透明质酸对人骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白和CD44表达的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.38.018

中国组织工程研究 ›› 2014, Vol. 18 ›› Issue (38): 6172-6178.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.38.018

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透明质酸对人骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白和CD44表达的影响

周斌¹，张方杰²，罗伟³，高曙光³，曾超³，熊依林³，李宇晟³，雷光华²

1中南大学湘雅医院，湖南省长沙市 410008；中南大学湘雅医院，2中南大学骨科研究所，3骨科，湖南省长沙市 410008

收稿日期:2014-07-14 出版日期:2014-09-10 发布日期:2014-09-10
通讯作者: 雷光华，博士，教授，中南大学湘雅医院中南大学骨科研究所，湖南省长沙市 410008
作者简介:周斌，男，1987年生，湖南省长沙市人，汉族，2014年中南大学湘雅医院毕业，硕士，医师，主要从事骨关节炎的研究。

Effects of hyaluronic acid on osteopontin mRNA and CD44 mRNA expression in human osteoarthritic chondrocytes

Zhou Bin¹, Zhang Fang-jie², Luo Wei³, Gao Shu-guang³, Zeng Chao³, Xiong Yi-lin³, Li Yu-sheng³,Lei Guang-hua²

1Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410008, Hunan Province, China; 2Institute of Orthopedics, Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410008, Hunan Province, China; 3Department of Orthopedics, Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410008, Hunan Province, China

Received:2014-07-14 Online:2014-09-10 Published:2014-09-10
Contact: Lei Guang-hua, M.D., Professor, Institute of Orthopedics, Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410008, Hunan Province, China
About author:Zhou Bin, Master, Physician, Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410008, Hunan Province, China

摘要/Abstract

摘要：

背景：软骨进行性破坏为晚期骨关节炎的特征性病变，骨关节炎相关因子透明质酸、骨桥蛋白、CD44在骨关节炎软骨中表达增加。
目的：通过透明质酸干预体外培养的人膝骨关节炎软骨细胞，探讨透明质酸对人膝骨关节炎软骨细胞CD44与骨桥蛋白表达的影响。
方法：将软骨标本进行体外培养获取纯化的软骨细胞，分为3组：空白对照组、透明质酸干预组(100 mg/L)和透明质酸酶干预组(200 mg/L)。培养48 h后，采用Real-time Q PCR检测软骨细胞骨桥蛋白mRNA，CD44 mRNA表达水平。用SPSS 17.0统计软件包分析骨桥蛋白mRNA和CD44 mRNA经透明质酸干预前后表达的差异。
结果与结论：透明质酸组的骨桥蛋白mRNA表达水平较空白组高，透明质酸酶组的骨桥蛋白mRNA表达水平较空白组低；透明质酸组及透明质酸酶组的CD44 mRNA表达水平均较空白组低。结果提示透明质酸可以上调骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白的表达；透明质酸在骨关节炎软骨细胞内对CD44表达的影响具有双相性，其影响结果可能与透明质酸的相对分子质量有关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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关键词: 组织构建, 软骨细胞, 透明质酸, 骨关节炎, 膝, 软骨细胞, 实时荧光定量 RT-PCR, 骨桥蛋白, CD44

Abstract:

BACKGROUND: Progressive fracture of the cartilage is considered the characteristic lesion in later osteoarthritis, the expression of osteoarthritis-related factors such as hyaluronic acid, osteopontin and CD44 in osteoarthritic cartilage is increased.
OBJECTIVE: To investigate the effect of hyaluronic acid on the expression of osteopontin mRNA and CD44 mRNA of chondrocytes in the in vitro cultured chondrocytes of patients with knee osteoarthritis.
METHODS: The cartilage samples obtained from osteoarthritic patients were cultured and purified into acquire chondrocytes in vitro, and the cells were divided into three groups: blank control group, hyaluronic acid (100 mg/mL) group and hyaluronidase (200 mg/mL) group. After 48 hours of cell culture, real-time quantitative polymerase chain reaction assay was used to detect the expression of CD44 mRNA and osteopontin mRNA. The difference of the expression levels before and after the intervention of hyaluronic acid was compared and analyzed using SPSS 17.0 software.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the blank control group, hyaluronic acid (100 mg/mL) upregulated osteopontin mRNA expression in the chondrocytes, hyaluronidase (200 mg/mL) also reduced osteopontin mRNA expression in the chondrocytes. The CD44 mRNA expression in the chondrocytes of
hyaluronic acid (100 mg/mL) group and hyaluronidase (200 mg/mL) group was lower than that in the blank control group. Hyaluronic acid can upregulate the expression of the osteopontin mRNA expression in the osteoarthritic chondrocytes; the biphasic effects of hyaluronic acid on CD44 mRNA expression in osteoarthritic chondrocytes might be associated with the molecule weight of hyaluronic acid.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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Key words: osteoarthritis, knee, chondrocytes, osteopontin, hyaluronic acid, antigen, CD44

中图分类号:

R318

周斌，张方杰，罗伟，高曙光，曾超，熊依林，李宇晟，雷光华. 透明质酸对人骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白和CD44表达的影响[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(38): 6172-6178.

Zhou Bin, Zhang Fang-jie, Luo Wei, Gao Shu-guang, Zeng Chao, Xiong Yi-lin, Li Yu-sheng,. Effects of hyaluronic acid on osteopontin mRNA and CD44 mRNA expression in human osteoarthritic chondrocytes[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(38): 6172-6178.

图/表（结果） 2

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引言

骨关节炎是最常见的关节疾病之一，该疾病对于个人、家庭以及社会的经济和心理影响都是巨大的。在中国，随着人口进一步老龄化，骨关节炎的发病率也逐年增加。骨关节炎的危险因素包括遗传、年龄、肥胖等等，而骨关节炎的直接病因与发病机制尚不明确，临床治疗以对症治疗为主。软骨基质的持续丢失、软骨下骨增生硬化以及滑膜的炎性改变是骨关节炎的特征^[1]，因此软骨细胞的状态与功能在骨关节炎疾病中具有重要意义^[2]。透明质酸、骨桥蛋白以及CD44均可由软骨细胞产生，是存在于软骨中的骨关节炎相关细胞因子。

透明质酸是一种高分子量的葡萄糖胺聚糖^[3]。透明质酸作为细胞外基质的主要成分，不仅是哺乳动物的组织中最丰富的葡萄糖胺聚糖，而且在诸如皮肤、软骨、房水及脐带等结缔组织中含量较高^[4-5]。透明质酸是滑膜及软骨的组成成分之一，并且在类风湿性关节炎、骨关节炎及反应性关节炎的炎性滑膜组织中的局部病变中生成增加^[6]。在骨关节炎的动物(鼠、兔、羊)模型中，透明质酸表现出多效性，其作用包括润滑、抗凋亡、抗炎、抗血管生成、抗纤维化等。其中，透明质酸在软骨中主要表现为抗炎与抗凋亡作用。

骨桥蛋白是能够被诸如破骨细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、上皮细胞、血管平滑肌细胞等多类细胞分泌的多功能的磷酸化糖蛋白，它存在于矿化组织的细胞外基质、细胞外液、炎性区域^[7-8]。通过基因结构及所在染色体位置认识到骨桥蛋白是一个N连接的整合素结合配体糖蛋白家族成员。骨桥蛋白同时被认为是早起T细胞活化基因1，在骨组织中大量存在，并在骨组织中介导重要的细胞之间及细胞-基质间的相互反应。骨桥蛋白能够与许多的细胞表面受体相互作用，这些受体包括αvβ3、αvβ1、α4β1、α8β1、α9β1等整合素以及非整合素(如CD44)。骨桥蛋白是一种具有多效性的细胞外基质蛋白，并在多种疾病中有重要意义，其中促炎是其重要作用之一^[8-9]。在软骨成熟过程中，骨桥蛋白的表达对骨折修复中软骨成骨过程有重要意义。骨桥蛋白在关节炎中的具体作用及其机制尚具有争议。然而，有研究显示，与正常软骨相比人骨关节炎软骨中的骨桥蛋白mRNA表达增加，且其表达水平与骨关节炎病情程度相关。另外，骨关节炎软骨内骨桥蛋白通过与CD44和整合素特异性作用，诱导细胞内信号传导，促进细胞的黏附及转移^[10]，并能够在许多不同类型的细胞中表现其特异的抗凋亡的作用^[11-12]。因此，骨桥蛋白可能在骨关节炎病理性分子改变中具有重要作用。

CD44是一种单跨膜糖蛋白，在包括软骨细胞在内的多种细胞中表达^[13]。CD44由20个外显子组成，长度超过 60 kb^[14-15]，并且存在多种不同的同型体。CD44参与细胞之间、细胞-基质间的黏附，细胞内信号传导，以及细胞基质同细胞骨架的相互作用。CD44作为一种细胞黏附分子，它参与的软骨细胞与胞外基质成分的相互作用在维持软骨正常功能及在关节炎的病理生理方面具有重要意义^[16]。通过CD44受体家族可以监测软骨细胞基质成分的改变。因此，CD44同整合素受体一样在保持软骨代谢的平衡中具有重要意义。而且，有研究称CD44在关节软骨中的表达被认为与膝关节骨关节炎的严重程度相关^[17]。

在其他疾病中有研究显示，透明质酸能够促进骨桥蛋白的表达，其中的机制不明^[18-22]。有关骨关节炎的研究称，透明质酸可以使骨关节炎成纤维样滑膜细胞中的骨桥蛋白表达增加^[23]。骨关节炎关节中透明质酸与骨桥蛋白的表达均增加，尽管透明质酸在骨关节炎关节中的浓度和分子量均较正常低(这可能与高表达的透明质酸释放入血及透明质酸的生成不完全有关)。另外，透明质酸的主要受体CD44通过与透明质酸作用，具有装配、整组、维持软骨细胞外基质的功能^[24]。CD44在软骨的表达水平也是升高的，而且与骨关节炎严重程度呈正相关。但是，透明质酸、骨桥蛋白、CD44在软骨细胞中表达是否具有相关性，目前尚不清楚。软骨中阐明透明质酸对骨桥蛋白、CD44在骨关节炎软骨中表达的影响可能对进一步了解骨关节炎的发生发展甚至对其治疗，具有重要的理论意义。

本实验试图在体外培养的软骨细胞中加入透明质酸，以初步探究透明质酸对软骨细胞骨桥蛋白与CD44表达的影响。

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材料方法

设计：随机区组设计。

时间及地点：实验与2014年1至4月于中南大学湘雅医院遗传实验室完成。

材料：骨关节炎软骨标本均于中南大学湘雅医院的膝关节镜或人工膝关节置换中所得，诊断为原发性膝关节骨关节炎，住院前均未行正规治疗。以上标本的取材均先告知患者并征得同意。

纳入标准：①采用中华医学会骨科学分会制定的《骨关节炎诊治指南(2007版)》中的膝骨关节炎诊断标准。②年龄48-75岁。

排除标准：①排除创伤性骨关节炎等继发性关节炎、化脓性关节炎和类风湿性关节炎等其他类型的关节炎。②患者在发病后住院前行正规治疗的除外。

透明质酸对人骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白和CD44表达影响的实验试剂：
试剂	来源
0.05%胰蛋白酶-EDTA、细胞培养基高糖型DMEM、胎牛血清	GIBICO公司
透明质酸钠(透明质酸)	贝壳诺顿公司
透明质酸酶	Sigma公司
RNA反转录试剂盒、Real time Q PCR试剂盒	GeneCopoeia公司
引物	(上海)贸易有限公司合成
TRIZOL试剂	美国invitrogen公司

实验方法：

人膝骨关节炎软骨细胞的分离与原代培养：标本收集后去除软骨附着的软组织，再次用PBS将标本冲洗2次，洗净标本；用无菌刀片削取软骨片，大小为15-20 mm²；再次用5 mL PBS漂洗削取下的软骨片，然后用眼科剪将软骨片剪成大小为1 mm×1 mm×1 mm碎块；剪好的软骨碎块置于15 mL离心管中，并加入0.15%的Ⅱ型胶原酶(DMEM/F-12配置)，加入容积约为软骨组织体积的10倍；将离心管置于恒温振荡箱(37 ℃，80 r/min)内，消化4-6 h后，可观察到消化液变浑，软骨组织基本消失。待上述消化完成后，1 000 r/min离心8 min，弃上清液；加入5 mL完全培养基(DMEM/F12含体积分数10%FBS)，充分吹打混匀，即可获得人骨关节炎软骨细胞的悬浮液；按1×10⁸ L^-¹将人骨关节炎细胞接种于25 cm²培养瓶内(4 mL/瓶)，然后将培养瓶置于37 ℃体积分数5%CO₂恒温培养箱进行培养；2 d后即更换培养液，然后每3-5 d换液1次，并倒置显微镜观察人骨关节炎软骨细胞形态和生长情况。

人膝骨关节炎软骨细胞传代培养：镜下观察，待人骨关节炎软骨细胞贴壁达75%-80%，吸净培养液，用PBS液5 mL轻洗细胞一两次，吸净PBS；加入1 mL 0.05%胰蛋白酶，使其均匀分布瓶底，然后马上吸净；再次加入0.05%胰蛋白酶1 mL，使其均匀分布瓶底，然后将培养瓶置于培养箱内2.0-3.0 min；倒置显微镜下观察细胞游离情况，细胞回缩，细胞的间隙增大，细胞部分已游离；加入10 mL全培养基于培养瓶内，多次反复轻轻吹打瓶底的细胞，使其从瓶底彻底脱落；收集该细胞悬浮液，1 000 r/min离心8 min，弃上清液；加入完全培养基3 mL，轻轻吹打混匀制成细胞悬浮液，然后按1∶3的比例进行传代培养或在培养皿中实验。

分组实验干预：取人膝骨关节炎软骨细胞进行实验，先予以含体积分数5%FBS的DMEM/F12孵育24 h，从而使人膝骨关节炎软骨细胞同步化出现在非增殖期和非活动期。然后再继续给予含体积分数10%FBS的DMEM/F12完全培养基孵育。每个样本3份随机分为3组：①空白对照组。②透明质酸组：予以100 mg/L透明质酸钠干预48 h。③透明质酸酶组：予以200 mg/L透明质酸酶干预48 h。

总RNA样本制备：取对数生长期细胞，按照RNA simple Total RNA Kit总RNA提取试剂盒操作步骤进行提取。琼脂糖凝胶电泳确定总RNA质量；紫外分光光度仪测，A₂₆₀/A₂₈₀ > 1.8，检验总RNA纯度并计算其浓度符合实验要求。

总RNA反转录反应：应用反转录试剂盒，根据试剂盒说明书，把所提取的总RNA短暂离心后，将12 μL的DEPC水和RNA(1 μg)放入EP管内，置于冰上，使RNA终浓度达到0.5 g/L，再加入Oligo(dt)1 μL，轻轻混合均匀，短时间离心。最后按顺序加入：5×buffer 5 μL、核糖核苷酸酶抑制剂1 μL，25 mm dNTP MIX 1 μL，M-Mulu反转录酶1 μL，轻轻混合均匀，再短时间离心。最后将混合物置于42 ℃ 60 min。 85 ℃加热5 min，中止上述反应并置于冰上。RNA反转录：PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成 (表1)。

荧光定量PCR反应：20 μL反应体系，包括模板cDNA 2 μL、SYBRGreen Master(ROX) 10 μL、骨桥蛋白Mrna/CD44 mRNA/内参β-actin上下游引物各2 μL，50X Rox Reference Dye和双蒸水4 μL。反应条件：预变性95 ℃ 10 min，95 ℃ 10 s，60 ℃ 1 min，40个循环。数据处理：CD44/骨桥蛋白基因的相对表达量为采用2^-^ΔΔCt法计算，ΔCt= Ct目的基因-Ct内参基因，ΔΔCt=ΔCt实验组样品-ΔCt对照组样品，相对表达量=2^-^ΔΔCt。当2^-^ΔΔCt值> 1.0认为表达增高，< 1.0认为表达降低，=1.0认为表达无改变。

主要观察指标：不同组间骨关节炎软骨细胞中目的基因CD44和骨桥蛋白的扩增曲线、熔解曲线及表达量的差别。

统计学分析：实验数据采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析，所有实验数据均以x(_)±s表示，采用单因素方差分析和SNK检验分析比较干预前后骨桥蛋白mRNA、CD44 mRNA水平。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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讨论

3.1 透明质酸与骨桥蛋白实验显示不论是外源性高相对分子质量(M_r 800 000-1 200 000)透明质酸还是骨关节炎软骨内源性的低相对分子质量透明质酸，均可以上调骨关节炎软骨细胞内骨桥蛋白的表达。透明质酸对骨关节炎软骨骨桥蛋白的表达可能与透明质酸的分子量无关。在其他疾病中，透明质酸也能够促进骨桥蛋白高表达。例如，在抑癌基因缺失的胶质瘤细胞模型中，予以透明质酸后能够通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导骨桥蛋白高表达及基质金属蛋白酶9分泌，并使得胶质瘤的侵袭性增加^[25]；Martínez-Sanz等^[18]发现透明质酸还可以增加新生成骨组织中骨桥蛋白表达；Mendes等^[19]发现透明质酸能够通过刺激骨桥蛋白和骨形态发生蛋白2高表达从而促进鼠牙槽组织的愈合过程。另外，在以往的的骨关节炎滑膜细胞研究当中，发现透明质酸也能够上调骨桥蛋白的表达^[23]。

目前研究显示，透明质酸是具有骨关节炎保护作用的。它不仅是一种缓解骨关节炎关节疼痛的治疗手段，还能够在骨关节炎相关炎性因子的调节和软骨基质的代谢等方面起作用。透明质酸的关节内注射治疗具有调节伤害感受器^[26]、减轻滑膜和关节囊纤维化^[27]、增加滑膜细胞高分子量透明质酸的内源性生成^[27-28]、减少包括前列腺素E2、白细胞介素1、白细胞介素6在内的炎性递质^[29-31]，以及减轻骨关节炎动物模型中关节软骨的基质降解^[32-33]。

同样，有部分研究认为骨桥蛋白对骨关节炎也具有保护作用。其中在骨关节炎关节软骨中观察到骨桥蛋白表达增加，而且有报道证实骨桥蛋白能够内源性抑制软骨炎症递质的产生。如在体外实验中，向骨关节炎软骨中加入重组骨桥蛋白后由白细胞介素1β诱导的一氧化氮和前列腺素E2的生成受到抑制，而加入含抗骨桥蛋白抗体的血清使得关节内骨桥蛋白中和后，软骨内一氧化氮生成增加^[34]。而在骨桥蛋白缺失的模型中，观察到骨桥蛋白的缺失使得年龄相关性骨关节炎和关节不稳定性骨关节炎的病情进一步恶化。其中结构上的改变和软骨组织的蛋白聚糖丢失增加在骨桥蛋白缺失时被放大^[35]。此外，骨桥蛋白缺失还能诱导基质金属蛋白酶13，使得作为软骨基质蛋白主要成分的Ⅱ型胶原降解^[36-37]，这使得骨关节炎进一步发展。

以往研究已证实骨关节炎软骨细胞内透明质酸和骨桥蛋白表达均增加。本实验结果显示，透明质酸可以诱导人骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白高表达，这与以往研究中透明质酸和骨桥蛋白均高表达具有一致性。如前文所述，透明质酸及骨桥蛋白在骨关节炎中均具有一定的保护作用(如在炎症因子、基质金属蛋白酶13、ADAMTS-5等骨关节炎相关因子的表达方面均具有抑制作用)。这可能提示透明质酸在骨关节炎软骨细胞内通过高表达骨桥蛋白而起到骨关节炎保护性作用，因此可能将对骨关节炎发生发展的了解及对骨关节炎的临床治疗具有重要意义。而骨关节炎中透明质酸和骨桥蛋白是否在炎症因子、基质降解酶或其他的调节方面具有共同的作用机制或者相关通路，还需要进一步研究。

3.2 透明质酸与CD44 本实验向骨关节炎软骨细胞加入外源性透明质酸可以下调人CD44的表达；而加入透明质酸酶使细胞内透明质酸降解后，CD44的表达也是下降的。实验中外源性透明质酸增加以及其内源性透明质酸的降解均使得CD44在骨关节炎软骨细胞内的表达降低。这提示或许内源性的透明质酸和外源性的透明质酸对CD44表达的影响不相同。以往有研究显示尽管骨关节炎关节软骨中透明质酸的表达升高，而分子量和浓度却均是降低的^[38-39]，这可能与透明质酸的降解增加、透明质酸的不完全合成以及不能够充分聚合的透明质酸生成增加有关^[10]；另外，骨关节炎细胞外基质的过度降解导致了高表达的透明质酸及透明质酸片段释放入血液循环中^[38-39])。而本实验中所使用的

外源性透明质酸的相对分子质量为800 000-1 200 000，相对分子质量高于普通透明质酸(M_r 500 000-730 000)。因此，内源性透明质酸和外源性透明质酸对CD44表达的影响不同，可能是由于透明质酸的相对分子质量不同所致。

实验中加入外源性透明质酸，使得CD44在骨关节炎软骨细胞的表达降低。这种外源性透明质酸为高分子量透明质酸，以往研究称高分子量的透明质酸在骨关节炎关节中较普通分子量透明质酸具有更好的抗炎作用。如在白细胞介素1刺激软骨细胞炎性因子产生的模型中，高分子量透明质酸较普通分子量透明质酸在抑制基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶13、ADAMTS-4、白细胞介素6的软骨内表达中效果更突出^[40]。以往研究称CD44有炎性致病作用：骨关节炎及类风湿性关节炎中的促炎因子可以上调CD44表达增加；抗CD44的治疗能够减轻关节的肿胀、白细胞在关节的侵入以及炎性所致的软骨破坏。因此，本实验提示高分子量的透明质酸，可能通过降低CD44的表达而表现其抗炎作用。

本实验透明质酸酶组中降解的是骨关节炎软骨中内源性的透明质酸，这种内源性的透明质酸是低分子量的。实验发现这种内源性的低分子量透明质酸的降低，促使骨关节炎软骨细胞CD44的表达减少。结果表明骨关节炎软骨中内源表达的低分子量透明质酸可以上调CD44的表达。这一结果与骨关节炎软骨中透明质酸和CD44的表达均增加具有一致性。因此，骨关节炎软骨中CD44的高表达可能与其内源性的透明质酸表达增加有关。此外，CD44在骨关节炎软骨内的高表达还可能与CD44的其他配体有关。CD44以许多不同的同型体形式存在，不同的CD44同型体可以有其特异性的配体。在胰酶处理牛软骨后通过免疫组化和流细胞计数观察CD44的再表达研究中发现，正常细胞表面CD44的表达中平均只须25%用来参与装配透明质酸^[40]。CD44除了能与透明质酸结合，还能与包括骨桥蛋白在内的多种细胞外物质相互作用。因此，CD44在骨关节炎软骨中高表达还可能与其他配体(如骨桥蛋白)相关。而若需明确骨关节炎关节软骨中CD44高表达的原因和机制，还需进一步研究。

综上所述，透明质酸对CD44表达可能具有双相性，其影响结果可能与透明质酸的分子量相关。

结论：透明质酸可以上调骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白mRNA的表达；透明质酸对CD44表达可能具有双相性，其影响结果可能与透明质酸的相对分子质量相关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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透明质酸对人骨关节炎软骨细胞骨桥蛋白和CD44表达的影响

Effects of hyaluronic acid on osteopontin mRNA and CD44 mRNA expression in human osteoarthritic chondrocytes

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