细胞焦亡相关蛋白在钽融合器松动周围组织中的表达及意义

doi:10.12307/2023.414

中国组织工程研究 ›› 2023, Vol. 27 ›› Issue (25): 4057-4062.doi: 10.12307/2023.414

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细胞焦亡相关蛋白在钽融合器松动周围组织中的表达及意义

龙智生1，扶流祥2，龚飞鹏1，温家宾1，邓颖1，闵欢1，邓专1，陈钢1

1江西省人民医院，南昌医学院第一附属医院骨科，江西省南昌市 330006；2南昌大学第二附属医院急诊科，江西省南昌市 330006

收稿日期:2022-04-04 接受日期:2022-06-08 出版日期:2023-09-08 发布日期:2023-01-18
通讯作者: 扶流祥，主治医师，硕士，南昌大学第二附属医院急诊科，江西省南昌市 330006
作者简介:龙智生，男，1983年生，湖南省娄底市人，汉族，硕士，副主任医师，主要从事骨组织工程再生研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(32060222)，项目负责人：龙智生

Expression and significance of pyroptosis associated protein in peripheral tissues with tantalum cage loosening

Long Zhisheng1, Fu Liuxiang2, Gong Feipeng1, Wen Jiabin1, Deng Ying1, Min Huan1, Deng Zhuan1, Chen Gang1

1Department of Orthopedics, First Affiliated Hospital of Nanchang Medical College, Jiangxi Provincial People’s Hospital, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China; 2Emergency Department, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China

Received:2022-04-04 Accepted:2022-06-08 Online:2023-09-08 Published:2023-01-18
Contact: Fu Liuxiang, Attending physician, Master, Emergency Department, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China
About author:Long Zhisheng, Master, Associate chief physician, Department of Orthopedics, First Affiliated Hospital of Nanchang Medical College, Jiangxi Provincial People’s Hospital, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 32060222 (to LZS)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

钽：钽的原子序数是73，熔点高(达2 986 ℃)，密度大(达16.65 g/cm3)，韧性好，具有极强的耐腐蚀性，与体液无反应，生物相容性良好，是一种优良的骨科材料。
细胞焦亡：又称细胞炎性坏死，是一种程序性细胞死亡，表现为细胞不断胀大直至细胞膜破裂，导致细胞内容物的释放进而激活强烈的炎症反应。文章重点关注钽(Ta)融合器松动患者细胞焦亡相关蛋白的表达。

背景：钽融合器植入椎间隙后如何影响其周围细胞最终导致骨溶解，发生无菌性松动，其机制有待阐明。
目的：探索细胞焦亡在钽所致椎间骨溶解中的作用。
方法：选择2015年1月至2021年12月江西省人民医院骨科收治的患者，观察组(n=19)为腰椎融合钽融合器松动并行翻修病例，对照组(n=11)为自体骨植骨腰椎融合、其他材料融合器融合后内固定取出及钽融合器植入邻近节段退变需要延长固定融合节段病例，术中收集两组患者融合器周围及融合节段周围界膜组织，进行扫描电镜、免疫荧光染色及qRT-PCR检测。

结果与结论：①扫描电镜下可见，观察组钽融合器周围及融合节段界膜组织内可见大量纤维组织增生，同时可见部分钽脱落不规则颗粒物存在，对照组纤维组织增生不明显，未见有不规则颗粒物存在；②苏木精-伊红染色显示，观察组钽融合器周围及融合节段界膜组织中可见大量纤维组织增生，成骨细胞不明显；对照组界膜组织中纤维组织增生不明显，可见成骨细胞分布在骨组织周围；③免疫荧光染色显示，观察组界膜组织细胞焦亡相关蛋白GSDMD、NLRP3、Caspase1表达高于对照组(P < 0.05)；④qRT-PCR检测显示，观察组界膜组织GSDMD、NLRP3、Caspase1的 mRNA表达高于对照组(P < 0.05)；⑤结果表明，细胞焦亡相关蛋白(GSDMD、NLRP3、Caspase1)在钽融合器松动病例中表达明显升高，说明细胞焦亡参与了钽所致椎间骨溶解的病理生理过程。

https://orcid.org/0000-0003-4899-6049(龙智生)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

关键词: 钽, 融合器, 细胞焦亡, 骨溶解, 骨组织工程, 脊柱融合, 界膜组织

Abstract: BACKGROUND: The mechanism of how the fusion cage affects its surrounding cells and eventually leads to osteolysis with aseptic loosening after implantation of the tantalum (Ta) fusion device into the intervertebral space remains to be elucidated.
OBJECTIVE: To explore the effect of pyroptosis in tantalum (Ta) induced intervertebral osteolysis.
METHODS: Patients admitted to the Department of Orthopedics, Jiangxi Provincial People’s Hospital from January 2015 to December 2021 were selected in this study. The observation group (n=19) contained the cases of lumbar fusion tantalum cage loosening and revision. The control group (n=11) consisted of autologous bone graft lumbar fusion, internal fixation removal after fusion of other material cages, and degeneration of adjacent segments implanted with tantalum cages requiring extended fixation of the fusion segment. During the operation, the limiting membrane tissue around the cage and around the fusion segment of the two groups was collected for scanning electron microscopy, immunofluorescence staining and qRT-PCR detection.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Electron microscopy showed that a large amount of fibrous tissue proliferation was observed around the tantalum (Ta) fusion vessel and within the boundary membrane tissue of the fused segment in the observation group. Meanwhile, irregular particles on tantalum shedding could be observed partially, but fibrous tissue proliferation was not obvious in the control group, and no irregular particles were found. (2) Hematoxylin and eosin staining showed that a large amount of fibrous tissue proliferation with indistinct osteoblasts was observed in the boundary membrane tissue around the fusions and in the fused segments, and osteoblasts were not obvious in the observation group. Fibrous tissue proliferation was not obvious in the limiting membrane tissue of the control group, and osteoblasts were seen distributed around the bone tissue. (3) Immunofluorescence examination showed that the expression of pyroptosis-related proteins GSDMD, NLRP3 and Caspase 1 in the limiting membrane tissue in the observation group was higher than that in the control group (P < 0.05). (4) qRT-PCR assay showed that mRNA expression levels of GSDMD, Caspase 1 and NLRP3 in the observation group were higher than those in the control group (P < 0.05). (5) These results showed that the expression of pyroptosis related proteins (GSDMD, NLRP3, and Caspase 1) was remarkably increased in tantalum (Ta) fusion loosening cases, indicating that pyroptosis was involved in the pathophysiology of tantalum (Ta) induced intervertebral osteolysis.

Key words: tantalum (Ta), fusion cage, pyroptosis, osteolysis, bone tissue engineering, spinal fusion, limiting membrane tissue

中图分类号:

龙智生, 扶流祥, 龚飞鹏, 温家宾, 邓颖, 闵欢, 邓专, 陈钢. 细胞焦亡相关蛋白在钽融合器松动周围组织中的表达及意义[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(25): 4057-4062.

Long Zhisheng, Fu Liuxiang, Gong Feipeng, Wen Jiabin, Deng Ying, Min Huan, Deng Zhuan, Chen Gang. Expression and significance of pyroptosis associated protein in peripheral tissues with tantalum cage loosening[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2023, 27(25): 4057-4062.

图/表（结果） 5

参考文献

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引言

材料方法

1.1 设计对比观察试验，组间比较采用独立样本t检验。
1.2 时间及地点选择2015年1月至2021年12月江西省人民医院骨科收治的患者。
1.3 对象选择2015年1月至2021年12月江西省人民医院骨科收治的患者，观察组(n=19)为腰椎融合钽融合器松动并行翻修病例，对照组(n=11)为自体骨植骨腰椎融合、其他材料融合器融合后内固定取出及钽融合器植入邻近节段退变需要延长固定融合节段病例。所有患者对治疗及手术方案均知情同意，并签署知情同意书。研究已通过江西省人民医院伦理委员会审查。
1.3.1 观察组入选标准
纳入标准：前期接受了钽融合器植入手术的单节段腰椎融合病例；患者有下腰部疼痛或者神经功能障碍等症状；X射线片或者CT显示，出现了钽融合器周围的骨溶解、钽融合器松动影像学表现；实验室检查包括血常规、降钙素原或者术中NGS(Seq RNA)排除感染所致的钽融合器松动病例；接受翻修手术病例。
排除标准：术前或者术中检查标本证实有感染征象的患者；患者合并严重的心脑血管、风湿免疫等内科疾病；先天性腰椎骨质结构不正常者；有腰部组织肿瘤及其他手术等病史者。
1.3.2 对照组入选标准
纳入标准：前期接受了自体骨植骨腰椎融合、行钽融合器植入或者其他材料融合器植入的融合，钽融合器融合后邻近节段退变需要延长固定融合节段病例；X射线片或者CT等影像学检查显示，腰椎融合情况良好；患者要求行脊柱内固定取出。
排除标准：术前或者术中检查标本证实有感染征象的患者；患者合并严重的心脑血管、风湿免疫等内科疾病；先天性腰椎骨质结构不正常者；有腰部组织肿瘤及其他手术等病史者。

1.4 材料钽融合器的材料学特征，见表1。

主要试剂与仪器：酶标仪(RT-6100，Rayto)；研磨仪(KZ-II，Servicebio)；台式高速冷冻离心机(D3024R，DRAGONLAB)；掌上离心机(D1008E，Servicebio)；涡旋混合器(MX-F，Servicebio)；磁力搅拌器(MS-PB)；超声波细胞破碎仪(JY92-11N，宁波新芝生物)；灰度分析软件(alphaEaseFC，alphaEaseFC)；化学发光仪(6300，CLINX)；RIPA裂解液(G2002，Servicebio)；BCA
蛋白定量检测试剂盒(G2026，Servicebio)；SDS-PAGE凝胶制备试剂盒(G2003，Servicebio)；蛋白Marker(26617，Servicebio)；β-actin(GB12001，Servicebio)；NLRP3(20770-1-AP，Servicebio)；GSDMD (GB11383，Servicebio)；Caspase1 (Gb21303，Servicebio)；DAPI (G1012，Servicebio)；抗荧光淬灭封固剂(G1401，Servicebio)；正置荧光显微镜(Nikon Eclipse C1，日本尼康)；成像系统(Nikon DS-U3，日本尼康)。
1.5 方法观察组翻修术中收集钽融合器周围界膜组织；对照组术中收集融合节段周围界膜组织。
扫描电镜观察：分别使用电子显微镜对两组病例的界膜组织标本进行观察分析，观察界膜标本的组成成分及纤维增生情况等。
苏木精-伊红染色：苏木精-伊红染色观察两组界膜标本组织的形态结构。①将收集到的两组界膜组织标本进行甲醛固定，石蜡包埋；②脱蜡和水化，依次将切片放入二甲苯Ⅰ10 min-二甲苯Ⅱ10 min-无水乙醇Ⅰ5 min-无水乙醇Ⅱ5 min-体积分数95%乙醇5 min-体积分数90%乙醇5 min-体积分数80%乙醇5 min-体积分数70%乙醇5 min-蒸馏水洗涤；③将脱蜡至水的切片放入苏木精水溶液中，染色3 min；④酸水及氨水中分色，各5 s，流水洗涤；⑤体积分数70%和90%乙醇中脱水各10 min；⑥乙醇伊红染色液染色 2.0-3.0 min，流水洗涤；⑦脱水封固，将切片依次放入体积分数95%乙醇Ⅰ5 min-95%乙醇Ⅱ5 min-无水乙醇Ⅰ5 min-无水乙醇Ⅱ5 min-二甲苯Ⅰ5 min-二甲苯Ⅱ5 min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封固；⑧在400倍光学显微镜下观察。
免疫荧光染色：免疫荧光染色分析细胞焦亡相关蛋白GSDMD、NLRP3、Caspase1表达情况，并进行免疫荧光吸光度统计分析。①石蜡切片脱蜡至水；②抗原修复：组织切片置于EDTA抗原修复缓冲液(pH=9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火至沸后断电间隔10 min中低火至沸，自然冷却后将玻片置于PBS(pH=7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min；③牛血清白蛋白封闭：切片甩干后用组化笔在组织周围画圈，在圈内滴加用3%牛血清白蛋白，室温封闭30 min；④加一抗：甩掉封闭液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗NLRP3(1∶200)、GSDMD (1∶1 000)、Caspase1 (1∶800)，切片平放于湿盒内4 ℃孵育；⑤加二抗：玻片置于PBS(pH=7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min。切片稍甩干后在圈内滴加二抗Cy3标记山羊抗兔IgG(1∶400)覆盖组织，避光室温孵育50 min；⑥DAPI复染细胞核：玻片置于PBS(pH=7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10 min；⑦封固：玻片置于PBS(pH=7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5 min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封固剂封固；⑧于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。紫外激发波长330-380 nm，发射波长420 nm；FITC绿光激发波长465-495 nm，发射波长515-555 nm；CY3红光激发波长510-560 nm，发射波长590 nm。免疫细胞化学结果判读：DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光或者绿光。免疫荧光图片采用Image-Pro Plus软件统计荧光强度值吸光度，评估蛋白表达强度。
qRT-PCR检测：qRT-PCR检测界膜组织NLRP3、Caspase1、GSDMD mRNA的表达量。按照 Trizol 试剂说明书裂解组织，提取总 RNA 并检测其浓度和纯度。按照反转录试剂盒对 RNA进行反转录，合成扩增前 cDNA。以 2 μL cDNA 为模板，采用 SYBR Green 依次按照 95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃1 min，40 个循环，95 ℃15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s 反应

条件进行扩增。按照2-ΔΔCt法进行定量分析，实验所需引物详见表2。

1.6 主要观察指标两组界膜组织形态学及细胞焦亡蛋白表达。
1.7 统计学分析采用SPSS 22.0 统计软件进行统计学分析。所有计量数据以x±s方式表示，组间比较采用独立样本t 检验；比率采用χ2 检验。当P < 0.05 时认为差异有显著性意义。该文统计学方法已经江西省人民医院生物统计学专家审核。

讨论

3.1 以磨损颗粒为核心的骨溶解及松动机制研究钽作为良好的骨组织工程材料目前在骨缺损及骨重建中运用广泛，然而钽融合在脊柱融合中疗效仍然存在一定争议。LÖFGREN等[9]报道，在单节段颈椎前路融合中使用钽金属的融合率(69%)明显低于自体骨移植组(92%)。另一项前瞻性随机多中心2年随访研究显示，独立多孔钽植入组与自体髂骨组的融合率分别为44%与100%[10]。钽在脊柱融合中的松动机制有待阐明。文献表明，无菌性关节假体松动与过量的磨损颗粒造成种植体周围骨溶解密切相关[11]，在对无菌性关节假体松动翻修中发现了钽颗粒物的脱落现象。ZHU等[12]通过将钽块置于PBS中，发现了类似的金属颗粒物脱落的过程(PBS中28 d，< 2 mg/L钽释放)；BONUTTI等[13]报道了多孔钽人工膝假体周围钽颗粒的释放现象。对于磨损颗粒如何影响骨代谢，有学者认为过量的磨损颗粒物刺激周围细胞释放，如肿瘤坏死因子、白细胞介素1、白细胞介素6、转化生长因子β、血小板衍生生长因子等炎性因子，进而影响骨代谢，破坏成
骨/破骨细胞动态平衡，最终造成周围骨溶解[14]。对磨损颗粒的进一步研究发现，磨损颗粒的理化特征与骨溶解的程度关系密切，HALLAB[15]发现种植体的炎症反应程度与磨损颗粒的直径大小、类型有关。KIENLE等[1]也发现，直径小于10-15 μm的颗粒能较大程度激活巨噬细胞促炎，并影响骨代谢及骨溶解发生。是否钽融合器在植入及负载过程中有钽颗粒脱落及其椎间骨溶解机制类似于关节假体无菌性松动，目前暂无相关文献报道，查阅文献发现其他材质的脊柱内植物中发现了金属颗粒物残留。WANG等[16]报道了9例腰椎翻修病例，在移植物周边发现了大量的钽颗粒物和纤维组织。同样，此次研究也发现钽融合器松动组融合器及融合节段周围界膜组织内有大量纤维组织增生及钽脱落不规则颗粒物存在，苏木精-伊红及扫描电镜证实作者的推测，钽融合器松动机制的病理生理过程可能为：钽融合器植入过程及负载状态下有钽颗粒脱落，钽融合器松动与磨损的钽颗粒所致的骨溶解密切相关，钽脱落的不规则颗粒物激活了假体周围的炎症反应，最终导致骨溶解的发生。
3.2 以细胞焦亡为基础的骨溶解病理生理过程细胞焦亡又称细胞炎性坏死，是一种程序性细胞死亡，表现为细胞不断胀大直至细胞膜破裂，导致细胞内容物的释放进而激活强烈的炎症反应。细胞焦亡是由GSDMD介导的细胞程序性坏死，其特征为依赖于炎性半胱天冬酶(主要是Caspase1，4，5，11)，并伴有大量促炎症因子的释放。细胞焦亡的生化特征主要标志有炎症小体的形成，Caspase和GSDMD的激活以及大量促炎症因子的释放，其中炎症小体非常作用[17-18]。NLRP3炎性小体作为固有免疫的重要组分，在机体免疫反应和疾病发生过程中具有重要作用，可以被多种微生物、内源性危险信号和环境刺激物激活，NLRP3/Caspase1/GSDMD通路为细胞焦亡经典通路[19-21]。FAN等[22]研究发现，人骨关节炎成纤维样滑膜细胞中NLRP1水平明显高于正常成纤维样滑膜细胞。ZHANG等[23]发现滑膜巨噬细胞焦亡参与了膝关节骨关节炎的病理发展，抑制滑膜巨噬细胞焦亡可减少白细胞介素1β和白细胞介素18 等因子表达，进而缓解膝骨关节炎中的滑膜炎症和纤维化。也有文献证实了细胞焦亡参与骨代谢疾病的过程，当机体受到如细菌感染、雌激素缺乏或衰老信号刺激，炎症通路将被激活，炎症因子白细胞介素1β和白细胞介素18分泌增多，NLRP3炎症小体增加并促使成骨细胞发生焦亡，成骨细胞与破骨细胞失衡，最终导致骨质疏松[24]。
在关节置换假体周围骨溶解研究中，PIERRE等[25]认为钛颗粒诱导巨噬细胞释放白细胞介素1β与NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白和Caspase1诱导相应的骨溶解发生，BURTON等[26]发现聚甲基丙烯酸甲酯颗粒介导的炎症性骨溶解也与NLRP3 的活化有关。此次研究提取了无菌性钽融合器松动病例融合器及融合节段周围界膜组织进行细胞焦亡相关蛋白检测(NLRP3、Caspase1、GSDMD)，发现钽融合器松动组细胞焦亡明显增高，证实了钽融合器松动促进了细胞焦亡相关蛋白(GSDMD、NLRP3、Caspase1)的表达，其对椎间骨溶解产生了重要影响，为钽融合器周围骨溶解、融合器松动发生的病因探索提供了帮助。
3.3 骨免疫微环境下巨噬细胞活化调控成骨细胞焦亡导致骨溶解的可能机制种植体与骨整合依赖于骨微环境中各种细胞之间相互作用，骨整合过程本质上是破骨细胞、成骨细胞、间充质干细胞与巨噬细胞等各种免疫活性细胞的互作结果，骨溶解的发生最终是成骨细胞/破骨细胞失衡[27]。骨生物学的研究进展揭示免疫微环境对成骨过程具有重要调控作用，免疫系统和骨骼系统共有的细胞因子与调控因子参与了骨相关的生理病理过程[28]。在关节假体松动的研究中发现，巨噬细胞是炎症反应的核心细胞，巨噬细胞能够识别假体周围环境中的磨损颗粒和受损组织，其是炎性反应的导体[29]。钽融合器溶解松动过程中是否存在成骨细胞焦亡以及成骨细胞焦亡依赖巨噬细胞活化及细胞因子，是设想的下一步研究方向。
总之，此次研究发现细胞焦亡在钽所致的椎间骨溶解中发挥了重要作用，但其具体病理生理过程、信号传导机制以及相应的细胞交互有待进一步探索，后期拟通过细胞及体内外实验对其具体的发生过程进行阐述，为钽融合器组织工程设计及手术技术改良提供实验数据支撑。
研究因对照组标本获取上存在一定困难，不能做到完全严格对照，对照组设置上包括了部分空白对照，接近于阳性对照的阴性对照病例，数量也有一定缺陷。因此，后期研究将扩大对照组病例的纳入类型，设立多组对照，增加样本量，降低对照组的部分干扰因素。同时后期拟通过动物模型及体外实验，探索并验证提出的假设，详尽阐述钽融合器周围骨溶解、融合器松动发生机制。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

细胞焦亡相关蛋白在钽融合器松动周围组织中的表达及意义

Expression and significance of pyroptosis associated protein in peripheral tissues with tantalum cage loosening

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[1]	王彦金, 周英杰, 柴旭斌, 禚汉杰. 3D打印多孔钛合金椎间融合器在颈椎前路椎间盘切除植骨融合中应用效果与安全性的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(9): 1434-1440.
[2]	贺垠皓, 李晓声, 陈宏文, 陈铁柱. 3D打印多孔钽金属治疗发育性髋关节发育不良：现状及应用前景[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(9): 1455-1461.
[3]	唐昊天, 廖荣东, 田京. 压电材料修复骨缺损的应用及设计思路[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(7): 1117-1125.
[4]	秦宇星, 任前贵, 李子龙, 全嘉星, 沈佩锋, 孙韬, 王浩宇. 骨微血管内皮细胞在股骨头坏死中的作用机制及前景[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(6): 955-961.
[5]	张敏, 张晓明, 刘童斌. 柚皮苷在骨组织再生领域的应用潜力[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(5): 787-792.
[6]	张辉, 王佳洋, 王茜, 甘洪全, 王志强. 动态培养环境下透明质酸与国产多孔钽复合对软骨细胞功能的影响[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(3): 339-345.
[7]	冉宇, 白春晓, 刘楚吟, 赵学千, 龙水文, 覃昌龙, 李忠泽, 张超, 贾育松, 陈江. 单节段Mobi-C人工间盘置换与ROI-C颈椎前路融合后颈椎矢状位参数的变化[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(27): 4297-4303.
[8]	彭建城, 姚晓玲, 凌海乾, 赖盈, 李捷. 颈前路减压融合后椎间植入物下沉的风险与预防[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(27): 4408-4413.
[9]	高月, 傅紫薇, 吴艳波, 潘诗农, 鲁钊. 股骨头骨骺滑脱的临床及影像学特征[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(27): 4421-4428.
[10]	侯振扬, 孙义玲, 苏长征, 李振, 许正文, 李文明, 柏家祥. 茶黄素-3，3’-双没食子酸酯缓解人工假体磨损颗粒引起的成骨抑制[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(25): 4069-4074.
[11]	于爱敏, 徐婷, 朱韵莹, 梁坚强, 武东辉. 载抗菌肽壳聚糖/骨粉/纳米微晶纤维素颌骨修复支架的理化性能[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(25): 3999-4005.
[12]	王章正, 莫亮, 周驰, 刘予豪, 严泓松, 何伟. 股骨头坏死保髋手术对后续全髋关节置换的影响[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(22): 3594-3601.
[13]	马茂潇, 崔国峰, 张雪, 张虹, 刘又文, 岳辰. 代谢综合征患者脊柱融合术后的并发症：系统回顾和Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(22): 3602-3608.
[14]	齐军强, 郭超, 牛东阳, 王浩田, 肖冰, 许国华. 金属离子掺杂羟基磷灰石骨修复材料的特性及应用[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(21): 3415-3422.
[15]	侯建明, 李琦. 生物活性支架材料修复骨质疏松性骨缺损[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(21): 3423-3429.