同种异体穿透性角膜移植模型大鼠CD4+和CD8+T细胞免疫功能的抑制

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.05.020

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (5): 723-728.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.05.020

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J2对同种异体穿透性角膜移植模型大鼠CD4+和CD8+T细胞免疫功能的抑制

郭惠玲^1，2，杜改萍^2，3，王丽强²，宫玉波¹，闫洪欣¹，黄一飞²

¹解放军306医院眼科，北京市 100101；²解放军总医院眼科，北京市 100853；³解放军401医院眼科，山东省青岛市 266000

收稿日期:2015-11-28 出版日期:2016-01-29 发布日期:2016-01-29
通讯作者: 黄一飞，博士，主任医师，解放军总医院眼科，北京市 100853
作者简介:郭惠玲，女，1977年生，山西省大同市人，汉族，博士后，主治医师，主要从事角膜病、玻璃体视网膜疾病、眼外伤方面的研究。工作单位为解放军306医院。
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(30973245)；全国博士后科学基金面上项目(20100481481)

J2 inhibits immune function of CD4+ and CD8+ T cells in allogeneic penetrating keratoplasty rat models

Guo Hui-ling^{1, 2}, Du Gai-ping^{2, 3}, Wang Li-qiang², Gong Yu-bo¹, Yan Hong-xin¹, Huang Yi-fei²

¹Department of Ophthalmology, the 306 Hospital of Chinese PLA, Beijing 100101, China; ²Department of Ophthalmology, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China; ³Department of Ophthalmology, the 401 Hospital of Chinese PLA, Qingdao 266000, Shandong Province, China

Received:2015-11-28 Online:2016-01-29 Published:2016-01-29
Contact: Huang Yi-fei, M.D., Chief physician, Department of Ophthalmology, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China
About author:Guo Hui-ling, M.D., Attending physician, Department of Ophthalmology, the 306 Hospital of Chinese PLA, Beijing 100101, China; Department of Ophthalmology, General Hospital of Chinese PLA, Beijing 100853, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 30973245; the National Postdoctoral Science Foundation, No. 20100481481

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

小分子化合物J2：是具有中国自主知识产权的新型免疫抑制剂，分子式为C₁₈H₁₆BN₄O₃，相对分子质量为336。J2与CD4分子的第1功能区结合，竞争性抑制其与MHCⅡ分子结合，干扰CD4⁺T细胞对组织相容性抗原的识别，针对CD4⁺T细胞进行清除或调控。

角膜移植排斥：是一个复杂的免疫过程，除CD4/MHC-Ⅱ抗原识别途径外，其他因素和途径如非HLA抗原的识别、非肽类抗原提呈诱导的T细胞免疫等也可诱导角膜移植排斥反应的发生。

背景：J2即是以CD4分子与MHCⅡ类分子复合结合物功能域(CD4-D1/MHCⅡβ)为靶点，在数十万种有机化合物化学数据库中进行计算机筛选获得的小分子化合物。在先期的研究中，作者分别采用口服和腹腔注射等全身用药的方式将J2用于小鼠皮肤移植及角膜移植模型，结果证明J2能够延长移植片的生存时间，抑制排斥反应的发生。为了能更好的发挥药物的靶向作用，并减少全身毒副反应，进一步将J2用于局部治疗角膜移植排斥反应。

目的：观察新型免疫抑制剂J2对同种异体穿透性角膜移植大鼠模型CD4⁺和CD8⁺T细胞免疫功能的抑制作用。

方法：以成年雌性Wistar大鼠作为供体，SD大鼠作为受体，建立同种异体穿透性角膜移植模型。A组为正常SD大鼠结膜下空白溶剂0.05 mL注射组。手术大鼠随机分成3组：B组为SD大鼠自体角膜移植结膜下空白溶剂0.05 mL注射组；C组为同种异体角膜移植结膜下空白溶剂0.05 mL注射组；D组为同种异体角膜移植结膜下1% J2-纳米混悬液(NS)0.05 mL注射组。各组动物分别于移植后3 d、1周、2周、3周，使用流式细胞仪检测外周血中T细胞亚群分布情况并进行比较。

结果与结论：B组各时间点外周血中淋巴细胞总CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺以及CD4⁺/CD8⁺差异无显著性意义；C组移植后3 d和1周总CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺差异无显著性意义，1周和2周总CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺数目增多，差异有显著性意义(P < 0.05)；D组中，1周和2周时CD4⁺和CD8⁺无显著增生。同一时间点横向比较：3 d、1周、2周时D组总CD3⁺明显少于C组，差异有显著性意义(P < 0.05)，而在第3周时D组与C组差异无显著性意义；CD4⁺在移植后3 d和1周时D组较C组数目少，但差异无显著性意义。CD4⁺/CD8⁺比值，在3 d、1周、3周时D组与C组比较差异均无显著性意义。提示J2通过抑制T淋巴细胞增生，抑制T细胞介导的角膜移植排斥反应。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

ORCID: 0000-0002-1078-2515(黄一飞)

关键词: 实验动物, 移植动物模型, 角膜移植, J2, 排斥反应, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: J2 takes functional domain (MHC CD4-D1/) of complex conjugate of CD4 molecule and MHC class II molecule as a target, and is a small molecule compound obtained by computer screening from a chemical data containing hundreds of thousands of organic compounds. In the previous study, J2 was used in mouse models of skin transplantation and keratoplasty by oral and intraperitoneal injection. Results verified that J2 could prolong the survival time of grafts, and suppress occurrence of rejection. To better play the role of a drug targeting and to reduce systemic toxicity, J2 will be further utilized in local treatment of keratoplasty rejection.
OBJECTIVE: To investigate the inhibitory effect of new immunosuppressive agent J2 on CD4+ and CD8+ T cell immune functions in rat models receiving allogenic penetrating keratoplasty.
METHODS: Allogeneic penetrating keratoplasty model was established using the adult female Wistar rats as donors and Sprague-Dawley rats as recipients. Group A: normal Sprague-Dawley rats were injected with 0.05 mL placebo subconjunctivally. Surgery rats were randomly divided into three groups. Group B: allograft rats were injected with 0.05 mL placebo subconjunctivally after autologous keratoplasty. Group C: allograft rats were injected with 0.05 mL placebo subconjunctivally. Group D: allograft rats were injected with 1% J2-nanosuspension 0.05 mL subconjunctivally. The distribution of T cell subsets in peripheral blood was detected using flow cytometry at 3 days, 1, 2 and 3 weeks after transplantation and compared among groups.
RESULTS AND CONCLUSION: There was no significant difference in total CD3+ T cells, CD4+ T cells, CD8+ T cells and CD4+/CD8+ in peripheral blood lymphocytes in group B at various time points. At 3 days and 1 week after surgery in group C, no significant difference in total CD3+ T cells, CD4+ T cells and CD8+ T cells was detected. At 1 and 2 weeks, the number of total CD3+ T cells, CD4+ T cells and CD8+ T cells increased, showing significant differences (P < 0.05). In group D, no significant hyperplasy was found in CD4+ T cells and CD8+ T cells at 1 and 2 weeks. The horizontal comparison of the same time point: the total CD3+ T lymphocytes of group D was significantly less than group C at 3 days, 1 and 2 weeks after operation (P < 0.05), whereas there was no significant difference at 3 weeks between the group D and group C. The number of CD4+ T lymphocytes in group D was less than in group C at 3 days and 1 week, but with no significant difference. The ratio of CD4+/CD8+ had no significant difference in group D compared with group C at 3 days, 1 and 3 weeks. J2 inhibits T lymphocyte proliferation and then inhibits T cell-mediated corneal allograft rejection.

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郭惠玲，杜改萍，王丽强，宫玉波，闫洪欣，黄一飞. J2对同种异体穿透性角膜移植模型大鼠CD4+和CD8+T细胞免疫功能的抑制[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(5): 723-728.

Guo Hui-ling, Du Gai-ping, Wang Li-qiang, Gong Yu-bo,Yan Hong-xin, Huang Yi-fei. J2 inhibits immune function of CD4+ and CD8+ T cells in allogeneic penetrating keratoplasty rat models[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(5): 723-728.

图/表（结果） 3

2.1 实验动物数量分析选用SPF级成年雌性Wistar大鼠12只(24眼)作为供体，SPF级成年雌性Sprague- Dawley (SD)大鼠84只(84眼)作为受体，分为4组，每组16只16眼。移植后3 d内出现伤口裂开、无前房、白内障、眼内感染、虹膜前粘连等并发症情况者予以淘汰共淘汰20只并进行了补充。

2.2 模型稳定性及造模方法的改进大鼠作为角膜移植动物模型，其MHC的表达相似于人类，因此实验动物模型稳定。体外实验及动物实验结果显示J2在抗免疫排斥方面显示了良好的药效和较高的生物利用度，实验将J2制成纳米混悬液滴眼液，观察局部用药对于角膜移植排斥反应的抑制作用。

2.3 免疫组化结果正常大鼠角膜未见CD4⁺、CD8⁺T细胞浸润，T淋巴细胞位于淋巴结副皮质区及滤泡间区，CD4+、CD8⁺T细胞可见细胞核膜棕黄色物质沉积。B组移植后1周角膜少见CD4⁺、CD8⁺T细胞的阳性表达(图1)；C、D组移植后1周淋巴结及角膜基质内均可见CD4⁺、CD8⁺T细胞的阳性表达，2周时淋巴结及角膜上皮层、基质层见大量CD4⁺、CD8⁺T细胞的阳性表达，以C组表达量最高。

2.4 角膜移植后外周血T淋巴细胞亚群的分布见表1。

B组各时间点外周血中淋巴细胞总CD3⁺、CD4⁺ CD3⁺、CD8⁺CD3⁺以及CD4⁺/CD8⁺差异无显著性意义；C组移植后3 d和1周总CD3⁺、CD4⁺CD3⁺、CD8⁺CD3⁺差异无显著性意义，1周和2周总CD3⁺、CD4⁺CD3⁺、CD8⁺CD3⁺数目增多，差异有显著性意义(P < 0.05)。

大鼠同种异体角膜移植后使用J2-NS结膜下注射(以下针对D组进行数据分析)，各时间点通过单因素方差分析外周血CD3⁺T细胞数目差异有显著性意义(F=19.762，比较，CD8⁺CD3⁺T细胞数目逐渐增多，差异有显著性意义(P < 0.05)。

CD4⁺/CD8⁺比值在移植后逐渐下降，差异有显著性意义(F=8.338，P=0.001)；通过LSD法多重两两比较：3 d和1周时比较差异无显著性意义(P=0.844)；3 d和2周、3周时比较差异有显著性意义(P < 0.05)；1周和2周时比较差异无显著性意义(P=0.053)；2周、3周时比较，CD4⁺/CD8⁺比值下降，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图2。

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引言

在国内角膜病是第二位的致盲眼病，在超过200万的角膜残疾患者中，80%的患者需要角膜移植才能复明^[1]。目前免疫排斥反应仍然是角膜移植后失败的最主要原因^[2]，目前抑制角膜移植排斥的方法仍以药物为主，皮质类固醇激素、环孢素A是临床上抗免疫排斥反应的一线用药，有着显著的疗效，与此同时，研究者们也不断地尝试开发更多更新的抗免疫排斥药物。传统的药物设计和合成方法都具有一定的随机性和盲目性，缺乏应有的合理性，随着功能基因组和结构基因组研究的快速进展以及在分子水平上人们对疾病发生、发展机制认识程度的不断深入，与重大疾病相关的生物靶标分子被不断发现，越来越多的靶标分子的三维分子结构被测定并成为药物开发的新靶标。角膜移植信号传导通路中，最早识别带有外源性主要组织相容性抗原(major histocompatibility complex，MHC)的细胞是CD4⁺T细胞，其活化、分泌的细胞因子可以激活CD8⁺T细胞和B细胞而引起免疫应答，导致排斥反应发生，所以T细胞的CD4分子和MHCⅡ类抗原的相互作用是产生免疫排斥反应的关键环节^[3]。计算机辅助药物设计技术是目前药物化学领域中新兴和高效的药物设计手段，可以根据已知生物靶分子的晶体结构数据或小分子化合物的构效关系进行模拟和计算，以较高的效率和准确性获得先导化合物^[4-5]。J2即是以CD4分子与MHCⅡ类分子复合结合物功能域(CD4-D1/MHCⅡβ)为靶，在数十万种有机化合物化学数据库中进行计算机筛选获得的小分子化合物，体外实验及动物实验结果显示J2在抗免疫排斥方面显示了良好的药效和较高的生物利用度^[6-16]。

实验观察了角膜移植后J2-纳米混悬液(NS)对大鼠T细胞亚群的影响，进一步验证J2设计的原理，并对其发挥免疫抑制作用的机制进行深入探讨。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

材料方法

1.1 实验材料前瞻性随机对照动物造模实验，于2009年3月至2010年6月在解放军总医院眼科实验室完成。

10%水合氯醛(解放军总医院)；复方托品卡胺滴眼液 (北京双鹤现代医药技术有限责任公司)；硫酸庆大霉素注射液(苏州第六制药厂)；0.25%氯霉素眼液(解放军总医院)；贝诺喜滴眼液(日本参天株式会社)；40 g/L环孢素滴眼液(华北制药集团)；BBS眼用平衡液(美国Alcon公司)；金霉素眼膏(上海通用药业有限公司)；40 g/L的多聚甲醛磷酸盐缓冲液(解放军总医院)；Anti-rat CD4(货号：0766R)、Anti-rat CD8(货号：0648R)(北京博奥森生物科技有限公司)；空白溶剂(吐温-80、PVA、注射用水) (军事医学科学院毒物药物研究所王晓奎博士提供)；手术显微镜(德国)；倒置显微镜(日本)；眼科显微手术器械：Vannas剪、持针器、显微系结镊，角膜环钻 (苏州明仁医疗器械公司，中国)；生物组织包埋机(金华市科迪仪器设备有限公司，中国)。

1.2 实验动物选用SPF级成年雌性Wistar大鼠12只(24眼)作为供体，SPF级成年雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠84只(84眼)作为受体，体质量200-220 g，实验大鼠由中国人民解放军军事医学科学院动物所提供，许可证号：京检证字号第0005889，共分为4组。A组为正常SD大鼠结膜下空白溶剂0.05 mL注射组，16只(16眼)；手术大鼠按随机数字表法分成3组：B组为SD大鼠自体角膜移植、结膜下空白溶剂0.05 mL注射组，16只(16眼)；C组为同种异体角膜移植、结膜下空白溶剂0.05 mL注射组，16只(16眼)；D组为同种异体角膜移植、结膜下J2-NS 0.05 mL注射组，16只(16眼)，各手术组大鼠事先标定2只于1周、2周取角膜行组织学检查。

1.3 造模方法

大鼠角膜移植模型建立：术前30 min复方托品卡胺滴眼液点眼3次，充分散瞳。腹腔注射10%水合氯醛(3.0- 3.5 mL/kg)进行麻醉；术前5 min盐酸奥布卡因滴眼液点眼。常规消毒铺巾，生理盐水溶液充分冲洗术眼。B组用直径3.0 mm环钻钻取SD大鼠角膜植片，旋转180°后对位缝合，冲洗针头注入无菌空气形成前房。C、D组供体用3.5 mm环钻在Wistar大鼠角膜中央钻切，受体用直径3.0 mm环钻在SD大鼠角膜中央钻切，将供体植片放置于植床上，10-0尼龙线间断缝合8-10针，线结暴露不埋藏，用冲洗针头注入无菌空气形成前房。术毕结膜囊涂金霉素眼膏，5-0丝线缝合睑缘，隔日拆线。

造模成功的标准：角膜移植后3 d内不出现伤口裂开、无前房、白内障、眼内感染、虹膜前粘连等并发症即为造模成功。

1.4 指标测定

组织学检查：各组中随机预先标定的大鼠，于角膜移植后1周、2周随机选取1只，过量麻醉处死，取术眼角膜及同侧淋巴结，40 g/L的多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定，常规乙醇梯度脱水、透明、石蜡包埋。在苏木精-伊红染色同时行免疫组织化学检查，观察植片上CD4、CD8的表达：按试剂盒说明书进行抗体标记，镜检。

流式细胞仪检测外周血：每组动物分别于移植后3 d、1周、2周、3周，于尾静脉取血100 μL，肝素抗凝；每管全血样品加入CD3-PEcy7、CD4-PE、CD8-FITC 三标荧光标记抗体5 μL，充分混匀，冰上震荡染色30 min；每管样品加入红细胞裂解液1 mL，混匀后室温避光溶解红细胞 3 min；加入100 μL Leucoperm reagent，室温孵育15 min；6 000 r/min离心30 s，弃上清；每管加入PBS 2 mL洗涤，6 000 r/min离心30 s，弃上清；加入0.5 mL 5 g/L的多聚甲醛重选沉淀固定，4 ℃过夜；样品上机检测。

1.5 主要观察指标 ①角膜移植片的组织学观察。②角膜移植片CD4、CD8细胞的免疫组化观察。③外周血T淋巴细胞的分布。

1.6 统计学分析实验数据由第一作者采用SPSS 16.0统计软件处理，使用x(_)±s表示，各组外周血淋巴细胞分布及每组不同时间点淋巴细胞的差异比较采用One-Way ANOVA单因素方差分析LSD法进行多重两两比较，P < 0.05认为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

讨论

角膜移植免疫排斥反应的过程大致可以分成3个阶段^[17-18]：①感应阶段：供体抗原的释放、识别，并传输到淋巴组织。移植抗原释放后首先经过APC和MHC-Ⅱ类分子一同递呈给T细胞，并且释放非特异性细胞因子作为第二次刺激信号，被同种特异性T细胞识别，致使T细胞激活，包括中枢致敏和外周致敏方式。②增殖分化阶段：抗原被处理，并产生特异性免疫细胞。调节性T细胞识别了作为第一信号的APC处理呈递的抗原和作为第二信号的APC分泌的白细胞介素1激活，释放白细胞介素2、白细胞介素4和γ-干扰素等细胞因子，诱导特异性免疫细胞开始增殖，分化成为效应细胞。③效应阶段：机体通过细胞和体液免疫途径攻击植片。目前认为角膜移植免疫排斥分为两种类型，一种是由CD4⁺T细胞介导的迟发型超敏反应及CD8⁺T细胞介导的细胞毒性T细胞反应^[19]。作者选择动物同种异体角膜移植模型对角膜移植的原理和机制进行探求。

本实验选择大鼠作为角膜移植动物模型，其MHC的表达相似于人类^[20]，易于控制，基因稳定，恢复能力强，操作简单。大鼠角膜移植是目前较为成熟的手术方法之一，然而仍有众多因素会造成手术失败，如缝线的质量，植片与植床的吻合度、手术时间、术前青光眼、晶体情况，与植片发生免疫排斥相关因素和供体与受体ABO及HLA血型系统都可对角膜移植术后的角膜植片的生存产生影响^[21]。而角膜自身血管较多、血管增生甚至血管畸形会对手术的成功率产生较大影响^[22]。角膜移植常于术后14 d左右发生排斥，也有少部分发生于术后1年左右，属于4型变态反应^[23]。

在宿主体内的两大类T淋巴细胞按表型不同可分为CD4⁺和CD8⁺细胞，与移植后的排斥反应直接相关^[24]。在器官移植的急性排斥反应和超急性排斥反应中，最早识别带有外源性MHC器官的细胞是CD4⁺T细胞，其表面受体(TCR)与APC细胞表面的MHCⅡ类分子结合形成复合体(TCR/MHC)对抗原进行识别后^[25]，通过信号传导使CD4⁺T细胞的活化、增殖，并分泌细胞因子激活CD8⁺T细胞和B细胞而引起免疫应答，发生植片的移植排斥反应^[26]。阻断其中任一环节都可以显著抑制免疫排斥反应的发生，如各种抗CD4和抗CD8的单克隆抗体就可以诱导移植耐受^[27-28]。很多研究也证实，在角膜移植排斥反应中，相对CD8⁺T细胞以CD4⁺T细胞介导的细胞免疫反应扮有重要的角色^[29]。如史伟云等^[30]观察CD4基因敲除鼠行同种异体角膜移植后角膜移植片在90 d观察期内未发生免疫排斥反应，而CD8基因敲除小鼠在28 d左右时发生免疫排斥反应。所以，目前多认为T细胞亚群的变化与机体免疫状态和移植排斥反应的发生密切相关。J2正是以CD4分子与MHC Ⅱ类分子复合结合物功能域(CD4-D1/MHCⅡβ)为靶，竞争性抑制其与MHCⅡ分子结合，干扰CD4⁺T细胞对组织相容性抗原的识别，从而达到抑制角膜移植排斥反应发生的目的。J2与CD4分子的第1功能区结合，竞争性抑制其与MHCⅡ分子结合，干扰CD4⁺T细胞对组织相容性抗原的识别，针对CD4⁺T细胞进行清除或调控。与目前现有的免疫抑制剂相比，J2在特异性方面具有显著优点；与目前研制的靶向CD4⁺T细胞功能抗体类分子相比，不具有免疫原性；与肽类相比结构稳定，易于化学修饰以及改造。同时作为小分子化合物，在药代动力学等方面优于单克隆抗体等生物制剂，具有较高的临床应用价值。

在本实验中，观察了大鼠角膜移植后外周血T淋巴细胞亚群的变化，结果显示大鼠自体原位移植对外周血中淋巴细胞总CD3⁺T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞以及CD4⁺T淋巴细胞与CD8⁺T淋巴细胞的比值无明显影响，说明单纯手术创伤并不引起明显的淋巴细胞的增生。大鼠同种异体移植后1周内总CD3⁺T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞增多不明显，证实了大鼠在早期手术创伤反应期间，主要为多形核白细胞等炎性细胞增多为主，而诱导免疫排斥反应发生、淋巴细胞大量增殖需要一定的时间，1周后总CD3⁺T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞数目呈增多趋势证实了这一点，此结果与第三部分组织病理学检查结果相一致。有些研究结果表明发生排斥反应时，CD4⁺T淋巴细胞增高，CD8⁺T淋巴细胞下降及CD4⁺/CD8⁺比值增高^[31]，也有研究结果显示角膜移植排斥反应时CD4⁺/CD8⁺比值稍有降低或倒置^[32-34]。而在本实验中CD4⁺T淋巴细胞与CD8⁺T淋巴细胞的比值的下降，说明免疫失衡和免疫病理的发生。在同种异体移植J2用药组中，CD3⁺T细胞的变化与未用药组相似，但在1周和2周时CD4⁺T淋巴细胞的增多不明显，说明在移植免疫应答的初始时期细胞增殖即受到了抑制，在1周和2周时CD8⁺T淋巴细胞的变化也不明显。在同一时间点横向比较不同组别的外周血淋巴细胞亚群的变化发现，3 d、1周、2周时用药组总CD3⁺T淋巴细胞明显少于未用药组，尤其3 d和1周时与自体移植结果接近，而在第3周时用药组与非用药组无明显差别，说明用药组在移植免疫应答的初始时期抗原的识别和活化阶段即受到了明显的抑制。CD4⁺T淋巴细胞在角膜移植后用药组均较非用药组数目少，但差异无显著性意义，可能与个体差异及样本量少有关。CD4⁺T淋巴细胞在术后3 d和1周是用药组较非用药组比较数目少，但差异无显著性意义。CD4⁺/CD8⁺比值，在3 d、1周、3周时用药组与非用药组比较均差异无显著性意义。

综上，J2主要是通过与CD4分子的第1功能区结合，竞争性抑制其与MHCⅡ分子结合，抑制CD4依赖性T细胞应答产生药理学效应，实验结果证实了此药理机制，J2可以抑制外周血T淋巴细胞的增殖而达到抑制角膜排斥反应的目的。当然，角膜移植排斥是一个复杂免疫过程，除CD4/MHC-Ⅱ抗原识别途径外，其他因素和途径如非HLA抗原的识别、非肽类抗原提呈诱导的T细胞免疫等也可诱导角膜移植排斥反应的发生^[35-36]，J2虽然阻断了主要抗原识别途径，但不能完全控制排斥反应的发生，详尽的药理学机制还需要进一步的研究探讨。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

J2对同种异体穿透性角膜移植模型大鼠CD4+和CD8+T细胞免疫功能的抑制

J2 inhibits immune function of CD4+ and CD8+ T cells in allogeneic penetrating keratoplasty rat models

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