地塞米松复合聚己内酯胶原支架材料的构建及性能评价

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.03.018

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (3): 402-407.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.03.018

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地塞米松复合聚己内酯胶原支架材料的构建及性能评价

王维^1，2，齐社宁¹，赵红斌^1，2，李振珺^1，2，李根²，张晓敏²，宋学文²

¹兰州大学基础医学院，甘肃省兰州市 730000；²解放军兰州军区兰州总医院骨科研究所，甘肃省兰州市 730050

收稿日期:2015-11-26 出版日期:2016-01-15 发布日期:2016-01-15
通讯作者: 齐社宁，博士，硕士生导师，教授，兰州大学基础医学院，甘肃省兰州市 730000
作者简介:王维，女，1988年生，湖北省人，汉族，兰州大学在读硕士。
基金资助:
甘肃省科技重大专项 (1203FKDA036)

Construction and performance of a dexamethasone/polycaprolactone collagen scaffold

Wang Wei^{1, 2}, Qi She-ning¹, Zhao Hong-bin^{1, 2}, Li Zhen-jun^{1, 2}, Li Gen², Zhang Xiao-min², Song Xue-wen²

¹School of Basic Medical Sciences of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; ²Institute of Orthopaedics, Lanzhou General Hospital of Lanzhou Military Command of Chinese PLA, Lanzhou 730050, Gansu Province, China

Received:2015-11-26 Online:2016-01-15 Published:2016-01-15
Contact: Qi She-ning, M.D., Master’s supervisor, Professor, School of Basic Medical Sciences of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, Chin
About author:Wang Wei, Studying for master’s degree, School of Basic Medical Sciences of Lanzhou University, Lanzhou 730000, Gansu Province, China; Institute of Orthopaedics, Lanzhou General Hospital of Lanzhou Military Command of Chinese PLA, Lanzhou 730050, Gansu Province, China
Supported by:
the Major Projects of Science and Technology in Gansu Province of China, No. 1203FKDA036

摘要/Abstract

摘要：

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文题释义：

地塞米松：又名氟美松、氟甲强地松龙、德沙美松，是糖皮质类激素。其衍生物有氢化可地松、泼尼松等，抗炎、抗过敏和抗毒作用较泼尼松更强，水钠潴留和促进排钾作用很轻，可肌注或静滴对垂体-肾上腺抑制作用较强。

聚己内酯：是一种线性脂肪族聚酯，具有生物可降解性药物易透过性生物良好相容性等优点，其与胶原蛋白结合可以充分发挥其作为支架材料的作用。

背景：组织工程支架材料已被广泛用于各种组织和神经修复，但是都有其局限性，效果不理想。

目的：构建一种能促进脊髓损伤修复的组织工程支架材料，以期用于脊髓损伤的再生和修复。

方法：乳化-溶剂挥发法制备地塞米松微球，以包封率、载药量以及收率的综合评分为指标，通过正交试验考察投药量、聚乳酸-羟基乙酸共聚物用量和聚乙烯醇质量分数对地塞米松缓释微球处方工艺的影响，扫描电镜观察微球表征。采用静电纺丝技术，以胶原蛋白和聚己内酯为原料制备复合地塞米松微球的纤维纳米支架，小鼠骨髓间充质干细胞与支架共培养3 d，扫描电镜观察细胞形态。复合材料植入大鼠脊髓缺损。

结果与结论：地塞米松缓释微球最佳制备工艺为投药量10 mg，乳酸-羟基乙酸共聚物用量80%，聚乙烯醇质量分数0.5%。微球外观圆整，表面光滑；微球的载药量、包封率和收率分别为(2.26±0.03)%，(83.62±0.21)%和(90.87±2.45)%。小鼠骨髓间充质干细胞在复合地塞米松微球的材料生长状况良好。动物实验结果显示，材料与宿主无免疫反应，且随着时间的延长材料逐步降解。说明复合地塞米松微球支架材料生物相容性良好，是一种良好的生物支架材料。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

ORCID: 0000-0003-3365-4943(齐社宁)

关键词: 生物材料, 材料相容性, 细胞外基质材料, 地塞米松微球, 胶原, 聚己内酯, 大鼠, 骨髓间充质干细胞, 乳酸-羟基乙酸共聚物, 生物相容性

Abstract:

BACKGROUND: Tissue engineering scaffold materials have been widely used in all kinds of tissue and nerve repair, but there are many limitations and the effect is not good.
OBJECTIVE: To construct a kind of tissue engineering scaffold material for the regeneration and repair of spinal cord injury.
METHODS: The dexamethasonemicrospheres were prepared by emulsification-solvent evaporation. The comprehensive scores of encapsulation efficiency, drug-loading rate and yield were taken as the indexes. The effect of dosage of dexamethasone and polylactic acid-glycolic acid copolymer and mass fraction of polyvinyl alcohol on formulation process of dexamethasone sustained-release microsphere was inspected by orthogonal experiment. The characterization of microspheres was observed by scanning electron microscope. The nanofiber scaffold of compound dexamethasone microspheres was prepared by taking collagen protein and polycaprolactone as raw materials using electrospinning technology. The mouse bone marrow mesenchymal stem cells were co-cultured with the scaffold for 3 days. Cell morphology was observed by scanning electron microscope. Composite material was implanted into the defect of spinal cord in rats.
RESULTS AND CONCLUSION: The optimal preparation process of dexamethasone sustained-release microspheres: dosage of dexamethasone was 10 mg, dosage of poly lactic acid-glycolic acid copolymer was 80%, mass fraction of polyvinyl alcohol was 0.5%. Appearance of dexamethasone microspheres was smooth, with a round surface. The encapsulation efficiency, drug-loading rate and yield of microspheres were (2.26±0.03)%, (83.62±0.21)% and (90.87±2.45)% respectively. The growth of mouse bone marrow mesenchymal stem cells was good on the surface of compound dexamethasone microspheres. There was no immunological reaction between the implant material and host, and the material was degraded gradually with time. These results demonstrate that the compound dexamethasone microsphere scaffold has good biocompatibility, which is a favorable kind of biological scaffold material.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

王维，齐社宁，赵红斌，李振珺，李根，张晓敏，宋学文. 地塞米松复合聚己内酯胶原支架材料的构建及性能评价[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(3): 402-407.

Wang Wei, Qi She-ning, Zhao Hong-bin, Li Zhen-jun, Li Gen, Zhang Xiao-min, Song Xue-wen . Construction and performance of a dexamethasone/polycaprolactone collagen scaffold[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(3): 402-407.

图/表（结果） 7

2.1 地塞米松微球制备工艺正交试验结果单因素试验发现二氯甲烷4 mL，聚乙烯醇20 mL，条件下制备的微球收率高于其他条件。A-C分别代表投药量、乳酸-羟基乙酸共聚物量、聚乙烯醇质量分数。正交试验结果得出对载药量的影响为C > B > A，对包封率的影响为B > A > C。为了选出最佳的制备工艺选择投药量、乳酸-羟基乙酸共聚物用量和聚乙烯醇质量分数为考察因素，载药量、包封率以及收率的综合评分为指标，正交试验结果见表1，方差分析表见表2。投药量、乳酸-羟基乙酸共聚物用量和聚乙烯醇质量分数都对微球的制备工艺均有显著性意义(P < 0.01或P < 0.05)，根据方差分析结果得出影响顺序A > C > B，最佳制备工艺为A3B2C1。按照优化处方制备3批地塞米松微球，结果平均载药量(2.26±0.03)%，平均包封率(83.62± 0.21)%，平均收率(90.87±2.45)%，说明优化的制备工艺重复性良好。

2.2 地塞米松微球含量的标准曲线通过紫外分光光度计得出地塞米松含量的标准曲线为y=0.042 4x+0.007(r ²= 0.999)，线性关系良好(图1)。

2.3 地塞米松微球的形态根据上述正交试验筛选出最佳制备工艺，扫描电镜观察制备的微球形态圆整、表面光滑，粒径大小较均一，直径为1-3 μm(图2)。

2.4 地塞米松的缓释曲线根据正交试验分析结果，将 10 mg地塞米松、80 mg乳酸-羟基乙酸共聚物和0.5%聚乙烯醇制备的微球用于体外释放。地塞米松微球体外释放结果见图3。 4 h内药物的释放率低于10%，第10天药物的释放约达到50%，第20天以后药物的释放率趋于平稳。

2.5 支架材料的表面特征扫描电镜结果显示静电纺丝技术制备聚己内酯胶原蛋白壳层致密(图4)。

2.6 细胞与支架材料共培养情况扫描电镜显示，材料与细胞共培养3 d后，复合地塞米松微球材料表面细胞的黏附和生长情况明显优于没有复合地塞米松微球的纤维纳米材料表面细胞生长情况(图5)，表明复合地塞米松微球的材料与细胞具有良好的生物相容性。

2.7 支架材料植入体内后的降解苏木精-伊红染色结果显示，植入1周时支架材料壳层较致密，胶原芯层未见明显降解(图6a)，壳层与组织结合不紧密，壳层未见降解(图6d)，4周时壳层结构疏松，胶原芯层已大部分降解，有部分细胞长入壳层(图6b)，壳层开始降解，与组织紧密结合(图6e)，16周部分壳层材料降解，大量细胞长入壳层，芯层胶原已全部降解(图6c)，壳层降解明显，壳层疏松，与组织紧密结合并长入壳层(图6f)。随着时间延长可见壳层逐渐降解并与组织结合越紧密，表明材料生物相容性良好。

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引言

脊髓损伤后再生曾一度被认为是不可能的，在过去20多年的研究表明脊髓损伤以后的轴突再生是可能的^[1]。20世纪80年代，美国的Joseph和Robert教授首次阐述了组织工程学的概念。作为年轻的学科，组织工程学旨在为保留和修复受损组织和器官提供生物学基础，而将组织工程方法应用于脊髓损伤修复领域前景广阔。

脊髓损伤按发生机制可以分为原发性损伤与继发性损伤，前者是由于初始外力直接或间接作用于脊髓所造成的，后者则是在前者的基础上通过一系列生理生化机制，如氧化应激炎症反应及兴奋性氨基酸过度释放等^[2]，脊髓损伤后出现的炎症反应，主要由巨噬细胞、成纤维细胞等组成的瘢痕组织来修复，这是影响机体的运动和感觉功能恢复重要原因。研究发现地塞米松能有效的抑制成纤维细胞的生长和表达，在支架材料中加入地塞米松药物，可以减少瘢痕形成^[3-4]。但是由于地塞米松疏水性和半衰期短的特点^[5]，为了延长药物作用时间，维持药物浓度，减少成纤维细胞生成的作用，因此作者尝试制备一种地塞米松微球，并在其中加入胶原蛋白制成芯层材料，胶原蛋白是一种天然高分子生物材料，大量研究表明胶原蛋白对细胞具有趋化作用，能促进细胞的黏附和增殖，诱导细胞分化，其免疫原性低，是一种良好的支架材料^[6-9]。但胶原蛋白的力学性能差，易变形，其次新生组织产生的酶会将胶原蛋白水解，导致支架塌陷。研究发现，胶原蛋白可以通过与其他材料共同作用，发挥其作为支架材料的优势^[10]。聚己内酯是一种线性脂肪族聚酯，具有生物可降解性药物易透过性生物良好相容性等优点^[10]，其与胶原蛋白结合可以充分发挥其作为支架材料的作用。

静电纺丝法是一种简单、快捷，且可以较大规模制备均匀、连续的一维纳米结构材料的方法，其制备的纤维直径可从几十个纳米到几微米，研究和开发静电纺丝技术及其制备的一维纳米结构材料的应用已经成为各国科研人员广泛关注的课题，到目前为止，通过电纺技术已经实现了近百种不同聚合物纳米纤维、各种类型聚合物/无机物复合纳米纤维及无机纳米纤维的制备^[11]。实验以高压静电纺丝技术制作聚己内酯胶原蛋白纤维纳米壳层，利用真空冷冻干燥发制备胶原芯层^[12]，芯层与壳层两者嵌套构建组织工程支架材料，并通过动物实验验证其是否用于能够修复脊髓损伤的应用研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计生物材料制备及动物实验。

1.2 时间及地点实验于2014年8月至2015年8月在解放军兰州军区兰州总医院骨研所完成。

1.3 材料清洁级雄性Wistar大鼠7只，体质量约200 g，实验方案经兰州军区兰州总医院动物实验科批准，许可证号：SYXK(甘)2011-0001，符合国家实验动物检疫标准。

1.4 方法

1.4.1 地塞米松微球的制备与评价根据正交试验表设计实验，考察投药量、载体量、聚乙烯醇(天津市恒兴化学试剂)浓度对地塞米松微球制备的影响。以载药量、包封率以及收率的综合评分为指标。

微球的制备工艺：采取W/O/W的方法，称取一定的乳酸-羟基乙酸共聚物(美国Sigma公司)，溶入二氯甲烷(天津市恒兴化学试剂)，搅拌过程在通风处理处进行。得到上清液后，1 000 r/min离心5 min，三蒸水洗涤3次，然后冷冻干燥，收集微球备用。称取适量地塞米松(Solarbio公司)，配制成10 mL浓度为100 mg/L，测得在240 nm处出现紫外吸收峰。利用紫外分光光度计(HP公司)测定已知地塞米松浓度，绘制标准浓度曲线。精密量取0.1 mg/L的地塞米松对照品溶液0.5，1.0，1.5 mL(n=3)，240 nm处测得的回收率为98.0%-99.8%，平均收率99.0%，表明该方法准确可靠。称取冷冻干燥微球10 mg，紫外分光光度计在240 nm处测定其吸光值。根据标准曲线得出的公式，测定上清液浓度，并按照下列计算公式载药量=微球中药物含量/10 mg，包封率=微球中药量/投药量，分别计算载药量和包封率。

取冷冻干燥后的不同条件制备出的微球，分别称取 40 mg，置于透析袋内，分别于1，2，4，8，12，24，48，72，96 h时从透析袋内取1 mL，同时每个时间点回补1 mL超纯水。收集于离心管中，置-20 ℃，以备测定。以时间为横坐标、累积释放率为纵坐标绘制缓释曲线。

1.4.2 复合支架的制备采用高压静电纺丝技术制备纳米纤维壳层。0.3 g胶原与0.2 g聚己内酯(美国Sigma公司)溶于10 mL六氟异丙醇中制成纺丝液。静电纺丝技术参数设定为电压15 kV，接收距离12 cm，流速1 mL/h。制成的纤维壳层长度20 cm，内直径3 mm，外直径3.5 mm，管壁厚度0.3 mm。真空干燥96 h，常温备用。利用真空冷冻干燥法制备芯层。用5 mL注射器将自制胶原蛋白装入特制模具中，置于-20 ℃冰箱冷冻12 h，真空冷冻干燥机24 h，制成空白胶原芯层。按照10 mg地塞米松微球与30 mL胶原混合均匀，采用上述方法制成复合地塞米松微球的胶原芯层。芯层用1%京尼平交联。取2 mm长空白胶原芯层和复合地塞米松微球的胶原芯层分别放入2个3 mm的纤维壳层中，使胶原芯层与壳层二者嵌套构建成管中管结构的支架材料。密封后⁶⁰Coγ(2×10⁴ Gy)照射1 h，常温保存备用。

1.4.3 复合支架与细胞共培养取1只大鼠，脱颈处死，体积分数75%乙醇在超净台浸泡20 min，取其右后腿的股骨和胫骨，剥离肌肉，分别剪去近端，DMEM-F12完全培养基(含体积分数10%胎牛血清)注射器冲洗骨髓腔，经细胞筛滤过，获得原代大鼠骨髓间充质干细胞，传代培养。取第5代大鼠骨髓间充质干细胞生长3 d后，按细胞浓度为3×10⁵ L^-¹接种于支架表面，加入DMEM/F12培养基，置于37 ℃的CO₂培养箱中培养3 d，取出材料，2.5%戊二醛固定。检测聚己内酯胶原支架材料在体外与细胞培养情况。采用低真空扫描电子显微镜(日本电子光学公司)观察并拍照。

1.4.4 动物模型的制备及复合支架的修复将6只大鼠以体积分数10%水合氯醛腹腔麻醉，在T₁₀处纵切，剥离肌肉，脊髓全切约2 mm，建立脊髓缺损模型，植入约2 mm复合地塞米松微球的聚己内酯胶原支架材料，缝合。

1.4.5 支架材料的形态观察造模后1，4，16周，各取2只大鼠以体积分数10%水合氯醛行腹腔麻醉，取出脊柱，体积分数10%甲醛固定7 d，常规包埋并石蜡切片，切片厚度约5 μm，苏木精-伊红染色，倒置显微镜(德国Leica公司)观察。

1.5 主要观察指标地塞米松微球表征以及缓释率，材料表面细胞生长情况及植入体内后的降解情况。

1.6 统计学分析采用统计学软件SPSS 17.0进行单因素方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

由于地塞米松的特殊理化性质，前期实验W/O/W的方法，地塞米松在水中会直接析出，故将地塞米松溶于微量的无水乙醇再加入水的这种溶液为内水相，为研究无水乙醇对微球的载药量、包封率和收率的影响，实验过程中，模仿地塞米松微球的制作过程，在只加入无水乙醇，不加入地塞米松条件下制备微球，将冷冻干燥的微球10 mg，用上述萃取方法取得其上清液，用紫外分光光度计在240 nm处测得其吸光度值为0.001 24，说明加入的微量无水乙醇对于微球的载药率和包封率没有影响。初乳的搅拌速率影响微球的制备工艺^[13]，因此本实验的初乳采用超声震碎仪乳化。但也有研究认为乳酸-羟基乙酸共聚物的组成不同对支架材料的力学性能、降解性能和生物学性能都有影响^[14]。本实验采用乳酸-羟基乙酸共聚物(50/50)制备的微球表面形态相较其他乳酸-羟基乙酸共聚物组成更光滑、圆整。采用正交试验筛选出微球最佳制备工艺，地塞米松微球缓释结果表明，地塞米松能在支架材料中持续给药，维持材料中的药物浓度，增加药物作用时间。

大量研究表明胶原蛋白对细胞具有趋化作用，能促进细胞的黏附，其免疫原性低是一种良好的支架材料^[6-9]。但胶原蛋白的力学性能差，易变形，其次新生组织产生的酶会将胶原蛋白水解，导致支架塌陷。但是有研究发现，胶原蛋白可以通过与其他材料(聚己内酯)共同作用，发挥其作为支架材料的优势。既往研究还发现聚己内酯能通过减少胶质细胞的聚集增殖达到修复脊髓损伤的效果^[15]。

组织工程自上世纪问世以来，一直用于脊髓损伤动物模型的修复研究^[16-18]，利用靶向微观胶原蛋白作为支架材料用于修复大鼠脊髓损伤，也取得一定程度的进展。还有学者利用在胶原材料中加入碱性成纤维细胞生长因子来修复脊髓损伤^[19]。聚己内酯与明胶为原料，采用静电纺丝技术制备纤维纳米支架用于神经组织工程研究^[20-21]。因此，实验以胶原蛋白为芯层，聚己内酯胶原蛋白为壳层，构建一种修复脊髓损伤的管中管结构组织工程支架材料。研究发现可以利用药物疗法结合组织工程来修复脊髓损伤^[22]。在胶原蛋白芯层中加入地塞米松微球，地塞米松是一种有效的糖皮质激素，能抑制瘢痕形成^[5]，然而在聚己内酯胶原蛋白支架材料中加入地塞米松微球可以减少继发性脊髓损伤。此次动物实验结果显示植入动物体内的复合地塞米松微球的聚己内酯胶原蛋白支架材料在动物体内降解情况良好，细胞能长入材料中，而且随着时间的延长，材料降解越明显，细胞长入越多，表明该材料生物相容性良好，可以用于脊髓损伤动物模型研究。

有研究认为材料的表面形态和结构是影响细胞黏附、增殖的最重要因素^[23-31]，采用高压静电纺丝技术制备的聚己内酯支架材料，具有较高的孔隙率以及表面积与体积比，因此制备复合地塞米松管中管结构的支架材料，有望成为脊髓损伤的组织工程研究中的重要支架材料。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

地塞米松复合聚己内酯胶原支架材料的构建及性能评价

Construction and performance of a dexamethasone/polycaprolactone collagen scaffold

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[1]	申晋波, 张林. 急性力竭运动导致大鼠跟腱微损伤的超微结构变化及机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1190-1195.
[2]	曾祯, 胡经纬, 李璇, 唐琳梅, 黄志强, 李明星. 超声造影定量分析重度失血性休克再灌注模型大鼠复苏期的肾血流灌注[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1201-1206.
[3]	唐辉, 姚志浩, 罗道文, 彭双麟, 杨双林, 王浪, 肖金刚. 高脂高糖饮食结合链脲佐菌素建立2型糖尿病性骨质疏松症大鼠模型[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1207-1211.
[4]	王诗琦, 张金生. 中医药调控缺血缺氧微环境对骨髓间充质干细胞增殖、分化及衰老的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1129-1134.
[5]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[6]	梁学奇, 郭黎姣, 陈贺捷, 武杰, 孙雅琪, 邢稚坤, 邹海亮, 陈雪玲, 吴向未. 泡状棘球绦虫原头蚴抑制骨髓间充质干细胞向成纤维细胞的分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 996-1001.
[7]	耿瑶, 尹志良, 李兴平, 肖东琴, 侯伟光. hsa-miRNA-223-3p调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1008-1013.
[8]	伦志刚, 金晶, 王添艳, 李爱民. 过氧化物还原酶6干预骨髓间充质干细胞增殖及体外向神经谱系诱导分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1014-1018.
[9]	朱雪芬, 黄成, 丁健, 戴永平, 刘元兵, 乐礼祥, 王亮亮, 杨建东. 胶质细胞神经营养因子诱导骨髓间充质干细胞向功能性神经元分化的机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1019-1025.
[10]	段丽芸, 曹晓沧. 人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡调节肠炎小鼠肠黏膜胶原的沉积[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1026-1031.
[11]	裴丽丽, 孙贵才, 王弟. 丹酚酸B抑制骨髓间充质干细胞氧化损伤及促进分化为心肌样细胞[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1032-1036.
[12]	邹刚, 徐志, 刘子铭, 李豫皖, 杨继滨, 金瑛, 张骏, 葛振, 刘毅. 人脱细胞羊膜支架促进Scleraxis修饰人羊膜间充质干细胞体外成韧带分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1037-1044.
[13]	陈俊毅, 王宁, 彭称飞, 朱伦井, 段江涛, 王烨, 贝朝涌. 脱钙骨基质与慢病毒介导沉默P75神经营养因子受体转染骨髓间充质干细胞构建组织工程骨[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 510-515.
[14]	李黎, 马力. 磁性壳聚糖微球固定化乳糖酶及其酶学性质[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 576-581.
[15]	刘旒, 周箐竹, 龚桌, 刘博言, 杨斌, 赵娴. 胶原/无机材料构建组织工程骨的特点及制造技术[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 607-613.