鼠妇提取物可抑制ILK调节骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.16.021

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (16): 2582-2586.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.16.021

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鼠妇提取物可抑制ILK调节骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

段哲萍¹，于新江²，李菁菁³，赵娟³

河北省人民医院，¹肿瘤二科，²心脏外科，河北省石家庄市 050051；³河北医科大学细胞生物教研室，河北省石家庄市 050017

修回日期:2017-01-06 出版日期:2017-06-08 发布日期:2017-07-06
通讯作者: 李菁菁，博士，副教授，河北医科大学细胞生物教研室，河北省石家庄市 050017
作者简介:段哲萍，女，1975年生，河北省石家庄市人，汉族，2013年河北医科大学毕业，硕士，主治医师，主要从事肿瘤综合治疗研究。
基金资助:
河北省中医药管理局课题(2015138)；河北省高等学校科学技术研究青年基金(2011177)

Pillbug extracts inhibit osteopontin-induced vascular smooth muscle cell proliferation by modulation of integrin kinase protein pathway

Duan Zhe-ping¹, Yu Xin-jiang², Li Jing-jing³, Zhao Juan³

¹Second Department of Oncology, ²Department of Cardiac Surgery, Hebei General Hospital, Shijiazhuang 050051, Hebei Province, China; ³Department of Cytobiology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei Province, China

Revised:2017-01-06 Online:2017-06-08 Published:2017-07-06
Contact: Li Jing-jing, M.D., Associate professor, Department of Cytobiology, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, Hebei Province, China
About author:Duan Zhe-ping, Master, Attending physician, Second Department of Oncology, Hebei General Hospital, Shijiazhuang 050051, Hebei Province, China
Supported by:
the Subject of Hebei Province Administration of Traditional Chinese Medicine, No. 2015138; the Scientific Research Foundation for the Youth of High Education in Hebei Province, No. 2011177

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
增殖细胞核抗原：由Miyachi等于1978年在系统性红斑狼疮患者的血清中首次发现并命名，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名，以后的研究发现增殖细胞核抗原与细胞DNA合成关系密切，在细胞增殖的启动上起重要作用，是反映细胞增殖状态的良好指标。
整合素：是由α和β亚单位组成的异源二聚体跨膜受体，血管平滑肌细胞主要表达整合素αvβ3，它的主要配体包括骨桥蛋白、纤连蛋白和玻黏蛋白等。由于整合素本身不具有激酶活性，它需要通过β亚单位的胞内区与talin、paxillin和ILK等相互作用，将其募集到胞膜内侧，共同形成黏着斑复合物，然后启动多条信号转导途径，从而导致细胞骨架重组，引起血管平滑肌细胞的黏附和迁移，参与血管炎性增生和血管重塑的过程。

摘要
背景：前期实验通过MTT法及细胞划痕实验检测出鼠妇可影响血管平滑肌细胞的增殖和迁移过程，但其相关作用机制尚不清楚。
目的：探讨鼠妇对于骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖影响的相关分子机制。
方法：按常规方法培养 SD 大鼠胸腹主动脉血管平滑肌细胞，选取3-5代细胞用于实验。实验分为8组：对照组、骨桥蛋白组、鼠妇水提取物(0.5，1.0，2.0 g/L)+骨桥蛋白组、鼠妇乙酸乙酯提取物(0.25，0.5，1.0 g/L)+骨桥蛋白组。加入相应药物培养24 h后，收集细胞，采用Western bolt检测PCNA、ILK蛋白表达水平。
结果与结论：①在鼠妇水提取物及乙酸乙酯提取物的作用下血管平滑肌细胞PCNA蛋白表达下降，其中0.5 g/L的鼠妇水提取物组和1.0 g/L的鼠妇乙酸乙酯提取物组抑制作用最明显，分别为骨桥蛋白组的77.8%和74.1%；②低质量浓度(0.5 g/L)的鼠妇水提取物抑制ILK表达作用明显，是骨桥蛋白组的81.4%；鼠妇乙酸乙酯提取物作用下血管平滑肌细胞ILK的表达水平没有明显改变；③结果表明，鼠妇水提取物及乙酸乙酯提取物均可抑制骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖，且鼠妇水提取物该作用可能与ILK蛋白通路有关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

ORCID: 0000-0002-8880-5772(段哲萍)

关键词: 组织构建, 组织工程, 鼠妇, 骨桥蛋白, PCNA, ILK

Abstract:

BACKGROUND: Pillbugs have been proved to exert an effect on the proliferation and migration of vascular
smooth muscle cells (VSMCs) through MTT assay and scratch assay, but the mechanisms are poorly understood.
OBJECTIVE: To investigate the molecular mechanisms underlying pillbugs influencing osteopontin-induced VSMC migration and proliferation.
METHODS: VSMCs from Sprague-Dawley rat thoraco-abdominal aorta were cultured in a common medium, and 3-5 generations of cells were selected. There were eight groups: control, osteopontin, pillbug water extract (0.5, 1.0, and 2.0 g/L) with osteopontin, and pillbug ethyl acetate extract (0.25, 0.5, and 1.0 g/L) with osteopontin groups. After 24 hours of culture, the expression levels of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and integrin kinase (ILK) were detected by western blot assay.
RESULTS AND CONCLUSION: Pillbug water and ethyl acetate extracts both inhibited the expression of PCNA, especially when cultured in 0.5 g/L pillbug water extract (77.8% of the osteopontin group) and 1.0 g/L ethyl acetate extract (74.1% of the osteopontin group). 0.5 g/L pillbug water extract significantly downregulated ILK level induced by osteopontin, which was 81.4% of the osteopontin group, while pillbug ethyl acetate extract exposed no influence on ILK expression. These results reveal that pillbug water and ethyl acetate extracts both are able to inhibit osteopontin-induced VSMC proliferation, and the role of the pillbug water extract maybe associated with ILK protein pathway.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Beetles, Osteopontin, Proliferating Cell Nuclear Antigen, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

段哲萍，于新江，李菁菁，赵娟. 鼠妇提取物可抑制ILK调节骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(16): 2582-2586.

Duan Zhe-ping, Yu Xin-jiang, Li Jing-jing, Zhao Juan. Pillbug extracts inhibit osteopontin-induced vascular smooth muscle cell proliferation by modulation of integrin kinase protein pathway[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(16): 2582-2586.

图/表（结果） 1

参考文献

[1] 李菁菁,温进坤,韩梅. FAK和ILK介导骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞黏附和迁移[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 2006, 22(6): 477-483.

[2] 田周,李博,郭立玮,等.湿法超微粉碎和水煎煮提取法对鼠妇蛋白溶栓抗凝活性的影响及机制初探[J].中药新药与临床药理, 2015, 26(2): 169-174.

[3] Patti G, Cannon CP, Murphy SA, et al. Clinical benefit of statin pretreatment in patients undergoing percutaneous coronary intervention: a collaborative patient-level meta-analysis of 13 randomized studies. Circulation. 2011;123(15):1622-1632.

[4] Yamada KM.Fibronectin peptides in cell migration and wound repair. J Clin Invest. 2000;105(11):1507-1509.

[5] He L, Pan S, Li Y, et al. Increased proliferation and adhesion properties of human dental pulp stem cells in PLGA scaffolds via simulated microgravity. Int Endod J. 2016;49(2):161-173.

[6] Giancotti FG, Ruoslahti E. Integrin signaling. Science. 1999; 285(5430):1028-1032.

[7] Hansson GK, Libby P. The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword. Nat Rev Immunol. 2006;6(7):508-519.

[8] Patti G, Cannon CP, Murphy SA, et al. Clinical benefit of statin pretreatment in patients undergoing percutaneous coronary intervention: a collaborative patient-level meta-analysis of 13 randomized studies. Circulation. 2011;123(15):1622-1632.

[9] 毛贺辉,陈燕红,苏国强.RNAi下调FAK基因对大肠癌细胞SW620侵袭及转移能力的影响[J].中国实用医学,2016,11(14): 287-288.

[10] Su GQ, Zhang FX, Mao HH, et al. Research of shRNAmir inhibitory effects towards focal adhesion kinase expression in the treatment of gastric cancer. Oncol Lett. 2015;9(2): 595-603.

[11] 朱胜典. 鼠妇临床应用二则[J].四川中医, 1987,3:25.

[12] 林明侠,刘树民.鼠妇的临床应用进展(综述)[J].北京中医药大学学报,2000,23(增刊):127-128.

[13] von Wolff M, Strowitzki T, Becker V, et al. Endometrial osteopontin, a ligand of beta3-integrin, is maximally expressed around the time of the "implantation window". Fertil Steril. 2001;76(4):775-781.

[14] Johnson GA, Burghardt RC, Joyce MM, et al. Osteopontin expression in uterine stroma indicates a decidualization-like differentiation during ovine pregnancy. Biol Reprod. 2003; 68(6):1951-1958.

[15] Carson DD, Lagow E, Thathiah A, et al. Changes in gene expression during the early to mid-luteal (receptive phase) transition in human endometrium detected by high-density microarray screening. Mol Hum Reprod. 2002;8(9):871-879.

[16] Briese J, Oberndörfer M, Pätschenik C, et al. Osteopontin is colocalized with the adhesion molecule CEACAM1 in the extravillous trophoblast of the human placenta and enhances invasion of CEACAM1-expressing placental cells. J Clin Endocrinol Metab. 2005;90(9):5407-5413.

[17] Allan G, Campen C, Hodgen G, et al. Identification of genes with differential regulation in primate endometrium during the proliferative and secretory phases of the cycle. Endocr Res. 2003;29(1):53-65.

[18] Weintraub AS, Lin X, Itskovich VV, et al. Prenatal detection of embryo resorption in osteopontin-deficient mice using serial noninvasive magnetic resonance microscopy. Pediatr Res. 2004;55(3):419-424.

[19] Wai PY, Kuo PC. The role of Osteopontin in tumor metastasis. J Surg Res. 2004;121(2):228-241.

[20] 杨雅莉,张翼,李毓,等.鼠妇富含蛋白多肽提取物的镇痛作用研究[J].西南师范大学学报, 2014,39(3):77-81.

[21] 李宁,匡岩巍,陈明支,等. 鼠妇乙醇提取物镇痛抗炎作用及化学成分研究[J].中国实验方剂学杂志,2008,14(11):74-76.

[22] Hannigan GE, Leung-Hagesteijn C, Fitz-Gibbon L, et al. Regulation of cell adhesion and anchorage-dependent growth by a new beta 1-integrin-linked protein kinase. Nature. 1996; 379(6560):91-96.

[23] 陈卫,苏踊跃,梁光萍,等.β1整合素近端和远端启动子报告基因载体的构建和鉴定及启动活性分析[J].医学研究生学报, 2007, 20(2):135-137.

[24] Wu C, Keightley SY, Leung-Hagesteijn C, et al. Integrin-linked protein kinase regulates fibronectin matrix assembly, E-cadherin expression, and tumorigenicity. J Biol Chem. 1998; 273(1):528-536.

[25] Troussard AA, Costello P, Yoganathan TN, et al. The integrin linked kinase (ILK) induces an invasive phenotype via AP-1 transcription factor-dependent upregulation of matrix metalloproteinase 9 (MMP-9). Oncogene. 2000;19(48): 5444-5452.

[26] Delcommenne M, Tan C, Gray V, et al. Phosphoinositide-3-OH kinase-dependent regulation of glycogen synthase kinase 3 and protein kinase B/AKT by the integrin-linked kinase. Proc Natl Acad Sci U S A. 1998;95(19): 11211-11216.

[27] Radeva G, Petrocelli T, Behrend E, et al. Overexpression of the integrin-linked kinase promotes anchorage-independent cell cycle progression. J Biol Chem. 1997;272(21):13937-13944.

引言

血管平滑肌细胞的表型转化、黏附、向内膜下的迁移、增殖、分泌细胞外基质是高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等血管重塑性疾病的细胞病理学基础。研究表明，细胞外基质成分如骨桥蛋白、纤连蛋白等均参与血管平滑肌细胞黏附、增殖与迁移的调节过程。课题组在前期实验中发现骨桥蛋白可以诱导血管平滑肌细胞的黏附和迁移过程，并且整合素激酶在这一过程中发挥重要作用^[1]。

鼠妇又名鼠负、负蟠、鼠姑、鼠黏、地虱等，是甲壳纲等足目潮虫科鼠妇属动物的俗称。现代研究发现，鼠妇有抗小鼠心律失常、镇痛、抗炎等作用^[2-3]。在多种血管重塑性疾病中，血管炎性增生明显，导致管腔狭窄，是造成缺血性心脏病的重要原因。有研究表明鼠妇通过抑制环氧化物酶起到抗炎作用，进而参与血管重塑性疾病的发生和发展过程。作者在前期实验中发现鼠妇可影响血管炎性增生过程中血管平滑肌细胞的增殖和迁移过程。鼠妇水提取物和乙酸乙酯提取物不影响基础培养下的血管平滑肌细胞增殖，但是均可抑制骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移。为此，实验进一步通过观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)蛋白和相关信号分子蛋白(ILK)的表达情况验证鼠妇对于骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响，探讨鼠妇在影响血管平滑肌细胞增殖方面的作用及其相关分子机制，为预防和治疗以血管平滑肌细胞增殖为细胞病理学基础的血管炎性增生性疾病提供合理的实验依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计 细胞学体外观察实验。

1.2 时间及地点 于2013年7月至2015年7月在河北医科大学细胞生物学实验室完成实验。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 健康SD大鼠1只，雄性，体质量90-100 g，购于河北医科大学实验动物中心。

1.3.2 试剂 鼠妇水提取物及鼠妇乙酸乙酯提取物由河北中医学院药学院制备、鉴定并测定浓度；重组鼠骨桥蛋白(Sigma公司)；DMEM培养基(Gibco公司，美国)；胎牛血清(北京四季青公司)；鼠抗ILK单抗、PCNA多抗、β-actin多抗(Santa Cruz公司)；辣根过氧化物酶标记兔抗鼠二抗(Pierce公司，美国)；化学发光试剂盒(Santa Cruz公司)；中分子量蛋白标准(北京中山生物技术公司)；硝酸纤维素膜(Amersham，美国)；脱脂奶粉(黑龙江完达山乳品厂)；丽春红S(Amersham，美国)；X射线胶片、显影剂、定影剂(柯达公司)。

1.3.3 实验设备 CXZLFS1普通光学显微镜、XDS-1B倒置显微镜(Olympus，日本)；MCO175 CO₂培养箱(SANYO，日本)；5417R低温高速离心机、5415D普通高速离心机(eppendorf公司，德国)；微量振荡器MH-1(江苏海门其林贝尔公司)；ELX800型酶标仪(Bio-Tek公司，美国)；超净工作台(吴江市净化设备厂)；DYY-III28A垂直电泳槽、DYY-III40B水浴式转移槽、电泳仪DYY-III2型(北京六一仪器)。

1.4 实验方法

1.4.1 SD大鼠胸腹主动脉血管平滑肌细胞原代培养 取健康SD大鼠，腹腔注射25%乌来糖行全麻，暴露胸腹腔，分离大鼠胸腹主动脉，立即置于含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液中，将血管剪成大小约1 mm³的小块，贴于消毒过的25 mL培养瓶中，加入培养液，放于37 ℃、体积分数为5%CO₂的恒温培养箱中，定期显微镜下观察细胞生长情况，3 d后更换新鲜DMEM培养液，5-7 d后将生长良好的原代细胞经0.125%胰酶消化后传代，收集3-5代细胞用于实验。

1.4.2 Western bolt检测PCNA、ILK蛋白表达 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度为5×10⁷ L^-1，接种于96孔板，每孔200 μL，放于37 ℃、体积分数为5%CO₂的恒温培养箱中孵育24 h，弃培养液，加入无血清DMEM培养液，每孔200 μL，根据实验分组加入相应药物：对照组、骨桥蛋白组、鼠妇水提取物(0.5，1.0，2.0 g/L)+骨桥蛋白组、鼠妇乙酸乙酯提取物(0.25，0.5，1.0 g/L)+骨桥蛋白组，每组3-5瓶细胞。加药培养24 h后，收集细胞，2 000 r/min离心8 min，弃上清。将各组细胞由离心管转移至effendorf管，2 000 r/min离心8 min，弃上清，应用RIPA细胞裂解液常规提取细胞总蛋白。蛋白定量根据试剂盒BCA法的步骤进行，常规SDS-PAGE电泳及蛋白电转，转膜后的PVDF膜用5%脱脂奶粉37 ℃封闭1.0-2.0 h，TTBS洗膜3次，滴加相应一抗即鼠抗ILK单抗、PCNA多抗和β-actin多抗，4 ℃冰箱中过夜。TTBS清洗3次，加入相应二抗，37 ℃温育1.0-2.0 h，取出后用TTBS在室温摇床上清洗3次，然后进行化学发光反应，用凝胶图像分析系统记录并测定各蛋白条带的积分吸光度，以与β-actin的比值计算目的蛋白表达水平。

1.5 主要观察指标 PCNA，ILK蛋白表达相对灰度值。

1.6 统计学分析 采用Excel 2010电子表格软件记录及初步处理数据、作图，SPSS 18.0统计软件包进行数据统计分析。计量资料数据用x(_)±s表示。各组之间观察指标均数比较采用单因素方差分析检验。P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

讨论

血管平滑肌细胞黏附、向内膜下的迁移及增殖，参与血管的炎性增生，导致血管重塑，这一过程依赖于细胞与细胞外基质之间相互作用的细微动态平衡。细胞外基质作为细胞生存与细胞之间相互联系的环境和媒介，不仅为细胞提供支架结构和附着位点，而且在介导各种因素引发的细胞黏附、增殖和迁移过程中具有相当重要生物学作用。有研究表明，多种生长因子和细胞外基质成分，如骨桥蛋白、纤连蛋白等均参与血管平滑肌细胞黏附、增殖与迁移的调节过程。细胞外基质与整合素相互作用所产生的效应主要是通过其β亚单位胞内区募集的蛋白激酶来调节肌球蛋白磷酸化状态、细胞骨架的重组和细胞迁移过程。从细胞生物学相关研究结果看，细胞的黏附、铺展与迁移是一个复杂的周期性动态过程，并受细胞内信号传导通路的精密调控，但该过程尚未十分清楚。有研究表明，细胞黏附和迁移是通过细胞外基质介导的整合素信号通路实现的^[4-8]。

整合素是由α和β亚单位组成的异源二聚体跨膜受体，血管平滑肌细胞主要表达整合素αvβ3，它的主要配体包括骨桥蛋白、纤连蛋白和玻连蛋白等。由于整合素本身不具有激酶活性，它需要通过β亚单位的胞内区与talin、paxillin和ILK等相互作用，将其募集到胞膜内侧，共同形成黏着斑复合物，然后启动多条信号转导途径，从而导致细胞骨架重组，引起血管平滑肌细胞的黏附和迁移，参与血管炎性增生和血管重塑的过程。在多种血管重塑性疾病中，血管炎性增生明显，导致管腔狭窄，是造成缺血性心脏病的重要原因^[9-10]。有越来越多的研究证实局部和全身炎症贯穿于动脉粥样硬化性心脏病病变的发生、发展全过程，并在一定程度上决定着斑块的稳定性和自然的进程^[11-12]。

骨桥蛋白是一种具有多种生物学活性的分泌型磷酸化糖蛋白，含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(简称RGD结构)残基，人类的破骨细胞、被激活的巨噬细胞、T细胞、肾以及血管平滑肌细胞等均可以分泌骨桥蛋白，它可受多种激素、生长因子、肿瘤促进剂以及原癌基因表达产物的调控。骨桥蛋白主要生物学功能有：介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质的相互作用^[13-14]；介导细胞的趋化、聚集、增殖、黏附和迁移^[15]；参与细胞的免疫调节^[16]；刺激钙的转运，参与钙质沉积^[13]；激活磷脂酰肌醇激酶3；影响组织生物矿化与重建；促进血管的生成；控制炎症的发生与发展；参与神经发育^[17-18]；参与癌细胞浸润和转移等许多过程^[19]。近十几年来随着认识的不断深入，越来越多的研究发现骨桥蛋白与心血管疾病、肿瘤的发生发展、炎症、损伤修复以及在生殖领域等均有着重要的作用。作者在前期的实验中发现骨桥蛋白可以诱导血管平滑肌细胞的增殖、黏附和迁移，并且发现ILK在这一过程中发挥着重要作用^[3]。

鼠妇有多种功效，包括平喘、利尿、解毒、止痛、消炎等^[1-2^，^20-21]。作者前期的实验发现鼠妇可影响骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞增生和迁移。实验进一步研究鼠妇在血管炎性增生过程中对血管平滑肌细胞影响的可能分子机制。以往的实验结果表明，实验浓度范围内鼠妇无论是水提取物还是乙酸乙酯提取物对于基础培养条件下的血管平滑肌细胞无毒副作用，这也为鼠妇作为抗动脉粥样硬化药物奠定了实验基础。然而，在加入骨桥蛋白刺激后，鼠妇水提取物及鼠妇乙酸乙酯提取物对于细胞增殖均起到抑制作用。实验运用Western bolt检测PCNA蛋白表达水平，结果证实骨桥蛋白+鼠妇乙酸乙酯提取物组随着质量浓度的升高，抑制作用增强；骨桥蛋白+鼠妇水提取物组随着质量浓度的升高，抑制作用降低；两者均呈剂量依赖性，在抑制骨桥蛋白相关的血管炎性增生疾病中可能会发挥一定的作用。

ILK是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，通过与整合素的结合，介导细胞与细胞外基质的联系，在细胞内、外双向信号转导中发挥着重要的调节作用，如细胞增殖、分化、迁移、凋亡等。ILK是1996年发现的一种分子质量为59 ku的进化过程中高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可与整合素的β1亚单位的胞浆区相连接^[22]，共同定位在黏着斑^[23]。ILK广泛存在于多种细胞的胞浆中，在骨骼肌、平滑肌和心肌等组织中都有高度表达^[3]，与细胞的生长增殖、分化、凋亡、黏附和侵袭密切相关。ILK的活性能通过与整合素和细胞外基质结合而迅速激活^[16^，^24]，也能被某个生长因子受体的酪氨酸激酶所激活^[19^，^25]。激活后的ILK具有以下作用：可通过磷酸化蛋白激酶B的Ser-473而激活PKB，从而抑制细胞的凋亡^[26]；可抑制糖原合成酶3的活性，增加细胞周期蛋白D1的表达，使细胞周期循环得以继续^[27]；促进连环蛋白(β-catin)的核转运，从而诱导钙粘连蛋白E(E- cadherin)的表达减少，导致细胞与细胞间黏着的丧失和细胞外基质相互作用的减弱；它可通过激活蛋白1途径上调基质金属蛋白酶9，使细胞外基质的侵袭增强^[25]。实验结果显示，骨桥蛋白组ILK蛋白表达量最高，加入鼠妇水提取物后ILK蛋白表达量下降，质量浓度为0.5 g/L时ILK的表达量是骨桥蛋白组的81.4%，同时，发现鼠妇乙酸乙酯提取物对ILK的表达无明显影响，这说明鼠妇水提取物有可能通过抑制ILK这条细胞内的信号途径而发挥抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移的作用，但乙酸乙酯提取物不通过这条信号通路，在分析实验结果时，作者发现鼠妇水提取物对ILK蛋白表达虽有抑制，但抑制率均不高，这可能与该种提取物是复合物有关，目前关于鼠妇化学成分的研究寥寥无几，但有文献提出水提取物的主要成分为蛋白多肽，醇提取物的主要物质是类固醇类化合物，成分不同所致实验结果不同。如果能进一步分离纯化出有效的单一成分，其抑制效果可能会更加明显。

总之，鼠妇水提取物及乙酸乙酯提取物均可抑制骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖，鼠妇水提取物可能通过调节ILK通路发挥该作用。

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[1]	姚晓玲, 彭建城, 许岳荣, 杨志东, 张顺聪. 可变角度零切迹前路椎间融合内固定系统治疗脊髓型颈椎病：30个月随访[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(9): 1377-1382.
[2]	安维政, 何萧, 任帅, 刘建宇. 肌源干细胞在周围神经再生中的潜力[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1130-1136.
[3]	张璟琳, 冷敏, 朱博恒, 汪虹. 干细胞源外泌体促进糖尿病创面愈合的机制及应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1113-1118.
[4]	陈晓旭, 罗雅馨, 毕浩然, 杨琨. 脱细胞支架制备及其在组织工程和再生医学中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 591-596.
[5]	康坤龙, 王新涛. 生物支架材料促进骨髓间充质干细胞成骨分化的研究热点[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 597-603.
[6]	沈佳华, 付勇. 基于石墨烯的纳米材料可否在干细胞领域应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 604-609.
[7]	张通, 蔡金池, 袁志发, 赵海燕, 韩兴文, 王文己. 基于透明质酸的复合水凝胶修复骨关节炎软骨损伤：应用与机制[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 617-625.
[8]	李辉, 陈良龙. 植骨材料在脊柱结核治疗中的应用与特征[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 626-630.
[9]	高仓健, 杨振, 刘舒云, 李浩, 付力伟, 赵天元, 陈威, 廖志垚, 李品学, 眭翔, 郭全义. 静电纺丝技术在肩袖损伤修复中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 637-642.
[10]	何云影, 李玲婕, 张舒淇, 李雨舟, 杨生, 季平. 聚丙烯酸/琼脂糖三维培养构建细胞球的方法[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 553-559.
[11]	何冠宇, 徐宝山, 杜立龙, 张同星, 霍振鑫, 申力. 天然丝素蛋白构建仿生取向微通道纤维环支架[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 560-566.
[12]	关健, 贾燕飞, 张葆鑫, 赵国中. 4D生物打印在组织工程的应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(3): 446-455.
[13]	刘家利, 索海瑞, 杨翰, 王玲, 徐铭恩. 填充结构对3D打印聚己内酯支架力学性能的影响[J]. 中国组织工程研究, 2022, 10(16): 2612-2617.
[14]	黄波, 陈明学, 彭礼庆, 罗旭江, 李获, 王皓, 田沁玉, 鲁晓波, 刘舒云, 郭全义. 可注射性甲基丙烯酸酐改性明胶/软骨源性基质微粒复合水凝胶支架的制备及生物相容性[J]. 中国组织工程研究, 2022, 10(16): 2600-2606.
[15]	徐人杰, 钟桥, 刘宇博, 虞宵, 颜勇卿, 赛吉拉夫, 杨惠林, 陈广祥. 敲减骨桥蛋白的膝关节滑膜细胞转录组和蛋白质组定量分析[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(11): 1680-1685.