中国组织工程研究 ›› 2010, Vol. 14 ›› Issue (10): 1739-1742.doi: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.10.006
闫 曼1,杨依勇2,秦书俭2,郑德宇2
Yan Man1, Yang Yi-yong2, Qin Shu-jian2, Zheng De-yu2
摘要:
背景:随年龄的增加,骨髓来源的间充质干细胞在数量和质量上均受到影响,并对供体损伤较大,寻找替代的间充质干细胞来源成为研究热点,而脐带血中是否含有间充质干细胞仍存在争议。
目的:拟从人脐带血中分离培养间充质干细胞,并对其生物学特性进行检测。
方法:无菌条件下,应用Percoll密度梯度离心法分离脐血标本,收获中间层细胞,加入含胎牛血清、青霉素和链霉素、L-谷氨酰胺的DMEM基础培养液,再经反复贴壁纯化,除去悬浮生长细胞,得到较多呈融合状态的贴壁细胞,待细胞达60%~80%融合时胰酶消化传代。分别取第1,5,9代细胞,观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达,绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞活性。
结果与结论:分离的脐血间充质干细胞大小均匀,呈梭形或星形的成纤维细胞样细胞。第1,5,9代脐带血间充质干细胞高表达CD29,CD105和CD166,低表达CD34和CD45;接种后5 d细胞进入指数增生期,9 d后数量减少,群体倍增时间为(53.5±8.32)h;细胞生长状态良好,在细胞活力方面1~7代基本相似(P > 0.05),至第9代细胞增殖活力稍下降,但仍无明显差异(P > 0.05)。结果证实可在体外成功从脐血中分离培养出间充质干细胞,第1~9代细胞均具有良好的增殖能力。
中图分类号: