胎盘间充质干细胞修复受损子宫内膜

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.13.018

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (13): 2074-2080.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.13.018

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胎盘间充质干细胞修复受损子宫内膜

牛婷，李爱斌，陈力

武汉大学人民医院生殖中心，湖北省武汉市 430060

修回日期:2016-12-09 出版日期:2017-05-08 发布日期:2017-06-09
通讯作者: 李爱斌，博士，主任医师，武汉大学人民医院生殖中心，湖北省武汉市 430060
作者简介:牛婷，女，1990年生，安徽省淮北市人，汉族，武汉大学人民医院在读硕士，主要从事生殖内分泌及不孕不育等方面的研究。
基金资助:
湖北省自然科学基金(2014CFB206)

The use of placental mesenchymal stem cells to repair the damaged endometrium

Niu Ting, Li Ai-bin, Chen Li

Reproductive Medical Center, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060, Hubei Province, China

Revised:2016-12-09 Online:2017-05-08 Published:2017-06-09
Contact: Li Ai-bin, M.D., Chief physician, Reproductive Medical Center, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060, Hubei Province, China
About author:Niu Ting, Studying for master’s degree, Reproductive Medical Center, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan 430060, Hubei Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Hubei Province, No. 2014CFB206

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
胎盘间充质干细胞：是成体干细胞的一种，来源丰富，标本易于获取，且可向成骨细胞、神经细胞及肝细胞等方向分化，临床应用不存在免疫排斥、不涉及伦理问题等优点，因此被认为是成体干细胞的理想来源，在骨组织修复、血管损伤领域及妊娠期高血压疾病等方面均有关于胎盘间充质干细胞的实验研究。动物及临床研究均显示了胎盘间充质干细胞在现代细胞治疗领域及组织工程领域的巨大潜力。
整合素αvβ3：整合素是由α、β亚单位组成的细胞表面受体，αvβ3 在子宫内膜中的表达很重要。Lessey 等发现αvβ3 表达在排卵后的黄体中期的子宫内膜，早孕的蜕膜中也存在，与“着床窗”的时间相吻合。有研究者对行试管助孕患者的子宫内膜进行活检，然后检测子宫内膜组织ανβ3的表达情况，结果显示ανβ3表达较高的患者妊娠率也更高，很多研究表明整合素是子宫内膜容受性的标志之一，因而，ανβ3的表达强度可以作为评价修复效果的指标之一。

摘要
背景：胎盘间充质干细胞来源丰富，易于获取，可向成骨细胞、神经细胞及肝细胞等方向分化，临床应用不存在免疫排斥、不涉及伦理问题等优点，因此被认为是成体干细胞的理想来源。
目的：观察同种异体胎盘间充质干细胞移植修复大鼠子宫内膜损伤的情况。
方法：取雌性SD大鼠，通过热损伤法建立子宫内膜损伤模型，造模后第15天，将造模成功的40只大鼠随机分为4组，宫腔移植组于宫腔局部注射同种异体胎盘间充质干细胞悬液1 mL，宫腔对照组于宫腔注射等量的PBS，尾静脉移植组于尾静脉注射同种异体胎盘间充质干细胞悬液1 mL，尾静脉对照组于尾静脉注射等量PBS。于大鼠第3个动情期时将造模雌鼠与雄鼠合笼，观察阴栓，在观察到阴栓的当天处死造模大鼠，游离出子宫组织，进行子宫内腺体计数、免疫组织化学及Western blot检测。
结果与结论：①腺体计数：宫腔移植组子宫内膜腺体数量多于其余3组(P < 0.05)，尾静脉移植组多于宫腔对照组、尾静脉对照组(P < 0.05)；②子宫内膜整合素αVβ3表达：免疫组织化学及Western blot检测均显示宫腔移植组整合素αVβ3强于其余3组(P < 0.05)，尾静脉移植组多于宫腔对照组、尾静脉对照组(P < 0.05)；③结果表明：胎盘间充质干细胞移植可不同程度地修复大鼠子宫内膜损伤组织，增加子宫内膜腺体计数，改善子宫内膜容受性。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID:0000-0001-6098-3289(牛婷)

关键词: 干细胞, 移植, 胎盘间充质干细胞, 子宫内膜损伤, 修复, ανβ3, 湖北省自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Placental mesenchymal stem cells are rich in source and easily obtained, which can differentiate into osteoblasts, nerve cells and liver cells. Additionally, there is no immune rejection and ethical issues in the clinical application. Therefore, placental mesenchymal stem cells are considered to be a good source of adult stem cells.
OBJECTIVE: To observe the effect of placental mesenchymal stem cell transplantation in the repair of endometrial lesions in rats.
METHODS: Endometrial damage models were established in rats by means of thermal damage, and on the 15th day after modeling, these rat models were randomly divided into four groups (n=10 per group): intrauterine injection of 1 mL of allogeneic placenta mesenchymal stem cell suspension (intrauterine transplantation group), intrauterine injection of the same amount of PBS (intrauterine control group), tail vein injection of 1 mL of allogeneic placenta mesenchymal stem cell suspension (intravenous transplantation group), and tail vein injection of the same amount of PBS (intravenous control group). The female rats experiencing the third estrus after modeling were caged with male rats to observe whether the vaginal plug appeared. The female rats were killed the same day when the vaginal plug was observed, and uterus tissues were taken to detect the number of endometrial glands as well as perform immunohistochemistry and western blot detection.
RESULTS AND CONCLUSION: The number of endometrial glands was highest in the intrauterine transplantation group followed by the intravenous transplantation group, and lowest in the two control groups (P < 0.05). The expression of integrin ανβ3 shown by immunohistochemistry and western blot was highest in the intrauterine transplantation group followed by the intravenous transplantation, and lowest in the two control groups (P < 0.05). These findings indicate that the placental mesenchymal stem cell transplantation can repair damaged endometrial tissues in rats to different degrees, by increasing endometrial glands count and improving the endometrial receptivity.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Stem Cell Transplantation, Endometrium, Placenta, Integrin alphaVbeta3, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

牛婷，李爱斌，陈力. 胎盘间充质干细胞修复受损子宫内膜[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(13): 2074-2080.

Niu Ting, Li Ai-bin, Chen Li. The use of placental mesenchymal stem cells to repair the damaged endometrium[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(13): 2074-2080.

图/表（结果） 3

2.1 大鼠子宫内膜损伤造模情况

2.1.1 大鼠正常子宫大体解剖及组织病理切片苏木精-伊红染色显微镜下观察大鼠正常子宫内膜组织，可见宫腔形态不规则，分为内膜层、肌层和外膜层，子宫内膜呈单层柱状上皮，覆盖子宫腔表面和腺腔，子宫内膜腺体主要位于黏膜下层和基底层，呈椭圆形或圆形(图1A)。

2.1.2 热损伤处理后大鼠子宫内膜组织 建模后1 d，大体可见子宫充血、肿大，苏木精-伊红染色显微镜下观察可见内膜间质充血、水肿，毛细血管扩张，其内可见大量红细胞；处理后2 d，大体见子宫水肿减轻，苏木精-伊红染色镜下可见内膜间质仍有血管充血，宫腔内可见脱落的子宫内膜组织碎片，子宫内膜组织结构模糊、紊乱；处理后7 d，大体可见受损子宫与周围组织粘连，苏木精-伊红染色镜下可见子宫内膜层变薄，腺体萎缩、变小，部分宫腔腔上皮内膜处中断；处理后14 d，大体见子宫形态缩小、苍白，苏木精-伊红染色见子宫腔变小，正常的内膜组织较少, 部分组织开始纤维化，苏木精-伊红染色显示为较多红色组织(图1B-E)。

2.1.3 生育能力检测 造模后第15天，将造模大鼠与雄性鼠合笼，观察到大鼠阴栓，记录为孕0.5 d，雌鼠受孕12 d 后处死，可见处理侧子宫萎缩变小，外观显示为白色条索状，子宫胚鼠数目为一两个，而对侧正常子宫侧可见胚鼠6-8只(图2)；统计学分析结果显示：内膜损伤侧子宫与正常子宫侧胚泡数目比较差异有显著性意义(1.00±0.82，6.00±0.97，P < 0.05)。

2.2 细胞移植后修复效果检测

2.2.1 细胞移植后大鼠子宫内膜腺体计数 细胞移植后，通过阴道脱落细胞涂片法确定大鼠动情周期，在第3个动情周期的动情期断颈处死大鼠，对各组横切面子宫内膜腺体计数，结果见表1，其中宫腔移植组子宫内膜腺体计数最多，尾静脉移植组腺体个数稍少，单因素方差分析检验各组子宫内膜腺体计数，各组间差异有显著性意义(P < 0.05)；SNK检验显示，宫腔移植组腺体个数多于宫腔对照组、尾静脉移植组、尾静脉对照组(P < 0.05)，尾静脉移植组多于宫腔对照组、尾静脉对照组(P < 0.05)，宫腔对照组与尾静脉对照组间无差异。

2.2.2 免疫组织化学检测子宫内膜整合素ανβ3表达 见图3。

ανβ3表达于子宫内膜腺上皮和腔上皮，是子宫内膜容受性的标记之一，表达于大鼠围着床期，可用于监测子宫内膜损伤修复的指标之一，用IPP软件来计算各组间ανβ3的吸光度值，结果见表1，宫腔移植组ανβ3的表达最强，尾静脉移植组稍弱，单因素方差分析检验各组间差异有显著性意义(P < 0.05)；SNK检验显示，宫腔移植组整合素ανβ3表达强于宫腔对照组、尾静脉移植组、尾静脉对照组(P < 0.05)，尾静脉移植组强于宫腔对照组、尾静脉对照组(P < 0.05)，宫腔对照组与尾静脉对照组间无差异。

2.2.3 Western blot检测子宫内膜整合素ανβ3的表达 见图4。

宫腔移植组ανβ3表达最强，尾静脉移植组稍弱，见表1，单因素方差分析检验各组间差异有显著性意义(P < 0.05)；SNK检验显示，宫腔移植组整合素ανβ3表达强于宫腔对照组、尾静脉移植组、尾静脉对照组(P < 0.05)，尾静脉移植组强于宫腔对照组、尾静脉对照组(P < 0.05)，宫腔对照组与尾静脉对照组间无差异。

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引言

子宫内膜作为人体代谢更新最为活跃的组织之一，正常月经周期主要是功能层在激素作用下增生、分泌、剥脱出血及再生，而基底层保持稳定。女性一生经历四百多个月经周期，其自身创面再生修复功能是维持月经和胚胎着床的生理基础，对育龄期妇女来说起着至关重要的作用。关于子宫内膜的修复机制，目前尚未完全阐明，主要有3种理论^[1]：一是来自于基底层的腺上皮分化为腔上皮后再生；二是间质细胞到上皮细胞的转化；三是子宫内膜干细胞分化为腔上皮后增殖再生。已有研究者从人类子宫内膜组织中分离培养出间充质样干细胞及上皮祖细胞^[2]，这些细胞具有自我更新、高度再生潜能且具有多向分化能力，主要存在于子宫内膜基底层，参与子宫内膜的再生及修复。然而，一旦受到流产、感染等多种因素的影响，子宫内膜干细胞将会受到影响，数量减少或其再生、分化、分泌等功能受损，影响子宫内膜的再生及自我修复，轻者子宫内膜变薄，重者可导致不同程度的宫腔粘连，引发育龄期妇女月经量减少甚至闭经、子宫内膜容受性降低，影响胚胎着床，严重影响妇女的生殖健康。子宫内膜损伤后修复障碍已成为目前生殖健康领域亟需解决的重要课题。

已有临床研究将自体骨髓间充质干细胞移植至重度Asherman’s综合征患者体内，显示有一定的治疗效果^[3]。但成人骨髓中的间充质干细胞的量非常少(0.001%-0.1%)^[4]，并且在疾病或衰老情况下，骨髓间充质干细胞的数量和分化能力降低^[5]，且骨髓采集是一个创伤性的过程，存在供区疼痛、感染等风险，因此寻找其他间充质干细胞十分重要。研究发现，胎盘间充质干细胞(placental mesenchymal stem cells，PMSCs)也是成体干细胞的一种，其来源丰富，标本易于获取且可向成骨细胞、神经细胞及肝细胞等方向分化，临床应用不存在免疫排斥、不涉及伦理问题等优点，因此被认为是成体干细胞的理想来源。在骨组织修复、血管损伤领域及妊娠期高血压疾病等方面均有关于PMSCs的实验研究^[6-9]。动物及临床研究均显示了PMSCs的在现代细胞治疗领域及组织工程领域的巨大潜力。

因而，依据PMSCs取材方便、来源充足、分化能力强且免疫排斥反应低，不涉及伦理问题的特点，将大鼠PMSCs分别通过直接宫腔注射及尾静脉注射移植入大鼠子宫内膜受损模型，细胞移植后，通过阴道脱落细胞学检查观察大鼠动情周期，在第3个动情周期的动情期将造模鼠与雄鼠合笼，通过观察阴栓来确定雌雄鼠是否交配，在观察阴栓到阴栓后的当天，处死造模雌鼠，游离出子宫组织，通过子宫内膜腺体恢复情况、整合素ανβ3的表达检测细胞移植后受损子宫内膜的修复情况，探索PMSCs在修复受损子宫内膜中的作用，为子宫内膜损伤修复的治疗提供一种新思路及新方法。

材料方法

1.1 设计 随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 实验于2015年1月至2016年2月在武汉大学中心实验室及动物室完成。

1.3 材料

实验动物：七八周龄雌性及雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠各数只，体质量200 g左右，SPF级别，由武汉大学动物实验中心提供，许可证号：SYXK(鄂)2015-0027，实验中对动物的处置符合医学伦理学标准。

实验细胞：PMSCs细胞由武汉大学2012级硕士研究生曹景云所赠。

主要试剂：DMEM培养液(美国HyClone公司)；胎牛血清(杭州四季青公司)；二甲基亚砜(Sigma公司)；免疫组化试剂盒、一抗兔抗鼠ανβ抗体、二抗羊抗兔IgG抗体(Bioss公司)；苏木精-伊红染色试剂盒(百浩生物科技公司)；DAB染色剂(武汉博士德)；BAC蛋白浓度测定试剂盒(美国Pierce公司)。

1.4 实验方法

大鼠子宫内膜损伤的模型制备：按照曲军英等^[10]的热损伤的原理方法来制备大鼠子宫内膜损伤的模型，具体步骤如下：取90只SD大鼠电子称重器来称质量，按100 mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉；待小鼠完全麻醉后，用体积分数75%乙醇消毒皮肤，扪及膀胱，在其上方纵行剪开2.0 cm切口，找到子宫，缓慢挑出；10 mL注射器抽取于8 mL 80 ℃预热生理盐水，取“Y”型子宫一侧(取左侧)近左右两侧子宫汇合处，用10 mL注射器针头穿入子宫后，展平子宫，待其在子宫腔内穿行约 3 cm后，将针头从另一侧宫腔刺出，出后接一皮管，将热水导入废液缸中；然后用同样方法热损伤其他大鼠子宫内膜组织，热水推毕后，缓慢拔出注射器针头，整平并复位子宫，生理盐水冲洗腹腔；无菌针线缝合腹部皮肤及皮下组织，转移至干净鼠笼，苦味酸做好记号，记录日期，待其麻醉清醒后，送回动物房；硫酸庆大霉素(8 IU 2 mL/支稀释成1 000 U/mL)术后连续3 d腹腔内注射2 mL稀释后的庆大霉素。模型制备后 1，2，7，14 d，每个时间点断颈处死10只大鼠，纵向剪开腹壁，找到大鼠子宫，观察并记录处理后的情况，剪取处理侧子宫组织0.5 cm，40 g/L多聚甲醛固定24 h；然后用PBS清洗，放于包埋器内，经过脱水、透明、浸蜡、苏木精-伊红染色步骤，正置显微镜下观察结果并进行拍照。将子宫内膜处理后15 d的10只大鼠与雄鼠合笼，大鼠与雄鼠在17：00合笼，雌、雄比例 3∶1，孕12 d时处死孕鼠，观察双侧子宫受孕情况。若实验过程中大鼠死亡，则以同样方法重新造模增补。

分组干预：造模后第15天，将造模成功的剩余40只雌性SD大鼠随机分4组干预，每组10只：宫腔移植组沿原切口打开腹腔，挑出左侧内膜损伤侧子宫，用1 mL注射器取1×10¹⁰ L^-¹的第3代PMSCs细胞悬液1 mL，将细胞悬液缓慢注射至宫腔内，留针20 s，以利于细胞弥散，复位子宫，1 mL生理盐水冲洗腹腔，逐层关腹，将大鼠移至37 ℃恒温板上，麻醉醒后送回动物房，并进行标记；宫腔对照组按照宫腔移植组方式在宫腔注射等量的PBS；尾静脉移植组于尾静脉注射1×10¹⁰ L^-¹的第3代PMSCs细胞悬液1 mL；尾静脉对照组于尾静脉注射等量PBS。

1.5 主要观察指标

细胞移植后取材及观察：细胞移植后，通过阴道脱落细胞学检查，观察大鼠的动情周期，在第3个动情周期的动情期将造模鼠与雄鼠合笼，通过观察阴栓来确定雌雄鼠是否交配，在观察阴栓到阴栓后的当天，处死造模雌鼠，游离出子宫组织，通过子宫内膜腺体恢复情况、测定整合素ανβ3的表达检测细胞移植后受损子宫内膜的修复情况。

免疫组织化学检测细胞移植后各组子宫内膜整合素ανβ3的表达：将0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液(pH=6.0)置于微波炉中加热沸腾，切片架放到烧杯内，放微波炉中继续中火10 min，取出后待其自然冷却进行抗原修复；用PBS漂洗3次，每张玻片上滴加体积分数3%H₂O₂(试剂A)，阻断内源性过氧化物酶；PBS漂洗滴加一抗覆盖切片组织，放入湿盒内，4 ℃孵育过夜；第2天取出湿盒，常温下放置45 min，PBS漂洗3次，每次3 min，每次洗完更换PBS；滴加二抗，按1∶100稀释兔抗羊IgG抗体，DAB显色3 min，显微镜下观察染色情况；染色结束用自来水冲洗10 min来终止反应；将玻片置于苏木精染液中复染5-10 min，1%盐酸乙醇中分化3 s，返蓝；滴加适量中性树胶封固。

Western blot检测：将组织块用冷PBS洗涤二三次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。清洗玻璃板，灌胶与上样，加足够的电泳液后上样电泳。转膜，将转好的膜于室温下脱色摇床上用5%的脱脂牛奶(0.5%TBST配)封闭1 h，稀释一抗(TBST溶解的5%脱脂牛奶，磷酸化蛋白使用TBST溶解的5%BSA)，4 ℃孵育抗体3 h，用TBST在室温下脱色摇床上洗3次，每次5 min，将二抗用TBST稀释3 000倍，室温下孵育30 min后，用TBST在室温下脱色摇床上洗3次，每次5 min，将胶片放在Odyssey进行扫描存档，PhotoShop整理去色，Alpha软件处理系统分析目标带的吸光度值。

1.6 统计学分析 采用SPSS 20.0软件包进行数据分析处理，计量资料采用x(_)±s表示，多组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，两两比较采用SNK检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

人类正常的月经周期主要是子宫内膜功能层在激素作用下增生、分泌、剥脱出血及再生，而基底层保持稳定。一旦子宫内膜受到流产、感染等因素影响到基底层时，子宫内膜的修复功能将会受到影响，轻者导致月经量减少，子宫内膜变薄，重者可导致闭经、宫腔粘连的发生，进而导致不孕。目前对子宫内膜损伤的治疗方法是宫腔镜下行粘连分离术，恢复一定的宫腔形态，术后放置宫内节育器或Foley气囊导尿管，辅以雌孕激素序贯周期治疗^[11]，局部应用透明质酸、Interceed或将人新鲜羊膜覆盖创面等^[12]，这些治疗方法对轻中度子宫内膜损伤效果明显，但对于重度子宫内膜损伤效果有限。子宫内膜损伤后修复障碍已成为目前生殖健康领域亟需解决的重要课题。

课题前期研究者已成功从大鼠胎盘中分离培养出PMSCs，对生物学特性进行了鉴定，培养出的PMSCs细胞呈均一的梭形；具有干细胞的特性，即CD105和CD29 表达阳性，表达率分别为92.18%、94.13%，不表达CD34，且可以向成骨及成脂细胞方向分化，证明了其多向分化潜能，为PMSCs修复大鼠受损子宫内膜提供了基础。通过模拟曲军英热损伤方法，实验成功建立了建立子宫内膜损伤模型，在子宫内膜损伤后15 d，通过宫腔局部注射及尾静脉注射将PMSCs移植至大鼠子宫内膜损伤模型中。此期通过宫腔局部注射进行细胞移植，可见大鼠子宫与周围组织粘连，需将其游离后进行细胞注射，且此期大鼠在造模时腹部的伤口已基本愈合，再次开腹间隔15 d，大鼠存活率较高。尾静脉移植不需要再次开腹，对大鼠损伤较小，但是大鼠尾静脉较细，在移植时应注意看清血管，在近尾尖近1/3交界处血管较清晰，此处进针更容易成功。同时关于干细胞移植的细胞浓度及移植量目前尚无统一标准，但是移植的浓度及数量会影响到细胞的修复效果，细胞过少达不到治疗效果，细胞过多会导致微血栓形成，甚至会使组织过度增生，本研究参考赵静^[13]骨髓间充质干细胞移植用于治疗薄型子宫内膜的研究中的移植浓度1×10¹⁰ L^-¹，移植量为1 mL来研究PMSCs对大鼠受损子宫内膜的修复效果，结果显示实验鼠并没有大量死亡，也无畸胎瘤形成，说明1×10¹⁰ L^-¹的细胞浓度移植是可行的。

在人类生殖过程中，从受精卵发育为一个成熟的胎儿，受精卵在母体子宫内成功着床对最终妊娠是否成功具有很大的影响作用。受精卵的着床过程是复杂的、程序化的，Halbersztadt等^[14]研究认为胚胎和子宫内膜间的相互识别、容纳、同步变化是着床成功的前提。整合素是由α、β亚单位组成的细胞表面受体，αvβ3在子宫内膜中的表达很重要。Lessey等^[15]发现αvβ3表达在排卵后的黄体中期的子宫内膜，早孕的蜕膜中也存在，与“着床窗”的时间相吻合。有研究者对行试管助孕患者的子宫内膜进行活检，然后检测子宫内膜组织ανβ3的表达情况，结果显示ανβ3表达较高的患者妊娠率也更高^[16]，很多研究表明整合素是子宫内膜容受性的标志之一，因而ανβ3的表达强度可作为评价修复效果的指标之一。实验选用 ανβ3来评PMSCs修复受损子宫内膜的效果。SD大鼠的动情周期为四五天，可分为动情前期、动情期、动情后期和动情间期，动情期持续12 h左右^[17]。通过阴道脱落细胞涂片法可以对大鼠各期进行区分，在细胞移植后第3个动情周期的动情期，将造模雌鼠与雄鼠合笼，观察阴栓，观察到阴栓的当天处死大鼠，游离出受损子宫组织，通过免疫组织化学及Western blot检测各组ανβ3表达情况。实验结果显示：显微镜下观察ανβ3表达在子宫内膜腺上皮及腔上皮的细胞质内，两种细胞移植组和对照组相比，免疫组织化学、Western blot两种方法检测均显示ανβ3的表达较高，且差异有统计学意义，两种细胞移植方式之间相比较，结果显示，宫腔局部移植组表达更高，差异有统计学意义。同时，结合细胞移植后子宫内膜腺体计数，结果均显示PMSCs移植后对大鼠受损子宫内膜具有一定的修复作用。

关于PMSCs对损伤部位修复机制目前尚不清楚，动物实验表明PMSCs体外可以分化为血管内皮细胞^[6]，并促进血管生成^[18-19]，提高周围性动脉病模型小鼠的运动能力^[20]。同时，PMSCs移植还可改善免疫性脑脊髓膜炎的反应^[21]，关于干细胞修复受损子宫内膜的机制，目前有有研究显示子宫内膜干细胞通过AKT和ERK途径促进损伤部位血管生成^[22]，骨髓间充质干细胞移植可改善大鼠子宫内膜损伤情况^[23]；子宫内膜的生长呈激素依赖性，雌激素在子宫内膜生长中发挥重要作用，研究发现雌激素通过旁分泌方式间接作用于子宫内膜间充质干细胞^[24-25]，且Wnt/β-Catenin信号通路的激活可能参与此过程的调节^[26]，Wnt基因家族与女性子宫内膜发育密切相关^[27]，因而PMSCs可能通过Wnt/β-Catenin信号通路修复受损子宫内膜，关于此假设，本课题将在以后的实验中进行进一步探索。本研究为子宫内膜损伤的修复治疗提供了一种新思路及新方法，但细胞移植后在子宫内膜受损处的定位、定位时间及具体修复机制仍需进一步的实验研究。

子宫内膜损伤后修复的理论之一是子宫内膜干细胞修复理论，宫腔粘连患者通过自体骨髓间充质干细胞移植后可改善子宫内膜环境的研究^[3]，也显示了子宫内膜损伤的修复障碍可能是由于子宫内膜组织干细胞的缺乏所导致。子宫内膜干细胞属于成体干细胞，具有自我更新和多向分化的能力，子宫内膜干细胞应用于子宫内膜损伤的修复具有一定的优越性，但重度子宫内膜损伤后，子宫内膜干细胞的数量及功能均会受到影响，因而如何获取可替代的干细胞是目前需要解决的问题。目前认为，干细胞修复受损组织的机制可能是其迁移能力及分泌功能、造血支持作用、免疫调节作用及其向多种细胞分化的功能^[28-35]。干细胞移植修复受损组织的研究目前多数还只是动物实验研究，临床研究尚较少，有研究者首次通过静脉将人PMSCs输注于特发性肺纤维化疾病患者体内的临床Ib期试验，研究者观察6个月，结果显示患者的肺纤维化程度没有进一步恶化，同时，细胞移植后的不良反应较轻，而且短期内显示人PMSCs移植是安全的^[36]。但是对于干细胞移植后的成瘤性，如何选取最优的干细胞种类、细胞移植途径、移植时机及移植细胞数目等仍需大量的动物及临床研究。

胎盘间充质干细胞修复受损子宫内膜

The use of placental mesenchymal stem cells to repair the damaged endometrium

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