特应性皮炎模型小鼠的生长繁殖及血液生理生化指标

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.41.015

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (41): 7284-7289.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.41.015

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特应性皮炎模型小鼠的生长繁殖及血液生理生化指标

童敏¹，梁云生²，张桂英²

中南大学湘雅二医院，¹实验动物中心，²皮肤性病科，湖南省长沙市 410011

收稿日期:2013-06-25 修回日期:2013-07-12 出版日期:2013-10-08 发布日期:2013-11-01
通讯作者: 张桂英，教授，硕士生导师，中南大学湘雅二医院皮肤性病科，湖南省长沙市 410011 zhangguiying67@yahoo.com.cn
作者简介:童敏★，女，1971年生，湖南省长沙市人，汉族，2008年中南大学毕业，硕士，副主任技师，主要从事实验动物药理学研究。 tongmin22626@163.com
基金资助:
湖南省科研条件创新专项计划资助项目(2011TT2019)*

Growth, reproduction and blood physiological and biochemical indexes in an atopic dermatitis mouse model

Tong Min¹, Liang Yun-sheng², Zhang Gui-ying²

¹Experimental Animal Center, ²Department of Dermatology and Venereology, the Second Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410000, Hunan

Received:2013-06-25 Revised:2013-07-12 Online:2013-10-08 Published:2013-11-01
Contact: Zhang Gui-ying, Professor, Master’s supervisor, Department of Dermatology and Venereology, the Second Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410000, Hunan Province, China zhangguiying67@yahoo.com.cn
About author:Tong Min★, Master, Associate chief technician, Experimental Animal Center, the Second Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410000, Hunan Province, China tongmin22626@163.com
Supported by:
Research Condition Innovation Project of Hunan Province, No. 2011TT2019*

摘要/Abstract

摘要：

背景：Nc/Nga小鼠皮损、病理和免疫学特征等均与人类特应性皮炎相一致，作为特应性皮炎动物模型其研究价值日益显现。目前国内尚无Nc/Nga小鼠的生理生化指标等相关数据报道。
目的：观察特应性皮炎动物模型Nc/Nga小鼠的生长繁殖性能以及血液生理、生化指标。
方法：统计Nc/Nga小鼠1-3胎的繁殖指标数据，包括每胎产仔数、离乳率、怀孕率及胎间隔。分别称取60只1-56 d Nc/Nga仔鼠的体质量，雌雄各半，绘制其生长表格。Nc/Nga鼠眼眶采血，测定其血常规和生化值。
结果与结论：Nc/Nga小鼠平均交配分娩间隔为(25.8±3.1) d，平均产仔数为(7.5±2.5)只，平均离乳率为(97.2±1.2)%、平均怀孕率为(97.0±1.4)%，1-3胎间差异无显著性意义(P > 0.05)。Nc/Nga小鼠的体质量随着日龄的增长而逐渐增加，断奶后一两周内增重最为迅速，6周后体质量雌雄间差异无显著性意义(P > 0.05)。同一日龄的雌雄间血常规和生化值比较，雌性小鼠红细胞、血红蛋白明显高于雄性小鼠；雄性小鼠血小板计数明显高于雌性小鼠(P < 0.05)；雌性小鼠三酰甘油、白蛋白水平明显高于雄性小鼠(P < 0.05)。提示性别和年龄都会影响Nc/Nga小鼠的血液生理和生化值指标。

关键词: 组织构建, 组织构建实验造模, Nc/Nga鼠, 特应性皮炎, 生长率, 血液生理生化指标, 分娩间隔, 产仔数, 离乳率, 省级基金

Abstract:

BACKGROUND: The skin lesions, pathological and immunological characteristics of Nc/Nga mice are consistent with human atopic dermatitis, and as an atopic dermatitis animal model, it has great research value. But there are no reports on the physiological and biochemical parameters of Nc/Nga mice in China.
OBJECTIVE: To observe the growth and reproduction and blood physiological and biochemical parameters of atopic dermatitis model of NC/Nga mice
METHODS: The data of reproductive performance of NC/Nga mice from the first to the third generation was analyzed, including mean litter size, weaning rate, pregnancy rate and generation interval. The body mass of 60 Nc/Nga mice with 1-56 days old was measured, 30 mice of female and male, then the growth curve was draw. The blood samples from the infraorbital vessels were collected to detect the blood physiological and biochemical parameters in the mice.
RESULTS AND CONCLUSION: The mean delivery interval of Nc/Nga mice was (25.8±3.1) days, mean litter size was (7.5±2.5) mice, mean weaning rate was (97.2±1.2)%, the mean pregnancy rate was (97.0±1.4)%, and there was no significant difference among the three generations of these mice (P > 0.05). The body mass of Nc/Nga mice was increased with the time increasing of days, the body mass of the mice was maximal within 1-2 weeks post-weaning, and there was no significant difference in body mass between males and females at 6 weeks post-weaning (P > 0.05). Comparison of the blood physiological and biochemical parameters of mice at the same age between males and females showed that the levels of red blood cells and hemoglobin in female mice were significantly higher than those in the male mice; the platelet count in the male mice was significantly higher than that in the female mice (P < 0.05); the triglycerides and albumin levels in the female mice were higher than those in the male mice (P < 0.05). The results indicate that the gender and age may influence the blood physiological and biochemical parameters of Nc/Nga mice.

Key words: skin diseases, models, animal, growth, breading, blood chemical analysis

中图分类号:

R318

童敏，梁云生，张桂英. 特应性皮炎模型小鼠的生长繁殖及血液生理生化指标[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(41): 7284-7289.

Tong Min, Liang Yun-sheng, Zhang Gui-ying. Growth, reproduction and blood physiological and biochemical indexes in an atopic dermatitis mouse model[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(41): 7284-7289.

图/表（结果） 4

2.1 实验动物数量分析 实验纳入60只仔鼠进行指标检测，雌雄各半，全部进入结果分析，无脱失。
2.2 Nc/Nga小鼠繁殖性状 Nc/Nga小鼠的平均胎间隔约为25.8 d，平均产仔数为8只，平均离乳率为97.2%，怀孕率为97.0%，表明Nc/Nga小鼠繁殖情况良好，见表1。

表2结果显示，雌雄Nc/Nga小鼠的体质量随着日龄的增长而逐渐增加，而且出现2个快速生长期，分别为出生后第7-14天和断奶(21日龄)后第21-28天内迅速增长，之后体质量增加变缓，最后趋于稳定。断奶前后小鼠体质量增长雌雄间差异无显著性意义(P > 0.05)。
2.4 Nc/Nga小鼠血液生理指标测定结果 见表3。

表3结果显示，28日龄的Nc/Nga小鼠在红细胞、血红蛋白、血细胞压积、血小板计数4项指标的均值差异有显著性意义(P < 0.05)；56日龄的Nc/Nga小鼠在红细胞、血红蛋白、血小板计数指标的均值差异有显著性意义(P < 0.05)；112日龄的Nc/Nga小鼠在红细胞、血红蛋白、红细胞平均血红蛋白容量、血小板计数4项指标的均值比较差异有显著性意义(P < 0.05)。雌性小鼠红细胞、血红蛋白明显高于雄性小鼠；雄性小鼠血小板计数明显高于雌性小鼠，说明性别对Nc/Nga小鼠血常规有影响。
2.5 Nc/Nga小鼠血液生化指标测定结果 见表4。

对同一日龄的雌、雄Nc/Nga小鼠血液生化进行了统计分析，见表4，统计结果显示，28日龄的Nc/Nga小鼠在三酰甘油、白蛋白、谷丙转氨酶 3项指标的均值比较差异有显著性意义(P < 0.05)；56日龄的Nc/Nga小鼠在三酰甘油、白蛋白2个指标的均值比较差异有显著性意义(P < 0.05)；112日龄的Nc/Nga小鼠在三酰甘油、总蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶 4项指标的均值比较差异有显著性意义(P < 0.05)。雌性小鼠三酰甘油、白蛋白明显高于雄性小鼠，其他指标无明显差异。

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引言

材料方法

设计：对比观察动物实验。

时间及地点：于2011年10月至2012年10月在中南大学湘雅二医院实验动物中心完成。

材料：从日本Charles River 实验室购得6周龄SPF级Nc/Nga小鼠40只，雌雄各半，体质量25-30 g，饲养于中南大学湘雅二医院实验动物室，实验动物使用许可证：SYXK(湘)2010-0003。

饲养管理及环境：实验小鼠均饲养在室内温度20- 25 ℃，相对湿度40%-70%，换气次数每小时15次；动物照度15-20 Lx，光照明暗交替12 h/d；动物自由采食和饮水，普通环境饲养。小鼠用饲料和垫料由湖南斯莱克实验动物有限责任公司提供，检测表明每100 g饲料中含有如下成分：蛋白质22 g、粗脂肪5.5 g、粗灰分 6.0 g、粗纤维5.0 g、碳水化合物39.5 g、钙1.28 g、磷0.91 g、赖氨酸1.98 g、蛋氨酸0.48 mg、尼克酸4.8 mg、铁231.8 mg、核黄素0.19 mg、硫胺素0.23 mg，另每周加喂一次葵花籽。垫料每周更换2次。饲养用笼具及饮水器每次更换清洗后均使用84消毒液浸泡，垫料经131 ℃、5 min高压预真空灭菌。动物房每次换完垫料用84消毒液对地板消毒，且每次更换笼具前动物房预先用紫外线照射30 min消毒。

特应性皮炎模型小鼠的生长繁殖及血液生理生化指标实验的主要仪器：

方法：

繁殖数据的统计：Nc/Nga小鼠均采用1雌1雄长期同居的繁殖方法，每胎仔鼠出生后即辨别雌雄，1-3胎初生仔鼠中选择60只仔鼠进行了哺乳期生长发育观察，雌雄各半，于1，7，14，21 d分别称取其体质量。离乳鼠(雌、雄鼠)每周称质量至8周，计算平均体质量。统计Nc/Nga小鼠的第1胎、第2胎、第3胎的平均每胎产仔数、怀孕率、离乳率、交配分娩间隔。

血液生理指标的测定：小鼠禁食12 h后以无菌抗凝玻璃毛细管(内径0.9-1.1 mm)经眶静脉丛采血，取20 μL全血于500 μL稀释液中混匀，用KX-21N全自动血球分析仪检测血常规指标并对同一日龄的Nc/Nga小鼠血常规进行统计分析，血常规指标分别为白细胞、红细胞、血红蛋白、血细胞压积，红细胞平均容量、红细胞平均血红蛋白容量、红细胞平均血红蛋白浓度、血小板计数、红细胞分布宽度、血小板分布宽度、平均血小板体积、红细胞分布宽度变异系数、红细胞分布宽度标准差、淋巴细胞百分比、淋巴细胞绝对值。

血液生化指标的测定：将剩余的全血于4 ℃冰箱放置1 h后3 000 r/min的速度离心10 min，取血清，全自动生化仪检测血清生化指标并进行统计分析。血清生化指标包括三酰甘油、高密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、总蛋白、白蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、肌酐、血清钙、免疫球蛋白、免疫球蛋白、葡萄糖、尿素、血清磷、免疫球蛋白、补体。

主要观察指标：特应性皮炎模型Nc/Nga小鼠的繁殖性状、生长情况及血液生理、生化指标。

统计学分析：由童敏运用SPSS 11.5软件包进行统计分析，计量资料以x(_)±s表示，组间比较采用单因素方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

特应性皮炎是一种表现极为复杂的皮肤疾病，发病机制至今仍不清楚，有必要研究清楚其屏障功能障碍、免疫学异常、瘙痒等一系列表现的发病机制。由于人体受试者少之又少，所以开发有效的特应性皮炎动物模型是研究特应性皮炎发病机制及探索其治疗的关键步骤。到目前为止，国内关于Nc/Nga小鼠的生长繁殖、血液及生化指标测定的一系列数据文献未见全面报道，而这些指标又是动物饲养和实验中最重要的实验数据^[10]。

Nc/Nga小鼠具有特应性易感素质，其皮损、病理和免疫学特征等均与人类特应性皮炎相一致，近年来在特应性皮炎遗传学^[11-12]，发病机制以及中西医治疗学等研究领域得到广泛应用^[13-17]。在普通环境中该小鼠可自然发生特应性皮炎损害，同时伴有显著的血清LgE的升高，如果在无特定病原菌(SPF)环境下生长，则没有明显的LgE升高或皮炎表现^[18-19]，所以本实验在普通环境下饲养。

文献报道Nc/Nga小鼠从7周龄开始，在耳朵、眼睑、背等部位出现皮肤粗糙、红斑及搔抓行为，搔抓行为是小鼠出现的第一个症状，进而才出现渗出、糜烂、结痂、水肿，主要表现在面部，耳朵，颈部和背部^[20-24]。组织病理学提示在出现明显皮肤症状之前，真皮内已经有嗜酸性粒细胞和单核细胞浸润，第17周可观察到过度不全角化，增生，海绵状水肿^[18]。本实验发现, 普通环境8周龄的部分NC/Nga小鼠出现了严重瘙痒、自发性皮肤干燥、屏障功能紊乱，由于NC/Nga小鼠在普通环境下皮肤传导功能出现异常，透皮失水增加，这些均易导致小鼠皮炎的产生，与文献报道一致^[25-29]。

生长繁殖数据是衡量小鼠生长繁殖性能的重要依据，对Nc/Nga小鼠进行深入研究，弄清其繁殖性能和生物学特性很重要，这些生长繁殖数据、生理生化特征将成为后续研究Nc/Nga小鼠应用的重要基础资料。本实验中Nc/Nga小鼠繁殖数据统计结果表明，Nc/Nga小鼠繁殖情况良好，部分NC/Nga小鼠出现的严重瘙痒现象对其繁殖功能无影响。室内环境与特应性皮炎发病关系较大，小鼠又怕热畏寒，所以室内温度应控制在20-25 ℃，相对湿度为50%-60%，饲养期间密切观察小鼠的生长情况，环境要干燥、安静、清洁、温度适宜，才利于动物繁殖生长^[30-32]。

血液生理和生化参数的测定是研究新品系实验动物的重要工作之一，不仅是动物质量监测的需要，而且也为新品系动物的应用提供了正常生理生化数据^[33-34]。血液生理生化值不仅对了解实验动物的生理状态有指导意义，而且也是病理学、生理学、毒理学研究以及探讨人类疾病的发病机制等研究中的重要参考指标。血肌酐和尿素氮是新陈代谢的产物，谷丙转氨酶和谷草转氨酶是肝功能试验中最重要的酶学指标^[35]。谷丙转氨酶及谷草转氨酶大部分存在于肝细胞中，谷丙转氨酶主要存在于细胞浆中，谷草转氨酶主要存在于线粒体中。检测血中尿素氮是检查肾功能的方法之一^[36-37]，由于性别不同某些生理特性有所不同，李慕等^[38]报道过SPF级KM小鼠血液生理生化指标在雌雄、日龄之间存在差异，胡建武等^[39]报道显示性别、年龄都会影响实验动物的血液学及血生化指标值。

实验所测的14项生理指标和17项生化指标中，同一日龄的雌、雄Nc/Nga小鼠血液生理生化指标的红细胞、血红蛋白、白蛋白、谷丙转氨酶等指标存在差异。雌性小鼠红细胞、血红蛋白、三酰甘油、白蛋白明显高于雄性小鼠，雄性小鼠血小板计数明显高于雌性小鼠，但均在正常波动范围^[40-41]。结论是性别因素对血液学及血生化指标存在一定的影响。

实验通过对Nc/Nga小鼠的生长繁殖数据和部分血液生理生化指标的检测，为科研人员使用Nc/Nga小鼠从事特应性皮炎医药研究提供了基础对照参考数据，建立了Nc/Nga小鼠生长繁殖及血液生化等指标的数据档案，同时亦为该小鼠标准化鉴定和质量控制提供依据，为进一步研究特应性皮炎的发病机制和开发药物提供了广阔的前景，其生物学特性还需进一步完善。

特应性皮炎模型小鼠的生长繁殖及血液生理生化指标

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