胫骨横向骨搬移加速2型糖尿病模型兔足溃疡愈合：环状RNA的参与和调控

doi:10.12307/2026.170

中国组织工程研究 ›› 2026, Vol. 30 ›› Issue (22): 5639-5649.doi: 10.12307/2026.170

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胫骨横向骨搬移加速2型糖尿病模型兔足溃疡愈合：环状RNA的参与和调控

孙祖延，黄文良，徐林，李豪杰，谢同亮，杨治航，邓江

遵义医科大学第三附属医院(遵义市第一人民医院)，贵州省遵义市 563000

收稿日期:2025-05-26 接受日期:2025-09-21 出版日期:2026-08-08 发布日期:2025-12-25
通讯作者: 邓江，博士生导师，主任医师，遵义医科大学第三附属医院(遵义市第一人民医院)，贵州省遵义市 563000
作者简介:孙祖延，男，1991年生，贵州省遵义市人，汉族，遵义医科大学骨科学在读硕士，主要从事骨科疾病研究。
基金资助:
贵州省科技计划项目(黔科合基础-ZK[2021]一般387)，项目负责人：黄文良；遵义市科技计划课题[遵市科合HZ字(2020)109号]，项目负责人：徐林；贵州省科技计划项目(黔科合成果-LC[2024]019)，项目负责人：黄文良

Transverse tibial bone transfer accelerates healing of foot ulcers in a rabbit model of type 2 diabetes mellitus: involvement and regulation of circular RNA

Sun Zuyan, Huang Wenliang, Xu Lin, Li Haojie, Xie Tongliang, Yang Zhihang, Deng Jiang

Third Affiliated Hospital of Zunyi Medical University (The First People’s Hospital of Zunyi), Zunyi 563000, Guizhou Province, China

Received:2025-05-26 Accepted:2025-09-21 Online:2026-08-08 Published:2025-12-25
Contact: Deng Jiang, Doctoral supervisor, Chief physician, Third Affiliated Hospital of Zunyi Medical University (The First People’s Hospital of Zunyi), Zunyi 563000, Guizhou Province, China
About author:Sun Zuyan, MS candidate, Third Affiliated Hospital of Zunyi Medical University (The First People’s Hospital of Zunyi), Zunyi 563000, Guizhou Province, China
Supported by:
Guizhou Provincial Science and Technology Plan Project, No. Qian Ke He Ji Chu-ZK[2021] General 387 (to HWL);
Science and Technology Plan Project of Zunyi, No. Zun Shi Ke He HZ(2020)109 (to XL); Guizhou Province Science and Technology Plan Project of Guizhou Province, No. Qian Ke He Chengguo-LC [2024] 019 (to HWL)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
胫骨横向骨搬移：是指俄罗斯医学专家 Ilizarov 创立的肢体再生与功能重建理论。在张力-应力法则作用下，组织再生能力被激活、加强，通过给予一定应力性牵拉，骨骼及其附着的肌肉、筋膜、血管、神经会同步生长。将胫骨横向骨搬移技术用于治疗下肢血管性病变及糖尿病足，研究结果初步显示该技术可诱导糖尿病足下肢微血管网再生，促进足部溃疡愈合。
糖尿病足溃疡：是指糖尿病患者感觉、运动和自主神经病变的结果。感觉神经病变导致保护性感觉丧失，运动神经病变导致足部畸形和生物力学异常，而自主神经病变导致皮肤的可见共弹性变化，如皮肤干燥，这些变化导致愈伤组织的形成。轻微创伤和炎症反复影响足部，而负重可能导致胼胝下组织发生出血、坏死，最终进展为全身皮肤缺损的慢性溃疡。

背景：胫骨横向骨搬移术作为一种新兴外科技术，通过改善局部血液循环和促进血管生成，有助于加速糖尿病足溃疡的愈合。尽管胫骨横向骨搬移术显示出积极的临床效果，但具体分子机制尚不明确。近年来，环状RNA在血管生成和创面修复中的作用逐渐被揭示。环状RNA可能通过调控相关基因的表达，影响创面愈合过程，但环状RNA在胫骨横向骨搬移术治疗糖尿病足溃疡中的作用仍不清楚。
目的：探讨胫骨横向骨搬移术对兔糖尿病足溃疡的治疗作用及机制。
方法：选取18只3月龄、体质量2.8-3.6 kg的雄性新西兰兔，给予高糖高脂饲料喂养1个月后，通过静脉注射四氧嘧啶诱导建立2型糖尿病模型。造模成功后，结扎右侧股动脉中上段，切除同侧足背全层皮肤，以模拟糖尿病足溃疡的病理特征。随后，将造模成功的兔随机分为4组(每组4只)：空白组不进行任何额外处理；换药组建模后常规碘伏消毒；假手术组建模后安装胫骨横向骨搬移术支架但不进行骨搬移；手术组建模后安装胫骨横向骨搬移术支架并进行骨搬移。在术后7，14 d，观察各组兔足背溃疡创面的愈合情况；术后7，14，21 d，通过酶联免疫吸附方法检测血清中血管内皮生长因子A和CD31水平；术后14 d，取各组溃疡创面组织进行苏木精-伊红染色、CD31免疫荧光染色及Western blot检测血管内皮生长因子A和CD31蛋白表达；术后7，14，21 d，采集手术组静脉血进行全序列基因测序，分析环状RNA的差异表达。
结果与结论：术后7，14 d，手术组糖尿病足溃疡的恢复效果明显优于其他3组，在表皮修复、胶原纤维沉积和血管生成方面表现出更优的促进作用。术后14，21 d，手术组血清中血管内皮生长因子A、CD31水平显著高于其他3组(P < 0.01)。基因测序分析结果显示，术后21 d环状RNA的变化最为显著，尤其是环状RNA 姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B的表达随着时间的推移逐渐降低，提示环状RNA 姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B可能与血管生成和组织修复密切相关。结果表明：胫骨横向骨搬移术能够有效促进兔糖尿病足溃疡创面的愈合。基因测序结果显示环状RNA差异表达，尤其是环状RNA 姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B下调显著，提示胫骨横向骨搬移术可能通过激活相关的分子通路，促进创面修复和血管生成。

https://orcid.org/0009-0000-8091-2074 (孙祖延)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 胫骨横向骨搬移, 糖尿病足溃疡, 糖尿病, 血管生成, 环状RNA(circRNA), circPDS5B

Abstract: BACKGROUND: Transverse tibial bone transfer is an emerging surgical technique that enhances local blood circulation and promotes angiogenesis, thereby accelerating the healing of diabetic foot ulcers. Although this technique has demonstrated positive clinical outcomes, its specific molecular mechanisms remain unclear. Recently, the role of circular RNA in angiogenesis and wound healing has gained increasing recognition. Circular RNA may influence the healing process by regulating the expression of related genes; however, its involvement in the treatment of diabetic foot ulcers through transverse tibial bone transfer has yet to be explored.
OBJECTIVE: To investigate the therapeutic effects of transverse tibial bone transfer on diabetic foot ulcers in a rabbit model and the mechanism of action.
METHODS: Eighteen 3-month-old male New Zealand rabbits, weighing 2.8–3.6 kg, were included in this study. After being fed a high-sugar, high-fat diet for 1 month, type II diabetic rabbit models were induced by intravenous injection of alloxan monohydrate. After successful modeling, the right femoral artery at the mid-upper segment was ligated, and the full-thickness skin of the ipsilateral dorsum of the foot was excised to simulate the pathological characteristics of diabetic foot ulcers. The successfully modeled rabbits were then randomly divided into four groups (n = 4 rabbits per group): blank group (no additional treatment), dressing group (routine disinfection with povidone-iodine after modeling), sham surgery group (installing a transverse tibial bone transfer scaffold but without bone transfer procedure), surgery group (installing a transverse tibial bone transfer scaffold plus bone transfer procedure). At 7 and 14 days after surgery, the healing of the foot dorsum ulcers was observed in each group. At 7, 14, and 21 days after surgery, serum levels of vascular endothelial growth factor A and CD31 were measured via enzyme-linked immunosorbent assay. At 14 days after surgery, ulcer tissue samples from each group were collected for histopathological analysis (hematoxylin and eosin staining), CD31 immunofluorescence staining, and Western blot assay to assess vascular endothelial growth factor A and CD31 protein expression levels. At 7, 14, and 21 days after surgery, venous blood samples were collected from the surgery group for whole-genome sequencing, and the differential expression of circular RNA was analyzed.
RESULTS AND CONCLUSION: At 14 and 21 days after surgery, the surgery group exhibited significantly better diabetic foot ulcer recovery compared with the other three groups, demonstrating superior epidermal regeneration, collagen deposition, and angiogenesis. At 14 and 21 days after surgery, the surgery group showed markedly higher serum levels of vascular endothelial growth factor A and CD31 than the other groups (P < 0.01). Gene sequencing analysis revealed the most pronounced changes in circular RNA expression on day 21, particularly the progressive downregulation of circular RNA PDS5B over time. This suggests a potential link between circular RNA PDS5B and angiogenesis and tissue repair mechanisms. All findings indicate that transverse tibial bone transfer effectively enhances diabetic foot ulcer healing in rabbits. The differential expression of circular RNAs, especially the significant decrease in circular RNA PDS5B, suggests that transverse tibial bone transfer may accelerate wound repair and angiogenesis by activating relevant molecular pathways.

Key words: transverse tibial bone transfer, diabetic foot ulcer, diabetes mellitus, angiogenesis, circular RNA (circRNA), circPDS5B

中图分类号:

孙祖延, 黄文良, 徐林, 李豪杰, 谢同亮, 杨治航, 邓江. 胫骨横向骨搬移加速2型糖尿病模型兔足溃疡愈合：环状RNA的参与和调控[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(22): 5639-5649.

Sun Zuyan, Huang Wenliang, Xu Lin, Li Haojie, Xie Tongliang, Yang Zhihang, Deng Jiang. Transverse tibial bone transfer accelerates healing of foot ulcers in a rabbit model of type 2 diabetes mellitus: involvement and regulation of circular RNA[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2026, 30(22): 5639-5649.

图/表（结果） 9

2.1 实验动物数量分析 16只糖尿病兔随机分为空白组、换药组、假手术组、手术组，每组4只，实验过程中无死亡，全部进入结果分析。
2.2 下肢动脉CT血管造影及X射线片检查手术组术后下肢动脉CT血管造影及胫骨X射线片观察骨搬移情况及改良胫骨横向骨搬移支架工作情况，见图3。

2.3 创面病理检查及创面观察空白组在术后第7天和第14天创面缩小均为33.33%，未见明显改善。换药组在术后第7天创面缩小了46.88%，而在术后第14天则有显著进展，创面缩小了71.88%。假手术组在术后第7天创面缩小了57.14%，在术后第14天创面缩小了69.64%。手术组在术后第7天创面缩小了50%，但在术后第14天创面缩小达到了96.47%，显示出最佳的愈合效果。手术组促进糖尿病足溃疡愈合的效果最为显著，远超其他组，见图4。术后2周各组溃疡创面组织的苏木精-伊红染色结果，见图5。术后2周各组溃疡创面组织的CD31荧光染色结果，见图6，7。
2.4 Western blot检测溃疡组织血管内皮生长因子A、CD31蛋白表达术后14 d，血管内皮生长因子A、CD31蛋白量表达如图8所示。手术组血管内皮生长因子A、CD31蛋白表达显著高于其他3组，手术通过促进内皮细胞增殖和血管生成加速了创面愈合。

2.5 各组兔血清血管内皮生长因子A、CD31水平术后7 d CD31水平：手术组 > 空白组、换药组、假手术组(P < 0.01)；空白组 > 换药组、假手术组(P < 0.05)；换药组与假手术组比较无显著差异(P > 0.05)。术后14 d CD31水平：手术组 > 换药组、假手术组(P <
0.01)；空白组 > 换药组、假手术组(P < 0.01)；手术组与空白组比较无显著差异(P > 0.05)。术后21 d

CD31水平：手术组 > 空白组、换药组、假手术组(P < 0.01)；空白组与换药组比较无显著差异(P > 0.05)；空白组、换药组 > 假手术组(P < 0.01)，见表1。
术后7 d血管内皮生长因子A水平：手术组 > 空白组、换药组、假手术组(P < 0.01)；假手术组 > 空白组、换药组(P < 0.01)；换药组 > 空白组(P < 0.01)。术后14 d血管内皮生长因子A水平：手术组 > 空白组、换药组、假手术组(P < 0.01)；假手术组 > 空白组、换药组(P < 0.01)；换药组 > 空白组(P < 0.01)；术后21 d血管内皮生长因子A水平：手术组 > 空白组、换药组、假手术组(P < 0.01)；假手术组 > 换药组(P < 0.05)；空白组 > 换药组(P < 0.01)，见表2。
2.6 高通量测序首先使用NanoDrop ND-1000光谱仪检测术后7，14，21 d采集的RNA质量，RNA样本的A260/A280比值在1.89-2.02之间，A260/A230比值在2.32-2.51之间，符合RNA测序要求，样本质量

浓度范围：460.60-992.92 ng/μL。所有样本均符合测序质量标准，无明显蛋白污染或降解现象，见图9A。采用变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性，所有样本RNA条带清晰，无明显降解带，RNA完整性良好，适合用于后续高通量测序，见图9B。对测序文库进行质量控制，包括文库片段大小分布和q30碱基占比。q30碱基占比均大于95%，确保数据质量。片段长度分布主要集中在300-500 bp，符合测序标准，见图9C。

转录组测序实验流程展示RNA提取、rRNA去除、片段化、cDNA合成、文库构建及高通量测序流程，确保数据可重复性。转录组测序分析流程图说明从原始数据质量控制到比对、环状RNA识别、定量分析及差异表达分析的全过程，确保数据处理的系统性和可靠性，见图10。
主成分分析显示术后7，14，21 d样本在环状RNA表达模式上明显分离，提示环状RNA表达具有时间依赖性变化，见图11A。热图分析显示不同时间点样本间的相关性，21 d的样本与7 d样本差异最大，见图11B。环状RNA散点图及表达分析展示术后不同时间点的环状RNA表达情况，进一步验证环状RNA在手术组的动态变化。其中环状RNA姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B在术后21 d显著下调，与糖尿病足溃疡愈合过程密切相关。环状RNA差异表达火山图，红色点代表显著上调的环状RNA，绿色点代表显著下调的环状RNA。术后21 d相较于术后7 d，上调环状RNA数目为668个，下调环状RNA数目为699个，显著差异环状RNA共1 367个(P < 0.05)，见图11C。数据表明，环状RNA姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B的表达在术后显著降低，尤其是在术后21 d(7.428 237)，相较于术后7 d (12.287 01)，环状RNA姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B的表达逐渐减少，见图11D。

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引言

糖尿病足溃疡是糖尿病患者常见且严重的并发症之一[1-2]，不仅显著降低患者的生活质量，且在严重情况下可导致截肢[3]。糖尿病足溃疡的病理机制主要是糖尿病引起的血管病变和神经病变。长期高血糖引起的神经病变使患者失去对创伤的感知能力，容易在足部出现伤口而不自知[4]；而血管病变则导致下肢血液循环受限，特别是微血管的病变，使得足部组织长期处于缺血状态，进而影响创面愈合[5-6]。
糖尿病足溃疡的愈合过程往往较为缓慢且容易复发，常伴随感染、坏疽等并发症，目前的治疗方法往往难以取得理想效果，导致病程延长并增加患者的痛苦。因此，探索新的治疗方法改善糖尿病足患者的预后，成为当今医学研究的一个重要方向。
胫骨横向骨搬移作为一种创新的外科手术技术，近年来逐渐应用于糖尿病足溃疡的治疗。胫骨横向骨搬移术具有改善局部血流[7]、促进血管生成及组织修复的潜力[8]，从而为糖尿病足溃疡提供了一种新的治疗途径[9]。通过机械牵拉骨段，胫骨横向骨搬移术能够刺激局部血管内皮细胞增殖，促进新生血管的形成，进而改善创面区域的血液供应，从而加速创面愈合[10]。尤其对那些因糖尿病导致的血供不足和组织修复缓慢的患者，提供了一个新的治疗策略。
近年来，环状RNA因在基因调控中的独特作用引起广泛关注。环状RNA具有稳定性高、功能多样等特点，可以通过调控基因表达、细胞信号传导等途径参与创面修复的多种过程[11]。已有研究表明，环状RNA在血管生成、成纤维细胞增殖、免疫调控等方面具有重要作用[12-15]，但它在胫骨横向骨搬移促进糖尿病足溃疡修复中的具体作用仍未明晰[16-18]。因此，探讨环状RNA在胫骨横向骨搬移术促进糖尿病足溃疡愈合中的作用机制，可能为糖尿病足溃疡的临床治疗提供新的分子靶点[19-21]。
虽然已有研究表明胫骨横向骨搬移在糖尿病足溃疡治疗中具有积极作用，但具体机制尚不明确。为进一步探索其中机制[22-25]，该实验构建兔糖尿病足溃疡模型，模拟胫骨横向骨搬移手术干预，系统评估其对溃疡创面修复的作用，进一步收集术后各时段静脉血行基因测序分析环状RNA的差异表达，深入探讨胫骨横向骨搬移对糖尿病足溃疡修复的作用机制。研究结果不仅有助于理解胫骨横向骨搬移在糖尿病足溃疡治疗中的作用，也为糖尿病足溃疡的分子靶向治疗提供新的思路和理论依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。
1.2 时间及地点实验于2024年2-10月在遵义市第一人民医院(遵义医科大学第三附属医院)中心实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物雄性3月龄新西兰大白兔18只，体质量2.8-3.6 kg，购自贵州亿科达生物科技有限公司，动物使用许可证号：SCXK(黔)2021-0001，饲养于遵义医科大学第三附属医院中心动物饲养室。实验环境温度22-24 ℃，湿度50%-60%，12 h昼夜交替的光照周期，配备自动饮水及自动排便冲水槽。
实验方案经遵义市第一人民医院伦理委员会批准，编号：伦审(2024)-2-748号。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
1.3.2 主要材料与试剂 ①材料：改良兔横向骨搬移支架(铝合金)，1.2 mm×150 mm、1.5 mm×150 mm螺纹克氏针(苏州润辉科技)，M3内六角机米螺丝、M3沉头螺丝(深圳市乐售工品科技有限公司)，锂电电磨机(上海美耐特清攀实业有限公司)，22 mm圆锯片(浙江省金华市首力公司)，美国BD PAXgene全血RNA静脉真空采血管。②试剂：四氧嘧啶(北京百奥莱科技有限公司)，碘海醇注射液(江苏省泰州市扬子江药业集团有限公司)，盐酸赛拉嗪注射液(敦化圣达动物药品有限公司)，甘舒霖R(吉林深通化东宝药业股份有限公司)，血管内皮生长因子A、CD31、GAPDH、三色预染蛋白质Marker购自武汉三鹰生物技术有限公司，10%聚丙烯酰胺彩色凝胶超快速配制试剂盒(上海雅酶)，聚偏二氟乙烯膜(美国密理博公司Millipore)，无蛋白快速封闭液、含Tween 20的Tris缓冲盐溶液、BCA蛋白定量检测试剂盒(北京索莱宝技术有限公司)，ELISA试剂盒(江莱生物)，基因测序来自数谱(上海)生物科技有限公司。
1.4 实验方法
1.4.1 2型糖尿病兔模型建立将18只雄性新西兰兔每笼1只单笼饲养，按每只250 g/d给予自制高糖高脂饲料(10%糖、10%猪油、80%基础饲料)喂养1个月，自由饮水；造模前禁食12 h，予以现配5%四氧嘧啶稀释液以150 mg/kg耳缘静脉注射，监测注射后7 d血糖，空腹血糖≥16.7 mmol/L证实2型糖尿病兔模型建立成功。选取16只成功建模的糖尿病兔，随机均分为空白组、换药组、假手术组和手术组，每组4只，均进行糖尿病足溃疡建模，空白组建模后不进行任何额外处理；换药组建模后常规碘伏消毒，每2 d换1次，共21 d；假手术组建模后安装胫骨横向骨搬移术支架但不进行骨搬移；手术组建模后安装胫骨横向骨搬移术支架并进行骨搬移。
1.4.2 糖尿病足溃疡模型建立将盐酸赛拉嗪注射液以0.2 mL/kg的剂量通过腰大肌肌内注射，待麻醉生效后开始备皮，在腹中线右侧约3 cm处结扎右侧股动脉，模拟糖尿病足患者下肢缺血的状态。然后，切除右足背约3 cm×2 cm的全层皮肤，模拟糖尿病足溃疡创面。
1.4.3 胫骨横向骨搬移支架安装和骨搬移

改良胫骨横向骨搬移支架：首先使用铝合金材料，按比例缩小胫骨横向骨搬移支架，使其大小与实验兔适配，体外模拟胫骨横向骨搬移安装过程，更直观地观察支架工作原理及工作状态，见图1。

胫骨横向骨搬移支架安装：在右胫骨平台内侧下方，采用手术刀切开一条长约4 cm、宽约3 cm的弧形切口，切开肌肉，使用骨膜剥离器剥离骨膜，使用微型电钻安装1.2 mm螺纹克氏针，沿胫骨纵向中线走向开设2个约10 mm间距的针道，用于连接下层骨搬移支架并固定搬移骨块。取出1.2 mm螺纹克氏针，换上1.5 mm螺纹克氏针，沿原针道外侧约10 mm的位置，再次开设2个新针孔，用于连接上层骨搬移支架，固定下层支架与骨搬移装置，接下来使用22 mm圆锯片，以内侧2个针孔为中心，锯出一块长约20 mm、宽约10 mm的矩形骨块。将2根1.2 mm螺纹克氏针穿透皮肤，固定于骨块上，1.5 mm螺纹克氏针则穿透皮肤固定于外侧2个针道。安装上下层骨搬移支架，确保层距约5 mm，用内六角扳手拧紧机米螺丝，固定4根螺纹克氏针，最后用丝线缝合皮肤。

骨搬移：术后1周，手术组开始向外侧搬移骨块和向回搬移骨块各1周时间，每日3圈，约0.025 cm×3=0.075 cm，搬移出和搬移回的最后一日为2圈，0.025 cm×2=0.05 cm，见图2。

术后处理：术后当天予以青霉素口服，普通饲料喂养，自由饮水，除换药组定期更换敷料外，其余组敷料污染时予以更换。
1.5 主要观察指标
1.5.1 双下肢动脉CT血管造影、X射线片检查手术组实验兔糖尿病足溃疡建模术后3 d肌肉注射盐酸塞拉嗪注射液，静脉缓慢推注碘海醇，完成下肢动脉CT血管造影检查及X射线片检查。
1.5.2 创面观察及病理学检查拍照记录术后0，7，14 d各组创面变化情况。术后14 d取各组溃疡创面组织行苏木精-伊红染色、CD31免疫荧光染色。
1.5.3 Western blot 检测血管内皮生长因子A、CD31蛋白表达取术后14 d各组溃疡组织，加入RIPA裂解液，12 000×g离心15 min，取上清，采用BCA定量试剂盒进行蛋白定量，调齐蛋白浓度，100 ℃ 10 min煮沸变性，放于-80 ℃保存。取100 μg蛋白进行电泳，湿转膜，封闭液封闭1 h，分别用血管内皮生长因子A、CD31抗体以及GAPDH抗体[血管内皮生长因子A(1∶2 000)；CD31(1∶5 000)；GAPDH (1∶7 000)]在4 ℃孵育过夜，含Tween 20的Tris缓冲盐溶液清洗3次，每次10 min，室温孵育二抗(1∶3 000)1 h，清洗3次，化学发光法显色。使用凝胶成像仪对蛋白条带进行拍照，Image J 软件分析计算蛋白相对表达水平。
1.5.4 ELISA 检测血管内皮生长因子A、CD31水平采集各组术后7，14，21 d兔静脉血，装入2.5 mL EP管内室温静置20 min，4 ℃、3 000 r/min离心20 min，收集上清液，放入-80 ℃冰箱冻存，所有标本齐集后采用ELISA检测血管内皮生长因子A、CD31水平。
1.5.5 高通量测序用BD PAXgene全血RNA采血管采集手术组术后7，14，21 d全血标本，放入-80 ℃冰箱冻存，行全序列基因测序检测。提取的总RNA样品，经琼脂糖电泳和Nanodrop质检、定量后，用 oligo(dT)磁珠富集mRNA(若RNA为降解样品或为原核样品则直接用rRNA去除试剂盒进行处理)；RNA 测序文库都由试剂盒完成，包括RNA片段化后用随机引物反转生成第一链cDNA，加入dUTP合成第二链cDNA，双链cDNA末端修复加A后连接Tllumina匹配接头，PCR扩增得到最终文库；构建好的文库用 Agilent 2100 进行质检，并由qPCR方法进行文库定量，使用Illumina NovaSeq 6000测序仪进行测序。
1.6 统计学分析使用SPSS 29.0软件进行统计学分析。计量资料以x±s表示，组间比较使用单因素方差分析(ANOVA)，若数据符合正态分布且方差齐性，进一步采用事后检验(如Tukey检验)对组间差异进行多重比较。对于不符合正态分布的数据，采用非参数检验进行组间比较。P < 0.05为差异有显著性意义。所有数据均为至少3次重复实验的平均值。所有数据的质量和统计分析均由生物统计学专家审核，确保方法、结果的准确性和可靠性。

讨论

糖尿病足溃疡是糖尿病患者常见且严重的并发症之一，通常伴随血管损伤、神经病变和免疫功能异常，患者生活质量明显下降且有截肢风险。随着全球糖尿病患者数量的增加，糖尿病足溃疡的治疗成为一项亟待解决的临床难题。现有的治疗方法，如药物治疗、物理治疗和传统外科手术，在改善溃疡愈合方面成效有限，尤其是对于血供不足、难以愈合的糖尿病足溃疡患者，治疗效果往往不理想[26-27]。因此，探索新的治疗策略，尤其是能够改善局部血流和促进创面修复的治疗方法，成为了当前研究的热点。
胫骨横向骨搬移术作为一种治疗方法已被证实对糖尿病足溃疡具有显著的治疗效果[28-29]，通过建立兔糖尿病足溃疡模型，模拟胫骨横向骨搬移治疗过程，探索该方法在促进溃疡愈合中的作用机制[30]。实验结果表明，胫骨横向骨搬移不仅能有效促进血管生成，还能加速溃疡创面愈合，并通过分子通路调控关键的环状RNA表达，为糖尿病足溃疡的临床治疗提供了新的理论依据。
3.1 胫骨横向骨搬移术在糖尿病足溃疡治疗中的作用糖尿病足溃疡的形成通常与局部血液循环障碍密切相关。胫骨横向骨搬移术通过调整胫骨与软组织的相对位置，改善局部血液循环，进而增强氧气和营养物质的供给，促进创面修复。研究结果显示，手术组术后创面恢复速度明显优于空白组、换药组和假手术组，这一现象与血管生成的增强密切相关。通过X射线片和CT血管造影检查，术后血管生成情况明显改善，提示胫骨横向骨搬移术能够有效改善下肢血管结构，促进新生血管的形成，为溃疡愈合提供了更好的微环境。
Western blot检测结果显示，手术组血管内皮生长因子A和CD31蛋白表达显著上调，表明胫骨横向骨搬移术通过促进血管生成加速创面愈合，进一步验证了胫骨横向骨搬移术通过改善局部血流供应和血管生成的机制，能够有效促进糖尿病足溃疡创面愈合。
ELISA检测结果显示，术后7，14，21 d手术组血清中血管内皮生长因子A和CD31水平显著高于其他组。这一结果进一步证实了Western blot分析的结论，表明胫骨横向骨搬移术通过增强血管内皮生长因子A和CD31的表达，促进创面愈合。
苏木精-伊红染色结果显示，手术组创面愈合明显优于其他组，创面几乎完全愈合，表皮修复完整，胶原纤维沉积丰富，这表明胫骨横向骨搬移术能够通过改善创面局部血供、促进血管生成和细胞增殖，加速创面愈合。
免疫荧光结果显示，手术组创面内的血管生成显著高于其他组，CD31的荧光染色强度最为明显。这一结果表明胫骨横向骨搬移术通过促进新生血管的形成，显著改善了创面的血供，进而加速了创面的愈合。
基因测序分析揭示了手术各时段RNA表达的变化，尤其是环状RNA的表达发生了显著变化。环状RNA作为一种新型的基因调控分子，其在创面愈合过程中的作用仍在研究中。尽管环状RNA在创面修复中的作用尚不完全明确，但其作为潜在治疗靶点的可能性为未来的研究开辟了新方向。
3.2 环状RNA在创面愈合中的潜在作用近年来，环状RNA作为一种新型的非编码RNA，因其环状结构的稳定性和广泛的生物学功能而受到研究者的广泛关注。已有研究表明，环状RNA在伤口愈合、组织修复和血管生成等过程中发挥重要作用[31]。通过基因测序和差异分析，发现术后不同时间点环状RNA表达发生显著变化，尤其是与血管生成和创面愈合密切相关的环状RNA(如姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B)在术后21 d下调，提示环状RNA可能通过调控血管生成及其他修复性通路，促进糖尿病足溃疡愈合。
环状RNA姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B在术后21 d表达量下降，与创面愈合的速度密切相关，该环状RNA表达下调可能与其在内皮细胞增殖、迁移以及新生血管形成过程中的作用有关。研究表明，环状RNA通过与miRNA竞争结合[32]，调控下游基因的表达，从而影响细胞行为[33]。环状RNA姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B可能通过这种机制，调节血管生成相关基因的表达，进一步促进糖尿病足溃疡创面愈合[34]。
3.3 研究的局限性与未来展望尽管研究提供了胫骨横向骨搬移在糖尿病足溃疡治疗中的潜在应用前景，但仍存在一些局限性。首先，实验采用的是兔糖尿病足溃疡模型，虽然该模型在模拟糖尿病足溃疡的病理过程中具有一定的参考价值，但与人类临床情况仍存在一定差距。因此，未来的研究应进一步验证胫骨横向骨搬移手术在临床糖尿病足溃疡患者中的治疗效果。此外，环状RNA在伤口愈合中的具体机制仍不完全明了，未来应深入探讨环状RNA如何通过调控不同的信号通路来促进创面
修复。
未来的研究可以从以下方面进一步探索：①分子机制研究：深入研究环状RNA在糖尿病足溃疡创面愈合中的具体作用，探索其如何通过调节血管生成及其他修复性通路，进一步推动创面愈合；②与新型治疗方法的结合：考虑将胫骨横向骨搬移手术与其他治疗方法(如局部药物治疗、干细胞疗法等)相结合，以期进一步提高治疗效果，缩短糖尿病足溃疡的治疗周期。
综上，胫骨横向骨搬移通过改善局部血流，促进血管生成，显著加速糖尿病足溃疡的愈合。基因测序结果揭示环状RNA在创面愈合中的潜在作用，环状RNA姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B可以通过募集异质核糖核蛋白L稳定Runt相关转录因子1和锌指蛋白24表达来抑制新生血管生成，阻碍创面组织的修复，手术降低了环状RNA姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B的表达，从而加速了创面组织修复。靶向环状RNA姐妹染色体过早分离基因5黏附相关因子B可能通过调控血管内皮生长因子A通路介导胫骨横向骨搬移的促愈合作用，未来研究可进一步探讨环状RNA的分子机制，为糖尿病足溃疡的治疗提供新的靶向干预策略。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

胫骨横向骨搬移加速2型糖尿病模型兔足溃疡愈合：环状RNA的参与和调控

Transverse tibial bone transfer accelerates healing of foot ulcers in a rabbit model of type 2 diabetes mellitus: involvement and regulation of circular RNA

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