青蒿琥酯改善软骨下骨破骨细胞介导的骨关节炎疼痛

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2672

中国组织工程研究 ›› 2020, Vol. 24 ›› Issue (17): 2636-2641.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2672

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青蒿琥酯改善软骨下骨破骨细胞介导的骨关节炎疼痛

沙力塔娜提·乌尔曼别克¹，李亦丞¹，任姜栋¹，马海蓉²，穆文博¹，曹力³

新疆医科大学第一附属医院，¹关节外科，²临床研究院，³骨科中心，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054

收稿日期:2019-10-08 修回日期:2019-10-10 接受日期:2019-11-25 出版日期:2020-06-18 发布日期:2020-03-28
通讯作者: 曹力，主任医师，教授，新疆医科大学第一附属医院骨科中心，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054
作者简介:沙力塔娜提•乌尔曼别克，女，1985年生，新疆维吾尔自治区阿勒泰地区吉木乃县人，哈萨克族，新疆医科大学在读硕士，主要从事骨与关节疾病研究。
基金资助:
国家自然科学基金联合基金重大专项(U1503221)；国家自然科学基金地区基金项目(81860746)

Artesunate relieves subchondral bone osteoclast-mediated osteoarthritis pain

Shalitanati·Wuermanbieke¹, Li Yicheng¹, Ren Jiangdong¹, Ma Hairong², Mu Wenbo¹, Cao Li³

¹Department of Joint Surgery, ²Clinical Medical School, ³Department of Orthopedics, First Affiliated Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China

Received:2019-10-08 Revised:2019-10-10 Accepted:2019-11-25 Online:2020-06-18 Published:2020-03-28
Contact: Cao Li, Chief physician, Professor, Department of Joint Surgery, First Affiliated Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
About author:Shalitanati•Wuermanbieke, Master candidate, Department of Joint Surgery, First Affiliated Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
Supported by:
the Joint Fund of the National Natural Science Foundation of China (Major Program), No. U1503221; the Regional Fund of the National Natural Science Foundation of China, No. 81860746

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

Netrin-1：发育中的轴突表现出朝向或远离外部引导线索的方向性偏向生长，Netrin-1是在脊椎动物中发现的第一个轴突导向分子，在4种经典的轴突导向家族蛋白(Netrins、Slits、Ephrins和Semaphorins)中，Netrin-1具有最强的化学引诱能力来促进轴突延伸，其对轴突导向、细胞迁移、形态发生和血管生成具有很强的趋化功能。

降钙素基因相关肽：是37个氨基酸神经肽，在外周和中枢神经系统中具有多种生物学功能，降钙素基因相关肽广泛分布于周围和中枢神经系统的伤害性途径中，其受体也在疼痛途径中表达，在40%-50%的背根神经节神经元中发现了降钙素基因相关肽样免疫反应(CGRP-LI)。

背景：研究表明，破骨细胞通过分泌netrin-1诱导软骨下骨的感觉神经异常长入，导致骨关节炎动物模型痛阈减低，由此推测抑制破骨细胞的骨吸收作用可缓解感觉神经介导的疼痛症状。

目的：探讨青蒿琥酯能否通过抑制软骨下骨破骨细胞活性进而减少感觉神经支配，为研究青蒿琥酯对骨关节炎镇痛提供实验依据。

方法：将C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组、安慰剂组和青蒿琥酯组，每组10只；假手术组仅切开小鼠右膝关节囊不损伤其他结构，术后无其他干预；其他2组通过右膝前十字韧带横断术构建骨关节炎模型，青蒿琥酯组术后给予腹腔内注射青蒿琥酯(每日100 mg/kg)，安慰剂组术后给予腹腔内注射相等体积的5%NaHCO₃。术后14 d进行足印迹分析，ELISA检测各组小鼠外周血血清TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平，取各组小鼠膝关节标本进行番红固绿染色及组织学评分、抗酒石酸酸性磷酸酶染色、netrin-1及CGRP免疫组化染色。

结果与结论：①右后爪同侧接触面积百分比：假手术组和青蒿琥酯组高于安慰剂组(P < 0.05)；假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P > 0.05)；②小鼠血清TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平组间差异均无显著性意义(P > 0.05)；③基于番红固绿染色的软骨组织学评分：假手术组和青蒿琥酯组低于安慰剂组(P < 0.05)，假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P > 0.05)；④抗酒石酸酸性磷酸酶染色：假手术组、青蒿琥酯组抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞量低于安慰剂组(P < 0.05)，假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P > 0.05)；⑤与安慰剂组相比，假手术组、青蒿琥酯组软骨下骨中netrin-1及CGRP阳性感觉神经减少(P < 0.05)，而这2项指标在青蒿琥酯组与假手术组之间差异无显著性意义(P > 0.05)；⑥结果表明，青蒿琥酯通过抑制软骨下骨破骨细胞分泌netrin-1改善了感觉神经介导的疼痛，具有可缓解骨关节炎疼痛的治疗潜力。

ORCID: 0000-0002-1569-7037(沙力塔娜提·乌尔曼别克)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 骨性关节炎, 青蒿琥酯, 破骨细胞, netrin-1, 软骨下骨, 疼痛, 降钙素基因相关肽

Abstract:

BACKGROUND: Studies have shown that osteoclasts induce aberrant in growth of sensory nerves into the subchondral bone by secreting netrin-1, resulting in a reduced pain threshold in an osteoarthritis animal model. Therefore, we assume that inhibition of osteoclasts can alleviate sensory nerve-mediated pain symptoms.

OBJECTIVE: To investigate whether artesunate inhibits subchondral bone osteoclasts and reduces sensory nerve-mediated pain, providing experimental data for the treatment of osteoarthritis pain using artesunate.

METHODS: C57BL/6J male mice were randomly assigned to a sham operation group, a placebo group and an artesunate group, with 10 mice per group. The mice in the sham operation group were only subjected to right knee capsulotomy with no damage to the other structures. Moreover, there was no intervention after operation. In the other two groups, the mice received an anterior cruciate ligament transection of the right knee to establish the osteoarthritis model, followed by treatment with artesunate (artesunate group, 100 mg/kg per day) or equivalent volume of 5% NaHCO₃ (placebo group) via intraperitoneal injection. Fourteen days after surgery, the footprint trial was performed, and the levels of tartrate-resistant acid phosphatase 5b (TRAcP5b), cathepsin K and carboxy-terminal telopeptide of type I collagen (CTX-I) in the peripheral blood were detected using ELISA. The knee joint specimens of each group were subjected to Safranin O-Fast Green staining, histological scoring, tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) staining and immunohistochemical staining with netrin-1 and calcitonin gene-related peptide (CGRP).

RESULTS AND CONCLUSION: The percentage of ipsilateral contact area of the right hindpaw in the footprint trial was significantly higher in the sham operation group and artesunate group than the placebo group (P < 0.05), but there was no significant difference between artesunate group and sham operation group (P > 0.05). No significant differences were observed in the serum levels of TRAcP5b, cathepsin K and CTX-I between the groups (P > 0.05). Based on the Safranin O-Fast Green staining, the cartilage histology score was significantly lower in the sham operation group and the artesunate group than the placebo group (P < 0.05), but there was no significant difference between artesunate group and sham operation group (P > 0.05). TRAP staining indicated that compared with the placebo group, the Trap⁺ osteoclasts were significantly lower in the sham operation group and the artesunate group (P < 0.05), but no significant difference was found between artesunate group and sham operation group (P > 0.05). Compared with the placebo group, the netrin-1⁺ and CGRP⁺ sensory nerves in the subchondral bone were significantly decreased in the sham operation group and the artesunate group (P < 0.05), but the two indices had no significant differences between artesunate group and sham operation group (P > 0.05). Our findings from this study indicate that artesunate improves sensory nerve-mediated pain by inhibiting netrin-1 secreted by subchondral bone osteoclasts, and has therapeutic potential to alleviate osteoarthritis pain.

Key words:

osteoarthritis, artesunate, osteoclast, netrin-1, subchondral bone, pain, calcitonin gene-related peptide

中图分类号:

沙力塔娜提•乌尔曼别克, 李亦丞, 任姜栋, 马海蓉, 穆文博, 曹力. 青蒿琥酯改善软骨下骨破骨细胞介导的骨关节炎疼痛[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(17): 2636-2641.

Shalitanati•Wuermanbieke, Li Yicheng, Ren Jiangdong, Ma Hairong, Mu Wenbo, Cao Li. Artesunate relieves subchondral bone osteoclast-mediated osteoarthritis pain[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2020, 24(17): 2636-2641.

图/表（结果） 6

2.1 实验动物数量分析实验选用健康C57BL/6J雄性小鼠30只，实验过程中无脱失，未出现感染迹象，全部进入结果分析。

2.2 足印迹实验假手术组右后爪同侧接触面积百分比高于安慰剂组，差异有显著性意义(P < 0.05)；而青蒿琥酯组右后爪同侧接触面积百分比同样高于安慰剂组，差异有显著性意义(P < 0.05)；假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P > 0.05)，见图1。

2.3 血清TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平术后 14 d，与假手术组相比，安慰剂组小鼠血清TRAcP5b、cathepsin K、CTX-Ⅰ水平有所升高，而青蒿琥酯抑制了这一升高趋势，但各组间差异均无显著性意义(P > 0.05)，见图2。

2.4 番红固绿染色及组织学评分与假手术组相比，安慰剂组小鼠关节软骨中蛋白聚糖明显减少(红染部分)，且软骨细胞排列紊乱，细胞肥大，OARSI-Modified Manking评分明显增加，差异有显著性意义(P < 0.05)；而青蒿琥酯组小鼠关节软骨中蛋白聚糖高于安慰剂组，且青蒿琥酯组OARSI-Modified Manking评分低于安慰剂组，差异有显著性意义(P < 0.05)；假手术组与青蒿琥酯组组织学评分之间差异无显著性意义(P > 0.05)，见图3。

2.5 抗酒石酸酸性磷酸酶染色结果术后14 d，与假手术组比较，软骨下骨抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞在安慰剂组中增加(P < 0.05)，而这一增加趋势在青蒿琥酯治疗组中被抑制，差异有显著性意义(P < 0.05)；假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P > 0.05)，见图4。

2.6 免疫组织化学染色结果 netrin-1在安慰剂组较其他2组高表达，且差异均有显著性意义(P < 0.05)，青蒿琥酯干预减少了软骨下骨中netrin-1的表达，而netrin-1在假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P > 0.05)，见图 5。安慰剂组小鼠软骨下骨表现出CGRP阳性感觉神经增加，与其他2组相比差异均有显著性意义(P < 0.05)。青蒿琥酯干预减缓了CGRP阳性感觉神经量升高的趋势，假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P > 0.05)，见图6。

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引言

疼痛是骨关节炎患者的主要主诉之一，在年龄大于60岁的男性和女性中分别有9.6%和18.0%的人患有症状性骨关节炎^[1]。目前尚无明确的干预措施能延缓骨关节炎病变进展，但疼痛管理是基本需求^[2]。临床用于骨关节炎疼痛管理的镇痛药和非类固醇类抗炎药存在镇痛作用不充分、效果不可持续和严重不良反应等问题^[3-4]，而关节腔注射药物和热疗、水疗、针灸、经皮神经电刺激等物理治疗，以及射频热凝术、缓解症状的慢作用药物等远期疗效不得而知^[4-11]。由此可见，寻求一种安全、有效的止痛治疗方式势在必行。

研究表明，软骨下骨的异常骨重塑是骨关节炎病理性结构特征之一^[12]，过度活化的破骨细胞参与了早期骨关节炎的异常骨重塑，而抑制破骨细胞活性可有效缓解软骨下骨病理变化，进而延缓关节软骨退变^[13]。临床研究及动物实验表明，软骨下破骨细胞活性在骨关节炎疼痛产生中发挥重要作用^[14-15]。最近一项研究证实，破骨细胞通过分泌netrin-1诱导软骨下骨的感觉神经轴突生长，并且介导骨关节炎的疼痛症状^[16]。

青蒿琥酯是青蒿素的半合成衍生物，是一种抗疟疾药物，由于其抗疟疾、抗氧化、抗炎等多种生物活性及药理安全性而受到了越来越多的关注^[17-18]。近期的体外研究发现青蒿琥酯具有抑制破骨细胞分化和功能的特性^[19]。基于以上研究结果，作者提出假设：青蒿琥酯能够通过抑制骨关节炎软骨下骨异常活跃的骨吸收而减低netrin-1的释放，进而缓解由骨关节炎软骨下骨引发的疼痛症状。该研究拟通过建立小鼠前十字韧带横断骨关节炎模型，初步探究青蒿琥酯能否通过抑制软骨下骨破骨细胞活性进而减少感觉神经支配，为研究青蒿琥酯对骨关节炎镇痛提供实验依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机分组对照动物实验。

1.2 时间及地点实验于2018年3月至2019年5月在新疆医科大学附属第一医院科技楼完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 SPF级C57BL/6J 雄性小鼠30只，12周龄，体质量23-28 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。所有程序及实验操作均得到新疆医科大学附属第一医院实验动物管理与使用伦理委员会的批准(审批号IACUC20171129-01)且符合要求。

1.3.2 实验药物及试剂 NaHCO₃(中国天津大茂化学试剂公司)；青蒿琥酯(中国天津万象恒远公司)；酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒：TRAcP5b(中国CUSABIO公司)、cathepsin K(中国CUSABIO公司)、CTX-Ⅰ(美国Gaithersburg Immunodiagnostic Systems公司)；抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)(美国Sigma-Aldrich公司)；netrin-1、降钙素基因相关肽(CGRP)一抗(英国Abcam公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 实验分组将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、安慰剂组及青蒿琥酯组，每组10只，骨关节炎模型是通过小鼠右膝前十字韧带横断术构建。假手术组打开右膝关节囊，暴露前十字韧带而不加以任何额外操作，随即给予缝合切口，术后无其他干预；安慰剂组及青蒿琥酯组构建前十字韧带横断骨关节炎模型：打开右膝关节囊，暴露前十字韧带后予以切断，切断韧带时注意不损伤周围组织，随即给予缝合切口。从手术后第2天开始，青蒿琥酯组小鼠腹腔内注射青蒿琥酯(每日100 mg/kg)，共给药14 d，安慰剂组小鼠腹腔内注射相等体积的安慰剂(5%NaHCO₃)。

1.4.2 足印迹实验术后14 d，在处死小鼠前，给小鼠前、后爪分别涂上棕黄色、藏青色染料，随后将小鼠放在实验跑道起始处，以所设终点为结点，获取跑道上小鼠的足印迹，每只小鼠记录5次。对足迹图进行扫描，并将其导入ImageJ软件，以分析爪子同侧接触面积，每次分析连续2步，最后计算右后爪同侧接触面积百分比，即右后爪接触面积相对于右前爪和后爪总接触面积的百分比。

1.4.3 酶联免疫吸附检测(ELISA)血清中TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平术后14 d，各组小鼠心脏穿刺抽血，采血量400 μL，以3 000 r/min离心10 min，取上清液分装于Eppendorf管并标记，保存于-80 ℃冰箱。按照试剂盒的标准化方案分别使用相应ELISA试剂盒测量小鼠血清中TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平。

1.4.4 番红固绿(Safranin O-Fast Green)染色及组织学评分术后14 d，处死各组小鼠并取小鼠右膝关节标本，对标本进行固定后依次进行脱钙、脱水、包埋等，制备切片(取膝关节内侧关节间隙的矢状位，层厚为4 μm)。番红固绿染色：切片脱蜡至水，依次浸泡于苏木精染液1 min，水洗，0.2%固绿染液5 min，1%醋酸10 s，0.1%番红染液5 min，水洗；梯度乙醇脱水，二甲苯透明；晾干后中性树胶封固，在光学显微镜下观察，采集图像，进行国际骨关节炎研究学会-改良Mankin评分(OARSI-Modified Mankin评分)^[20]。此评分系统用于评估关节软骨的破坏程度，根据评分标准量化关节软骨的磨损程度，破坏程度越高分数越高。

1.4.5 抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色将切片放入60 ℃烘箱烤片40 min，切片脱蜡至水，过乙醇，1×TBST洗3次(每次5 min)，切片放入1×TBST中放置37 ℃恒温箱内15 min(所用1×TBST提前在37 ℃恒温箱预热好)；按照抗酒石酸酸性磷酸酶染色试剂盒说明书配染液，将配好的染色液放入37 ℃恒温箱内15 min；取出切片后每张滴加20 μL染液，随即在光学显微镜下观察显色完全后用自来水终止显色；甲基绿染液染核5 min，自来水冲洗10 min，依次浸泡于二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中，每次5 min，晾干后中性树胶封固，在光学显微镜下观察，采集图像。

1.4.6 免疫组织化学染色按照免疫组织化学试剂盒标准方案对切片进行染色。烤片过夜后将切片脱蜡至水，室温下置于体积分数为3%H₂O₂ 10 min，TBST冲洗3次(每次5 min)，37 ℃条件下应用0.4%胃蛋白酶液修复抗原活性25 min，TBST冲洗3次(每次5 min)，滴加山羊血清封闭37 ℃修复25 min，滴加抗兔netrin-1、CGRP一抗抗体，4 ℃湿盒孵育过夜，室温放置40 min，TBST冲洗3次(每次5 min)，滴加二抗37 ℃孵育25 min，TBST冲洗3次(每次 5 min)，DAB显色，苏木精复染8 min，PBS返蓝，脱水透明，中性树胶封固，光镜下观察netrin-1、CGRP表达水平。

1.5 主要观察指标 ①足印迹实验检测右后爪同侧接触面积百分比；②血清TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平；③软骨下骨番红固绿染色及软骨组织学评分；④软骨下骨抗酒石酸酸性磷酸酶染色和定量分析；⑤软骨下骨netrin-1及CGRP免疫组织化学染色和定量分析。

1.6 统计学分析数据分析均使用SPSS 22.0统计软件，结果以x(_)±s表示。应用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行多组间均数比较，两两比较采用LSD检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

疼痛是骨关节炎患者就医的常见原因，考虑到疼痛对患者生理及心理的巨大影响，美国疼痛医学会提出将疼痛列为“第五大生命体征”，以提高全球医学界对疼痛的重视程度^[2]。目前对骨关节炎慢性、混合性疼痛(即伤害感受性疼痛、神经病理性疼痛并存)的病因学知之甚少^[21-22]，但临床证据支持外周和中枢敏化机制对骨关节炎疼痛的贡献^[23]。

影像学研究发现，软骨下骨的骨髓水肿样病变与骨关节炎疼痛高度相关^[24-25]。在早期骨关节炎的发生发展中，活性升高的破骨细胞参与了异常的软骨下骨重建，进而引发关节软骨退变^[13]，抑制破骨细胞活性的药物可有效缓解骨关节炎疼痛和骨髓水肿样病变^[26-27]。以上研究结果提示，软骨下骨异常活跃的骨吸收可能是疼痛的重要来源。作者进行的实验结果与之前的骨关节炎研究相仿^[28]，骨关节炎小鼠软骨下骨的抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞显著增加，并且髓腔扩大，在青蒿琥酯的干预下，异常活跃的骨吸收被显著抑制，软骨下骨微观结构得以改善。实验结果进一步提示，青蒿琥酯可逆转至少一种与骨关节炎相关的骨骼变化^[29]，即破骨细胞数量增加。研究表明，在大鼠骨质疏松和骨溶解模型中，青蒿琥酯可显著抑制由RANKL诱导的破骨细胞生成和破骨细胞特异性基因的表达^[30]。而另一项报道称，骨关节炎小鼠破骨细胞生成可由RANKL-RANK-TRAF6信号通路诱导^[31]。由此可见，青蒿琥酯具有通过抑制破骨细胞而改善疼痛症状的潜能。

破骨细胞释放酶标记物包括TRAcP5b和cathepsin K，TRAcP5b是骨吸收的特异和敏感标记^[32]，cathepsin K在骨吸收初期的作用已使其成为治疗骨质疏松症等疾病的新型治疗方法的目标^[33]。CTX-Ⅰ同样是骨吸收的生物标志物，研究表明骨质疏松患者外周血中CTX-Ⅰ水平高于对照组^[34]，而且在骨质疏松动物模型中其水平同样是升高的^[35]。有趣的是，该结果提示虽然安慰剂组软骨下骨中的破骨细胞活性增加，但外周血中破骨细胞生物标记TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平与其他2组间无显著差异，这与骨质疏松模型不同^[36]。作者推测骨关节炎小鼠模型软骨下骨的局部骨吸收可能不足以引起外周血TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平变化。

破骨细胞分泌的细胞因子可以激活并刺激周围神经，导致疼痛信号的增加^[37]。有研究报道，在破骨细胞的条件培养基中检测到高水平的Netrin-1，而且体外重组Netrin-1可显著促进轴突外向生长。然而，抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞中Netrin-1基因的敲除可有效缓解骨关节炎动物模型软骨下骨中感觉神经支配的骨关节炎疼痛^[16]。Netrin-1是层粘连蛋白样基质蛋白，属于轴突引导蛋白家族，被认为是体外和体内破骨细胞形成所必需的旁分泌和自分泌因子^[38]。当破骨细胞分泌的Netrin-1与CGRP阳性感觉神经末梢相结合后，促使FAK和AKT磷酸化，进而将痛觉信息上传至脊髓背根神经节，最终传入中枢神经系统完成信号整合^[16]。由此可见，Netrin-1是软骨下骨感觉神经支配的关键调节剂，具有成为骨关节炎镇痛治疗新靶点的潜力。青蒿琥酯所具有的多种生物学活性中就包括了抑制破骨细胞的分化成熟及骨吸收功能^[39]。在该实验中，骨关节炎软骨下骨的破骨细胞过度活化，netrin-1水平显著增加，并且CGRP阳性感觉神经异常增生，而青蒿琥酯的干预促使这一病理性改变趋势被显著逆转；不仅如此，小鼠足印迹实验同样表明，青蒿琥酯干预后关节炎小鼠的病理性步态得以改善。由此可见，青蒿琥酯对破骨细胞的抑制作用可有效缓解骨关节炎的疼痛症状。

综合上述，该研究首次证实青蒿琥酯在小鼠骨关节炎模型中能够减少破骨细胞分泌Netrin-1，推测青蒿琥酯是通过抑制软骨下骨破骨细胞分泌Netrin-1，减少软骨下骨的感觉神经支配，从而改善感觉神经介导的疼痛症状，具有可缓解骨关节炎疼痛的治疗潜力。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

青蒿琥酯改善软骨下骨破骨细胞介导的骨关节炎疼痛

Artesunate relieves subchondral bone osteoclast-mediated osteoarthritis pain

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