温针灸调控膝骨关节炎模型兔关节软骨中PI3K/Akt信号通路的变化

doi:10.12307/2022.911

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (35): 5596-5601.doi: 10.12307/2022.911

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温针灸调控膝骨关节炎模型兔关节软骨中PI3K/Akt信号通路的变化

武永利1，2，刘娣1，王铎3，刘君伟1，马遇原3

1宁夏医科大学总医院中医骨伤科，宁夏回族自治区银川市 750004；2宁夏医科大学回医药现代化教育部重点实验室，宁夏回族自治区银川市 750004；3宁夏医科大学中医学院，宁夏回族自治区银川市 750004

收稿日期:2021-11-15 接受日期:2022-01-28 出版日期:2022-12-18 发布日期:2022-05-16
通讯作者: 武永利，教授，主任医师，博士生导师，宁夏医科大学总医院中医骨伤科，宁夏回族自治区银川市 750004；宁夏医科大学回医药现代化教育部重点实验室，宁夏回族自治区银川市 750004
作者简介:武永利，男，1968年生，宁夏回族自治区银川市人，教授，主任医师，博士生导师，主要从事退行性脊柱关节病的基础及临床研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81760891，82160939)，项目负责人：武永利

Effect of warm acupuncture on PI3K/Akt signaling pathway in articular cartilage of a rabbit knee osteoarthritis model

Wu Yongli1, 2, Liu Di1, Wang Duo3, Liu Junwei1, Ma Yuyuan3

1Department of Orthopedics and Traumatology of Traditional Chinese Medicine, the General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China; 2Key Laboratory of Hui Ethnic Medicine Modernization, Ministry of Education, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China; 3School of Traditional Chinese Medicine, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China

Received:2021-11-15 Accepted:2022-01-28 Online:2022-12-18 Published:2022-05-16
Contact: Wu Yongli, Department of Orthopedics and Traumatology of Traditional Chinese Medicine, the General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China; Key Laboratory of Hui Ethnic Medicine Modernization, Ministry of Education, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China
About author:Wu Yongli, Professor, Chief physician, Doctoral supervisor, Department of Orthopedics and Traumatology of Traditional Chinese Medicine, the General Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China; Key Laboratory of Hui Ethnic Medicine Modernization, Ministry of Education, Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, Ningxia Hui Autonomous Region, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, Nos. 81760891 and 82160939 (to WYL)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
软骨细胞凋亡：作为细胞程序性死亡中的一种，在骨关节炎的发病中具有重要影响，该过程对软骨的破坏和重建起到重要作用，是造成软骨退行性病理改变的主要因素。
温针灸：温针灸疗法作为中医特色疗法中的一种，具有舒筋止痛、温经通络的作用，对于治疗早、中期膝骨关节炎患者疗效确切，在中医骨伤治疗膝骨关节炎中应用广泛。

背景：温针灸临床治疗膝骨关节炎疗效显著，但基础治疗机制尚未明确。
目的：观察温针灸对兔膝骨关节炎模型关节软骨中PI3K/Akt信号通路及其下游因子Bcl-2、Bax表达的影响。
方法：取6月龄新西兰兔40只，采用随机数字表法分为正常组、模型组、药物组、温针灸组，每组10只。模型组、药物组、温针灸组兔右后肢膝关节伸直位以石膏管型固定4周，制备膝骨关节炎模型。造模成功后，模型组每日置于兔架上固定15 min，药物组每天行硫酸氨基葡萄糖灌胃治疗(77 mg/kg，1次/d)，温针灸组每天行温针灸治疗(15 min/次，1次/d)。连续治疗28 d后，利用苏木精-伊红染色观察软骨损伤程度，Tunel法检测软骨细胞凋亡，RT-PCR法检测软骨组织中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的mRNA表达，Western blot法检测软骨组织中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax 的蛋白表达。
结果与结论：①苏木精-伊红染色显示，模型组软骨细胞数量减少，细胞排列无序，层次紊乱，软骨面被破坏，Mankin评分显著升高；药物组与温针灸组软骨细胞数量明显增多，基质着色深，Mankin评分降低；②与正常组相比，模型组软骨细胞凋亡率增高(P < 0.05)；与模型组相比，药物组、温针灸组软骨细胞凋亡率降低(P < 0.05)；③RT-PCR与Western blot检测显示，与正常组相比，模型组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA与蛋白表达降低(P < 0.05)，Bax的mRNA与蛋白表达升高(P < 0.05)；与模型组相比，温针灸组与药物组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA与蛋白表达升高(P < 0.05)，Bax的mRNA与蛋白降低(P < 0.05)；④结果表明温针灸可通过调控PI3K/Akt信号通路引起下游因子Bcl-2表达升高、Bax表达降低，进而抑制软骨细胞过度凋亡，达到保护关节软骨的作用。

https://orcid.org/0000-0001-9774-453X(武永利)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 膝骨关节炎, 温针灸, 软骨细胞凋亡, PI3K/Akt信号通路, 下游因子

Abstract: BACKGROUND: Warm acupuncture is an effective treatment for knee osteoarthritis; however, the therapeutic mechanism is not clear
OBJECTIVE: To observe the effects of warm acupuncture on PI3K/Akt signaling pathway and expression of downstream factors Bcl-2 and Bax in the articular cartilage of a rabbit model of knee osteoarthritis.
METHODS: Forty 6-month-old New Zealand rabbits were randomly divided into blank group, model group, glucosamine sulfate group and warm acupuncture group, with 10 rabbits in each group. The blank group was not modeled, and in the other three groups, the knee joint of the rabbit right hindlimb was immobilized in extension position using a plaster tube for 4 weeks to prepare the rabbit knee osteoarthritis model. After successful modeling, the blank group was not interfered. The rabbits in the model group were fixed in the rabbit frame for 15 minutes daily, those in the glucosamine sulfate group were treated with glucosamine sulfate by gavage at 77 mg/kg daily, and those in the warm acupuncture group were treated with warm acupuncture for 15 minutes daily, for 28 continuous days in total. After the intervention, hematoxylin-eosin staining was performed to observe the severity of cartilage damage. Cell apoptosis in chondrocytes was observed using TUNEL assay. mRNA and protein expressions of PI3K, Akt, Bcl-2 and Bax in cartilage tissue were detected by RT-PCR and western blot, respectively.
RESULTS AND CONCLUSION: The model group had a rough surface of articular cartilage, disordered arrangement and reduced number of chondrocytes, and significantly increased Mankin score, while the glucosamine sulfate and warm acupuncture groups showed increased number of chondrocytes, deeply stained matrix, and reduced Mankin score. Compared with the blank group, the apoptotic rate of chondrocytes was significantly increased in the model group (P < 0.05). Compared with the model group, the apoptotic rate of chondrocytes was significantly decreased in the glucosamine sulfate and warm acupuncture groups (P < 0.05). Compared with the blank group, the mRNA and protein expressions of PI3K, Akt and Bcl-2 were significantly decreased and the mRNA and protein expressions of Bax were significantly increased in the model group (P < 0.05). Compared with the model group, mRNA and protein expressions of PI3K, Akt and Bcl-2 were significantly increased and the mRNA and protein expressions of Bax were significantly decreased in the glucosamine sulfate and warm acupuncture groups (P < 0.05). To conclude, warm acupuncture can increase the expression of bcl-2 and decrease the expression of Bax by regulating PI3K/Akt signaling pathway, and then inhibit the excessive apoptosis of chondrocytes to protect articular cartilage.

Key words: knee osteoarthritis, warm acupuncture, chondrocyte apoptosis, PI3K/Akt signaling pathway, downstream factor

中图分类号:

武永利, 刘娣, 王铎, 刘君伟, 马遇原. 温针灸调控膝骨关节炎模型兔关节软骨中PI3K/Akt信号通路的变化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(35): 5596-5601.

Wu Yongli, Liu Di, Wang Duo, Liu Junwei, Ma Yuyuan. Effect of warm acupuncture on PI3K/Akt signaling pathway in articular cartilage of a rabbit knee osteoarthritis model[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(35): 5596-5601.

图/表（结果） 6

2.1 实验动物数量分析 40只兔全部进入结果分析。
2.2 各组兔软骨组织病理改变见图2。

苏木精-伊红染色显示，正常组软骨细胞排列整齐呈柱状，细胞核清晰，深染均匀，4层结构清晰可辨，潮线完整，基质着色均匀；模型组关节软骨层表面粗糙，完整性破坏，软骨细胞层次结构紊乱，4层结构不清晰，软骨缺损，潮线扭曲且不完整；药物组软骨表面毛糙、有裂隙延伸至软骨下骨，软骨细胞排列不均匀、细胞数量减少，软骨基质着色较浅，部分区域可见双重潮线；温针灸组软骨表面平整、无明显缺损，细胞排列局部紊乱、数量无减少，软骨基质着色不明显，潮线结构清晰。
2.3 各组兔软骨Mankin组织学评分结果与正常组相比，模型组Mankin组织学评分升高(P < 0.05)；与模型组相比，温针灸组及药物组Mankin组织学评分降低(P < 0.05)，说明温针灸与硫酸氨基葡萄糖均可改善膝骨关节炎软骨损伤程度，见表3。

2.4 各组兔软骨细胞凋亡情况各组软骨组织Tunel染色结果，见图3。与正常组相比，模型组软骨细胞凋亡率升高(P < 0.05)；与模型组相比，药物组、温针灸组软骨细胞凋亡率降低(P < 0.05)，见表3。

2.5 各组兔软骨组织PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的mRNA表达与正常组相比，模型组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA表达降低(P < 0.05)，Bax mRNA表达升高(P < 0.05)；与模型组相比，温针灸组与药物组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA表达升高(P < 0.05)，Bax的mRNA表达降低(P < 0.05)，见图4。

2.6 各组兔软骨组织PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的蛋白表达见图5。

与正常组相比，模型组PI3K、Akt、Bcl-2的蛋白表达降低(P < 0.05)，Bax蛋白表达升高(P < 0.05)；与模型组相比，温针灸组与药物组PI3K、Akt、Bcl-2的蛋白表达升高(P < 0.05)，Bax蛋白表达降低(P < 0.05)，见图6。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。
1.2 时间及地点实验于2020年7月至2021年11月在宁夏医科大学完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 6月龄雄性新西兰兔40只，普通级，体质量2.5-3.0 kg，由宁夏医科大学动物实验中心提供，批号：SYXK(宁)2015-0001。动物全部分笼饲养于宁夏医科大学动物实验室，室温24 ℃，标准饲料，自由进食、饮水。采用随机数字表法分为正常组、模型组、药物组、温针灸组，每组10只。动物实验获得宁夏医科大学动物实验中心伦理委员会批准。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。实验动物在麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。
1.3.2 实验耗材与试剂无菌针灸针(华佗牌，苏州医疗用品厂有限公司，规格0.25 mm×25 mm)；清艾条(江苏康美制药有限公司，规格20 cm×2.1 cm，国药准字Z32020253)；硫酸氨基葡萄糖(浙江海正药业有限公司，国药准字H20041316)；总RNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司)、反转录试剂盒、RT-PCR试剂盒(日本TaKaRa公司)；总蛋白提取试剂盒、BCA蛋白浓度测定试剂盒(上海贝博生物科技有限公司)；兔PI3K、Akt、Bcl-2、Bax抗体(北京博奥森生物技术有限公司)。
1.3.3 实验仪器 Aperio LV1玻片扫描仪(德国Leica SS008109)；ELx800全自动酶标仪(美国 BIO-TEK公司)；垂直电泳仪(美国Bio-rad PP1150)；超灵敏多功能功能成像仪(美国GE Amersham Imager 680)；核酸检测仪(德国Berthold 1007)；基因扩增仪(德国耶拿Biometra TOne)；RT-PCR仪(美国Thermo StepOne PlusTM)。
1.4 实验方法
1.4.1 建立膝骨关节炎模型取模型组、药物组、温针灸组兔，右后肢膝关节伸直位以石膏管型固定4周，制备兔膝骨关节炎模型[7]。将兔置于兔架上，取长约10 cm石膏折叠6层后浸入清水中，敷于兔右膝处，使石膏平整覆盖兔右膝关节形成右后肢伸直位固定，并予以绷带包扎，待石膏完全硬化后造模完成。注意事项：造模后密切观察兔膝，若出现兔远端或末梢肿胀及糜烂、石膏脱落及严重撕咬等现象，则立即重新造模。造模4周后拆除石膏固定，随机抽取10只行兔膝关节X射线片检查确定造模是否成功。X射线片显示兔膝关节间隙变窄、边缘轻度骨质增生，提示造模成功，见图1。

1.4.2 造模后干预造模成功后，模型组每日置于兔架上固定15 min，共28 d；药物组灌胃给予77 mg/kg硫酸氨基葡萄糖，1次/d，7 d为1个疗程，连续治疗4个疗程；温针灸组每日在内膝眼、犊鼻、鹤顶穴予以温针灸治疗，穴位定位参照《实验针灸学》[8]，15 min/次，1次/d，7 d为1个疗程，连续治疗4个疗程。
1.4.3 实验取材实验结束当日进行取材。使用3%戊巴比妥钠按30 mg/kg剂量经兔耳缘静脉注射进行麻醉[9]，打开右后膝关节腔，充分暴露关节软骨，取胫骨平台及股骨下段关节软骨。生理盐水完全冲洗胫骨平台后，放入40 g/L多聚甲醛中固定24-48 h，置入15%EDTA脱钙液(1周更换1次)中，石蜡包埋，用切片机将蜡块切为5 μm厚薄片，用于苏木精-伊红染色与Tunel染色。将股骨下段迅速冻存于-80 ℃冰箱中，用于RT-PCR、Western blot检测。
1.5 主要观察指标
1.5.1 苏木精-伊红染色观察软骨组织病理变化取石蜡切片，依次置于二甲苯Ⅰ液和Ⅱ液、无水乙醇Ⅰ液和Ⅱ液、体积分数95%乙醇、体积分数90%乙醇、体积分数80%乙醇及蒸馏水中，置于改良Lillie-Mayer苏木精染色液中5 min，盐酸乙醇分化，蒸馏水反蓝，置于伊红染色液中5 min，冲洗、脱水、透明、封固，置于光镜200倍视野下观察。依据Mankin评分标准进行组织学评分[10]，见表1。

1.5.2 Tunel法检测软骨细胞凋亡将5 μm切片置于65 ℃烤片机烤片4.5 h；二甲苯脱蜡2次，每次5 min；进行梯度乙醇(无水乙醇、体积分数95%乙醇、体积分数90%乙醇、体积分数80%乙醇、体积分数70%乙醇)水化，每次5 min；Proteinase K工作液37 ℃处理组织20 min；0.01 mol/L PBS漂洗3次，每次5 min；制备Tunel反应混合液，将50 μL的TdT+450 μL荧光素标记的dUTP液混匀；每个组织上加50 μL的Tunel反应混合液，在37 ℃湿盒避光反应1 h；PBS漂洗3次，每次5 min；滴加DAPI染色液100 μL于样本上，恒温孵育盒避光室温孵育20 min；PBS漂洗3次，每次5 min；水溶性封固剂进行封固后，使用荧光显微镜在绿色波长488 nm、红色波长596 nm视野下观察并拍照，并用ImageJ软件对图像进行分析。凋亡细胞核呈绿色荧光，DAPI染色细胞核呈蓝色荧光。
1.5.3 RT-PCR检测采用RT-PCR法检测软骨组织中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的mRNA表达量。提取软骨中总RNA测定浓度：①将软骨组织在液氮中磨碎，每50 mg组织加1 mL裂解液RZ，用匀浆仪进行匀浆处理；②将匀浆样品在15-30 ℃放置5 min，使得核酸蛋白复合物完全分离；③加入200 μL氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 s，室温放置3 min；④4 ℃下12 000 r/min离心10 min，样品会分成3层，黄色的有机相，中间层和无色的水相，RNA主要在水相中，水相的体积约为所用裂解液RZ试剂的50%，把水相转移到新管中；⑤缓慢加入0.5倍体积无水乙醇，混匀，将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，4 ℃下12 000 r/min离心30 s；⑥向吸附柱CR3中加入500 μL去蛋白液RD，4 ℃下12 000 r/min离心30 s，弃废液，将CR3放入收集管中；⑦向吸附柱CR3中加入500 μL漂洗液RW，室温静置2 min，4 ℃下12 000 r/min离心30 s，弃废液；⑧将吸附柱放入2 mL收集管中，4 ℃下12 000 r/min离心2 min，去除残余液体；⑨将吸附柱CR3转入一个新的1.5 mL离心管中，加50 μL的RNase-Free ddH2O，室温放置2 min，4 ℃下12 000 r/min离心2 min。用超微量核酸分析仪检测mRNA纯度和浓度后进行反转录反应：取2 μL RNA进行PCR扩增，配置20 μL反转录反应体系。扩增条件：95 ℃酶激活5 min，1个循环；95 ℃变性5 s，60 ℃退火10 s，72 ℃延伸25 s，共40个循环，以β-actin为内参。采用 2-ΔΔCt法计算各基因相对表达量。引物序列见表2。

1.5.4 Western blot检测采用Western blot法检测软骨组织中 PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的蛋白表达量。采用总蛋白提取试剂盒提取蛋白，进行BCA浓度测定，按照SDS-PAGE试剂盒说明书配胶，上样后加入电泳缓冲液，转膜后放入封闭液封闭2 h，分别加入兔PI3K(稀释比为1∶500)、Akt(稀释比为1∶500)、Bcl-2(稀释比为1∶500)、Bax(稀释比为1∶500)抗体，4 ℃孵育过夜；TBST冲洗3次，每次5 min；加入二抗(稀释比为1∶10 000)，室温摇床反应1 h；配制ECL发光液，在凝胶成像仪下曝光成像。图像分析软件检测整合光密度，以β-actin为内参，以目的蛋白和内参的灰度值之比表示目的蛋白的相对表达量。
1.6 统计学分析采用SPSS 25.0软件进行统计分析。计量资料用x±s表示，数据符合正态分布且方差齐时，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验，方差不齐用Games-Howell法，P < 0.05 为差异有显著性意义。统计学方法已经宁夏医科大学公共卫生管理学院统计学专家审核。
1.7 出版规范该研究遵守国际医学期刊编辑委员会《学术研究实验与报告和医学期刊编辑与发表的推荐规范》。文章出版前已经过专业反剽窃文献检测系统进行3次查重。文章经小同行外审专家双盲外审，同行评议认为文章符合期刊发稿宗旨。

讨论

膝骨关节炎是引起老年人膝关节疼痛的常见病，属于中医“膝痹”的范畴[11]。中医治疗膝痹的方法众多，包括针灸、推拿、中药等，其中温针灸疗法在防治膝骨关节炎方面具有丰富的临床基础，该方法具有行气活血、温经通脉、化瘀止痛的作用，为指南推荐治疗膝骨关节炎的疗法之一[12]。相关研究证实“犊鼻、外膝眼”下覆盖着丰富的动静脉网，通过温针灸的双重刺激效应可使局部血液循环加速，抑制炎性物质及相关代谢物质的产生[13]。课题组一直致力于温针灸治疗膝骨关节炎的临床及基础研究。前期研究表明，温针灸可抑制软骨细胞凋亡达到治疗膝骨关节炎的目的，但其作用途径不明确[14]。

现代医学认为，膝骨关节炎发生发展的主要病理变化是关节软骨退变，关节软骨的主要组成成分是软骨细胞和细胞外基质[15]。软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞，其在软骨形成、代谢及修复中起着重要作用[16]，因此软骨细胞的凋亡对于维持软骨细胞在软骨中的正常数量具有重要意义。在膝骨关节炎早期，软骨细胞凋亡与早期软骨损伤严重程度呈正相关，提示软骨细胞凋亡在本质上与软骨损伤有关，并可能启动膝骨关节炎软骨退变[17]。膝骨关节炎发生后，软骨细胞的合成和代谢平衡被打破，导致维持正常软骨功能的细胞外基质分泌受限，最终使软骨破坏加速发生[18]。PI3K/Akt信号通路在细胞增殖、凋亡等多种细胞转录和迁移途径中发挥至关重要的作用，该信号通路对软骨细胞凋亡具有重要意义[19-20]，其下游因子Bcl-2、Bax是调控细胞凋亡的主要因子[21]。在细胞稳态下，Bcl-2与Bax通常为异源二聚体的形式存在，共同调节细胞凋亡[22]。研究发现，PI3K/Akt 通路被激活后使Akt迅速活化，并进一步磷酸化为P-Akt丰富下游靶点Bax，增强Bcl-2因子的转录，发挥细胞的抗凋亡作用[23-24]。PI3K/Akt信号通路的激活调控下游因子Bcl-2、Bax的表达发生变化，与膝骨关节炎进程中软骨细胞凋亡有着密切的联系。因此，基于PI3K/Akt信号通路探究温针灸对于软骨细胞凋亡的影响，对临床治疗膝骨关节炎具有重要的指导意义。

近些年研究证实，PI3K/Akt信号通路激活后通过影响下游因子Bcl-2、Bax抑制软骨细胞凋亡[25-26]。田胜兰等[27]也发现人甲壳质酶蛋白YKL-40可激活PI3K/Akt信号通路，有效抑制Bax蛋白表达和促进Bcl-2的蛋白表达，起到抑制兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的作用。熊勇等[28]的研究也证实，温针灸可通过升高Bcl-2表达、降低Bax表达抑制软骨细胞过度凋亡，有效促进损伤软骨修复，延缓膝骨关节炎的发展，但其作用机制尚未明确。此次实验苏木精-伊红染色结果显示，模型组软骨细胞数量减少，细胞排列无序，层次紊乱，软骨面被破坏，Mankin评分显著升高；而药物组与温针灸组软骨细胞数量明显增多，基质着色深，Mankin评分降低，证明温针灸及硫酸氨基葡萄糖可有效修复膝骨关节炎兔关节软骨损伤。Tunel染色显示，温针灸组和药物组软骨细胞凋亡率明显低于模型组，证实温针灸可有效抑制软骨细胞过度凋亡。RT-PCR与Western blot实验结果显示，模型组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA与蛋白表达较正常组明显降低，Bax的mRNA与蛋白表达较正常组明显升高，药物组与温针灸组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA与蛋白表达均较模型组明显升高，Bax的 mRNA与蛋白表达较模型组降低，表明温针灸和硫酸氨基葡萄糖均可通过激活PI3K/Akt信号通路上调Bcl-2表达、下调Bax的表达，从而有效抑制兔软骨细胞的过度凋亡，促进内环境稳态恢复，最终达到延缓软骨退变、治疗膝骨关节炎的目的。

研究已经证实，选取硫酸氨基葡萄糖治疗膝骨关节炎可有效减少对软骨细胞的损害，修复损伤软骨[29]。而在临床治疗中，膝骨关节炎病程较长、病势易反复，使用硫酸氨基葡萄糖治疗膝骨关节炎时会并发恶心、呕吐等胃肠道不良反应，并对于大多患有糖尿病、高血压等中高龄人群不适长期服用[30]。温针灸作为一种中医骨伤中特色的治疗方法，在治疗膝骨关节炎时不良反应小，普遍适用于各种膝骨关节炎患病人群，是治疗膝骨关节炎的重要手段。

综上所述，温针灸治疗兔膝骨关节炎可通过激活PI3K/Akt信号通路增强Bcl-2表达、抑制Bax表达，对软骨细胞过度凋亡起到抑制作用，改善软骨细胞生存状态，修复损伤软骨，延缓软骨退变，达到预防和治疗膝骨关节炎的作用。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

温针灸调控膝骨关节炎模型兔关节软骨中PI3K/Akt信号通路的变化

Effect of warm acupuncture on PI3K/Akt signaling pathway in articular cartilage of a rabbit knee osteoarthritis model

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