运动性骨骼肌损伤中时钟基因BMAL1与MyoD的作用

doi:10.12307/2023.957

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (4): 510-515.doi: 10.12307/2023.957

• 肌肉肌腱韧带组织构建 tissue construction of the muscle, tendon and ligament • 上一篇下一篇

运动性骨骼肌损伤中时钟基因BMAL1与MyoD的作用

刘志杨1，傅泽铤2，夏雨2，丁海丽2

1成都体育学院附属体育医院，四川省成都市 610041；2成都体育学院运动医学与健康研究所，四川省成都市 610041

收稿日期:2022-11-24 接受日期:2023-01-04 出版日期:2024-02-08 发布日期:2023-07-13
作者简介:刘志杨，男，1980年生，四川省成都市人，汉族，2006年成都体育学院毕业，主治医师，主要从事运动促进健康的研究。
基金资助:
四川省科技厅自然科学基金资助(23NSFSC1208)，项目负责人：丁海丽

The role of BMAL1 and MyoD in exercise-induced skeletal muscle damage

Liu Zhiyang1, Fu Zeting2, Xia Yu2, Ding Haili2

1Affiliated Sport Hospital of Chengdu Sport University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China; 2Institute of Sports Medicine and Health, Chengdu Sport University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China

Received:2022-11-24 Accepted:2023-01-04 Online:2024-02-08 Published:2023-07-13
About author:Liu Zhiyang, Attending physician, Affiliated Sport Hospital of Chengdu Sport University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Sichuan Provincial Science and Technology Department, No. 23NSFSC1208 (to DHL)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

生物节律：在哺乳动物中，生物节律的调控机制是由中枢和外周项组成的一套分级系统来完成，即位于下丘脑视交叉上核的中枢时钟及存在于全身器官组织细胞的外周时钟。视交叉上核因其属于上级中枢时钟而发挥着核心调控作用，可以经视网膜下丘脑束将来自视网膜神经元的光信号传入中枢，之后通过神经和内分泌的途径将生物节律投射到外周器官组织细胞，在此过程中时钟基因的节律性表达是维持全身节律同步的关键因素。
时钟基因：是产生和维持机体昼夜节律的分子基础，包括Bmal1、Clock、Per、Cry、Rev-erbα和RORα等，骨骼肌中3.4%-16%基因是以节律性的方式表达，并参与调控骨骼肌生理形成与功能。时钟基因的发现和对这些基因产物工作原理的揭示、了解生命及生命的运行原理，特别是对基因、行为和环境之间的关系有着重要的理论意义。

背景：一次大负荷运动后会引起肌联蛋白titin降解导致骨骼肌损伤，成肌调节因子家族MyoD参与骨骼肌生成，在骨骼肌损伤修复中发挥重要的作用。

目的：观察一次大负荷运动不同时相下骨骼肌MyoD、时钟基因BMAL1与titin表达变化，以期明确BMAL1与MyoD在运动诱导骨骼肌损伤中的作用。
方法：24只8周龄SD大鼠随机分为安静对照组(n=4)和运动组(n=20)。运动组大鼠于跑台进行90 min下坡跑，运动后即刻(0 h)及运动后12，24，48，72 h取比目鱼肌。通过实时荧光定量PCR实验检测BMAL1、MyoD的mRNA表达量；透射电镜观察骨骼肌肌纤维超微结构变化；免疫荧光观测MyoD与BMAL1、BMAL1与titin的定位情况。

结果与结论：①透射电镜显示：一次大负荷离心运动后，大鼠比目鱼肌部分位置肌节变宽，z线模糊不清呈水波状，其中运动后12 h损伤最为严重，72 h后基本恢复；②实时荧光定量PCR检测显示：运动组BMAL1的mRNA表达呈现先升高，后趋于正常的状态；MyoD 的mRNA表达呈现先下降、后升高的趋势；③免疫荧光观测：运动组可在12，24 h观测到BMAL1和MyoD的共定位；可在0，12，24 h观测到BMAL1和titin的共定位；④结果表明，MyoD与BMAL1共同参与运动性骨骼肌损伤的修复，可能是通过titin进行的。

https://orcid.org/0000-0002-1883-1094(刘志杨)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 运动性骨骼肌损伤, 运动, 骨骼肌, 损伤, 成肌调节因子, 大脑／肌肉芳香经受体核转位因子样蛋白１, 骨架蛋白, 肌联蛋白

Abstract: BACKGROUND: A high-load exercise can trigger the degradation of titin, leading to skeletal muscle damage. MyoD participates in skeletal muscle generation and plays an important role in the repair of skeletal muscle damage.
OBJECTIVE: To observe the expression changes of MyoD, BMAL1 and titin in skeletal muscles at different times during a high-load exercise, as to clarify the role of MyoD and BMAL1 in exercise-induced skeletal muscle damage.
METHODS: Twenty-four 8-week-old Sprague-Dawley rats were randomly divided into a control group (n=4) and an exercise group (n=20). Rats in the exercise group were subjected to downhill running (90 minutes). Soleus muscle samples were collected at 0, 12, 24, 48, and 72 hours after exercise. The mRNA expressions of BMAL1 and MyoD were measured by real-time fluorescence quantitative PCR. The ultrastructure of skeletal muscle fibers was observed by transmission electron microscope. Immunofluorescence was used to observe the co-localization of MyoD and BMAL1 as well as BMAL1 and titin.
RESULTS AND CONCLUSION: After the single high-load centrifugal exercise, the sarcomere of the soleus muscle was widened and the Z-line was blurred and water wave-like, both of which were most serious at 12 hours after exercise and basically recovered at 72 hours. The results of real-time fluorescent quantitative PCR showed that BMAL1 mRNA expression in the exercise group increased first and then tended to normal, while the mRNA expression of MyoD decreased first and then increased. Immunofluorescence co-localization observation indicated that the co-localization of BMAL1 and MyoD was obviously observed at 12 and 24 hours after exercise, and the co-localization of BMAL1 and titin was observed at 0, 12, and 24 hours. All the findings indicate that MyoD and BMAL1 are jointly involved in the repair of exercise-induced skeletal muscle damage probably via titin.

Key words: exercise-induced muscle damage, exercise, skeletal muscle, injury, myogenic regulatory factor, brain and muscle aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-like protein 1, skelemin, titin

中图分类号:

刘志杨, 傅泽铤, 夏雨, 丁海丽. 运动性骨骼肌损伤中时钟基因BMAL1与MyoD的作用[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(4): 510-515.

Liu Zhiyang, Fu Zeting, Xia Yu, Ding Haili. The role of BMAL1 and MyoD in exercise-induced skeletal muscle damage[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(4): 510-515.

图/表（结果） 8

2.1 实验动物数量分析实验选用大鼠24只，实验过程无脱失，进入结果分析24只。
2.2 大鼠大负荷离心运动后骨骼肌超微结构的变化透射电镜下观察肌纤维超微结构发现，安静对照组肌原纤维分布均匀，Z线清晰，线粒体排列整齐、形态完整；运动后即刻部分位置肌原纤维断裂，肌节紊乱；运动后12 h肌原纤维排列紊乱，横纹溶解；运动后24 h紊乱的肌原纤维减少，但Z线仍然扭曲变形；运动后48 h肌超微结构基本恢复；运动后72 h肌原纤维超微结构整齐，Z线可见，见图1。

2.3 大鼠骨骼肌BMAL1和MyoD mRNA的相对表达一次性大负荷离心运动后72 h内，大鼠BMAL1 mRNA的相对表达变化见图2。结果显示，BMAL1 mRNA的相对表达在一次性大负荷离心运动后0，12 h升高，与安静对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05)；在12 h之后，运动组BMAL1 mRNA的表达较前有所降低，与安静对照组相比，差异并没有显著性意义(P > 0.05)。因此，在一次性大负荷离心运动后，BMAL1的表达趋势呈现出先升高、后趋于正常的状态。

一次性大负荷离心运动后72 h内，大鼠MyoD mRNA的相对表达变化见图3。运动组MyoD mRNA的相对表达在一次性大负荷离心运动后即刻降低，随后升高，并在12 h达到最高，之后变化趋于平缓，与安静对照组相似。并且发现运动组在0，12 h均显著性高于安静对照组，尤其是12 h差异更加显著。

2.4 大鼠骨骼肌BMAL1与MyoD的免疫荧光共定位情况免疫荧光结果显示在安静对照组中未见BMAL1与MyoD共表达情况；在运动组5个时相中，0 h未观察到有共定位标记，于12 h开始出现BMAL1与MyoD共表达，至48 h仍有少量共定位标记，72 h中BMAL1与MyoD共表达信号基本消失，无明显标记，见图4，5，表1。

2.5 大鼠骨骼肌BMAL1与titin的免疫荧光共定位情况免疫荧光结果显示在安静对照组中未见BMAL1与titin共表达情况；在运动组5个时相中，于0 h开始出现BMAL1与titin共表达，于12-24 h仍有少量共定位标记，48 h和72 h中现BMAL1与titin共表达信号基本消失，无明显标记，见图6，7，表1。

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引言

运动诱发的骨骼肌损伤(exercise-induced muscle damage，EIMD)主要由不习惯的运动表现引起，其严重程度受训练类型、强度和持续时间的影响[1]，运动诱发的骨骼肌损伤可导致结构蛋白和收缩蛋白降解[2-3]，临床上症状表现为迟发性肌肉酸痛、僵硬、肿胀和各种功能缺陷[4]。肌联蛋白(titin)是从Z盘至M线贯穿半个肌节的巨大蛋白，除了能使肌肉主动收缩外，还能使肌节在收缩后恢复至初始长度，保证肌节内张力传递[5]。有研究表明，titin结构的破坏是运动诱发的骨骼肌损伤发生的重要原因之一[3]。
时钟基因广泛存在于骨骼肌中并发挥重要作用。骨骼肌时钟基因多以昼夜节律形式呈现，在肌发生、代谢和分泌等生理功能中发挥着重要作用[6-7]；当节律紊乱时，可观察到肌纤维结构改变、线粒体代谢减少、运动能力下降和睡眠障碍等现象[8]，研究发现全身BMAL1-/-小鼠骨骼肌的粗细肌丝超微结构呈现出破坏状态，线粒体肿胀、体积减小[9]。运动可以调控骨骼肌分子时钟，有证据显示一次急性运动可影响骨骼肌自身节律表达，使时钟基因相位前移两三个小时，而不影响中枢节律变化[10]。
MyoD是属于成肌调节因子(myogenic regulatory factors，MRFs)家族的一种转录因子，控制骨骼肌细胞的生成和分化[11]，研究表明MyoD-/-突变小鼠表现出肌肉质量减少[12]。MyoD被鉴定为骨骼肌特异性时钟控制基因，有研究推测时钟基因BMAL1(brain and muscle arnt-like protein 1)可能经MyoD发挥成肌分化能力，而MyoD也可促进BMAL1转录[13]。尽管这些研究证实了骨骼肌在各个生理功能及活动中的节律性，但时钟基因分子机制在骨骼肌中的作用尚未被完全认识，尤其是在运动性骨骼肌损伤中。
因此作者提出假设，一次大负荷运动诱导骨骼肌超微结构损伤初期时会伴随BMAL1表达的升高，并且BMAL1会富集于MyoD、titin处。该实验首先通过透射电镜检验骨骼肌超微结构判断造模成功与否，第二步通过实时荧光定量PCR检测骨骼肌BMAL1、MyoD的表达，了解损伤的骨骼肌中MyoD、BMAL1 mRNA的表达；第三步通过检测与肌生成相关的MyoD与BMAL1、BMAL1与稳定粗、细肌丝的titin在骨骼肌微损伤不同恢复时刻结合的变化情况，探讨和完善运动诱导骨骼肌微损伤机制。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，单因素方差分析和LSD检验。
1.2 时间及地点实验于2022年1月在成都体育学院动物实验中心及分子实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物健康雄性8周龄SPF级SD大鼠共24只，体质量(279.17±4.06) g，购于成都达硕实验动物有限公司。于成都体育学院实验动物房每笼4只分笼饲养，定时训练，室温20-26 ℃，相对湿度40%-70%，自由饮水饮食。实验室光照与黑暗时间12 h交替，ZT0(即光照起始时间)为早8：00开灯；ZT12(即光照结束时间)为晚20：00熄灯。
实验中动物处置符合国家科学技术部2006年颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》相关规定，实验获得成都体育学院伦理委员会批准[(2021)34号]。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
1.3.2 实验试剂 RNA Trizol Reagent，批号vs18061730，合肥博美生物科技有限公司生产；异丙醇，货号B422BA0020，上海生工生物工程技术服务有限公司生产；氯仿，PrimeScriptTM RT reagent Kit，货号RR047A，宝日医生物技术有限公司生产；TB GreenTM Premix Ex TaqTM Ⅱ(Tli RNaseH Plus)，货号RR820A，宝日医生物技术有限公司生产；无水乙醇(AR级)，批号GB678-90，成都海兴化工试剂有限公司生产；BMAL1一抗，货号PA1-46118，thermoFisher生产；MyoD一抗，货号ab16148，英国abcam艾博抗(上海)贸易有限公司生产；β-actin一抗，货号AC026，abclonal生产；FITC标记山羊抗兔IgG，GB22303，Servicebio；CY3标记山羊抗小鼠IgG，202110，Servicebio。
1.4 实验方法
1.4.1 实验动物分组将24只实验大鼠随机分为2组，安静对照组(n=4)，大鼠正常饲养，不做任何干预；运动组(n=20)，大鼠进行离心运动，分别于运动后0，12，24，48，72 h不同时相取材。
1.4.2 运动方案大负荷离心运动方案：参考 ARMSTONG等[14]离心运动方案建立大鼠骨骼肌的损伤模型。运动组使用小动物电动跑台对大鼠进行训练，在正式实验前进行适应性跑台训练3 d，第1日坡度 0°，速度16 m/min，运动时间5 min；第2日坡度 0°，速度16 m/min，运动时间10 min；第3日休息，第4日进行一次持续性下坡跑，坡度-16°，速度 16 m/min，运动时间 90 min。
1.4.3 实验标本取样实验大鼠分别在安静、运动后即刻(0 h)及运动后12，24，48，72 h时分批处死并取材。所有大鼠取材前称量空腹体质量，戊巴比妥钠(150 mg/kg)腹腔注射麻醉后开腹分离并剪取比目鱼肌，放入冰台上的锡纸，小心去除肌腱和结缔组织。取材过程中避免肌肉牵拉。把处理后的比目鱼肌肌腹分为3段，其中一段大小为1 mm×1 mm×3 mm，然后放入4 ℃预冷的3%戊二醛固定液，用于透射电镜观察；剩余部分平均分成2段，一段放入40 g/L多聚甲醛溶液中，保存于4 ℃，用于免疫荧光共定位观测；另一段用锡纸包裹后放入液氮迅速降温，然后保存于-80 ℃，用于实时荧光定量PCR检测。
1.4.4 透射电子显微镜观察骨骼肌纤维超微结构变化将骨骼肌切段后样品先用3%戊二醛预固定，后用1%四氧化锇再固定，经丙酮逐级脱水，按比例设置脱水剂的浓度(在100%浓度中更换3次)，处理后的骨骼肌样品使用脱水剂脱水，经过环氧树脂包埋，制备约50 nm切片后，漂浮于刀槽液面上，再捞至铜网，分别通过醋酸铀和枸橼酸铅双染色10-15 min和1.0-2.0 min，透射电镜观察采图。
1.4.5 实时荧光定量PCR检测核心BMAL1及MyoD mRNA表达将100 mg组织在液氮中磨碎加入1 mL已预冷的TRIzol，依次采用氯仿、异丙醇、体积分数75%乙醇经反复离心分离提纯样本总RNA，经超微量紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测浓度和纯度后，将RNA反转录合成cDNA。
采用PIKORed 96(美国ThermoFisher生产)实时荧光定量PCR检测BMAL1的mRNA表达水平，所有引物均交由上海生工生物工程技术服务有限公司设计合成，并以ULTRAPAGE纯化。BMAL1的上游引物序列为5´-TGC CAC CAA TCC ATA CAC-3´，下游引物序列为5´-TTC CCT CGG TCA CAT CCT AC-3´，产物长度123 bp；MyoD的上游引物序列为5´-TTT TTC ATG CGA CTC ACA-3´，下游引物序列为5´-CTG TGG GAA AGA GTG GGT GTC A-3´，产物长度134 bp；β-actin的上游引物序列为5´-GAA GAT CAA GAT CAT TGC TCC-3´，下游引物序列为5´-TAC TCC TGC TTG CTG ATC CA-3´，产物长度121 bp。使用Thermo Scientific PikoReal软件分析PCR过程各检测样本的CT(Threshold cycle)值。通过2-ΔΔCt计算mRNA相对表达水平。
1.4.6 免疫荧光染色标记骨骼肌细胞BMAL1与MyoD、BMAL1与titin共定位情况(双染) ①固定好的大鼠比目鱼肌组织通过全自动脱水机进行脱水、包埋、切片；②石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15 min，二甲苯Ⅱ 15 min，二甲苯Ⅲ 15 min，无水乙醇Ⅰ 5 min；无水乙醇Ⅱ5 min，体积分数85%的乙醇5 min，75%乙醇5 min，蒸馏水洗；③抗原修复：将切片浸入柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)，微波炉高火加热10 min，停火8 min，中高火再加热10 min；冷却后，PBS洗3次，每次5 min；④血清封闭：滴加山羊血清封闭液，室温静置20 min；⑤滴加一抗(BMAL1一抗，MyoD一抗，1∶100)，4 ℃条件静置过夜；⑥PBS洗3次，每次5 min；⑦滴加二抗，37 ℃ 30 min；⑧PBS洗3次，每次5 min；⑨滴加DAPI，室温孵育10 min；PBS洗3次，每次5 min；⑩使用抗荧光衰减封片剂封固。
1.5 主要观察指标大鼠肌肉损伤程度及BMAL1、MyoD与Titin的表达。
1.6 统计学分析所得数据以x±s表示。使用graphpad prism 8.0统计软件和Image-Pro Plus 6.0进行数据处理。对所得数据进行正态性检验，对符合正态分布的用单因素方差分析，方差齐性时用LSD检验，方差不齐时用Welch’s校正检验，以P < 0.05表示差异有显著性意义，P < 0.01表示差异有非常显著性意义。文章的统计学方法已经成都体育学院生物统计学专家审核。

讨论

不习惯的离心运动会导致骨骼肌损伤和延迟性肌肉酸痛[15]。下坡跑步作为一种全身性运动，因可使肌肉产生离心运动而广泛用于研究肌肉损伤的生理变化。已有研究证明，一次大负荷离心运动能够引起骨骼肌损伤[16]。此次实验与以往的研究结果一致[17]，实验中大鼠比目鱼肌在一次大负荷离心运动后部分肌纤维断裂，肌节紊乱，运动后12 h损伤情况最严重，至72 h肌原纤维超微结构恢复，Z线可见并排列整齐，线粒体分布规律，无肿胀现象。电镜结果显示一次大负荷运动诱导骨骼肌损伤造模成功，骨骼肌超微结构出现一过性损伤，随着时间推移逐渐恢复。
MyoD是时钟基因生理功能的正调节剂，与骨骼肌核心时钟基因一起发挥作用[18]。此次实验中，MyoD mRNA表达在0 h显著低于对照组，12 h则显著高于对照组。对于MyoD在0 h显著降低，推测其可能是骨骼肌损伤后被迅速消耗[19]，通过直接作用于BMAL1上游来促进其表达[10]；之后12 h表达升高显著，一方面可能是因BMAL1作用于其启动子中的远端核心增强子，而促使表达增多；另一原因可能是因MyoD在骨骼肌中受到泛素蛋白酶体系统的调控，其末端残基和内部赖氨酸都可以被泛素化而进行蛋白酶体降解，尤其是可以被MAFbx泛素化降解[20]，而有研究发现在离心运动后，可使泛素蛋白酶体系统中MAFbx和MuRF-1表达降低[21]，则减少了MyoD的分解，与此同时，卫星细胞活动增加，MyoD也表达增多[22]，故而其在12 h显著高于对照组。
骨骼肌时钟基因在维持骨骼肌和全身健康中起着关键作用[23]。时钟基因BMAL1是哺乳动物昼夜节律起搏器的重要组成部分，BMAL1的缺失会导致严重的骨骼肌病变，包括线粒体呼吸受损、功能衰弱以及肌肉萎缩、肌卫星细胞再生缺陷[24-26]。而运动可通过改变骨骼肌节律来恢复肌肉正常的代谢功能[27-28]。BRAGER等[29]的研究发现，过表达骨骼肌中的BMAL1能够使小鼠运动时消耗更少的能量并在运动后恢复得更快。此次研究采用实时荧光定量PCR来检测运动后不同恢复时间点上的表达情况，结果发现：运动组的BMAL1 mRNA表达在0，12 h显著升高，这与先前的研究结果相同[26，30]。对于BMAL1在0 h显著增高，推测其一部分原因是受到MyoD即时的刺激，使0 h表达增多。CHATTERJEE等[25]的研究也证明，骨骼肌损伤后，BMAL1的表达发生了上调，并且促进卫星细胞的生长，而在BMAL1-/-小鼠模型观察到卫星细胞的再生缺陷，这说明BMAL1是肌肉修复所需的促生肌反应的组成部分。而在12 h之后BMAL1并无显著性变化，即没有受到MyoD的刺激增多而升高，因此可能是另有其他因素在促使这一结果。所以关于BMAL1与MyoD相互作用影响的具体机制还仍有待进一步研究。
为了进一步验证BMAL1与MyoD之间的联系，此次实验选用荧光共定位观察二者是否有蛋白层面的相互关系。结果显示运动干预后运动组中，12 h出现明显的共定位标记，在24 h仍有少量共定位标记，但与12 h相比较弱，其余时相中未看到明显标记。由此也佐证了实时荧光定量PCR中获得的结果，0 h时BMAL1显著性升高，而MyoD则显著性下降；于12 h中BMAL1与MyoD均有显著性升高；于24 h时MyoD仍有升高，而BMAL1则无明显差异；之后二者均无明显变化，此变化趋势基本上与骨骼肌超微结构损伤恢复的趋势一致，说明运动性骨骼肌损伤的恢复伴随着MyoD与BMAL1的生成。由于MyoD与BMAL1存在共定位，为更加明确运动性骨骼肌损伤修复的过程，接着观察BMAL1与titin之间的关系。Titin 是骨骼肌肌节中重要的骨架蛋白，约占肌纤维质量的10%，在维持骨骼肌细胞正常的结构和功能中起重要作用[31]。此外，先前的研究表明，心肌和骨骼肌中BMAL1均可与titin启动子上的E-box结合从而调节titin的表达[13，32]。此次实验中，BMAL1与titin的共定位结果表明，运动组在0，12，24 h出现明显的共定位标记，其中，0 h的共定位情况最明显，这也符合BMAL1在0 h显著上升的情况，之后随着BMAL1表达下降，共定位的情况也逐渐减弱直至消失。运动性骨骼肌损伤后，骨骼肌通过增加新的肌小节来适应不习惯的离心运动[33]，推测在这个过程中titin数量的增加与BMAL1相关，但这需要进一步的实验证明。此次实验证实运动性骨骼肌损伤后，骨骼肌核心时钟基因BMAL1与MyoD共同作用促进骨骼肌的恢复再生。从骨架蛋白损伤恢复的角度探讨了MyoD作用骨骼肌恢复可能的机制，这将有助于明确MyoD在运动性骨骼肌损伤过程中的作用，为维持骨骼肌的健康提供一个新思路。此次实验虽证明BMAL1与MyoD两者间存在共定位，但无法精确证明BMAL1与MyoD的作用关系，仍有待后续实验采用抑制剂或基因敲除鼠进一步证明BMAL1与MyoD的作用机制；同时，未能检测骨骼肌相应的信号通路蛋白变化来提供更具说服力的结果。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

运动性骨骼肌损伤中时钟基因BMAL1与MyoD的作用

The role of BMAL1 and MyoD in exercise-induced skeletal muscle damage

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