分泌型模块化钙结合蛋白调控发育性髋关节发育不良大鼠髋臼软骨细胞自噬

doi:10.12307/2026.681

中国组织工程研究 ›› 2026, Vol. 30 ›› Issue (18): 4618-4626.doi: 10.12307/2026.681

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分泌型模块化钙结合蛋白调控发育性髋关节发育不良大鼠髋臼软骨细胞自噬

郑雯1，朱东生2，王晓东1

1苏州大学附属儿童医院，江苏省苏州市 215000；2连云港市第一人民医院，江苏省连云港市 222000

收稿日期:2025-05-15 接受日期:2025-09-08 出版日期:2026-06-28 发布日期:2025-12-04
通讯作者: 王晓东，博士，教授，苏州大学附属儿童医院，江苏省苏州市 215000 通讯作者：朱东生，博士，副主任医师，连云港市第一人民医院，江苏省连云港市 222000
作者简介:郑雯，女，1994年生，四川省会理市人，彝族，医师，现在四川省崇州市妇幼保健院儿科工作。
基金资助:
江苏省重点研发计划(社会发展)项目(BE2022732)，项目负责人：王晓东；连云港市妇幼健康科研项目(F202319)，项目负责人：朱东生

Secreted modular calcium binding protein regulates autophagy in the acetabular cartilage of rats with developmental dysplasia of the hip

Zheng Wen1, Zhu Dongsheng2, Wang Xiaodong1

1Children’s Hospital of Soochow University, Suzhou 215000, Jiangsu Province, China; 2The First People’s Hospital of Lianyungang, Lianyungang 222000, Jiangsu Province, China

Received:2025-05-15 Accepted:2025-09-08 Online:2026-06-28 Published:2025-12-04
Contact: Wang Xiaodong, PhD, Professor, Children’s Hospital of Soochow University, Suzhou 215000, Jiangsu Province, China Co-corresponding author: Zhu Dongsheng, PhD, Associate chief physician, The First People’s Hospital of Lianyungang, Lianyungang 222000, Jiangsu Province, China
About author:Zheng Wen, Physician, Children’s Hospital of Soochow University, Suzhou 215000, Jiangsu Province, China
Supported by:
Jiangsu Key Research and Development Program (Social Development), No. BE2022732 (to WXD); Lianyungang Maternal and Child Health Research Project, No. F202319 (to ZDS)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
分泌型模块化钙结合蛋白2(Secreted modular calcium binding protein 2，SMOC2)：主要在细胞外基质组织中发挥作用，能够调节细胞外基质与细胞间的相互作用。此外，SMOC2还与成骨、血管形成以及恶性肿瘤的发生发展存在关联。
自噬：是一种细胞内的自我降解过程，细胞通过形成双层膜结构的自噬体，包裹受损的细胞器、异常蛋白等物质，然后与溶酶体融合，利用溶酶体内的水解酶将其降解，从而实现细胞内物质的循环利用。

背景：发育性髋关节发育不良是儿童最常见的骨骼畸形，是青年期骨关节炎的重要危险因素，严重者需行髋关节置换，严重影响患者的生活质量。
目的：探讨SMOC2在发育性髋关节发育不良模型大鼠髋臼顶壁软骨中的表达及其对软骨细胞自噬的影响。
方法：①将新生SD大鼠随机分成疾病组和对照组(正常大鼠)，疾病组大鼠建立发育性髋关节发育不良模型，2周龄时采用RT-qPCR和Western Blot检测髋臼顶壁软骨组织SMOC2的表达，并检测自噬相关蛋白的表达。②提取大鼠髋臼组织软骨细胞，将细胞分为Sh-NC、Sh-SMOC2-1、Sh-SMOC2-2三组，使用Western Blot检测自噬相关蛋白的表达；使用透视电镜观察细胞自噬小体数量。③提取大鼠髋臼组织软骨细胞，将细胞分为Sh-NC、Sh-SMOC2、Sh-SMOC2+740 Y-P(PI3K激活剂)3组，使用Western Blot检测自噬相关蛋白的表达，探究SMOC2是否通过PI3K/AKT通路调控软骨细胞自噬相关蛋白。
结果与结论：①与对照组相比，疾病组大鼠髋臼顶壁软骨组织中SMOC2表达下降，自噬相关蛋白P62表达下降，Beclin表达升高，微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ表达无差异。②与Sh-NC组相比，Sh-SMOC2-1、Sh-SMOC2-2组软骨细胞中在细胞中P62表达下降，微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ比值升高，Beclin1表达下降。③与Sh-SMOC2组相比，Sh-SMOC2+740 Y-P组软骨细胞中P62表达升高，微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ/Ⅰ比值下降，Beclin1表达无差异。综上所述，2周龄发育性髋关节发育不良大鼠髋臼软骨细胞自噬增强，SMOC2可以通过PI3K/AKT信号通路调控大鼠软骨细胞的自噬。
https://orcid.org/0009-0005-3201-2342(郑雯)；https://orcid.org/0000-0002-6344-5504(朱东生)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 发育性髋关节发育不良, SMOC2, 自噬, PI3K/AKT, 骨关节炎, 髋臼, 软骨细胞

Abstract: BACKGROUND: Developmental dysplasia of the hip is the most common skeletal deformity in children and is an important risk factor for osteoarthritis in young adulthood. Severe cases require hip replacement, which seriously affects the quality of life of patients.
Objective: To investigate the expression of secreted modular calcium-binding protein 2 (SMOC2) in the cartilage acetabular roof of rats with developmental dysplasia of the hip and its effect on chondrocyte autophagy.
Methods: (1) Newborn Sprague-Dawley rats were randomly divided into disease group and control group (normal rats). A developmental dysplasia of the hip model was established in rats of the disease group. At 2 weeks of age, the expression of SMOC2 as well in the cartilage tissues of the acetabular top wall was detected by real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blot. Autophagy-related protein expression was assessed via Western blot. (2) Chondrocytes were isolated from rat acetabular tissue and divided into three groups: Sh-NC, Sh-SMOC2-1, and Sh-SMOC2-2 groups. The expression of autophagy related proteins was detected by Western blot, and the number of autophagosomes was observed using a transmission electron microscope. (3) Rat acetabular tissue chondrocytes were extracted, and the cells were divided into three groups: Sh-NC, Sh-SMOC2, and Sh-SMOC2+740 Y-P (phosphatidylinositol 3-kinase activator) groups. The expression of autophagy-related proteins was detected using western blot to investigate whether SMOC2 regulates autophagy-related proteins of chondrocytes through the PI3K/AKT pathway.
Results and Conclusion: (1) Compared with the control group, there was a decrease in the expression of SMOC2, a decrease in the expression of autophagy-associated protein P62, an increase in the expression of Beclin, and no difference in the expression of microtubule-associated protein 1 light chain 3 II/I in cartilage tissues of the rat acetabular top wall in the disease group. (2) Compared with the Sh-NC group, P62 expression was decreased, microtubule-associated protein 1 light chain 3 II/I ratio was increased, and Beclin1 expression was decreased in chondrocytes of the Sh-SMOC2-1 and Sh-SMOC2-2 groups. (3) Compared with the Sh-SMOC2 group, P62 expression was elevated, microtubule-associated protein 1 light chain 3 II/I ratio was decreased, and there was no difference in Beclin1 expression in chondrocytes of the Sh-SMOC2+740 Y-P group. In conclusion, autophagy is enhanced in acetabular chondrocytes of 2-week-old rats with developmental dysplasia of the hip, and SMOC2 can regulate autophagy in rat chondrocytes through the phosphatidylinositol 3-kinase/AKT signaling pathway.

Key words: developmental dysplasia of the hip, SMOC2, autophagy, PI3K/AKT, osteoarthritis, acetabulum, chondrocytes

中图分类号:

郑雯, 朱东生, 王晓东. 分泌型模块化钙结合蛋白调控发育性髋关节发育不良大鼠髋臼软骨细胞自噬[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(18): 4618-4626.

Zheng Wen, Zhu Dongsheng, Wang Xiaodong. Secreted modular calcium binding protein regulates autophagy in the acetabular cartilage of rats with developmental dysplasia of the hip[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2026, 30(18): 4618-4626.

图/表（结果） 7

2.1 实验动物数量分析实验选用新生SD大鼠12只，随机分为2组，每组6只，进入结果分析12只。
2.2 发育性髋关节发育不良大鼠髋臼顶壁软骨组织中SMOC2表达下降
2.2.1 Western Blot检测结果与对照组相比，疾病组髋臼顶壁软骨组织中SMOC2蛋白的表达下降，见图1A，B。
2.2.2 RT-qPCR检测结果与对照组相比，疾病组髋臼顶壁软骨组织中Smoc2 mRNA的表达明显下降，见图1C。
2.3 发育性髋关节发育不良大鼠髋臼顶壁软骨组织中自噬相关蛋白表达异常 Western Blot检测结果显示，与对照组相比，疾病组髋臼顶壁软骨组织中P62蛋白表达下降，Beclin1表达升高，LC3-Ⅱ/Ⅰ表达无明显差异，见图2。
2.4 Sh-SMOC2可有效敲低软骨细胞中SMOC2的表达为探究SMOC2在软骨细胞中的作用，将软骨细

胞分为Sh-NC、Sh-SMOC2-1和Sh-SMOC2-2三组，分别进行质粒转染。转染成功后，细胞发出绿色荧光，见图3。提取3组软骨细胞的RNA和蛋白，进行RT-qPCR检测及Western Blot检测。
2.4.1 RT-qPCR实验结果与对照组相比，Sh-NC组软骨细胞中Smoc2 mRNA的表达水平未见明显变化(图4A，B)；而相较于Sh-NC组，Sh-SMOC2-1和Sh-SMOC2-2组软骨细胞中Smoc2 mRNA的表达均显著下降，见图4A，B。

2.4.2 Western Blot实验结果与对照组相比，Sh-NC组软骨细胞中SMOC2蛋白的表达水平未见明显变化；而相较于Sh-NC组，Sh-SMOC2-1和Sh-SMOC2-2组软骨细胞中SMOC2蛋白的表达均显著下降，见图4C-F。由此可见，Sh-SMOC2-1和Sh-SMOC2-2均能有效敲低软骨细胞中SMOC2的表达。

2.5 SMOC2调控软骨细胞自噬
2.5.1 Western Blot检测提取Sh-NC、Sh-SMOC2-1和Sh-SMOC2-2三组软骨细胞的蛋白，利用Western Blot检测自噬相关分子P62、Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达。结果显示，与Sh-NC组相比，Sh-SMOC2-1和Sh-SMOC2-2组软骨细胞中P62和Beclin-1蛋白的表达下降，LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高，见图5。

2.5.2 透射电镜观察收集Sh-NC组和Sh-SMOC2组软骨细胞，置于透射电镜下观察，结果显示，与Sh-NC组相比，Sh-SMOC2组软骨细胞中自噬小体增多，见图6。结果提示，SMOC2是软骨细胞自噬的调控因子。
2.6 SMOC2通过PI3K/AKT信号通路调控软骨细胞自噬相关蛋白表达为探究SMOC2是否通过PI3K/AKT通路调控软骨细胞自噬相关蛋白，在软骨细胞中加入PI3K激活剂(740 Y-P)，软骨细胞分为SH-NC组、 Sh-SMOC2组、Sh-SMOC2+740 Y-P组。提取3组细胞

中的蛋白进行Western Blot检测。PI3K、P-PI3K、P-AKT蛋白及软骨细胞自噬相关蛋白表达见图7。结果显示，与SH-NC组相比，Sh-SMOC2组软骨细胞中P62和Beclin1蛋白表达水平下降，LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高。与Sh-SMOC2组相比，Sh-SMOC2+740 Y-P组软骨细胞中P62蛋白表达水平升高，LC3-Ⅱ/Ⅰ比值下降，Beclin1表达无明显差异，见图7。结果提示SMOC2通过PI3K/AKT信号通路调控软骨细胞自噬相关蛋白表达。

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引言

发育性髋关节发育不良是儿童骨骼系统中一种较为常见的先天性发育异常疾病，其核心病理特征主要表现为髋臼与股骨头在解剖结构上的异常匹配[1-2]。若发育性髋关节发育不良未能得到及时有效的诊断与干预，随着疾病进程的持续发展，可能进展为继发性骨关节炎，严重影响患者的运动功能，降低其生活质量[1，3-4]。
自噬作为一种高度保守的细胞内降解机制，在维持软骨细胞稳态过程中发挥着至关重要的作用[5-6]，自噬主要通过维持细胞内环境的动态平衡，从而保障软骨细胞的正常生理功能[7-8]。近年来的研究表明，自噬功能障碍与骨关节炎之间存在密切关联，自噬功能的缺失或紊乱可显著加速软骨细胞的损伤与退变进程[9-10]。在骨关节炎早期，自噬的激活可以减少炎症反应，保护软骨细胞免受氧化应激和细胞凋亡的影响，在骨关节晚期，软骨细胞自噬活性的缺失可能导致细胞的凋亡增加，加重关节炎的进展[11-12]。尽管自噬在多种骨骼疾病中的作用机制已受到广泛关注，但它在发育性髋关节发育不良中的研究仍不足。探究发育性髋关节发育不良中的自噬情况及其机制对提高发育性髋关节发育不良相关骨关节炎的治疗策略具有重要的意义。
分泌型模块化钙结合蛋白2(Secreted modular calcium binding protein 2，SMOC2)是一种具有钙结合能力的分泌性蛋白，广泛参与多种组织的发育、血管生成以及细胞外基质重塑等关键生物学过程[13-15]。
在骨骼系统中，SMOC2已被证实对骨和软骨的发育具有重要的调节作用，其通过与多种细胞表面受体及细胞外基质成分相互作用，影响细胞的增殖、分化和代谢过程，从而在骨骼的形成与发育过程中发挥关键作用[14，16-17]。另有研究报道SMOC2可以调控自噬[18]，但关于SMOC2在发育性髋关节发育不良中的表达和作用尚不清楚。
此次研究通过建立发育性髋关节发育不良大鼠模型，检测髋臼软骨细胞中SMOC2的表达和自噬水平，并进一步探讨SMOC2是否调控软骨细胞的自噬。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验和体外细胞实验。
1.2 时间及地点实验于2024年3-12月在苏州大学附属儿童医院研究所完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物新生24 h SD大鼠购买于上海必凯科翼生物科技有限公司，生产许可SCXK (沪)2023-0009。动物饲养环境为SPF级，温度20-26 ℃，湿度40%-70%，由母鼠喂养。该实验方案已经苏州大学实验动物伦理委员会审核通过(SUDA20240205A01)。
1.3.2 细胞软骨细胞从2周龄SD大鼠髋臼软骨中提取。
1.3.3 主要试剂 SMOC2鼠抗单克隆抗体(SANTA CRUZ)，Beclin1兔抗多克隆抗体(Abcam)，微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light 3，LC3)Ⅱ/Ⅰ兔抗多克隆抗体(CST)，P62兔抗单克隆抗体(CST)，PI3K兔抗单克隆抗体(CST)，p-PI3K兔抗多克隆抗体(SAB)，AKT兔抗单克隆抗体(CST)，p-AKT兔抗单克隆抗体(CST)，GAPDH鼠抗单克隆抗体(Proteintech)，740 Y-P(MCE)等。
1.3.4 实验仪器动物手术器械(广州尚色)，反转录仪(美国ABI)，PCR板(瑞士Roche)，实时荧光定量PCR仪(瑞士Roche)，化学发光成像系统(美国GE)，蛋白电泳仪/转移槽(美国BIO-RAD)，聚偏二氟乙烯膜(PVDF膜，德国Merck)等。
1.4 实验方法
1.4.1 动物造模新生24 h内SD大鼠随机分成对照组(正常大鼠)和疾病组，每组6只，疾病组予以襁褓体位固定下肢建立发育性髋关节发育不良模型，每天松解1 h，避免缺血坏死，7 d后解除固定。2周龄时解剖髋关节，股骨头与髋臼失去正常解剖关系视为造模成功，乙醚吸入性麻醉后处死大鼠，取出髋臼顶壁软骨组织提取组织蛋白和RNA，检测SMOC2表达水平及自噬相关蛋白表达情况。
1.4.2 髋臼原代软骨细胞提取取2周龄SD大鼠，乙醚吸入性麻醉后处死大鼠，无菌取出髋臼软骨，切成< 1 mm3的碎块，先后用0.25%胰蛋白消化酶、0.2%Ⅱ型胶原酶消化，消化液通过200目滤网过滤，滤过液离心后弃上清，培养液重新悬浮细胞后接种，放入37 ℃、体积分数5% CO2细胞培养箱中培养。

1.4.3 细胞转染构建携带GFP荧光标记的Sh-NC、Sh-SMOC2-1和Sh-SMOC2-2质粒，并通过慢病毒进行包装(质粒及慢病毒均由吉凯生物设计并完成包装)。将2 mL软骨细胞悬液(细胞浓度3×107 L-1)接种于6孔板，24 h后分别加入Sh-NC(阴性对照)、Sh-SMOC2-1慢病毒和Sh-SMOC2-2慢病毒转染，转染10-16 h后换液并观察转染效率，继续培养72 h后收取样品，见表1。

1.4.4 实时荧光定量PCR(Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction，RT-qPCR)检测 ①取2组大鼠髋臼顶壁软骨组织，检测SMOC2 mRNA的表达；②将软骨细胞分为Sh-NC、Sh-SMOC2-1、
Sh-SMOC2-2组，提取RNA，检测软骨细胞中SMOC2的敲低效率。采用TRIzol法提取髋臼顶壁软骨组织和软骨细胞总RNA，测定RNA的浓度和纯度。使用反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA。以cDNA为模板，采用SYBR Green法进行RT-qPCR，引物由专业公司设计合成。反应条件：95 ℃预变性30 s，95 ℃ 10 s、60 ℃ 30 s，40个循环。以GAPDH为内参，采用2-ΔΔCt法计算目标基因相对表达量，见表2。

1.4.5 蛋白免疫印迹(Western Blot)检测 ①取2组大鼠髋臼顶壁软骨组织，检测SMOC2蛋白的表达；②将软骨细胞分为Sh-NC、Sh-SMOC2-1、Sh-SMOC2-2组，提取蛋白，检测软骨细胞中SMOC2的敲低效率；③将软骨细胞分为Sh-NC、Sh-SMOC2-1、Sh-SMOC2-2组，提取蛋白，检测软骨细胞中自噬相关分子P62、Beclin1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达；④将2 mL软骨细胞悬液(3×107 L-1)接种于6孔板，加入PI3K激活剂(740 Y-P)30 μmol/L处理2 h[19]，将细胞分为3组：Sh-NC、Sh-SMOC2、Sh-SMOC2+740 Y-P组，检测软骨细胞中自噬相关分子P62、Beclin1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达。

取髋臼顶壁软骨组织和软骨细胞，加入裂解液裂解(组织先予以研磨机研磨)后冰上裂解，超声裂解，4 ℃，13 000 r/min 离心20 min，取上清至新EP管，加入蛋白上样缓冲液，煮沸变性。经电泳、湿转、转膜、封闭后4 ℃冰箱孵育SMOC2鼠抗单克隆抗体(1∶500)、P62兔抗单克隆抗体(1∶1 000)、Beclin1兔抗多克隆抗体(1∶1 000)、LC3-Ⅱ/Ⅰ兔抗多克隆抗体PI3K兔抗单克隆抗体，p-PI3K兔抗多克隆抗体，AKT兔抗单克隆抗体，p-AKT兔抗单克隆抗体(均为1∶1 000)、GAPDH鼠抗单克隆抗体(1∶50 000)
过夜，山羊抗鼠二抗(1∶5 000)、山羊抗兔二抗(1∶5 000)室温孵育2 h，增强化学发光法显色。
1.4.6 透射电镜观察软骨细胞自噬弃去细胞培养液，加入胰蛋白酶消化细胞并离心，弃上清，加入2.5%常温戊二醛固定液，轻轻挑起细胞团，避光固定半小时后4 ℃保存，后续由艾方生物公司于透射电镜下观察拍照。
1.5 主要观察指标 ①大鼠髋臼顶壁软骨组织中SMOC2及自噬相关分子P62、Beclin1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达情况；②软骨细胞敲低SMOC2后自噬相关分子P62、Beclin1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达变化；③软骨细胞敲低SMOC2后细胞中自噬小体数量；④敲低SMOC2的软骨细胞中加入PI3K激活剂后，自噬相关分子P62、Beclin1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达变化。
1.6 统计学分析所有实验重复3次及以上，采用GraphPad Prism 9.0软件进行统计学分析。计量数据以x±s表示，经正态性和方差齐性检验后，两组间比较采用独立样本t检验。分别以P < 0.05，P < 0.01，P < 0.001表示差异的显著性水平。文章的统计学方法已经苏州大学统计学专家审核。

讨论

发育性髋关节发育不良是新生儿中最常见的先天性骨骼畸形之一[20-21]。发育性髋关节发育不良与青年期骨关节炎的发生密切相关，是其重要的危险因素[4，22-23]。在病情较为严重的病例中，患者甚至需要接受髋关节置换手术来改善生活质量[3，24]。近年来，自噬在骨关节炎中的作用逐渐受到关注，在骨关节炎的发生和发展过程中，自噬功能的异常可能与软骨细胞的损伤和退变密切相关[7，25]。深入研究发育性髋关节发育不良中自噬的变化及其相关的分子机制或许能为临床治疗提供新的思路和方法。通过调节自噬，或许可以延缓或减轻发育性髋关节发育不良的进展，减少骨关节炎的发生风险。
此次实验结果显示，在2周龄发育性髋关节发育不良大鼠髋臼顶壁软骨组织中，自噬相关蛋白P62表达下降、Beclin1表达升高，提示髋臼软骨组织自噬增强。自噬是细胞降解和回收蛋白质及细胞器以维持细胞内稳态的一个动态过程[26]。通常情况下，自噬在细胞中起着保护作用，保持一定程度的自噬对细胞的正常发育是有利的，但自噬减弱或过度均会损伤细胞导致细胞的死亡，导致疾病的发生[26]。
在发育性髋关节发育不良早期，自噬通过多重机制发挥保护作用。异常机械应力和局部缺氧可损伤髋关节软骨细胞和骨细胞[27-29]，此时自噬通过清除受损细胞器和异常蛋白维持细胞内稳态，并清除线粒体等活性氧来源以减轻氧化应激[11，30-31]。同时，自噬通过调控基质金属蛋白酶的活性维持软骨基质平衡[32-33]。但是，早期自噬功能的改变可能为发育性髋关节发育不良后期继发骨关节炎埋下隐患，自噬减弱将导致软骨细胞凋亡加剧、基质降解加速，显著增加关节炎发生风险[34-36]。在此次实验中，2周龄发育性髋关节发育不良大鼠髋臼软骨组织中自噬的增强可以帮助软骨细胞应对氧化应激、机械损伤和代谢紊乱等病理刺激，维持软骨细胞稳态[11]。自噬的改变与骨关节炎早期阶段的变化也相似。这些发现提示自噬调控可能是发育性髋关节发育不良早期干预和关节炎预防的重要靶点。
SMOC2作为SPARC家族中的一员，最初在关节软骨的细胞外基质中被发现[37]。研究报道，SMOC2可以通过调节大鼠心肌细胞的自噬水平来影响心衰的严重程度[18]。此次次研究中，敲低SMOC2的软骨细胞后自噬相关分子发生了变化，P62表达下降，LC3-Ⅱ/Ⅰ的比值升高，提示细胞自噬活性增强；但Beclin1表达下降则表明自噬活性可能受到抑制，结果存在矛盾。推测敲低SMOC2促进了软骨细胞的自噬活性，而Beclin1表达下降可能是自噬增强后引发的负反馈调节机制所致。同时，考虑自噬是一个动态过程，通过透射电镜观察，在SMOC2表达敲低的软骨细胞中自噬小体数量增多，提示SMOC2表达敲低增强了软骨细胞的自噬。
体外细胞实验结果表明SMOC2可以调节软骨细胞自噬，结合发育性髋关节发育不良大鼠髋臼顶壁软骨组织中SOMC2表达下降、自噬增高的实验结果，考虑在发育性髋关节发育不良大鼠髋臼软骨组织中，SMOC2的表达下降参与了自噬的调控。在发育性髋关节发育不良早期，SMOC2表达下降促使自噬增强，帮助软骨细胞应对病理刺激，维持软骨细胞稳态。
现有研究关于自噬在发育性髋关节发育不良中直接作用的研究较少。有研究报道，LRP1调控自噬通过Wnt/β-连环蛋白(Wnt/beta-catenin，Wnt/β- catenin)信号通路影响软骨细胞的分化，从而在发育性髋关节发育不良的发病机制中发挥作用[38]。此外，研究报道自噬减弱促进了发育性髋关节发育不良相关骨关节炎的进展[39]，说明自噬在发育性髋关节发育不良相关骨关节的发生发展中也扮演重要角色。在发育性髋关节发育不良早期，自噬在关节软骨稳态中扮演重要角色，适度的自噬有助于维持软骨细胞稳态[40-41]。但是，该病早期如不经良好的治疗，在青年期大多会发展为骨关节炎[3，21]；而随着病情进展，自噬水平逐渐下降，将导致软骨退变进行性加重[11，42]。研究表明PI3K/AKT信号通路在调控细胞增殖、分化及自噬等方面有着重要作用[43-44]。
SMOC2和PI3K/AKT信号通路之间存在调控关系[13，45]。
此外，PI3K/AKT信号通路与自噬之间存在密切的相互调控关系[46-48]。基于此，推测在软骨细胞中SMOC2可能通过PI3K/AKT信号通路调控自噬相关蛋白的表达。为了验证推测，在SMOC2表达敲低的软骨细胞中加入PI3K激活剂进行挽救实验，结果显示，加入PI3K激活剂后自噬相关因子P62表达升高，LC3-Ⅱ/Ⅰ比值下降，表明SMOC2可通过PI3K/AKT信号通路调控软骨细胞自噬。
骨关节炎是发育性髋关节发育不良的晚期并发症，给家庭和社会带来了沉重的经济负担[49]，即使患者早期接受了有效的治疗，也有相当一部分患者最终会发展为骨关节炎[50]。自噬在骨关节炎的发展及病理改变中扮演重要角色[51-52]。SMOC2对软骨细胞自噬的调控或许可以成为干预发育性髋关节发育不良相关骨关节炎的一个靶点。
然而，此次研究仍存在一定的局限性。首先，动物模型与人类疾病在病理生理机制上可能存在差异，其研究结果可能无法完全反映人类疾病的真实情况；其次，在机制研究方面，仅在细胞水平验证了SMOC2通过PI3K/AKT信号通路对细胞自噬的调控作用，尚未在动物组织水平进一步证实这一调控关系，这可能会影响研究结论的普适性和可靠性；再者，尚未纳入其他自噬相关标记物，例如ATG5、ULK1等，且在自噬检测方法的多样性方面也存在不足。在后续研究中，将致力于弥补这些缺陷，进一步完善研究方法，以期获得更为全面和准确的研究结果。
综上所述，研究通过动物实验探究了发育性髋关节发育不良髋臼软骨自噬情况，同时细胞实验表明，软骨细胞中SMOC2表达下降，可以通过PI3K/AKT信号通路调控软骨细胞自噬。提示SMOC2可能参与调控发育性髋关节发育不良髋臼软骨自噬，这可能成为干预发育性髋关节发育不良相关骨关节炎的一个靶点。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

分泌型模块化钙结合蛋白调控发育性髋关节发育不良大鼠髋臼软骨细胞自噬

Secreted modular calcium binding protein regulates autophagy in the acetabular cartilage of rats with developmental dysplasia of the hip

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