犬脂肪间充质干细胞及其外泌体修复庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2089

中国组织工程研究 ›› 2020, Vol. 24 ›› Issue (25): 3959-3965.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2089

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犬脂肪间充质干细胞及其外泌体修复庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤

林嘉颖，陈淑仪，陈胜锋，王丙云，陈志胜，刘璨颖，白银山，计慧琴，谢仕廷

佛山科学技术学院生命科学与工程学院，广东省佛山市 528231

收稿日期:2019-12-11 修回日期:2019-12-14 接受日期:2020-01-17 出版日期:2020-09-08 发布日期:2020-08-22
通讯作者: 陈胜锋，博士，副教授，佛山科学技术学院生命科学与工程学院，广东省佛山市 528231
作者简介:林嘉颖，女，1994年生，广东省高州市人，汉族，在读硕士，主要从事动物干细胞方面的研究。
基金资助:
广东省自然科学基金项目(2018A030313892)；广东省自然科学基金项目(2017A030313171)；广东省教育厅预防兽医学重点实验室项目(2014KTSPT037)

Canine adipose-derived mesenchymal stem cells and their exosomes in the repair of gentamicin-induced renal tubular epithelial cell injury

Lin Jiaying, Chen Shuyi, Chen Shengfeng, Wang Bingyun, Chen Zhisheng, Liu Canying, Bai Yinshan, Ji Huiqin, Xie Shiting

School of Life Science and Engineering, Foshan University, Foshan 528231, Guangdong Province, China

Received:2019-12-11 Revised:2019-12-14 Accepted:2020-01-17 Online:2020-09-08 Published:2020-08-22
Contact: Chen Shengfeng, MD, Associate professor, School of Life Science and Engineering, Foshan University, Foshan 528231, Guangdong Province, China
About author:Lin Jiaying, Master candidate, School of Life Science and Engineering, Foshan University, Foshan 528231, Guangdong Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Guangdong Province, No. 2018A030313892 and 2017A030313171 ; a project of the Key Laboratory of Veterinary Medicine of Guangdong Provincial Education Department, No. 2014KTSPT037

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

犬脂肪间充质干细胞：由犬皮下脂肪组织分离得到，是一类具有自我更新潜能、多向分化能力的成体多能干细胞，它能分泌多种细胞因子、趋化因子以及外泌体等活性物质，具有强大的组织修复作用，在宠物临床上有很大发展前景。

外泌体：是活细胞分泌产生的胞外囊泡，大小为40-100  nm，含有多种蛋白质、mRNA和miRNAs，它通过这些生物分子的传递改变受体细胞的生化特征，是参与细胞间通讯的重要成分，而且在疾病诊断和治疗中也发挥着重要作用。

摘要

背景：犬肾脏损伤的特点是肾小管上皮细胞凋亡坏死。最近研究表明间充质干细胞及其外泌体在人、大鼠、小鼠肾损伤治疗中显示出良好的效果，但对犬的研究甚少。

目的：探讨犬脂肪间充质干细胞及其外泌体对庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤的影响。

方法：采用5 mmol/L硫酸庆大霉素处理犬肾小管上皮细胞，随后分别将犬脂肪间充质干细胞及其条件培养基和外泌体与受损犬肾小管上皮细胞共培养。在24 h及48 h后采用CCK-8法测定各组细胞增殖活力，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，最后通过Q-PCR法检测PCNA、Bcl-2和Bax基因的表达。

结果与结论：犬脂肪间充质干细胞及其条件培养基和外泌体均可显著促进受损犬肾小管上皮细胞增殖以及减少细胞凋亡(P < 0.05)，其中犬脂肪间充质干细胞外泌体的效果最好，可显著提高受损犬肾小管上皮细胞PCNA、Bcl-2基因的表达(P < 0.05)，对庆大霉素诱导的犬肾小管上皮细胞损伤发挥修复作用。

ORCID: 0000-0003-3613-2980(林嘉颖)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 犬, 脂肪间充质干细胞, 外泌体, 庆大霉素, 肾小管上皮细胞, MDCK细胞

Abstract:

BACKGROUND: Canine kidney injury is characterized by the apoptosis and necrosis of renal tubular epithelial cells. Recent developments in mesenchymal stem cells and their exosomes research have shown great promise for the treatment of kidney injury in humans, rats and mice, but little research has been done on dogs.

OBJECTIVE: To investigate the effects of canine adipose-derived mesenchymal stem cells and their exosomes on canine renal tubular epithelial cell injury induced by gentamicin in vitro.

METHODS: Canine renal tubular epithelial cells were treated by 5 mmol/L gentamicin sulfate. Subsequently, canine adipose-derived mesenchymal stem cells and their conditional medium and exosomes were co-cultured with damaged canine renal tubular epithelial cells respectively. After 24 and 48 hours, the cell proliferation activity of each group was measured by cell counting kit-8 method, and the apoptosis rate of each group was detected by flow cytometry. Finally, Q-PCR was used to further reveal the effects of canine adipose-derived mesenchymal stem cell exosomes on PCNA, Bcl-2 and Bax genes in these cells.

RESULTS AND CONCLUSION: Canine adipose-derived mesenchymal stem cells, their conditioned media, and exosomes could significantly promote proliferation and reduce apoptosis in damaged canine renal tubular epithelial cells (P < 0.05). Among them, canine adipose-derived mesenchymal stem cell exosomes worked best, which could significantly increase the expression of PCNA and Bcl-2 genes in damaged canine renal tubular epithelial cells (P < 0.05). These results suggest that canine adipose-derived mesenchymal stem cells can repair the canine renal tubular epithelial cell damage induced by gentamicin through their exosomes.

Key words:

canine, adipose-derived mesenchymal stem cells, exosomes, gentamicin, renal tubular epithelial cells, MDCK cells

中图分类号:

林嘉颖, 陈淑仪, 陈胜锋, 王丙云, 陈志胜, 刘璨颖, 白银山, 计慧琴, 谢仕廷. 犬脂肪间充质干细胞及其外泌体修复庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(25): 3959-3965.

Lin Jiaying, Chen Shuyi, Chen Shengfeng, Wang Bingyun, Chen Zhisheng, Liu Canying, Bai Yinshan, Ji Huiqin, Xie Shiting. Canine adipose-derived mesenchymal stem cells and their exosomes in the repair of gentamicin-induced renal tubular epithelial cell injury [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2020, 24(25): 3959-3965.

图/表（结果） 5

2.1 犬AD-MSCs及AD-MSC-CM对受损MDCK细胞增殖的影响由表2可以看出，24 h时AD-MSCs组和AD-MSC-CM组的吸光度值均显著高于模型组(P < 0.05)，AD-MSCs组和AD-MSC-CM组间差异无显著性意义(P > 0.05)；48 h时AD-MSCs组的吸光度值均显著高于AD-MSC-CM组和模型组(P < 0.05)，AD-MSC-CM组与模型组差异无显著性意义(P > 0.05)。

2.2 犬AD-MSCs及其AD-MSC-CM对受损MDCK细胞凋亡的影响流式细胞仪检测细胞凋亡结果见图1A，统计结果见图1B，24 h时虽然AD-MSCs组细胞凋亡率低于AD-MSC-CM组和模型组，但3者之间差异均无显著性意义(P > 0.05)；48 h时AD-MSCs组及AD-MSC-CM组的细胞凋亡率均显著低于模型组(P < 0.05)。

2.3 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞增殖的影响由表3可以看出，24 h和48 h时AD-MSC-Exo组的吸光度值均显著高于模型组(P < 0.05)。

2.4 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞凋亡的影响流式细胞仪检测细胞凋亡率见图2A，统计结果见图2B，24 h时AD-MSC-Exo组细胞凋亡率显著低于模型组(P < 0.05)；48 h时AD-MSC-Exo组细胞凋亡率低于模型组，但差异无显著性意义(P > 0.05)。

2.5 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞PCNA、Bcl-2和Bax mRNA表达水平的影响由图3A可见，24 h时AD-MSC-Exo组PCNA mRNA表达与模型组比较差异无显著性意义(P > 0.05)；48 h时AD-MSC-Exo组PCNA mRNA表达显著高于模型组(P < 0.05)；由图3B可见，48 h时AD-MSC-Exo组Bcl-2的相对表达量也显著高于模型组(P < 0.05)；由图3C可见，AD-MSC-Exo组Bax的表达随Bcl-2升高而升高，需计算Bcl-2/Bax比值；由图3D可见，AD-MSC-Exo组和模型组Bcl-2/Bax比值差异无显著性意义(P > 0.05)。

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引言

肾毒性是限制庆大霉素在临床上使用的最重要因素，尽管对患者进行严格的监测，但在治疗过程中仍有10%-25%患者出现了肾毒性^[1]。使用庆大霉素会引起肾小管损伤，影响其重吸收作用，甚至出现严重的肾小管阻塞^[2]。已有文献报道低剂量的庆大霉素可导致动物近曲小管细胞凋亡，凋亡率与庆大霉素的浓度呈线性关系^[3]。间充质干细胞是动物机体内一类具有自我更新、多向分化潜能以及免疫调节等多功能的细胞，可以从骨髓、脐带、脂肪、胎盘等组织中分离获得^[4]。已有许多研究表明间充质干细胞促进损伤组织修复等方面都具有良好的效果^[5]。2004年MONGI等^[6]首次证明了间充质干细胞对大鼠肾功能恢复的促进作用，BI等^[7]证实体外培养的间充质干细胞条件培养液也可促进小鼠肾小管细胞增殖，减少肾小管细胞凋亡。越来越多的报道指出外泌体是间充质干细胞旁分泌作用参与细胞间通讯的重要成分，主要通过减少炎症反应、促进细胞增殖和血管生成、抑制凋亡等促进组织再生和修复^[8]。间充质干细胞外泌体免疫原性低，与间充质干细胞相比，外泌体更容易制备且安全性更高，因而具有潜在的临床应用前景^[9]。目前，间充质干细胞治疗肾损伤的研究主要是在肾损伤小鼠模型中进行的，该模型与人类或犬肾损伤并不完全一致，间充质干细胞在物种间的再生潜力存在差异^[10]。犬间充质干细胞治疗肾损伤的研究极少，国内仅有2篇文献表明犬间充质干细胞及其分泌的干细胞因子能有效治疗犬急性肾衰竭^[11-12]，而国外研究则表明间充质干细胞治疗后犬肾功能并没有改善^[10]，甚至还会引起炎症、肾小管坏死、矿化和纤维化^[13]。基于以上结果，犬间充质干细胞治疗犬肾损伤的效果还存在较大争议，而犬外泌体对犬肾损伤的影响则鲜有报道，迫切需要进行更多基础研究探讨犬间充质干细胞及其外泌体对犬肾损伤的影响及其机制。因此，该实验采用庆大霉素处理犬肾小管上皮细胞(MDCK细胞)致其损伤，再通过Transwell共培养方式探究体外条件下犬脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells，AD-MSCs)、犬脂肪间充质干细胞条件培养基(adipose-derived mesenchymal stem cell conditioned media，AD-MSC-CM)以及犬脂肪间充质干细胞外泌体(exosome derived from adipose-derived mesenchymal stem cell，AD-MSC-Exo)对损伤MDCK细胞增殖与凋亡的影响，并进一步检测AD-MSC-Exo对损伤MDCK细胞增殖凋亡相关基因表达的影响，为犬间充质干细胞及其外泌体应用于治疗犬肾损伤提供一定的实验依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1 材料和方法 Materials and methods

1.1 设计细胞水平体外实验。

1.2 时间及地点实验于2018年10月至2019年4月在佛山科学技术学院动物医院二楼实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 实验细胞株 MDCK细胞购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。犬脂肪间充质干细胞及外泌体来自课题组成员詹小舒馈赠，细胞分离及鉴定方法详见该作者已发表文章^[14]，外泌体分离鉴定详见已发表文章^[15]。

1.3.2 实验试剂及耗材 DMEM高糖培养基、青霉素-链霉素双抗、L-谷氨酰胺、0.25%胰蛋白酶(Hyclon公司)；胎牛血清(BI公司)；硫酸庆大霉素(Biofroxx公司)；CCK-8试剂盒(日本同仁公司)；Annexin V/PI双染凋亡试剂盒(BD公司)；MiniBEST Universal RNA Extraction Kit、PrimeScript^TM RT reagent Kit、SYBR Green PCR Master Mix(Takara公司)；一次性塑料细胞培养板、0.4 μm 24孔Transwell共培养板(Corning公司)。

1.3.3 实验仪器 CO₂培养箱(Shellab公司)；高压灭菌锅(Hirayama型，广州易祥科教仪器有限公司)；超净工作台(苏州净化设备有限公司)；离心机(5810R，Eppendorf公司)；荧光定量PCR仪(Roche公司)；酶标仪(Biored公司)；倒置显微镜(CKX41，Olympus公司)；超速离心机(Beckman公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 AD-MSC-CM制备 AD-MSCs贴壁生长72 h后，收集细胞条件培养基，4 000 r/min离心20 min去除死细胞及部分细胞碎片，0.22 μm滤膜过滤后置于4 ℃待用。

1.4.2 犬AD-MSCs及AD-MSC-CM对受损MDCK细胞增殖的影响该实验分为4组：①阴性对照组；②模型组；③AD-MSCs组；④AD-MSC-CM组。取对数生长期MDCK细胞接种于24孔板，细胞密度为5×10⁴/孔，每组均设3个复孔。培养24 h后弃去原培养液，阴性对照组只加入1 mL新鲜DMEM完全培养基(88%DMEM基础培养基+1%双抗溶液+ 1%L-谷氨酰胺)；模型组加入1 mL含终浓度为5 mmol/L庆大霉素的DMEM完全培养基，培养24 h后更换1 mL新鲜DMEM完全培养基；AD-MSCs组加入1 mL含终浓度为 5 mmol/L庆大霉素的DMEM完全培养基，培养24 h后弃去培养液，下室加入750 μL新鲜DMEM完全培养基，Transwell小室加入250 μL AD-MSCs悬液(细胞浓度5×10⁷ L^-1)；AD-MSC-CM组加入1 mL含终浓度为5 mmol/L庆大霉素的DMEM完全培养基，培养24 h后弃去培养液，加入1 mL含250 μL AD-MSC-CM的DMEM完全培养基。培养24 h和 48 h后，每孔加入100 μL的CCK-8孵育30 min，在波长为450 nm处测定吸光度值。

1.4.3 犬AD-MSCs及AD-MSC-CM对受损MDCK细胞凋亡的影响细胞分组及处理同1.4.2。培养24 h和48 h后，消化并离心收集细胞，用预冷PBS清洗2遍，加入200 μL Binding buffer重悬细胞，加入FITC标记的Annexin-V 5 μL，避光孵育15 min，上机前加入PI 5 μL避光孵育5 min，再加入200 μL Binding buffer，1 h内用流式细胞仪检测细胞凋亡率。

1.4.4 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞增殖的影响该实验分为3组：①阴性对照组；②模型组；③AD-MSC-Exo组。取对数生长期MDCK细胞接种于24孔板中，细胞密度为5×10⁴/孔，均设3个复孔，24 h后弃去原培养液，阴性对照组只加入1 mL新鲜DMEM完全培养基；模型组加入1 mL含终浓度为5 mmol/L庆大霉素的DMEM完全培养基，培养24 h后更换1 mL新鲜DMEM完全培养基；AD-MSC-Exo组加入1 mL含终浓度为5 mmol/L庆大霉素的DMEM完全培养基，24 h后弃去培养液，加入1 mL含100 mg/L AD-MSC-Exo的DMEM完全培养基。培养24 h和48 h后采用CCK-8法检测吸光度值。

1.4.5 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞凋亡的影响 MDCK细胞分组及处理同1.4.4，按1.4.3方法检测细胞凋亡率。

1.4.6 犬AD-MSC-Exo对受损MDCK细胞PCNA、Bcl-2和Bax mRNA表达水平的影响 MDCK细胞接种于6孔板培养，细胞密度为1×10⁵/孔，细胞分组与处理同1.4.4。提取各组细胞RNA，反转录得到cDNA，实时荧光定量PCR检测PNCA、Bcl-2、Bax、GAPDH(内参)基因的表达水平，并计算Bcl-2/Bax比值。PCR引物序列及反应程序见表1。

1.5 主要观察指标 CCK-8法检测细胞增殖活力、流式细胞术检测细胞凋亡率，荧光定量PCR检测PCNA、Bcl-2、Bax基因的表达。

1.6 统计学分析采用SPSS Statistics 17.0统计软件进行单因素方差分析(ANOVA)，结果以x(_)±s表示，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

肾脏是机体重要的排泄器官，也是很多药物毒性作用的靶器官。庆大霉素肾毒性的一个主要表现是肾小管细胞毒性，可导致实验动物肾小管上皮细胞凋亡和坏死^[16]，其机制为庆大霉素在动物体内被近端小管重吸收后积蓄于肾皮质内，进而使肾皮质细胞中溶酶体的磷脂酶A和C活性被抑制，引发磷脂和磷脂酰肌醇沉积，最终导致细胞损伤、坏死。另外庆大霉素也可以通过线粒体氧化磷酸化途径造成肾小管上皮细胞损伤^[17]。庆大霉素用量与细胞损伤程度呈正相关关系，严磊等^[18-19]研究表明随着庆大霉素的浓度增加，肾小管上皮细胞凋亡率随之升高。该研究旨在揭示犬AD-MSCs及其外泌体对庆大霉素诱导的犬肾小管上皮细胞损伤的修复作用。

间充质干细胞是机体最重要的成体干细胞之一，来源广泛，在体外增殖速度快，可诱导分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、骨骼肌和心肌细胞、神经细胞及血管内皮细胞等多种类型细胞^[20-2⁶^]。AD-MSCs来源于脂肪组织，含量丰富，并且具备取材方便、制备方法简便、免疫原性低以及致畸致瘤风险低等优势^[2⁷^]。大量研究显示间充质干细胞可以通过多种机制修复受损肾脏的功能，比如转分化机制。早期的实验研究表明注射的外源性间充质干细胞可以通过转分化为肾小管上皮细胞，从而减轻肾脏损伤^[2⁸^]。与此观点相符的是有学者在治疗过程中采用荧光染料标记外源性间充质干细胞，结果显示肾脏中存在间充质干细胞区域的细胞凋亡程度明显低于无间充质干细胞区域^[2⁹^]。随着科技的发展这种机制受到许多学者质疑，他们认为这种直接分化机制可能不是间充质干细胞发挥作用的主要机制，体内示踪技术证实治疗中使用的间充质干细胞真正能到达肾脏的仅有2.5%^[³⁰^]。目前大多数学者认为间充质干细胞可通过分泌大量细胞因子和趋化因子并释放诸如外泌体等活性物质来协调肾脏保护，与免疫调节、抗瘢痕、内源性祖细胞支持、抗凋亡、血管生成和趋化等机制密切相关^[3¹^]。

该研究采用Transwell共培养法将犬AD-MSCs与受损犬肾小管上皮细胞置于同一培养环境中，而2种细胞不发生直接接触，从而探究犬AD-MSCs是否通过旁分泌作用MDCK细胞。结果证实犬AD-MSCs可显著促进受损MDCK细胞增殖，同时减少受损细胞凋亡，这种作用是通过旁分泌机制实现的，与此同时还发现AD-MSC-CM也具有这种修复作用，印证了旁分泌机制观点，但在实验中作者发现AD-MSC-CM效果不如AD-MSCs发挥持久，推测可能由于条件培养基中所含AD-MSCs分泌的有效成分有限。

外泌体是细胞分泌产生的胞外囊泡，大小为40-100 nm，密度为1.13-1.19 g/mL，含有蛋白质、mRNA、miRNAs和DNA^[3²^-3³^]。大多数细胞都可分泌外泌体，包括肥大细胞、树突状细胞、B细胞、T细胞、肿瘤细胞和上皮细胞等^[3⁴^-3⁸^]。外泌体来源于晚期的胞吞区室，称为多囊泡体。多囊泡体与质膜融合将其腔内囊泡释放到细胞外环境中^[3⁹^]。外泌体具有重要的生物学功能，它通过生物分子的传递可以改变受体细胞的生化特征，并在细胞通讯中发挥作用。由此可见间充质干细胞释放的外泌体具有一定的特异性，选择性地含有蛋白质、mRNAs和microRNAs，这些特定物质参与血管生成、细胞转运、凋亡和蛋白水解等途径^[⁴⁰^-4¹^]。研究表明在体内外间充质干细胞分泌的外泌体均具有与间充质干细胞相似的功能，可降低实验动物血肌酐及尿素氮水平、近端肾小管坏死、凋亡、氧化应激和体内大量管状蛋白铸型的形成^[4²^]。该研究证实在体外培养条件下AD-MSC-Exo同样具有促进受损肾小管上皮细胞增殖，同时减少受损细胞凋亡的功能。更值得注意的是犬AD-MSC-Exo处理受损MDCK细胞可使细胞数量增加1倍以上，效果更优于AD-MSCs。与干细胞移植疗法相比，外泌体在生产、贮存、运输及临床应用等环节具有成份更明确、使用更方便、成本更低、安全性更高的优势，具备更好的临床应用前景^[4³^]。

PCNA是一种细胞周期标记蛋白，在细胞的G₀到S期合成增加，因此成为经典的细胞增殖标志。不仅如此，PCNA与100多个蛋白质发生相互作用，参与DNA复制、DNA修复和细胞周期控制^[4⁴^]。Bax和Bcl-2是Bcl-2蛋白家族的重要成员，其中Bax是一种重要的促凋亡因子，激活后在线粒体外膜形成孔，导致膜完整性丧失，细胞色素C释放，Bcl-2是一种抗凋亡因子，可以抑制Bax的功能，最终细胞对凋亡信号的反应由Bax/Bcl-2比值决定^[4⁵^-4⁶^]。庆大霉素毒理机制已被广泛研究，据文献报道庆大霉素处理人肾皮质近曲小管上皮(HK-2)细胞可引起细胞生长增殖、凋亡、抗凋亡、细胞周期等相关基因的差异表达，可上调Bax和caspase-3，下调Bcl-2^[4⁷^]。间充质干细胞具有修复肾小管上皮细胞的潜在机制是基于BEHR等^[4⁸^]研究发现间充质干细胞的输注可抑制大鼠肾近端肾小管细胞2种有丝分裂原活化蛋白激酶、p38和ERK的激活，下调Bax和裂解caspase-3的表达，上调Bcl-2的表达。根据荧光定量PCR结果，AD-MSC-Exo可上调受损MDCK细胞PCNA、Bcl-2 mRNA的表达，但Bax mRNA表达也随之上调，此时AD-MSC-Exo组Bcl-2/Bax比值与模型组差异无显著性意义(P > 0.05)。因此推测犬AD-MSCs可能还通过调控其他凋亡基因，减少MDCK细胞凋亡。

综上所述，在体外条件下犬AD-MSCs及其条件培养液均能显著促进庆大霉素诱导的犬肾小管上皮细胞增殖，并减少受损细胞的凋亡；而犬AD-MSCs分泌的外泌体也具有相同的功能，并且使受损MDCK细胞数量增加1倍以上，这种作用是通过外泌体上调该细胞PCNA基因表达而实现的。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

犬脂肪间充质干细胞及其外泌体修复庆大霉素致犬肾小管上皮细胞损伤

Canine adipose-derived mesenchymal stem cells and their exosomes in the repair of gentamicin-induced renal tubular epithelial cell injury

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