早期糖尿病视网膜病变模型大鼠玻璃体腔注射安维汀后房水细胞因子变化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.18.026

中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (18): 2933-2939.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.18.026

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早期糖尿病视网膜病变模型大鼠玻璃体腔注射安维汀后房水细胞因子变化

肖津安1，2，白清玉3，谢安明1

1西安交通大学医学院第一附属医院眼科，陕西省西安市 710061；西安市第四医院，2眼科，3信息科，陕西省西安市 710004

收稿日期:2015-03-02 出版日期:2015-04-30 发布日期:2015-04-30
通讯作者: 谢安明，硕士，主任医师，西安交通大学医学院第一附属医院，陕西省西安市 710061
作者简介:肖津安，女，1977年生，陕西省凤翔县人，汉族，西安交通大学在读硕士，副主任医师，主要从事白内障、青光眼和眼底病的研究。

Changes of cytokines in the aqueous humor following Avastin intravitreous injection in early diabetic retinopathy rats

Xiao Jin-an1, 2, Bai Qing-yu3, Xie An-ming1

1Department of Ophthalmology, First Affiliated Hospital, Medical College, Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China; 2Department of Ophthalmology, Fourth Hospital of Xi’an, Xi’an 710004, Shaanxi Province, China; 3Department of Information, Fourth Hospital of Xi’an, Xi’an 710004, Shaanxi Province, China

Received:2015-03-02 Online:2015-04-30 Published:2015-04-30
Contact: Xie An-ming, Master, Chief physician, Department of Ophthalmology, First Affiliated Hospital, Medical College, Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China
About author:Xiao Jin-an, Studying for master’s degree, Associate chief physician, Department of Ophthalmology, First Affiliated Hospital, Medical College, Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, Shaanxi Province, China; Department of Ophthalmology, Fourth Hospital of Xi’an, Xi’an 710004, Shaanxi Province, China

摘要/Abstract

摘要：

背景：关于抑制血管生成药安维汀治疗早期糖尿病视网膜病变大鼠的机制研究多数局限于血管内皮生长因子，而结缔组织生长因子和色素上皮衍生因子也在其中起重要的作用。
目的：探讨安维汀玻璃体腔注射在早期糖尿病视网膜病变模型大鼠应用后房水细胞因子的变化及意义。
方法：经链脲佐菌素诱导10周建立早期糖尿病视网膜病变模型大鼠，分别采用安维汀(1.25，2.5 mg)和生理盐水进行玻璃体腔注射。
结果与结论：ELISA检测显示，与生理盐水注射组比较，两个安维汀注射组房水中血管内皮生长因子质量浓度降低，色素上皮衍生因子和结缔组织生长因子质量浓度增高(P < 0.05)，但两组间上述细胞因子的浓度差异无显著性意义(P > 0.05)。结果证实，安维汀玻璃体腔注射在早期糖尿病视网膜病变大鼠应用促进新生血管的细胞因子血管内皮生长因子水平降低，抑制新生血管的细胞因子色素上皮衍生因子质量浓度升高，促进结缔组织生长因子水平升高。

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关键词: 实验动物, 基因病毒载体及相关因子模型, 眼, 糖尿病视网膜病变大鼠模型, 安维汀, 房水, 细胞因子, 血管内皮生长因子, 色素上皮衍生因子, 结缔组织生长因子, 链脲佐菌素

Abstract:

BACKGROUND: Studies on the inhibitory mechanism of Avastin for early diabetic retinopathy rats are mostly confined to the vascular endothelial growth factor, while connective tissue growth factor and pigment epithelium-derived factor also play an important role in the disease.
OBJECTIVE: To evaluate the changed cytokines of aqueous humor and significance of Avastin intravitreous injection in early diabetic retinopathy rats.
METHODS: Rat models of early diabetic retinopathy were established by inducing with streptozotocin for 10 weeks. Avastin (1.25 mg and 2.5 mg) and physiological saline were injected in the vitreous space.
RESULTS AND CONCLUSION: Enzyme linked immunosorbent assay results revealed that compared with the physiological saline injection group, mass concentration of vascular endothelial growth factor was reduced, mass
concentrations of pigment epithelium-derived factor and connective tissue growth factor was increased in aqueous humor of the two Avastin injection groups (P < 0.05), but no significant difference in concentration of above cytokines was detected between the two groups (P > 0.05). Results verified that Avastin intravitreous injection decreased vascular endothelial growth factor levels, decreased pigment epithelium-derived factor mass concentration and increased connective tissue growth factor levels in rat models of early diabetic retinopathy.

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Key words: Eye, Retinal Diseases, Diabetes Mellitus, Aqueous Humor, Cytokines

中图分类号:

R318

肖津安，白清玉，谢安明. 早期糖尿病视网膜病变模型大鼠玻璃体腔注射安维汀后房水细胞因子变化[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(18): 2933-2939.

Xiao Jin-an, Bai Qing-yu, Xie An-ming. Changes of cytokines in the aqueous humor following Avastin intravitreous injection in early diabetic retinopathy rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(18): 2933-2939.

图/表（结果） 1

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引言

糖尿病是一种全球性常见疾病，目前全球患者超过2.2亿，全球糖尿病的负担日益严重。根据世界卫生组织预测，到2030年糖尿病患者将达到3.66亿人，糖尿病将成为全球第7大死亡原因。糖尿病分为胰岛素依赖型糖尿病(1型糖尿病)和非胰岛素依赖型糖尿病(2型糖尿病)，其中90%-95%的患者为2型糖尿病^[1-2]。糖尿病是由于糖代谢紊乱导致全身多器官组织血管受累，长期不治及治疗不当可能会导致糖尿病慢性并发症的发生，此病程进展缓慢，眼部常见的慢性并发症有糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)，它是糖尿病最常见微血管并发症之一，增殖型糖尿病视网膜病变成为发达国家中工作人群致盲性眼部疾病的首位^[3]，也是糖尿病患者致盲的首要原因。糖尿病视网膜病变分为非增殖性糖尿病视网膜病变和增殖性糖尿病视网膜病变，分期标志以是否出现新生血管为标准，目前增殖型糖尿病视网膜病变有效的治疗技术有玻璃体切割术联合全视网膜光凝治疗，但因严重的视网膜新生血管和纤维增殖导致此病的致盲率仍很高，手术后视功能恢复不佳，多因患者就诊时大部分已经处于增殖性糖尿病视网膜病变晚期，因此对于糖尿病视网膜病变早期诊断早期治疗尤为重要，此点对于提高的患者视功能有重大意义。因此实验以早期糖尿病视网膜病变为研究对象，经链脲佐菌素建立糖尿病视网膜病变大鼠模型。

多数研究证实，在糖尿病视网膜病变的发病过程中，生长因子的过度表达和糖尿病视网膜病变的发生和进展密切相关，异常表达的生长因子能够诱导糖尿病视网膜病变的视网膜新生血管形成和细胞增殖，视网膜的缺血缺氧促成新生血管的表达。关于细胞因子在糖尿病视网膜病变发病机制的作用研究成为研究的热点，目前与视网膜新生血管形成有关的细胞因子研究中揭示生长因子在糖尿病视网膜病变的病程进展中起重要作用^[4-5]。目前研究的热点是调节血管生成的细胞因子的失衡，眼内的促视网膜新生血管形成的主要因子为血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，新生血管抑制因子有色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)，与血管生成和组织纤维化增殖密切相关的有结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)。

抗VEGF治疗成为近年新生血管研究的热点，代表性的药物之一为安维汀，实验以检测房水细胞因子为研究对象，采用动物实验建立早期糖尿病视网膜病变大鼠模型，比较安维汀在玻璃体腔注射前后，3种细胞因子在房水中的表达变化，从而证实3种细胞因子在早期糖尿病视网膜病变发病中的作用机制，以及安维汀应用后的意义。

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材料方法

设计：随机对照动物模型实验。

时间及地点：于2013年5月至2014年4月在西安交通大学第一附属医院眼科实验室完成。

材料：健康45日龄雄性SD大鼠50只，体质量170-180 g，购买自西安交通大学动物中心，动物许可证号：SYXK(陕) 2012-005。大鼠均经过尾静脉取血检测空腹血糖，入选血糖正常大鼠。实验期间，室温约20 ℃，每日光照约12 h，自由饮水。为避免实验环境的改变对大鼠的影响，所有大鼠饲养1周当大鼠各项生命体征平稳后再进入实验。

药物：安维汀：100 mg，4 mL (25 g/L)，批号：H0129B03，批准文号：进口药品注册证号S20100023，购自美国罗氏公司。

构建糖尿病模型相关试剂及仪器：
试剂及仪器	来源
Rat VEGF ELISA试剂盒，Monoclonal Anti-CTGF antibody，链脲佐菌素	美国Sigma公司
Rat PEDF ELISA试剂盒	Bioproducts MD公司
Chromate 4300 酶标仪	美国Awareness公司

方法：

分组及干预：健康雄性SD大鼠50只，36只经链脲佐菌素诱导建立糖尿病动物模型，9只为正常对照组，5只大鼠实验中死亡予以剔除。将剩余的大鼠随机分为未注射药物组、安维汀1.25 mg注射组(0.05 mL)、安维汀2.5 mg注射组(0.1 mL)、生理盐水注射组(0.1 mL)，每组9只。

构建早期糖尿病视网膜病变模型大鼠：所有大鼠禁食12 h，正常饮水，实验大鼠称体质量后，按60 mg/kg用1 mL注射器腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病^[6-7]，正常对照组按60 mg/kg腹腔注射柠檬酸缓冲液。整个过程严格无菌操作，尽量在10 min内完成，注射链脲佐菌素后30 min恢复进食，72 h后采尾血用Accu-chekactive血糖仪(德国Roche公司)

测血糖及尿糖，选取血糖>16.7 mmol/L 以及尿糖强阳性的SD大鼠为糖尿病模型，剔除血糖低于16.7 mmol/L的大鼠。成模后每周测量大鼠体质量和空腹血糖1次, 记录饮水量、饮食、精神状态等变化情况，去除中间死亡鼠及血糖不达标的正常鼠，其余列为研究对象，术前应用抗生素滴眼液滴眼，链脲佐菌素诱导糖尿病后10周的SD大鼠可作为早期糖尿病视网膜病变的动物模型；抽取检测大鼠房水细胞因子VEGF，PDEF，CTGF的表达，随后2个安维汀注射组玻璃体腔内注射安维汀，生理盐水注射组玻璃体腔内注入生理盐水。术前及术后给予抗生素滴眼液滴眼，监测术后眼压均在正常范围内，且均未发生操作不当导致的医源性视网膜裂孔及眼内新鲜出血，眼内炎症，视网膜脱离等并发症。1周后测定大鼠房水细胞因子VEGF，PDEF及CTGF的表达，比较上述细胞因子在5组间的差异以及安维汀注射组玻璃体腔注射后对房水细胞因子的影响。

玻璃体腔注射：安维汀玻璃体腔注射在无菌的动物手术室内进行，术前3 d抗生素滴眼液点眼，体积分数5%水合氯醛按10 μL/g腹腔注射麻醉SD大鼠，常规消毒、铺巾，严格无菌操作，开睑器开睑，充分暴露眼球于患眼颞上角膜缘后1 mm处用1 mL注射器玻璃体腔内注射安维汀 0.05 mL或0.1 mL(1.25 mg或2.5 mg)，术后给予抗炎治疗，每日进行眼压、裂隙灯及眼底检查，所有实验大鼠眼压正常，未发生角膜擦伤、晶状体损伤、虹膜损伤、医源性视网膜裂孔、葡萄膜炎、视网膜脱离、眼内新鲜出血、眼内炎症和高眼压等并发症。

房水采集：有研究采用高敏感度ELISA检测对侧未注射眼的眼内药物浓度，用低敏感度ELISA检测注射眼的眼内药物浓度，两者测量的结果显示，注射后第8天血清中bevacizumab达到最大浓度^[8]，因此实验选择玻璃体腔注药后7 d进行房水检测。

麻醉和无菌操作同前，在玻璃体腔注射安维汀前及注射后1周抽取房水，首先以1∶2 000的妥布霉素生理盐水冲洗结膜囊，以无菌1 mL一次性塑料TB针管接9号针头，于角膜缘内1 mm作前房穿刺，用2-5 s从瞳孔中央区抽吸房水0.1-0.2 mL，注意事项有抽吸时勿伤及虹膜晶状体及角膜内皮，将样本置入0.5 mL Eppendorf 管，立即放入液氮中，然后存放于-75 ℃冰箱中储存，术后所有实验动物无眼内炎、眼内出血、虹膜损伤等并发症发生。

细胞因子的ELISA检测：采用ELISA法测定标本中的VEGF，PEDF，CTGF的质量浓度。在半对数纸上以标准品的吸光度值作图，绘制此试剂盒的标准曲线，根据样品的吸光度值在该曲线上查出相应的质量浓度，单位为μg/L。检测实验动物房水中3种细胞因子的表达，比较不同剂量安维汀对细胞因子表达的影响。

主要观察指标：各组大鼠房水中VEGF，PEDF，CTGF质量浓度变化。

统计学分析：采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学处理，所有数据用x(_)±s表示，组间数据差异的比较采用独立样本t 检验，安维汀注射前后的组内数据比较用配对t 检验，以P < 0.05为差异有显著性意义。

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讨论

建立2型糖尿病动物模型具有众多优势，对于指导临床治疗具有重大意义，成为预防2型糖尿病发生及延缓糖尿病并发症形成中心内容。因此，近年来，国内外研究主要是成功通过注射链脲佐菌素的方法诱导大鼠2型糖尿病并发症，此造模方法能够模拟人类2型糖尿病并发症的常见病变，在预防与治疗2型糖尿病方面有重要的意义。在研究金属锌防治2型糖尿病大鼠视网膜病变的过程中，董宇等^[9]应用高脂高糖联合腹腔注射链脲佐菌素(40 mg/kg)，成功诱发具有2型糖尿病视网膜病变病理改变，如视网膜毛细血管内皮细胞肿胀变形、基底膜增厚、核形态不规则等。同样石静丽等^[10]采用SD大鼠为实验对象，给予高脂饲料喂养，3个月后腹腔注射链脲佐菌素(45 mg/kg)1次成功进行造模，结果证实通过此种方法建立的实验性2型糖尿病大鼠糖尿病视网膜病变模型与人类2型糖尿病视网膜病变有较多共性，是研究2型糖尿病视网膜病变及其防治药物的理想动物模型。有研究报道，链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠病程在10周时发现视网膜已出现符合早期糖尿病视网膜病变的微血管及神经元有关病理学改变^[6]，同时成模10周的糖尿病大鼠已经出现与糖尿病视网膜病变的眼底微血管病变及相应的神经元病变一致的改变，因此实验采用10周链脲佐菌素-糖尿病SD大鼠作为接近人类早期糖尿病视网膜病变模型的动物模用于糖尿病视网膜病变的相关实验研究，此种造模方法具有简单经济、成模率高、用时较短及重复性好的优点，值得推广。

糖尿病如何导致糖尿病视网膜病变发病的机制十分复杂，到目前为止尚未明确，其中影响较大的学说是炎症学说，推测2型糖尿病可能是由细胞因子介导的一系列炎症反应，认为它是一种免疫性疾病，炎症作用在糖尿病的发病机制中起媒介作用^[11]。大量研究提示大量的免疫及炎症标志物都参与了糖尿病、胰岛素抵抗和糖尿病视网膜病变的病理过程。实验了解到多种炎症因子和细胞因子在其中发挥重要作用^[12]，参与了糖尿病视网膜病变的病理过程发生，以往的研究主要集中在增殖型糖尿病视网膜病变，而实验主要是研究早期糖尿病视网膜病变大鼠房水中VEGF，PEDF，CTGF的表达，探讨上述因子在早期糖尿病视网膜病变的致病机制，目前此项研究内容较少。

VEGF被认为是在眼科领域寻找了近半世纪的“视网膜因子”，是目前已经发现的最强新生血管生长因子，在各种视网膜新生血管性病变发病中起核心作用，一方面多种致病因子通过VEGF促进新生血管形成，另一方面VEGF也能刺激各种生长因子和细胞因子的表达。病理情况下，缺氧、缺血状态均促进以自分泌方式发挥作用VEGF分泌增多，一方面促进内皮细胞增生，增加内皮细胞通透性，这样大分子物质如纤维蛋白原等进入细胞外基质形成纤维蛋白凝胶，它刺激新生血管和基质细胞内向生长，最终导致新生血管的形成；另一方面VEGF还可加重增殖型糖尿病视网膜病变的渗出性病变，因此成为糖尿病视网膜病变研究中的热点。研究发现视网膜内VEGF mRNA表达在糖尿病大鼠的视网膜血管通透性增加时明显增加，在单纯型糖尿病视网膜病变患者表达明显增强，还见于视网膜Muller细胞和视乳头的神经胶质细胞高表达，在早期糖尿病视网膜病变视网膜VEGF表达量增加与实验的实验均证实其有促血管生成的作用。VEGF在糖尿病视网膜病变发生进展中所起到的作用已被认可，它被抑制后视网膜新生血管显著减少，在临床上已经得到证实并推广应用^[13-15]。实验从动物实验方面证实糖尿病视网膜病变大鼠房水VEGF质量浓度在玻璃体腔注射安维汀后，房水中VEGF质量浓度显著降低，进一步证实安维汀玻璃体腔注射在糖尿病视网膜病变应用具有抑制新生血管作用。同时早期糖尿病视网膜病变大鼠房水中VEGF浓度显著高于正常组，证实VEGF在糖尿病视网膜病变早期房水中表达明显增高，与糖尿病视网膜病变发病密切相关。

PEDF是迄今发现的最强力的抗新生血管细胞因子，增殖型糖尿病视网膜病变新生血管形成与血管生成因子和抑制因子二者的失衡有关，表现为VEGF水平升高伴随PEDF水平降低。PEDF 属于一种分泌型糖蛋白，是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族成员之一，与其他成员不同，它无抑制蛋白水解酶活性的作用。体外实验发现，PEDF 能够抑制经过高糖或过氧化氢诱导的细胞凋亡及功能异常^[16]。动物实验证实，经链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠中，PEDF可以通过抑制细胞间黏附分子1的表达发挥抑制视网膜白细胞聚集^[17]的作用，同时PEDF能够通过抑制还原型辅酶Ⅱ氧化酶引起的氧化应激的产生，阻止在早期糖尿病视网膜病变中视网膜电流图a波及b波振幅的下降和血管通透性的增高，提示PEDF可能对早期糖尿病视网膜病变具有保护作用。Dawson等^[18]研究首次发现PEDF具有抑制血管增生的作用，是维持玻璃体角膜等无血管结构组织的主要因子。PEDF在眼部，由RPE细胞产生并分泌到视网膜感光细胞间基质的PEDF对视网膜分化起重要作用^[19-21]；研究发现PEDF在胎儿的视网膜色素上皮细胞颗粒、发育中的视锥细胞、某些神经母细胞^[22]，成人睫状体，视网膜的节细胞层和内核层，脉络膜，角膜的上皮和内皮细胞^[23]，玻璃体和房水中均有表达。PEDF是一种抗新生血管细胞因子，抑制作用明显高于其他抗新生血管的因子如血管抑素及内皮抑素血小板反应蛋白1^[24]，PEDF能够抑制多种新生血管形成因子的活性，如VEGF，胰岛素样生长因子，碱性成纤维细胞生长因子等细胞因子。VEGF是目前研究结果显示的功能最强的促进新生血管形成的细胞因子，VEGF与PEDF的关系是近年的研究热点问题。多项研究显示PEDF与VEGF的质量浓度比例失衡在新生血管增殖有关的视网膜病变中都可见^[25-26]，通过提高PEDF水平则能达到抑制视网膜新生血管形成的目的^[27-29]，PEDF抗血管增殖作用在一定程度上是抑制VEGF的过程。以往关于安维汀注射后房水PEDF研究较少，实验从动物实验方面证实糖尿病视网膜病变大鼠房水PEDF质量浓度在玻璃体腔注射安维汀后，房水中PEDF质量浓度显著增加，差异有显著性意义，进一步证实安维汀玻璃体腔注射在糖尿病视网膜病变应用具有抑制新生血管作用。同时糖尿病视网膜病变大鼠房水中PEDF浓度显著低于正常组，证实PEDF在糖尿病视网膜病变早期明显降低，与糖尿病视网膜病变发病密切相关。大量研究可见，增殖型糖尿病视网膜病变新生血管形成与血管生成因子和抑制因子二者的失衡有关，表现为VEGF水平升高伴随PEDF水平降低，实验在早期糖尿病视网膜病变大鼠中通过动物实验证实VEGF与PEDF成反向变化，早期糖尿病视网膜病变大鼠房水中VEGF和PEDF质量浓度反向改变及比例失调可能与增殖型糖尿病视网膜病变的新生血管形成有关。

CTGF不仅具有促纤维化功能，同时还有促进血管生成的作用。研究CTGF体内实验大部分集中在其促纤维化功能的方面，此过程主要由纤维母细胞被激活成肌成纤维细胞后所介导细胞外基质的异常过量堆积^[27]。CTGF的过度表达被认为是纤维化的标志。在生理状态下，CTGF呈低水平表达，其作用组织也主要局限于结缔组织，但在病理状态下，如纤维化疾病和创伤修复中CTGF发挥了重要的作用，在心肌、肺、肾纤维化、肿瘤及动脉粥样硬化等病变过程中均其可见表达水平升高^[28-29]。同时CTGF还有促进血管生成的作用，体外实验证实CTGF的这种作用是通过促进血管内皮细胞黏附，增殖，移行及诱导血管内皮细胞形成管状结构得以实现的^[28]，同时CTGF还能直接吸引CD34⁺祖细胞到血管内皮细胞，促进血管生成和内皮细胞增殖^[29]。然而进一步的研究发现CTGF在体外还同时具有拮抗血管生成的作用。一方面，CTGF诱导角膜血管生成^[30]及联合整合素在体外诱导新生血管生成，通过a6pl和αvβl的配体发挥作用^[30-31]；另一方面， CTGF与VEGF(165)结合成复合物，具有抑制VEGF促血管生成的功能^[32]。此观点在动物实验中得到证实，建立下肢缺血模型小鼠，转染VEGF(165)和CTGF后具有抑制VEGF的促血管生成作用^[33]。实验中实验发现CTGF在糖尿病视网膜病变模型大鼠房水中表达增加，高于正常对照组，差异有显著性意义，房水中CTGF与VEGF表达增加一致，可以推测CTGF具有一定的促进新生血管生成的作用，这一点与VEGF促进血管增殖的作用一致。但CTGF的拮抗血管生成的作用需要进一步实验证实。对于CTGF的定量检测发现增殖性糖尿病视网膜病变患者的玻璃体液中CTGF的浓度显著高于非增殖性糖尿病视网膜病变患者和正常对照组的CTGF质量浓度，随增殖性糖尿病视网膜病变的分期加剧而浓度逐渐增高^[34-35]，动物实验得到一致的结果，在糖尿病大鼠模型的视网膜中也发现CTGF的表达明显增高^[36]，临床和动物实验证据支持CTGF在糖尿病视网膜病变的发生发展中可能起到一定作用。实验从房水细胞因子检测得出一致结论，这一点尚未有报道，早期糖尿病视网膜病变大鼠房水中CTGF质量浓度高于正常组，证实CTGF在糖尿病视网膜病变发病密切相关；实验从动物实验方面证实糖尿病视网膜病变大鼠房水CTGF质量浓度在玻璃体腔注射安维汀后，房水中CTGF质量浓度升高，进一步证实安维汀玻璃体腔注射在糖尿病视网膜病变应用具有抑制新生血管作用同时有一定的促进纤维增殖的作用。

安维汀的商品名是阿瓦斯汀，它在2004年通过美国食品与药物管理局认证，是首个经批准上市的VEGF抑制剂，早期主要用于转移性结直肠癌的治疗过程^[37]。近年来眼科专家尝试用安维汀治疗有关眼内新生血管疾病，在短期的研究结果中显示出良好的疗效和安全性^[38]。先后用于治疗年龄相关性黄斑变性^[39]、虹膜新生血管^[40]、新生血管性青光眼^[38^，^41]、视网膜新生血管性疾病等的治疗^[42-43]。在增殖性糖尿病视网膜病变在玻璃体切割术前应用玻璃体腔注射安维汀，临床实验证实能有效减少增殖膜剥离不彻底、术中出血、牵拉性视网膜脱离、医源性裂孔等并发症的发生^[42^，^44]，易化手术过程，减少术后玻璃体再出血及血管增生，提高患者视功能，改善患者的生活质量。安维汀这种生物制剂本质上是一种重组的抗VEGF的人源化单克隆抗体，它可以与所有目前已知的VEGF异构体结合，通过抑制其生物学活性达到间接阻断VEGF与其受体的结合的目的，最终能够阻碍血管渗漏及新生血管的形成。实验的实验证实安维汀用于早期糖尿病视网膜病变大鼠，抑制血管增生的细胞因子表达增加，促进血管增生的细胞因子表达减少，但CTGF表达增加，可能是其促进纤维增殖的作用的体现，需要以后深入研究，在治疗新生血管性疾病时考虑联合抗纤维化制剂达到完美治疗效果。

目前多项研究提示安维汀玻璃体腔注射是一种安全有效的给药方式，短期观察发现玻璃体腔给药后对眼压和血压的影响较小。有研究一项在互联网进行的安维汀玻璃体腔内注射的安全性调查^[45]，参与调查的有4个洲12个国家共70个眼科中心，共计5 228例患者，注射7 113次的手术资料，平均随访时间是3.5个月，经统计眼部不良反应有角膜擦伤，葡萄膜炎或炎症反应，晶状体损伤，白内障进展，眼内炎，视网膜脱离，急性视力下降，视网膜中央动脉阻塞，视网膜色素上皮色素上皮撕裂，视网膜下出血；全身不良反应有血压升高，急性缺血性心脏病发，脑血管意外等，但这些发生率极低，均未超过0.21%。实验前期的临床实验和目前的动物实验中均未发现明显的局部和全身毒副作用，但用药的远期疗效需要进一步的长期、大样本、多中心的临床实验研究。

通过对糖尿病视网膜病变大鼠模型的实验研究使实验了解到其发病是多种致病机制的协同作用的结果，同时在治疗过程难题不断涌现，发现仅仅通过单一的治疗方法或者药物治疗在临床应用上和动物实验的效果不太理想。实验组前期的临床实验针对增殖型糖尿病视网膜病变 Ⅳ期的患者于玻璃体切割术前玻璃体腔注射安维汀检测注射前后房水细胞因子变化，结论基本一致，首次在房水中检测CTGF因子。安维汀玻璃体腔注射后的促进纤维增殖作用在动物实验和临床实验均得到证实，实验设想将类似于抗VEGF的生物制剂(如安维汀等)的抗CTGF制剂应用于糖尿病视网膜病变大鼠，进行双靶点干预治疗，或许可以抑制增殖型糖尿病视网膜病变的进程和逆转增殖型糖尿病视网膜病变已形成的新生血管从而达到减少并发症发生和稳定视力的目的。目前抗纤维化治疗处于动物实验阶段，待可靠的研究结果出现即可进行双靶点治疗(抗纤维化与抗新生血管)，提高患者的生存质量。本次实验样本量受限，仅能预测早期糖尿病视网膜病变大鼠玻璃体腔注射安维汀后上述3种细胞因子的质量浓度变化趋势，一方面有抑制新生血管生成的作用的趋势，同时还具有促进纤维增殖的趋势，进行多中心、大样本双盲对照研究以期待找到抑制新生血管和纤维增殖的方法。

另外，后续的研究可以进行不同病程糖尿病视网膜病变大鼠的动物实验检测房水中细胞因子的改变，同时检测视网膜细胞因子的表达，探讨两者的相关性及不同细胞因子的相关性，同时检测细胞因子作用的细胞内信号通路了解糖尿病视网膜病变的发病机制。

早期糖尿病视网膜病变模型大鼠玻璃体腔注射安维汀后房水细胞因子变化

Changes of cytokines in the aqueous humor following Avastin intravitreous injection in early diabetic retinopathy rats

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