亚甲基蓝可拮抗苯胺致小鼠骨髓细胞DNA的损伤

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1836

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
单细胞凝胶电泳：细胞膜和核膜在裂解液的作用下被破坏，其中的RNA和蛋白质等从细胞逸出，扩散到裂解液中，而只有核DNA仍停留在细胞核原位。如果细胞完整，经荧光染色后核会呈现圆形；反之，如果细胞受损，那么DNA双链在碱性条件解旋成单链，断片就会进入凝胶，在电泳时，相对分子质量较小、本身带负电荷的断片，在电泳场作用下离开主核向阳极移动，形成不同层次的电泳条带。这些条带经荧光染料染色后，其形状犹如彗星一般，因此也称彗星实验。
DNA损伤：利用gel red染液对电泳条带进行染色，细胞受损越严重，产生断片越多，彗星的尾越长。通过彗星尾长、尾距及荧光强度等指标综合评估DNA损伤及其修复的程度。

摘要
背景：采用单细胞凝胶电泳技术应用于DNA损伤与修复的研究，探讨苯胺遗传毒性的靶器官及亚甲基蓝修复动力学效应，为治疗苯胺中毒提供基础数据和新的策略。
目的：探讨亚甲基蓝对苯胺致小鼠骨髓细胞DNA损伤的拮抗作用。
方法：采用不同浓度苯胺5，50，100，200 mg/kg对昆明小鼠进行灌胃(苯胺灌胃组)，同时设置相对应的亚甲基蓝治疗组、阴性对照组以及空白对照组，每组10只小鼠，持续染毒6 d，取小鼠骨髓细胞进行单细胞凝胶电泳实验，观察骨髓细胞DNA的损伤及修复情况。
结果与结论：①与阴性对照组和空白对照组相比，100，200 mg/kg苯胺灌胃组小鼠骨髓细胞DNA尾长、尾矩增加(P < 0.01)，5，50 mg/kg亚甲基蓝治疗组尾长、尾矩分别较对应的苯胺灌胃组稍微减少(P > 0.05)，而100，200 mg/kg苯胺灌胃组尾长、尾矩与对应的亚甲基蓝治疗组比较显著增加(P < 0.01)；②结果表明，小鼠骨髓细胞DNA损伤程度随着苯胺浓度的增加而逐渐加重；亚甲基蓝对苯胺致小鼠骨髓细胞DNA损伤具有一定的修复效果。该实验方案已于2018-07-01经扬州大学动物科学与技术学院伦理委员会批准。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID:0000-0001-7590-3608(姜超)

关键词: DNA损伤, DNA修复, 遗传毒性, 拮抗作用, 彗星实验, 剂量关系, 亚甲基蓝, 苯胺, 昆明小鼠, 骨髓

Abstract:

BACKGROUND: With the continuous application of single cell gel electrophoresis technology in DNA damage and repair, we explore target organs of aniline genotoxicity and kinetic effects of methylene blue, providing a new strategy for the treatment of aniline poisoning symptoms.
OBJECTIVE: To investigate the antagonistic effect of methylene blue on aniline-induced DNA damage of bone marrow cells in mice.
METHODS: Kunming mice were intragastrically administered with aniline at 5, 50, 100, and 200 mg/kg (aniline-administered groups). Corresponding methylene blue treatment groups, negative control group, and blank control group were set. Ten mice in each group were exposed to poison for 6 days. The mouse bone marrow cells were taken for single cell gel electrophoresis to observe the DNA damage and repair of bone marrow cells.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the negative control group and the blank control group, the DNA tail length and tail moment of the bone marrow cells in 100 and 200 mg/kg aniline-administered groups increased significantly (P < 0.01). The tail length and tail moment of the 5 and 50 mg/kg methylene blue treatment groups were slightly lower than those of the corresponding aniline-administered groups (P > 0.05), while the tail length and tail moment of the 100 and 200 mg/kg aniline-administered group showed a significant increase as compared with the corresponding methylene blue treatment groups (P < 0.01). Overall findings indicate that DNA damage in mouse bone marrow cells gradually aggravates with the increase of aniline concentration, and methylene blue has a certain repair effect on aniline-induced DNA damage in mouse bone marrow cells.

Key words: DNA damage, DNA repair, genotoxicity, antagonism, comet assay, dose relationship, methylene blue, aniline, Kunming mice, bone marrow

中图分类号:

姜超，胡玉龙. 亚甲基蓝可拮抗苯胺致小鼠骨髓细胞DNA的损伤[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(33): 5312-5316.

Jiang Chao, Hu Yulong. Antagonistic effect of methylene blue on aniline-induced DNA damage of mouse bone marrow cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(33): 5312-5316.

图/表（结果） 2

2.1 实验动物数量分析 纳入小鼠100只，均进入结果分析，无死亡和感染。

2.2 各组小鼠骨髓细胞DNA单细胞凝胶电泳图像分析 在荧光显微镜下，细胞核被gel red试剂染成红色；当细胞受损时，断裂的DNA碎片会形成拖尾，细胞DNA受损越严重，产生的断片也越多、越小，尾长和尾矩越大，见图1A，B；与阴性对照组和空白对照组相比，100，200 mg/kg苯胺灌胃+亚甲基蓝治疗组小鼠骨髓细胞DNA链损伤的单细胞凝胶电泳图像的变化并不明显，表明亚甲基蓝对苯胺致小鼠骨髓细胞DNA链损伤具有一定的修复效果，见图1C，D；当细胞未受损伤，电泳时细胞核DNA因其相对分子质量大停留在细胞核基质中，无拖尾现象，见图1E，F。应用 Image Pro-Plus 6.0生物专业图像分析软件计算进行光密度分析，对其中荧光颗粒密度进行测定。实验以空白对照组荧光颗粒的平均密度为参照数值，各组结果均为相对密度。与空白对照组相比，5，50 mg/kg苯胺灌胃组荧光颗粒显著增多(P < 0.01)，而100，200 mg/kg苯胺灌胃+亚甲基蓝治疗组与对应的苯胺灌胃组相比较，荧光颗粒密度显著减少(P < 0.01)，见表1。

2.3 各组小鼠骨髓细胞DNA尾长、尾距差异 对所有组别的小鼠骨髓细胞DNA尾长、尾矩进行测量发现，阴性对照组与空白对照组尾长、尾矩相比差异无显著性意义(P > 0.05)；与阴性对照组和空白对照组相比，5，50 mg/kg苯胺灌胃组小鼠骨髓细胞的尾长、尾矩差异无显著性意义(P > 0.05)，而100，200 mg/kg苯胺灌胃组尾长、尾矩显著增加，差异有显著性意义(P < 0.01)，表明苯胺染毒浓度越高，DNA链受损伤产生的片段越多，DNA损伤越严重；此外，5，50 mg/kg苯胺灌胃+亚甲基蓝治疗组尾长、尾矩分别较对应的苯胺灌胃组减少，但差异并无显著性意义(P > 0.05)，而100，200 mg/kg苯胺灌胃组尾长、尾矩与对应的亚甲基蓝治疗组比较显著增加(P < 0.01)，见表2。

参考文献

[1]尹博.表面活性剂对含氮芳香烃的增溶作用研究[D].广州:广东工业大学,2017.

[2]张晓春,吴登胜,杨强生,等.低浓度苯胺、硝基苯对生产工人健康的影响[J].中国工业医学杂志,2001,14(1):53-54.

[3]Wang J, Wang G, Khan MF. Disorder of G2-M checkpoint control in aniline-induced cell proliferation in rat spleen. PLoS One. 2015;10(7):e0131457.

[4]Patnaik S, Natarajan MM, James EJ, et al. Methylene blue unresponsive methemoglobinemia. Indian J Crit Care Med. 2014;18(4):253-255.

[5]Bazylewicz A, K?opotowski T, Kicka M, et al.Acute poisoning due to chemical substances inducing methemoglobinemia-- two cases report. Przegl Lek. 2010;67(8):636-639.

[6]Clifton J 2nd, Leikin JB. Methylene blue. Am J Ther. 2003; 10(4):289-291.

[7]黄继汉,黄晓晖,陈志扬,等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算[J].中国临床药理学与治疗学,2004,9(9): 1069-1072.

[8]蔡继翔,刘烨,梁明才,等.单细胞凝胶电泳应用研究进展[J].生物信息学,2016,14(2):95-99.

[9]徐丽娟,赵欣欣,奚铭远,等.血浆置换联合亚甲蓝救治重度急性苯胺中毒1例[J].中国输血杂志,2018,31(1):74-75.

[10]刘雪兰,徐少博,吕月,等.苯胺经皮肤中毒致急性重度肝损害1例[J].浙江实用医学, 2018,23(5):373-374.

[11]蒋伟,朱洪坤,清江.苯胺对小鼠成纤维细胞L929的体外毒性评价[J].生态毒理学报,2018,13(5):256-261.

[12]温广军.苯胺对浮萍营养生长和部分生理指标的毒性效应[D].扬州:扬州大学,2012.

[13]刘申吒.EGCG对人食管鳞癌TE-1细胞放疗增敏的作用及其机制研究[D].镇江:江苏大学,2016.

[14]赵晓红,牛静萍,李兴玉,等.苯胺类化合物的遗传毒性及其定量构效关系[J].毒理学杂志,2000,14(4):218-220.

[15]Harrison JH, Jollow DJ. Contribution of aniline metabolites to aniline-induced methemoglobinemia. Mol Pharmacol. 1987; 32(3):423-431.

[16]支绍册,金箫,李冬,等.急性间二硝基苯中毒9例诊治分析[J].全科医学临床与教育,2015,13(4):453-455.

[17]边高鹏,刘瑞祥,史宝忠,等.苯胺致小鼠肝细胞和淋巴细胞DNA损伤及其修复效应[J].中国实验动物学报,2016,24(2):139-144.

[18]Makhdoumi P, Hossini H, Ashraf GM, et al. Molecular mechanism of aniline induced spleen toxicity and neuron toxicity in experimental rat exposure: a review. Curr Neuropharmacol. 2019;17(3):201-213.

[19]Ma H, Wang J, Abdel-Rahman SZ, et al. Induction of NEIL1 and NEIL2 DNA glycosylases in aniline-induced splenic toxicity. Toxicol Appl Pharmacol. 2011;15(1):1-7.

[20]黄伟英,陈鸿汉,刘菲.低浓度下4个取代苯污染物与硝酸铅的混合对发光菌的联合毒性[J].生态环境学报,2010,19(1):57-62.

[21]Bomhard EM. High-dose clastogenic activity of aniline in the rat bone marrow and its relationship to the carcinogenicity in the spleen of rats. Genotoxicity. 2003;77(5):291-297.

[22]Jones E, Fox V. Lack of clastogenic activity of aniline hydrochloride in the mouse bone marrow. Mutagenesis. 2003;18(3):283-286.

[23]郝凤桐.特效解毒剂的临床应用[J].职业卫生与应急救援,2017, 35(1):25.

[24]贝怀国.实验性大鼠亚硝酸盐中毒与治疗实验[J].上海畜牧兽医通讯,2015,(5):8-10.

[25]姚燕红,叶洋鹰.18例亚甲蓝配伍维生素C抢救亚硝酸钠中毒患者的护理[J].当代护士,2015,22(5):33-34.

[26]Juffermans NP, Vervloet MG, Daemen-Gubbels CR, et al. Adose-finding study ofmethylene blue to inhibit nitric oxide actions in the hemodynamics of human septic shock.Nitric Oxide. 2010;22(4):275-280.

[27]梁楠,胡鲲,杨先乐.亚甲基蓝代谢及生物毒性研究概况[J].渔业致富指南,2016,(10):17-19.

[28]陈万光,屈菊平,周芬娜.亚甲基蓝对高体鳑鮍鱼苗的急性毒性研究[J].广东农业科学,2010,(5):131-132.

[29]邹志兵.低氧训练时心肌组织细胞低氧诱导因子1α与凋亡相关蛋白的表达[J].中国组织工程研究,2015,19(51):8305-8310.

[30]蓝志明.CCK-8法定量检测亚甲蓝对人髓核细胞的毒性[J].中国组织工程研究,2018,22(16):2532-2536.

引言

目前人类急性苯胺中毒病例的增多引起相关学者对于苯胺中毒防治研究的重视^[1]。张晓春等^[2]对68例长期从事苯胺生产、接触低浓度苯胺的工人健康状况进行了动态观察，由于在生产过程中所做的防护到位，工人的中毒症状并不十分明显，但其血液中高铁血红蛋白含量大于正常值，且与接触苯胺的时间成正比，同时中枢神经系统疾病发生率显著高于对照组，还有部分患者心肌酶明显增高，推测可能由于轻度缺氧致心肌组织和神经系统损害所导致。Wang等^[3]的研究表明，苯胺在人和动物中都会引起造血毒性。苯胺暴露会导致铁超负荷，氧化性DNA损伤和细胞增殖增加，最终可能导致多器官的致瘤反应。

自1876年亚甲基蓝首次合成以来，在许多临床领域中都有实际应用，目前在毒理学领域普遍用于中毒性高铁血红蛋白血症的治疗^[4]。Bazylewicz等^[5]发现服用亚甲基蓝可有效改善苯胺中毒导致的呼吸、循环衰竭及机体多器官损伤。亚甲基蓝是一类较为安全的药物，但在治疗苯胺诱导的高铁血红蛋白血症时可能存在特殊风险，关键是要控制好注射剂量，临床上一般以1.0-2.0 mg/kg剂量进行静脉注射^[6]。

目前国内外相关研究多为治疗苯胺中毒的案例探讨，对苯胺导致人体慢性中毒治疗方法的理论研究不足且存在争议，亚甲基蓝作为苯胺的特效解毒药，其对苯胺毒性拮抗作用的机制尚不明确，缺乏普遍指导意义。实验用苯胺对昆明小鼠体内染毒6 d，同时采用亚甲基蓝治疗，应用近几年发展起来的SCGE技术对小鼠骨髓细胞进行DNA损伤及修复的测定，期望可以在揭示苯胺毒性机制的同时能够对于亚甲基蓝对苯胺毒性的拮抗作用有更深层次的了解。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 于2018年9月至12月在扬州大学运动人体科学实验中心完成。

1.3 材料 健康雄性SPF级昆明小鼠100只，8周龄，体质量(30±5) g，均由扬州大学比较医学中心提供，动物生产许可证号：SCXK(苏)2017-0007，用标准饲料和蒸馏水喂养，全部动物引入观察1周后进行实验。

1.4 实验方法

1.4.1 分组及干预 将小鼠随机分为不同浓度苯胺(天津市凯通化学试剂有限公司)5，50，100，200 mg/kg染毒组(苯胺灌胃组)，每组10只小鼠，按照标记依次进行苯胺灌胃。同时，设置与不同浓度苯胺染毒组相对应的亚甲基蓝治疗组，即在不同浓度苯胺灌胃4 h后，按照小鼠体质量，计算亚甲基蓝溶液剂量进行尾部静脉注射，每组10只小鼠。另设阴性对照组和空白对照组各10只小鼠，其中阴性对照组仅进行亚甲基蓝注射，规格同亚甲基蓝治疗组，而空白对照组不进行干预实验。灌胃之前小鼠禁食1 h，再将配置好的苯胺溶液分4级浓度梯度进行灌胃，所有小鼠每日灌胃总时长控制在1 h内。根据人与动物按体表面积折算的单位质量用药量换算系数^[7]，实验小鼠所需亚甲基蓝剂量为18.2 mg/kg，故配置亚甲基蓝溶液质量浓度为5.46 g/L，根据小鼠体质量，用注射器吸取亚甲基蓝溶液于小鼠尾部两侧的尾静脉缓慢静注。在第6天时，通过尾部采血取样，运用单细胞凝胶电泳技术分别观察苯胺染毒组和对应的亚甲基蓝治疗组小鼠血样^[8]，当观察到两组小鼠相比有较为明显的彗尾减小现象时，将全部小鼠分组进行眼球放血、麻醉处死、解剖进行实验。

1.4.2 镀膜 将被重铬酸钾浸泡24 h的载玻片擦净，放入立式染缸中(注意缓慢旋转锥形瓶，使气泡完全消失)，加热体积分数1%的常熔点琼脂糖至彻底沸腾，倒入立式染缸，1.5 min后将载玻片取出并放入45 ℃烘箱中12 h。

1.4.3 骨髓细胞悬液制备 固定小鼠头部，眼部取血致死，剪开小鼠股骨两端使其露出骨髓腔，用已吸好500 µL PBS的注射器冲洗骨髓腔使骨髓细胞流入1.5 mL的离心管中，制成单细胞悬液待用。

1.4.4 镀胶 按细胞原液∶低熔点琼脂糖=1∶3比例混合，一般取25 µL细胞原液，75 µL低熔点琼脂糖混合均匀，取80 µL混合液滴加在载玻片一端，将其均匀铺开并放置在裂解盒内，4 ℃晾干。

1.4.5 裂解 按细胞储备液∶Triton X-100=100∶1比例配制细胞裂解液并置于4 ℃条件下，随后将细胞裂解液倒入裂解盒中，没过载玻片即可，在4 ℃条件下裂解2 h。

1.4.6 免疫荧光染色 采用荧光核酸凝胶染色法进行染色，吸取提前配好的gel red染液10 µL，滴至载玻片中央，染色1.5 min。荧光显微镜在40倍视野下观察细胞并记录(选取杂质较少的区域及无细胞重叠的区域)。将荧光显微镜拍摄所得的图片转换为TIFF格式，导入由TOTAL SOFT BANK LTD.研发的电脑自动化配载计划系统(Computer Automated Stowage Planning；CASP)，通过得到的DNA迁移的2个复合参数：尾长(DNA尾部最末端与头部中心的距离)，尾矩(尾部DNA占总DNA百分比与尾长的乘积)来评价亚甲基蓝对苯胺致DNA损伤程度的修复效果。

1.5 主要观察指标 ①荧光显微镜在40×下观察细胞并记录；②单细胞凝胶电泳检测骨髓细胞DNA尾长及尾矩；③检测荧光颗粒密度。

1.6 统计学分析 采用SPSS 20.0软件分析，计量资料以x(_)±s表示，组间均数比较采用单因素方差分析法，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

3.1 苯胺毒性作用分析 实验发现较高浓度的苯胺会引起明显的细胞损伤，坏死细胞显著增多，出现DNA断裂等损伤现象，这与蒋伟等^[11]的研究一致。温广军^[12]将浮萍暴露于苯胺环境72 h和168 h后，丙二醛含量均显著增加，而且增加的程度与苯胺的浓度呈正相关。同时浮萍体内的过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶这3种抗氧化酶的活性受到了显著抑制^[13]。自由基在攻击生物膜后发生脂质过氧化反应产生丙二醛，它的产生标志着机体发生氧化损伤。根据体内3种抗氧化酶活性受到的抑制情况，推测苯胺也有可能是由于其促进生物体内活性氧自由基的产生，自由基又会导致DNA链的断裂。实验设置不同剂量的苯胺灌胃组，发现当苯胺浓度达到100 mg/kg时，DNA的损伤显著增加。

苯胺经口灌胃进入小鼠体内，造成DNA损伤，赵晓红等^[14]认为苯胺亲脂性的特性使其能够与脂质膜结合，同时使其在血液中能由脂蛋白运输，进入骨髓等其他器官，在细胞色素P450单加氧化酶的羟基化作用下转化为对氨基酚、邻氨基酚、间氨基酚、苯氨基磺酸及乙酰苯胺等，发生Ⅰ相反应。Ⅰ相反应是药物在肝脏内代谢的第一阶段，发生氧化、还原及水解反应，产生一系列肝细胞毒性产物，主要包括亲电子基和氧自由基。Harrison等^[15]的研究表明在肝脏微粒体细胞色素P450单加氧化酶的催化下，氨基上的一个氢被氧化形成羟基，发生N-羟化反应形成苯基羟胺，其上的羟基由于氨基诱导效应，两者连接的共价键易于断裂，形成羟自由基，可以造成DNA损伤。在细胞微粒体细胞色素P450单加氧化酶的催化下，经过环羟化转为酚而解毒，而经N-羟化反应产生中间产物苯基羟胺，其对血红蛋白具有极强的氧化性，使一部分血红蛋白被氧化成含三价铁的高铁血红蛋白^[16]，使血红蛋白运输氧的功能下降，机体缺氧，从而引起高铁血红蛋白血症的发生，患者毛细血管丰富的区域出现黏膜和皮肤的紫绀及一系列缺氧症状；同时还会使组成血红蛋白的氨基酸发生替代或缺失，从而使血红蛋白变性，形成赫恩滋小体，最终引起红细胞破裂。边高鹏等^[17]的研究表明50，100 μmol/L苯基羟胺就可致人类成纤维细胞SCE频率相比对照组上升40%，预示其具有明显DNA损伤效应。苯基羟胺首先攻击肝细胞导致DNA断裂，然后随肝脏血液循环再次进入外周血中，引起淋巴细胞的DNA损伤。

苯胺可以引起大鼠和小鼠组织DNA损伤^[18]，也可促使大鼠脾脏DNA加合物的形成^[19]，实验发现，随着苯胺浓度的增加，小鼠骨髓细胞的DNA尾长和尾矩增长，由此可见小鼠骨髓细胞对苯胺引起的遗传损伤敏感性较强，苯胺暴露可导致小鼠骨髓细胞产生明显的DNA损伤，这与黄伟英等^[20]研究的苯胺对发光菌的遗传毒性报道一致，却与Bomhard^[21]研究的苯胺盐酸盐对大鼠脾脏细胞和Jones等^[22]对骨髓的研究结果不同，他们认为小鼠苯胺中毒主要是因为红细胞发生感应和溶血，且在高剂量下仅轻微诱导血红蛋白的增加，这一点还需进一步探讨。

3.2 亚甲基蓝保护作用分析 以往研究发现，亚甲基蓝本身作为氧化剂，根据其在体内的不同浓度，对血红蛋白有两种不同的作用。当亚甲基蓝处于低浓度时，6-磷酸葡萄糖脱氢反应的过程中，氢离子还原型三磷酸吡啶核苷传递给亚甲基蓝，使其转变为还原型白色亚甲基蓝^[23]；白色亚甲蓝将氢原子传递给带3价铁的高铁血红蛋白，使其还原为带2价铁的正常血红蛋白，而白色亚甲蓝又被氧化为亚甲基蓝^[24]，亚甲基蓝的还原氧化过程可反复的进行^[25]。从而减轻苯胺导致的DNA损伤。Juffermans等^[26]认为人体注射高浓度的亚甲基蓝会损害内脏器官的血流灌注和组织氧供，也有导致高铁血红蛋白血症的风险。

目前，亚甲基蓝应用于治疗苯胺中毒症状仍存在诸多争议，主要问题在于亚甲基蓝自身的毒性带来潜在的风险，同时，在苯胺中毒人群中使用亚甲基蓝的效果报道并不一致，可能与用于治疗的亚甲基蓝浓度不同有关。据梁楠等^[27]报道，新生儿使用亚甲基蓝，任何暴露途径都可能导致新生儿皮肤脱皮，蓝绿尿现象，甚至是出现溶血性贫血，高胆红素血症和高铁血红蛋白血症，并有可能并发6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏症。亚甲基蓝在鱼病防治中也起着关键作用，陈万光等^[28]研究发现用10 mg/L溶液中浸浴鱼苗10-20 min可有效防治水霉病，而高体鳑鮍鱼苗的亚甲基蓝安全质量浓度(0.96 mg/L)明显低于锦鲤(4.25 mg/L)，预示亚甲基蓝对鱼类的毒性作用存在着种间差异。邹志兵^[29]的研究表明机体组织在缺氧后可导致DNA明显受损，细胞发生凋亡。而亚甲基蓝可使变性的高铁血红蛋白还原成血红蛋白^[30]，从而减轻苯胺所致的DNA损伤，该实验发现，使用亚甲基蓝治疗的组别与对应浓度的苯胺组相比，DNA拖尾现象明显减少，尾长和尾矩显著缩短，提示亚甲基蓝对苯胺造成的DNA损伤有保护作用。

综上所述，苯胺浓度增加可导致小鼠骨髓细胞DNA损伤程度逐渐加重，同时研究也表明，亚甲基蓝对苯胺致小鼠骨髓细胞DNA损伤具有一定的修复作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程