不同浓度金诺芬抑制M1型巨噬细胞功能及修复糖尿病小鼠伤口的价值

doi:10.12307/2026.555

中国组织工程研究 ›› 2026, Vol. 30 ›› Issue (6): 1390-1397.doi: 10.12307/2026.555

• 皮肤粘膜组织构建 skin and mucosal tissue construction • 上一篇下一篇

不同浓度金诺芬抑制M1型巨噬细胞功能及修复糖尿病小鼠伤口的价值

潘鸿飞1，庄圳冰1，徐白云1，杨章阳1，林恺瑞1，詹冰晴1，蓝靖涵1，高恒1，张南波1，林家煜2

1福建医科大学，福建省福州市 350000；2福建医科大学附属第二医院内分泌科，福建省泉州市 362000

收稿日期:2024-11-01 接受日期:2025-01-20 出版日期:2026-02-28 发布日期:2025-07-14
通讯作者: 林家煜，博士，副主任医师，福建医科大学附属第二医院内分泌科，福建省泉州市 362000
作者简介:潘鸿飞，男，2003年生，福建省平潭综合实验区人，汉族，福建医科大学本科在读。共同第一作者：庄圳冰，女，2003年生，福建省泉州市人，汉族，福建医科大学本科在读。
基金资助:
福建省自然科学基金项目(2023J01739)，项目负责人：林家煜；2022级临床医学专业(“5+3”一体化)“专题科研训练”项目(05300419)，项目负责人：潘鸿飞

Inhibitory effects of different concentrations of auranofin on M1 macrophage function and its therapeutic potential in diabetic wound healing

Pan Hongfei1, Zhuang Zhenbing1, Xu Baiyun1, Yang Zhangyang1, Lin Kairui1, Zhan Bingqing1, Lan Jinghan1, Gao Heng1, Zhang Nanbo1, #br# Lin Jiayu2#br#

1Fujian Medical University, Fuzhou 350000, Fujian Province, China; 2Department of Endocrinology, The Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Quanzhou 362000, Fujian Province, China

Received:2024-11-01 Accepted:2025-01-20 Online:2026-02-28 Published:2025-07-14
Contact: Lin Jiayu, MD, Associate chief physician, Department of Endocrinology, The Second Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Quanzhou 362000, Fujian Province, China
About author:Pan Hongfei, Fujian Medical University, Fuzhou 350000, Fujian Province, China Zhuang Zhenbing, Fujian Medical University, Fuzhou 350000, Fujian Province, China Pan Hongfei and Zhuang Zhenbing contributed equally to this work.
Supported by:
Fujian Provincial Natural Science Foundation, No. 2023J01739 (to LJY); “Thematic Research Training” Project of Class 2022 Clinical Medicine (“5+3” Integration), No. 05300419 (to PHF)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
金诺芬：是一种有机金化合物，具有抗炎和免疫调节作用。
M1型巨噬细胞：是巨噬细胞的一种极化状态，以分泌促炎细胞因子为特征。在糖尿病伤口愈合过程中，M1型巨噬细胞的持续激活会加剧局部炎症反应，导致伤口延迟愈合。

背景：在糖尿病伤口愈合过程中，M1型巨噬细胞的持续激活加剧了炎症反应，阻碍了伤口愈合。金诺芬作为一种具有抗炎特性的药物，对M1型巨噬细胞的影响及在糖尿病伤口愈合中的潜在作用尚未明确。
目的：探讨不同浓度金诺芬对M1型巨噬细胞生物学功能的影响，并评估金诺芬在糖尿病伤口愈合中的潜在应用价值。
方法：以RAW264.7细胞、THP-1细胞作为研究对象，通过不同浓度的干扰素γ和脂多糖诱导M1型极化。然后，使用1，2 μmol/L金诺芬处理M1型巨噬细胞，采用CCK-8法评估金诺芬对细胞活力的影响，采用qPCR检测白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α mRNA表达，ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平，Western blot检测NF-κB(p65)及磷酸化MAPK(p-MAPK)和总MAPK的蛋白表达。此外，选取6-8周龄雄性C57BL/6J小鼠及db/db糖尿病小鼠，分为C57对照组、db/db对照组和金诺芬治疗组，每组6只，进行背部皮肤缺损造模及腹腔注射金诺芬治疗，观察小鼠伤口愈合情况。
结果与结论：①细胞实验显示，干扰素γ(10 ng/mL)与脂多糖(100 ng/mL)联合处理能显著诱导RAW264.7细胞、THP-1细胞的M1型极化，表现为白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α mRNA表达显著升高；金诺芬(1，2 μmol/L)处理后，细胞中炎症因子mRNA表达降低，细胞上清液中炎症因子分泌减少；②金诺芬显著抑制了NF-κB(p65)和p-MAPK信号通路的激活；③动物实验中，金诺芬促进了db/db小鼠伤口的愈合。结果表明，金诺芬具有良好的抗炎作用并可促进糖尿病小鼠伤口的愈合。
https://orcid.org/0000-0002-7537-5275(林家煜)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 金诺芬, M1型巨噬细胞, 糖尿病, 皮肤缺损, 炎症因子, 伤口愈合, 工程化组织构建

Abstract: BACKGROUND: During diabetic wound healing, the sustained activation of M1 macrophages exacerbates the inflammatory response and hinders wound repair. Auranofin, an anti-inflammatory drug, has not been clearly studied for its effects on M1 macrophages and its potential role in diabetic wound healing.
OBJECTIVE: To investigate the effects of different concentrations of auranofin on the biological function of M1 macrophages and evaluate its potential application in diabetic wound healing.
METHODS: RAW264.7 and THP-1 cells were used as research models. M1 polarization was induced using different concentrations of interferon-γ and lipopolysaccharide. M1 macrophages were treated with 1 and 2 μmol/L auranofin. Cell counting kit-8 assay was used to evaluate the effect of auranofin on cell viability. Quantitative real-time PCR was performed to detect mRNA expression of interleukin-1β, interleukin-6, and tumor necrosis factor-α. ELISA was employed to measure the levels of interleukin-1β, interleukin-6, and tumor necrosis factor-α in the supernatant. Western blot analysis was used to assess the expression of nuclear factor-κB (p65), phosphorylated mitogen-activated protein kinases (MAPK), and total MAPK proteins. Additionally, 6-8-week-old male C57BL/6J and db/db diabetic mice were used for wound healing experiments, with the mice divided into C57 control, db/db control and auranofin treatment groups, each containing six animals. Dorsal skin defect modeling and treatment with intraperitoneal injection of auranofin were performed to observe wound healing in mice.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Cell experiments showed that co-treatment with interferon-γ (10 ng/mL) and lipopolysaccharide (100 ng/mL) significantly induced M1 polarization in RAW264.7 and THP-1 cells, resulting in increased mRNA expression of interleukin-1β, interleukin-6, and tumor necrosis factor-α. Treatment with auranofin (1 and 2 μmol/L) reduced the mRNA expression of these inflammatory factors in the cells and inhibited the secretion of inflammatory factors in the cell supernatant. (2) Auranofin treatment significantly suppressed the activation of nuclear factor-κB (p65) and phosphorylated MAPK signaling pathways. (3) Animal experiments showed that auranofin promoted wound healing in db/db diabetic mice, suggesting that auranofin has strong anti-inflammatory effects and may facilitate the healing of wounds in diabetic mice.

Key words: auranofin, M1 Macrophages, diabetes mellitus, skin defects, inflammatory factors, wound healing, engineered tissue construction

中图分类号:

潘鸿飞, 庄圳冰, 徐白云, 杨章阳, 林恺瑞, 詹冰晴, 蓝靖涵, 高恒, 张南波, 林家煜. 不同浓度金诺芬抑制M1型巨噬细胞功能及修复糖尿病小鼠伤口的价值[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1390-1397.

Pan Hongfei, Zhuang Zhenbing, Xu Baiyun, Yang Zhangyang, Lin Kairui, Zhan Bingqing, Lan Jinghan, Gao Heng, Zhang Nanbo, Lin Jiayu. Inhibitory effects of different concentrations of auranofin on M1 macrophage function and its therapeutic potential in diabetic wound healing [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2026, 30(6): 1390-1397.

图/表（结果） 5

2.1 细胞存活率对于M1型极化的RAW 264.7细胞(图1A)，金诺芬在浓度为0.000 1-1 μmol/L时，细胞活力保持接近100%，表明金诺芬在这一浓度范围内对细胞活力影响较小。当金诺芬浓度超过1 μmol/L时，细胞活力开始显著下降，尤其在10 μmol/L及以上浓度，抑制效果明显，呈剂量依赖性。对于M1型极化的THP-1细胞(图1B)，低浓度金诺芬处理后细胞活力维持较高水平，随着浓度增加，细胞活力逐渐下降，10 μmol/L及以上浓度时，细胞活力显著降低，趋势与M1型极化的RAW 264.7细胞类似。金诺芬对M1型极化的RAW 264.7和THP-1细胞系均表现出剂量依赖性的抑制作用，且在高浓度时对细胞活力有显著的抑制效果，后续细胞实验选择1 μmol/L和2 μmol/L金诺芬进行干预。
2.2 金诺芬抑制M1型巨噬细胞炎症因子表达干扰素γ(10 ng/mL)与脂多糖(100 ng/mL)联合使用显著促进了两种巨噬细胞向M1型极化，表现为炎症因子mRNA表达显著增强(图2)。在此基础上，对M1型极化的RAW264.7细胞、THP-1细胞进行不同浓度金诺芬(1，2 μmol/L)处理24 h，结果显示金诺芬能显著抑制M1型巨噬细胞中炎症因子mRNA表达(图3)。
通过ELISA检测细胞培养上清液中白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平，结果显示，在M1状态下，这些炎症因子的水平显著高于M0状态，表明M1型巨噬细胞具有更高的炎症活性。金诺芬在1 μmol/L和2 μmol/L浓度下，能够显著降低M1型极化的RAW264.7细胞、THP-1细胞中炎症因子水平，见图4。
2.3 金诺芬对M1型极化的RAW264.7和THP-1细胞中NF-κB(p65)、p-MAPK和总MAPK蛋白表达的影响诱导的M1型巨噬细胞中，NF-κB和p-MAPK蛋白表达水平升高。金诺芬处理后，NF-κB(p65)和p-MAPK蛋白表达下降，见图5，提示金诺芬可能是通过抑制NF-κB以及MAPK信号通路，调节M1型巨噬细胞中白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α免疫因子分泌。
2.4 各组小鼠背部创面愈合情况图6A为小鼠背部皮肤创面大体图像，在创伤后第3-7天，金诺芬治疗组的创面面积较db/db对照组显著缩小。图6B显示3组小鼠在饲养期间的体质量差异无显著性意义，表明在此浓度下金诺芬对小鼠没有明显毒性。

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引言

糖尿病足溃疡是糖尿病最为常见的并发症之一[1]，主要特征是局部的慢性炎症和愈合过程的延迟。糖尿病足溃疡的发生涉及多个病理生理过程，其中炎症反应是伤口愈合过程中的主要障碍。具体而言，炎症在糖尿病足溃疡中的作用主要体现在以下几个方面：①炎症反应的持续性：糖尿病患者常常处于慢性高血糖状态，这种代谢紊乱会导致多种炎症因子的持续释放，包括肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6等[2-5]，通过激活炎症信号通路，在局部组织中引发炎症反应，抑制伤口的正常愈合过程，并可能导致伤口的进一步恶化[6-8]。②巨噬细胞的功能失调：在糖尿病足溃疡中，巨噬细胞的极化状态发生异常，尤其是向促炎的M1型极化倾斜[9-10]。巨噬细胞作为重要的免疫细胞，能够根据微环境变化极化为不同亚型。在伤口愈合的初始阶段，M1型巨噬细胞首先被激活并募集到伤口处，分泌大量促炎因子，如干扰素γ、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6以及一氧化氮，以激活先天性免疫反应，帮助清除伤口中的病原体及细胞碎片[11-12]。随着愈合进程的推进，M2型巨噬细胞逐渐占据主导地位。M2型巨噬细胞因抗炎作用而著称，能够通过下调炎症因子(如肿瘤坏死因子α、白细胞介素12和白细胞介素8等)的表达，以及上调抗炎因子的表达，有效减轻炎症并促进伤口愈合[13]。在高血糖环境下，巨噬细胞倾向于向M1型极化，还会抑制M1型巨噬细胞向M2型的正常转化[14]，这种M1型巨噬细胞的持续激活加剧了局部炎症反应，进一步影响愈合过程。相对缺乏的M2型巨噬细胞使得抗炎和修复机制受到抑制，导致组织重塑和愈合延迟[15-16]。③组织修复受限：长期的炎症反应不仅导致局部组织损伤，还会抑制重要愈合细胞如成纤维细胞和角质形成细胞的功能，严重影响伤口的修复进程[17]。④感染风险的增加：糖尿病患者常常面临较高的感染风险，特别是在糖尿病足溃疡中，高血糖环境为细菌的繁殖提供了理想条件，感染加剧了局部炎症反应，形成了复杂的临床表现。感染不仅阻碍了愈合过程，还可能导致更加严重的并发症，如广泛的组织坏死，甚至需要进行截肢手术。抗感染治疗、严格控制血糖水平、调节巨噬细胞极化状态成为糖尿病足溃疡管理的关键因素[18-20]。
作为一种已知的抗风湿药物，金诺芬具有显著的抗炎和免疫调节作用[21]。越来越多的研究表明，金诺芬不仅能够抑制局部炎症，还可能通过调节细胞信号通路和代谢状态来促进细胞功能的恢复，尤其是在生物材料和医学植入物的应用中发挥了重要作用[22-23]。LIU等[22]通过聚氨基甲酸酯材料负载金诺芬药物制备的血管内导管涂层，在抗菌和抗生物膜性能上表现优异，能够显著抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生长和生物膜形成，可用于预防血管内导管相关血流感染。此外，金诺芬和固醇辅酶A去饱和酶1抑制剂共同包裹在含硝基咪唑的胶束中，为管理难以治疗的卵巢癌开辟了新的途径[23]。金诺芬作为免疫调节剂，在促进组织再生、减少炎症反应及增强细胞功能方面具有巨大的潜力。金诺芬通过激活丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPK)和抑制核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)等信号通路，阻止促炎性细胞因子的表达和释放[24-29]，它还通过抑制硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase，TrxR)及硒蛋白的合成，进一步减少慢性炎症并防止与炎症相关的组织损伤[30]，为慢性炎症的治疗提供了新的思路。然而，目前关于金诺芬对M1型巨噬细胞功能及在糖尿病伤口愈合中的作用仍缺乏系统性研究。
该研究旨在探讨不同浓度金诺芬对M1型巨噬细胞生物学功能的影响，并进一步评估金诺芬在糖尿病小鼠伤口愈合中的潜在作用，为金诺芬在糖尿病并发症管理中的临床应用提供新的实验基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计体外细胞实验与体内动物实验。
1.2 时间及地点实验于 2024年1-10月在福建省泉州医学高等专科学校动物实验中心完成。
1.3 材料
1.3.1 细胞、药物及动物 RAW264.7细胞系购自中源生物，是一种小鼠来源的巨噬细胞系，经STR鉴定。THP-1细胞系购自ATCC(美国细胞库)，是一种人源的急性单核细胞白血病细胞系。金诺芬购自MCE公司，纯度大于98%。金诺芬以二甲基亚砜作为溶剂，按照实验所需浓度稀释后，分装保存于-20 ℃冰箱中以保持其稳定性。
6-8周龄雄性db/db小鼠(糖尿病小鼠)(12只)、C57BL/6J小鼠(6只)购自北京维通利华公司，实验动物机构许可证号：SCXK(京)2024-0001，体质量23-25 g。小鼠在标准动物实验室环境中饲养，环境条件为：温度(22±2) ℃，湿度50%-60%，12 h/12 h光暗循环。实验方案经福建医科大学附属第二医院动物实验伦理委员会批准，审批号为2022331。
1.3.2 实验试剂干扰素γ购自MCE公司，纯度不低于98%，以PBS作为溶剂，分装后保存于-20 ℃冰箱中；脂多糖购自兰博利德公司，作为细菌内毒素的来源，以完全培养基作为溶剂，分装后保存于-20 ℃冰箱中；佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA)购自索莱宝；DMEM细胞培养基、RPMI-1640细胞培养基购自华大基因(深圳，中国)；1%青霉素/链霉素购自美仑生物；体积分数10%胎牛血清购自普诺赛；白细胞介素1β、白细胞介素6及肿瘤坏死因子α的引物序列购自上海生物科技生物工程有限公司，用于后续的实时定量PCR实验；NF-κB抗体(#8242)、磷酸化MAPK(p-MAPK)抗体(#4511)和MAPK抗体(#8690) 购自Cell Signaling Technology(CST)，稀释比例均为1∶1 000；内参β-actin抗体(AB0035)购自Abway公司，稀释比例为1∶5 000。
1.4 实验方法
1.4.1 细胞实验
(1)培养条件：①RAW264.7细胞接种于含1%青霉素/链霉素和体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基中，在37 ℃、体积分数5% CO₂培养箱培养，以维持细胞的生长和活力，每两三天定期更换培养基，以去除细胞代谢产物，确保培养环境的稳定。同时，为避免细胞过度融合，采用胰蛋白酶消化法进行细胞传代，具体操作为：在细胞生长至80%汇合度时，加入胰蛋白酶消化液，轻轻摇晃以分离细胞，待细胞完全脱落后，加入DMEM培养基终止消化，离心收集细胞，置于37 ℃、体积分数5% CO₂培养箱中，细胞在对数生长期时进行实验。②THP-1细胞接种于含1%青霉素/链霉素和体积分数10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，在37 ℃、体积分数5% CO₂培养箱培养。为了诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞，通常在细胞生长至80%汇合度时，加入100 nmol/L PMA处理24 h诱导为巨噬细胞(M0细胞)[31]，然后使用胰蛋白酶消化法传代，操作与RAW264.7细胞类似。
(2)巨噬细胞M1型极化诱导：将上述两种巨噬细胞以2×105个/孔密度接种于6孔板，待细胞贴壁后，使用不同质量浓度的干扰素γ(10，20 ng/mL)和脂多糖(100，200 ng/mL)，单独或联合处理24 h[32-33]。
分组设置为：未处理对照组、单独干扰素γ组(10，20 ng/mL)、单独脂多糖组(100 ng/mL)，干扰素γ(10 ng/mL)和脂多糖(100 ng/mL)联合处理组，干扰素γ(20 ng/mL)和脂多糖(200 ng/mL)联合处理组以诱导M1巨噬细胞极化。培养期间，定期观察细胞状态，记录处理前后细胞形态变化，包括细胞贴壁情况、形态特征(如细胞形状、大小等)，以评估不同方法处理对细胞状态的影响。通过qPCR检测炎症因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的mRNA表达。每组实验至少设置3次重复，以提高结果的可靠性。
(3)金诺芬对M1型巨噬细胞的抑制作用：采用CCK-8法评估细胞活力，将诱导后的M1型巨噬细胞以2 000个/孔密度接种于96孔板，第2天加入不同浓度金诺芬(0.000 012 5，0.000 125，0.001 25，0.012 5，0.125，0.25，0.5，1，1.6，2，4，8，16，32，64，128，160 μmol/L)处理24 h[34]，第3天用CCK-8检测细胞活力，以评估金诺芬对M1型巨噬细胞的抑制作用。每组实验至少设置3次重复，以提高结果的可靠性。处理结束后，收集细胞及上清液以进行后续分析。
(4)细胞分组及干预：将 RAW264.7细胞和THP-1细胞各设置4组，分别为未处理对照组(M0组)、M1型极化组(M1组)以及1，2 μmol/L金诺芬处理组。M1型极化组采用干扰素 γ(10 ng/mL)与脂多糖(100 ng/mL)联合处理 24 h；金诺芬处理组则在 M1型极化诱导的基础上，分别加入1，2 μmol/L金诺芬共同处理 24 h，以观察金诺芬对 M1型巨噬细胞炎症因子表达以及相关信号通路蛋白表达的影响。

(5)qPCR检测白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α mRNA表达：使用TRIzol法提取诱导后的M1型巨噬细胞总RNA，通过紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度，确保符合后续实验的要求。反转录反应使用随机引物，反应条件设置为42 ℃培养60 min，以合成cDNA。接下来，使用SYBR Green PCR Master Mix进行qPCR，循环条件设定为95 ℃预变性5 min，随后进行40个循环：95 ℃变性10 s，60 ℃退火和延伸34 s。实时荧光定量PCR使用特定的引物(白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α及内参基因GAPDH)进行扩增。相对表达量采用2-ΔΔCt法计算，以评估金诺芬对炎症因子表达的影响，见表1。

(6)ELISA法检测炎症因子水平：使用ELISA法检测上清液中白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平，根据试剂盒说明书操作。
(7)Western blot检测RAW264.7细胞中NF-κB(p65)、p-MAPK和总MAPK的蛋白表达：使用RIPA裂解液提取总蛋白，使用BCA法进行蛋白浓度测定。制备10% SDS-PAGE分离胶和5% SDS-PAGE浓缩胶。将等量的蛋白样品与4×上样缓冲液混合，煮沸5 min进行变性处理。然后，采用SDS-PAGE进行电泳分离，转膜至PVDF膜，使用5%脱脂牛奶(在TBST中)封闭1 h。接着，分别用一抗(p65、p-MAPK、MAPK)4℃孵育过夜，HRP标记二抗室温孵育1 h，用ECL显色试剂显色1 min，通过凝胶成像仪拍照并记录数据。
1.4.2 动物实验选择6-8周龄雄性C57BL/6J小鼠(6只)及雄性db/db小鼠(12只)，分为C57对照组、db/db对照组和金诺芬治疗组，每组6只。适应性饲养1周后，3组小鼠均需进行伤口造模。使用异氟烷气体麻醉小鼠，于背部进行脱毛处理，通过皮肤打孔器在脊柱左右侧背部分别进行10 mm直径打孔，打孔深度达到破坏肌肉层为止。在伤口造模后24 h开始干预，金诺芬治疗组小鼠腹腔注射金诺芬溶液(10 mg/kg，溶解方式是先用10%二甲基亚砜溶解后再加入90%玉米油，溶剂均为细胞无菌剂)[35]，C57对照组、db/db对照组小鼠则注射等体积的生理盐水。造模后每天称量小鼠的体质量，造模后第0，3，5，7天拍摄小鼠背部缺损皮肤愈合情况。
1.5 主要观察指标 ①采用CCK-8法评估细胞的存活率，以确定不同浓度金诺芬对细胞的毒性作用；②ELISA检测促炎因子白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α分泌量，评估金诺芬对炎症反应的调节作用；③Western blot检测NF-κB、MAPK相关信号通路的激活情况，进一步了解金诺芬在分子水平的作用机制；④RT-qPCR检测炎症相关基因白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α mRNA的表达；⑤通过拍照记录不同时间点(第0，3，5，7天)创面愈合情况，评估金诺芬对糖尿病模型小鼠伤口愈合的影响。
1.6 统计学分析采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析，使用GraphPad Prism 8.0作图。计量资料用x±s表示。组间比较采用独立样本t检验，多个组比较则采用单因素方差分析(ANOVA)。显著性水平设定为P < 0.05。文章统计学方法已经通过福建医科大学附属第二医院统计学专家审核。

讨论

慢性创面长期暴露于空气中，容易受到外部病原体的入侵，造成伤口感染。而糖尿病创面的高糖微环境被认为是细菌定植的最佳场所，持续的高血糖状态，导致晚期糖基化终产物在伤口处积累，干扰细胞的正常功能。巨噬细胞是免疫系统的关键细胞，根据其活化状态可分为M1型和M2型[36]。M1型巨噬细胞释放的炎症因子如肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6，虽然在感染防御中起到关键作用，但其过量释放会导致周围组织损伤，抑制成纤维细胞和角质形成细胞的功能，从而延缓伤口愈合[37]。因此，治疗糖尿病伤口时，控制M1型巨噬细胞的过度活化，促进组织修复和再生，是亟待解决的科学难题。
此研究结果表明，金诺芬能够显著抑制M1型巨噬细胞中炎症因子的分泌，且具有剂量依赖性。金诺芬通过下调白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α等炎症因子的mRNA和蛋白水平，抑制NF-κB和MAPK信号通路的激活，从而调节巨噬细胞的炎症反应，这一发现为理解金诺芬抗炎机制提供了重要线索。在糖尿病患者中，伤口愈合的过程常常受到炎症反应失调的影响，M1型巨噬细胞的过度激活与糖尿病伤口愈合延迟密切相关。金诺芬对M1型巨噬细胞的具体作用体现在显著的抗炎效果上，通过抑制M1型巨噬细胞中关键促炎细胞因子如肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6的表达，有助于减轻糖尿病伤口的炎症反应，促进伤口愈合。此外，金诺芬通过调节NF-κB和MAPK信号通路的激活，抑制炎症递质的产生[37-38]。金诺芬也可能影响巨噬细胞的代谢状态，促使M1型巨噬细胞转向更为“温和”的代谢状态，例如增强氧化磷酸化，减少M1型巨噬细胞的活化程度，从而降低炎症因子的表达[39]。动物实验结果表明，金诺芬治疗组在伤口愈合方面显著优于对照组，在实验的第3，5，7天，金诺芬治疗组小鼠伤口愈合程度逐步提高，伤口的收敛程度和愈合区域明显优于对照组，且无明显的炎症渗出和感染迹象，这一结果支持了金诺芬通过抑制M1型巨噬细胞的炎症反应，促进糖尿病创面愈合的假设。这些发现不仅揭示了金诺芬对M1型巨噬细胞的新作用机制，也为金诺芬在糖尿病伤口愈合和炎症性疾病管理中的潜在临床应用提供了科学依据。
与其他抗炎药物如非类固醇抗炎药相比，金诺芬的不良反应和安全性也是重要的研究方向。非类固醇抗炎药(如布洛芬、阿司匹林)通过抑制环氧合酶减少前列腺素的生成，从而缓解炎症。然而，非类固醇抗炎药的长期使用常常导致胃肠道刺激、出血风险增加以及肾功能损害等问题。相比之下，金诺芬作为一种非类固醇抗炎药，可能在不显著影响环氧合酶的情况下，通过其他信号通路抑制炎症，这种作用机制使得金诺芬在治疗急性和慢性炎症性疾病时，可能比传统的非类固醇抗炎药更具安全性和耐受性[40]。
尽管该研究取得了良好的初步成果，未来的研究仍需进一步验证金诺芬在临床中的应用效果，特别是剂量依赖性和长期疗效。通过更大规模的动物实验和临床试验，进一步确认金诺芬在糖尿病伤口愈合中的潜力。
综上，该研究揭示了金诺芬在糖尿病伤口愈合中的重要作用，特别是在调控M1型巨噬细胞炎症反应方面的创新机制。金诺芬显著抑制了M1型巨噬细胞中白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α等促炎细胞因子的表达，减轻了糖尿病创面的慢性炎症反应，从而有助于促进伤口愈合。动物实验结果进一步验证了金诺芬在糖尿病伤口愈合中的积极作用。此外，该研究还探讨了金诺芬通过调节NF-κB和MAPK信号通路，抑制过度炎症反应的分子机制，为金诺芬在炎症性疾病中的应用提供了新的思路。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

不同浓度金诺芬抑制M1型巨噬细胞功能及修复糖尿病小鼠伤口的价值

Inhibitory effects of different concentrations of auranofin on M1 macrophage function and its therapeutic potential in diabetic wound healing

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