黄芪桂枝五物汤对颈椎病和焦虑症“异病同治”作用机制的网络药理学分析

doi:10.12307/2022.663

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (23): 3650-3656.doi: 10.12307/2022.663

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黄芪桂枝五物汤对颈椎病和焦虑症“异病同治”作用机制的网络药理学分析

邓博文1，李筱叶2，蒋昇源1，刘港 1，赵毅1，张厚君1，贺丰1，穆晓红1

1北京中医药大学东直门医院，北京市 100007；2北京市海淀区心理康复医院，北京市 100086

收稿日期:2021-09-14 接受日期:2021-10-16 出版日期:2022-08-18 发布日期:2022-02-12
通讯作者: 穆晓红，博士，主任中医师，博士生导师，北京中医药大学东直门医院，北京市 100007
作者简介:邓博文，男，1992年生，四川省乐山市人，汉族，北京中医药大学在读博士，主要从事中医药治疗脊柱脊髓损伤以及脑性瘫痪的研究。

Mechanisms of Huangqi Guizhi Wuwu Decoction in the treatment of cervical spondylosis and anxiety disorder based on the principle of “treating different diseases with the same method”: a network pharmacology analysis

Deng Bowen1, Li Xiaoye2, Jiang Shengyuan1, Liu Gan1, Zhao Yi1, Zhang Houjun1, He Feng1, Mu Xiaohong1

1Dongzhimen Hospital, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100007, China; 2Psychological Rehabilitation Hospital of Haidian District, Beijing 100086, China

Received:2021-09-14 Accepted:2021-10-16 Online:2022-08-18 Published:2022-02-12
Contact: Mu Xiaohong, MD, Chief physician, Doctoral supervisor, Dongzhimen Hospital, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100007, China
About author:Deng Bowen, MD candidate, Dongzhimen Hospital, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100007, China

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
异病同治：是指不同的疾病，若促使发病的病机相同，则可采取同一种方法治疗。其基础是证同治亦同，证是治疗的关键。
分子对接：是将已知三维结构数据库中的分子逐一放在靶标分子的活性位点处。通过不断优化受体化合物的位置、构象、分子内部可旋转键的二面角和受体的氨基酸残基侧链和骨架，寻找受体小分子化合物与靶标大分子作用的最佳构象，并预测其结合模式、亲和力和通过打分函数挑选出接近天然构象的与受体亲和力最佳的配体的一种理论模拟分子间作用的方法。

背景：黄芪桂枝五物汤被广泛应用于颈椎病和部分情感障碍疾病的治疗，但其具体作用机制仍不明确。
目的：通过网络药理学及分子对接方法初步探讨黄芪桂枝五物汤依据“异病同治”原则治疗颈椎病和焦虑症的共同作用机制。
方法：检索中药系统药理学数据库建库至2021-09-01有关黄芪桂枝五物汤、五味药物的有效活性成分及相应靶点。以“Cervical spondylosis”和“Anxiety disorder”为检索词，检索Genecards，OMIM，Pharmgkb，TTD以及DrugBank数据库建库至2021-09-01所有数据，挖掘颈椎病和焦虑症的疾病靶点；应用R软件对疾病与药物靶标映射获取共有靶点，通过Cytoscape 3.8.2软件和STRING平台分别构建“药物活性成分-靶点-疾病”关系与蛋白互作网络，筛选网络核心共有靶点；运用R软件对交集靶点进行GO富集分析以及KEGG路富集分析；应用Vina软件、PyMOL软件对网络关键交集靶点与主要活性成分分子对接和展示。
结果与结论：①共筛选出黄芪桂枝五物汤药物有效活性成分73个，主要成分包括槲皮素、山奈酚和β-胡萝卜素等；②与疾病共有靶点19个，关键靶点为白细胞介素1、TP53、缺氧诱导因子1和丝裂原活化蛋白激酶1等；③分子对接结果显示，山奈酚可靶向调控白细胞介素1、TP53和缺氧诱导因子1；④GO初步分析结果表明，黄芪桂枝五物汤治疗颈椎病和焦虑症的机制主要涉及活性氧代谢过程、炎症反应的调控、氧化应激反应及细胞凋亡等生物学过程；⑤KEGG分析结果表明，黄芪桂枝五物汤通过调节白细胞介素17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路等126条共有通路发挥对颈椎病和焦虑症“异病同治”的作用；⑥上述数据证实，黄芪桂枝五物汤“异病同治”颈椎病和焦虑症可能通过槲皮素、山奈酚等活性成分抑制神经免疫反应、氧化应激反应和细胞凋亡等相关生物学过程发挥作用，以此为临床用药提供新思路，为基础实验提供理论依据。

https://orcid.org/0000-0002-7200-1809 (穆晓红)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 黄芪桂枝五物汤, 颈椎病, 焦虑症, 氧化应激, 炎症反应, 细胞凋亡, 异病同治, 分子对接, 网络药理学

Abstract: BACKGROUND: Huangqi Guizhi Wuwu Decoction is widely used in the treatment of cervical spondylosis and some affective disorders, but its specific mechanism is still unclear.
OBJECTIVE: Through the methods of network pharmacology and molecular docking, to preliminarily discuss the common mechanism of Huangqi Guizhi Wuwu Decoction in the treatment of cervical spondylosis and anxiety disorder according to the treating principle of “treating different diseases with the same method.”
METHODS: We searched the pharmacology database of traditional Chinese medicine system from the inception to September 1, 2021, retrieving the effective active components and corresponding targets of five drugs in Huangqi Guizhi Wuwu Decoction. Genecards, OMIM, PharmGKB, TTD and drugbank databases were searched using the keywords of “cervical spondylosis” and “anxiety disorder” from their inception to September 1, 2021, and the disease targets of cervical spondylosis and anxiety disorder were mined. The key targets of Huangqi Guizhi Wuwu Decoction in the treatment of cervical spondylosis and anxiety disorder between components and disease targets were screened using R language to construct the active ingredient-target-disease and protein-protein interaction network through the Cytoscape 3.8.2 and STRING, as well as screen the common targets of network core. The intersection targets were obtained by GO enrichment analysis and KEGG pathway enrichment by R language. The Vina and PyMOL software were to establish molecular docking between common targets and main active ingredients in the protein-protein interaction network.
RESULTS AND CONCLUSION: We screened 73 active components of Huangqi Guizhi Wuwu Decoction in total, including quercetin, kaempferol β-Carotene. There were 19 targets associated with the disease, and the key targets included interleukin-1β, TP53, hypoxia-inducible factor-1α, mitogen activated protein kinase 1, etc. Molecular docking results showed that kaempferol could target and regulate interleukin-1β, TP53, and hypoxia-inducible factor-1α. GO preliminary analysis showed that the mechanism of Huangqi Guizhi Wuwu Decoction in the treatment of cervical spondylosis and anxiety mainly involved biological processes including reactive oxygen species metabolism, regulation of inflammatory response, oxidative stress response and cell apoptosis. KEGG results showed that according to the principle of “treating different diseases with the same method,” Huangqi Guizhi Wuwu Decoction played the therapeutic role in cervical spondylosis and anxiety disorder by regulating 126 common pathways such as interleukin-17 signal pathway, tumor necrosis factor signal pathway and mitogen activated protein kinase signal pathway. All these findings preliminarily reveal that Huangqi Guizhi Wuwu Decoction follows the principle of “treating different diseases with the same method” in the treatment of cervical spondylosis and anxiety disorder, which may play a role in regulating neuroimmune inflammation, antioxidant stress, cell apoptosis and other related biological processes through active components such as quercetin and kaempferol, so as to provide new ideas for clinical medication and theoretical basis for basic experiments.

Key words: Huangqi Guizhi Wuwu Decoction, cervical spondylosis, axiety disorder, oxidative stress, inflammatory response, apoptosis, treating different diseases with the same method, molecular docking, network pharmacology

中图分类号:

邓博文, 李筱叶, 蒋昇源, 刘港 , 赵毅, 张厚君, 贺丰, 穆晓红. 黄芪桂枝五物汤对颈椎病和焦虑症“异病同治”作用机制的网络药理学分析[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(23): 3650-3656.

Deng Bowen, Li Xiaoye, Jiang Shengyuan, Liu Gan, Zhao Yi, Zhang Houjun, He Feng, Mu Xiaohong. Mechanisms of Huangqi Guizhi Wuwu Decoction in the treatment of cervical spondylosis and anxiety disorder based on the principle of “treating different diseases with the same method”: a network pharmacology analysis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(23): 3650-3656.

图/表（结果） 6

2.1 黄芪桂枝五物汤药物活性成分通过TCMSP数据库初步筛选，获得黄芪桂枝五物汤有效活性化合物790个，其中黄芪87个，桂枝220个，白芍85个，大枣133个，生姜265个，其中符合DL和OB筛选条件的生物活性化合物73个，见表1。

2.2 疾病相关靶点及药物-疾病交集靶点分析通过Genecards、OMIM、Pharmgkb、TTD以及DrugBank数据库分别获得颈椎病相关基因靶点54，3，5，0，36个；焦虑症基因靶点5 566，200，17，50，146个。通过R软件Venn程序包，将获得靶点合并、去重，共获得颈椎病疾病靶点94个，焦虑症疾病靶点4 903，确定疾病交集靶点73个。将药物活性成分和疾病靶点取交集，利Venn程序包绘制韦恩图，获取共有靶点19个,见图1，3者共有靶点19个，如下：TNFAIP6，PTGS1，PTGS2，CASP3，IKBKB，CYP3A4，ESR1，MYC，MMP3，CCND1，MAPK1，TP53，NFKBIA，SOD1，HIF1A，HSPA5，IL1B，IFNG，SPP1。

2.3 “药物活性成分-靶点-疾病”网络构建及共有靶点蛋白相互作用网络分析利用Cytoscape 3.8.2软件构建活性成分-靶点-疾病相互作用网络，其中，31个有效活性成分参与并调控19个作用靶点，见图2。

槲皮素为大枣、黄芪共有化合物，儿茶素为大枣、白芍、桂枝共有化合物，豆甾醇为生姜、大枣共有化合物，山奈酚为白芍、黄芪共有化合物，β-谷甾醇为生姜、大枣、白芍、桂枝共有化合物等。将交集靶点导入STRING平台构建PPI网络，该网络包含19个节点、106条边，其中深蓝色和橘色线条代表数据库中获得的蛋白之间相互作用，绿色线为实验验证的蛋白网络，详见图3。

以置信度≥0.400为筛查标准，筛选信息导入Cytoscape 3.8.2软件，利用插件Network Analyzer分析，该网络包含52个节点、128条边，橘色代表疾病，方形蓝色代表核心靶标，圆形代表活性成分，圆饼不同颜色代表不同药物共同拥有此活性成分，网络节点大小和度值呈正相关。网络分析示槲皮素自由度17，紧密度为0.586 2，介度为0.135 9，预测槲皮素是黄芪桂枝五物汤治疗颈椎病和焦虑症共病的主要活性成分，其次为山奈酚(自由度为6，紧密度为0.467 8，介度为0.027 8)、β-胡萝卜素(自由度为4，紧密度为0.443 4，介度为0.008 4)等。同时使用CytoNCA插件和R软件，限定BC、DC、CC、NC、LAC等值均大于中位数，筛选PPI核心网络节点，见图3。上述网络图表示黄芪桂枝五物汤中药材-化合物-靶点-通路相互协同调控，发挥“异病同治”的功效。
2.4 靶点和通路富集分析使用R软件对19个交集靶点进行GO富集分析和KEGG通路富集分析，根据P大小，列举并分析各类排名靠前条目。GO功能富集分析，获得生物过程(BP)1 212个，主要涉及活性氧代谢过程、炎症反应的调控、氧化应激反应等；细胞组成(CC)17个，主要涉及神经元投射胞浆、树突细胞质、转移酶复合体等；分子功能(MF)81个，主要涉及泛素蛋白连接酶结合、抗氧化活性、RNA聚合酶Ⅱ通用转录起始因子结合等。KEGG通路富集分析获得126条信号通路，其中靠前的通路为白细胞介素17、肿瘤坏死因子、Th17极化、Toll受体信号通路(Toll-like receptor signaling pathway)和C型凝集素受体信号通路(C-type lectin receptor signaling pathway)，主要涉及炎症和免疫调控，其后的MAPK，AGE-RAGE，NF-kappa B，PI3K-Akt，HIF-1，Th1 and Th2细胞分化等信号通路，主要涉及细胞凋亡、内分泌代谢、免疫炎症及氧化应激等，表明多通路、多靶点参与了黄芪桂枝五物汤治疗颈椎病和焦虑症共病的过程，见图4。

2.5 分子对接结果筛选PPI核心网络节点中度值排名前3位的靶蛋白和黄芪桂枝五物汤主要活性成分进行分子对接验证。当结合能<-20.9 kJ/mol时，表明关键成分和靶点可形成稳定结构，结合具有较好活性，其分值越低提示对接效果越佳。分子对接结果显示，黄芪桂枝五物汤的主要活性成分槲皮素和3个靶蛋白的对接亲和度均<-20.9 kJ/mol，其中槲皮素和受体缺氧诱导因子1α的结合活性最强，见表2，图5。

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引言

颈椎病是因颈椎间盘及其邻近结构退行性改变，刺激或压迫神经、血管，引起相应的临床综合征，其发病率趋于年轻化[1]。颈椎病的发病机制尚不明确，既往危险因素研究不能全面解释颈椎病患者的病理生理学机制。研究表明情绪障碍会促进颈椎病的发生发展，颈椎病患者常伴发焦虑状态或焦虑症，其发生率较高，影响患者治疗疗效及预后，甚至引起患者心理障碍和心理问题[2-3]。目前临床对颈椎病合并焦虑症患者的治疗方式局限，西药以镇静类药物为一线用药，其锥体外系反应和心脑血管等不良事件发生率较高，患者对药物依赖性强，在一定程度限制了其应用。
中医药在治疗慢性疾病方面有独特的疗效和潜在的优势。中医认为，颈椎病和焦虑症的基本病机均为“气虚血瘀”，故历代医家多以活血通络、温阳益气法指导临床治疗。黄芪桂枝五物汤是益气活血的代表方之一，源自《金匮要略·血痹虚劳脉证并治篇》、由黄芪、桂枝、芍药、大枣、生姜共5味药组成，有调养荣卫、益气温经、和血通痹之功。临床研究发现黄芪桂枝五物汤能有效改善颈椎病引起的疼痛、肢体麻木等症状，同时缓解患者焦虑状态[4-5]，表明黄芪桂枝五物汤对颈椎病和焦虑症有“异病同治”的功效。但黄芪桂枝五物汤成分复杂，现有研究多局限于单一靶点探讨，且目前国内外尚无黄芪桂枝五物汤治疗颈椎病和焦虑症共同作用机制的相关研究，具体分子机制尚不明确。故该文应用网络药理学“整体观”的研究方法，从多角度分析并阐述黄芪桂枝五物汤的活性成分靶点和颈椎病、焦虑症的关联性，构建靶点、疾病、通路之间的多种生物学机制，为“异病同治”的中医理论提供依据，为临床推广应用和后期基础实验研究提供参考依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 药物有效成分筛选与靶点获取利用中药系统药理学数据库，即TCMSP数据库(https://www.tcmsp-e.com)，以口服生物利用度(oral bioavailability，OB)≥30%，类药性指数(drug-likeness，DL)≥0.18为条件，初步筛选黄芪桂枝五物汤植物药(黄芪、桂枝、白芍、大枣、生姜)的活性化学成分及对应的潜在靶点信息，检索时限从建库至2021-09-01。通过Uniprot数据库(https://www.uniprot.org)，匹配靶点human基因名称，使药物靶点信息标准化，并使用Perl语言对靶点进行校正和转化，获取黄芪桂枝五物汤可能存在的靶点。
1.2 疾病靶点获取以“Cervical spondylosis”和“Anxiety disorder”为检索词，通过Genecards(https://www.genecards.org)、OMIM(https://omim.org)、Pharmgkb(https://www.pharmgkb.org)、TTD(http://db.idrblab.net)以及DrugBank(https://go.drugbank.com)数据库，以“Homo sapiens”为种属条件，分别检索疾病基因靶点，获取信息分别应用R开源软件合并及去重，获得颈椎病和焦虑症的共有靶点。
1.3 药物-疾病交集靶点筛选与分析通过R开源软件Venn程序包对1.1和1.2获得的药物有效活性成分作用靶点与疾病靶点取交集分析，绘制韦恩图分析，并导入Cytoscape 3.8.2构建“药物活性成分-靶点-疾病”网络关系图，将靶点作用关系可视化处理。
1.4 蛋白相互作用网络构建与核心共有靶点筛选将1.3部分获得的共有靶点导入STRING平台(https://string-db.org)进行蛋白分析，获取药物-疾病共同靶点蛋白相互作用关系，置信度≥0.4为筛查标准，将筛选后靶点信息导入Cytoscape 3.8.2绘制并构建蛋白相互作用网络关系图(PPI)，利用Network Analyzer和CytoNCA插件，根据连接度、介度、紧密度等参数分析并获取网络核心共有靶点。
1.5 GO富集分析及KEGG通路富集分析通过R软件的BiocManager，org.HS.eg.db，clusterProfiler等程序包，将药物-疾病共有基因靶点symbol统一化为基因ID，通过基因ID分别进行基因本体(GO)富集分析以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析，对分析结果可视化处理。
1.6 分子对接验证将1.1中获得主要药物活性成分和1.4筛选PPI网络中度值前3位的靶蛋白进行分子对接，验证其药物和靶点相关性。从PubChen数据库(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)获取中药活性成分结构，利用Chem bio3D 14.0软件(PerkinElmer)将结构能量最小化处理，保存为mol格式。通过Uniprot(https://www.uniprot.org)和URCSB PDB(https://www1.rcsb.org)分别获得靶蛋白3D结构，保存为PDB格式，并去水、加氢处理，使用Vina软件(Apache)将活性成分和靶点蛋白转化为pdbqt格式，并进行分子对接处理。PyMOL软件(Schrödinger)对对接结果可视化处理。
1.7 主要观察指标通过检索药物和疾病靶点数据库，获得活性成分和靶点信息，构建药物活性成分-靶点-疾病网络，直观反应黄芪桂枝五物汤“异病同治”颈椎病和焦虑症潜在靶点，建立蛋白相互作用网络关系图，筛选网络核心共有靶点，反映靶点的重要程度，通过GO和KEGG分析初步探索药物潜在作用生物学过程和机制，得出分子对接结果，浅析主要活性成分和靶点关联程度。

讨论

临床疾病病机复杂，症候多样，治法依证而辨，强调“证同治同”的核心思想，其“异病同治”理论则是中医辨证论证特有的治则体现及中医治疗学的特色[6]。中医学认为颈椎病归属于“痹症”范畴，主要病机为气虚血瘀、本虚标实，兼夹痰浊、阴虚等其他病理因素[7]。焦虑症属于情志病范畴，古代医家王清任认为此病乃“内有瘀血”所致，多从气虚血瘀论治[4]，故两者基本病机皆为“气虚血瘀”。同时二者存在共性的病理生理机制，其发病均与神经系统免疫调节、炎症反应过程、氧化应激反应以及胶质细胞激活等密切相关[8]，与中医“证同治同”的思想不谋而合。
黄芪桂枝五物汤主治病机在于机体气血虚弱，寒客血脉，脉络癖滞者，方中黄芪甘补温气，以通营卫，臣以桂枝辛散温通，振奋气血，活血通络，佐以芍药和营理血，养阴揉筋，温经通痹，可谓标本兼治。现代药理学研究表明黄芪桂枝五物汤具有免疫调节、抗炎镇痛、改善微循环、抗氧化应激促进神经修复等功能[5]。临床研究表明黄芪桂枝五物汤不仅在颈椎病等疾病中应用广泛，在治疗焦虑状态、焦虑症等情感障碍等疾病中也有一定的疗效[4-5]。但回顾文献发现目前尚缺乏黄芪桂枝五物汤治疗颈椎病合并焦虑症的相关研究报道，其具体机制尚不明确。故该文利用网络药理学和分子对接技术对黄芪桂枝五物汤对颈椎病和焦虑症“异病同治”进行交集靶点预测，为后续临床、基础实验研究提供理论依据。
文章通过网络药理学方法，初步筛选出黄芪桂枝五物汤治疗颈椎病与焦虑症共病的主要活性成分，包括槲皮素、山奈酚和β-胡萝卜素等。槲皮素为天然黄酮类化合物，具有较强的抗氧化活性和抗炎作用，是一种新型治疗神经系统疾病的药物。研究表明槲皮素通过抑制H2O2诱导的氧化应激反应，降低细胞内活性氧水平和丙二醛产生，增加抗氧化酶表达，并上调Bcl-2，下调Bax、caspase-3和P53的活化，可能通过P53途径减轻细胞膜的脂质过氧化和细胞凋亡，延缓神经退行性疾病的进展[9]。槲皮素通过抑制STAT1和核转录因子κB通路，调控脊髓损伤后M1型巨噬细胞极化，降低炎性因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β等的分泌，减轻炎症反应，防止少突胶质细胞坏死性凋亡[10]，且在缺氧条件下激活缺氧诱导因子1α的表达，串扰KEAP1-NRF2-ARE信号通路的表达水平，共同调控血红素氧合酶1和活性氧表达，干预NOS1/PKG信号传导的上调，减轻氧化应激反应和神经元细胞凋亡，改善神经功能[9，11-12]。同时槲皮素可逆转应激引起的脂质过氧化反应，调节5-羟色胺代谢和胆碱能神经递质的传递，产生抗焦虑作用[13]。但值得注意的是目前尚无槲皮素对颈椎病或颈椎病合并焦虑症的相关基础研究，需进一步深入探索。
文章的分子对接结果提示，槲皮素可能通过靶向白细胞介素1β、TP53、缺氧诱导因子1α等受体蛋白，调节神经炎症反应、氧化应激反应、细胞凋亡等生物学机制发挥作用，可能是防治颈椎病伴焦虑症潜在的分子机制，为后续基础研究奠定理论基础。文章发现槲皮素为黄芪桂枝五物汤方中黄芪和大枣共有活性成分。而黄芪为方中君药，具有甘温益气固表之功效。现代药理学研究表明黄芪含有多种有效成分，具有抗炎镇痛，免疫调节，抗氧化应激等作用[14]。提示黄芪所含有效成分在疾病治疗中可能发挥主要作用。但回顾文献发现目前仍缺乏黄芪及其有效活性成分(黄酮类、多糖和皂苷)在颈椎病或焦虑症领域的基础研究。山奈酚为天然多酚类化合物，其生物学功能活性具有多样性，能有效抑制STAT3激活、AKT蛋白磷酸化等，抑制炎性因子产生，减轻神经的发生与发展[15]。其显著抑制还原性辅酶Ⅱ以及脂质过氧化表达，调控氧化应激平衡，对颈椎病缺血再灌注引起的神经元凋亡和焦虑症具有共同调节作用[16-17]。
颈椎病和焦虑症具有白细胞介素1β、TP53、缺氧诱导因子1α等19个交集靶点，31个有效活性成分，涉及126条共有通路，颈椎病和焦虑症相似作用功效是黄芪桂枝五物汤对两个不同疾病“异病同治”的作用基础。蛋白相互作用核心网络及拓扑分析表明交集靶点之间关系密切，自由度与靶蛋白参与疾病调控可能性呈正相关，其中白细胞介素1β、TP53、缺氧诱导因子1α是网络中度值排名靠前的核心靶点。白细胞介素1β是一种诱导型多效炎性细胞因子，在中枢神经系统激活小胶质和星形胶质细胞，诱导其他下游促炎和趋化因子的合成、释放[18]。白细胞介素1β在T细胞免疫失衡及促炎作用的辅助性T细胞17(Th17)的极化过程中起着关键作用[19]，诱导多种自身免疫性疾病，参与颈椎间盘退变以及焦虑症发生和发展[18，20-22]。TP53又称为p53基因，受细胞微环境影响，参与协调多种细胞效应与信号转导，其与核转录因子κB通路之间存在串扰关系，依赖于活性氧动态平衡调控[23]，并差异性调节NRF2转录表达，对内源性抗氧化系统与炎性反应有双向调节作用[24-25]，是治疗焦虑症的潜在作用机制[26]，也是导致神经性疼痛的重要靶点[27-28]。缺氧诱导因子1α是缺血缺氧组织中氧还原稳态的主要调节因子，干预血管内皮生长因子、活性氧和核转录因子κB等靶蛋白表达[29]，缓解缺血再灌注及炎性反应引起的神经元损伤[30]。同时研究发现体内激活缺氧诱导因子1信号通路，能促进海马神经元树突生长，改善动物情感障碍状态[31]。上述研究提示相关核心靶标可能是黄芪桂枝五物汤发挥药效的重要靶点，表明黄芪桂枝五物汤主要通过抗氧化应激、免疫炎症、细胞凋亡调控等作用，双向调节颈椎病和焦虑症，体现了中医“异病同治”理论与治则。
GO富集分析结果表明，共有靶点主要参与基因转录和蛋白翻译、调节细胞因子活性、抗氧化应激、活性氧代谢过程、炎症反应的调控等生物学过程。KEGG通路富集结果表明黄芪桂枝五物汤治疗疾病重要作用靶标为白细胞介素17和肿瘤坏死因子信号通路等。白细胞介素17信号通路主要参与自身免疫及慢性炎症疾病发展过程，主要由转录因子RORγt的表达并被白细胞介素12家族细胞因子白细胞介素23激活，参与多种细胞效应[32]。其诱导T细胞活化以及激活核转录因子κB，促进炎性因子(白细胞介素6、肿瘤坏死因子α等)和多种趋化因子的高表达，促进中性粒细胞、巨噬细胞的募集与极化，产生炎症级联反应[32]，而核心中药可能抑制调控免疫炎性反应，从而延缓间盘退变以及减轻颈椎病神经损伤症状[20，33]。白细胞介素17信号通路可串扰MAPK通路(p38、ERK和JNK)，参与神经元分化及突触可塑性，调控海马齿状回神经元数量，影响焦虑症的发生。肿瘤坏死因子信号通路介导了体内细胞凋亡、神经炎症、细胞因子分泌等多样生物学过程[34]，其肿瘤坏死因子受体1，2为焦虑症主要干预靶点[35]。同时肿瘤坏死因子α可激活Caspase-8蛋白酶，形成级联放大反应，诱导神经元和少突胶质细胞细胞凋亡，导致进行性神经功能缺损，引起颈椎病相应神经症状[36]。以上通路主要为经典炎症通路，表明黄芪桂枝五物汤可通过调节炎症反应干预颈椎病合并焦虑症病程。
综上所述，通过网络药理学对黄芪桂枝五物汤“异病同治”颈椎病和焦虑症的共同作用机制探讨，表明其活性成分可能通过抑制神经炎症反应、氧化应激反应、细胞凋亡相关生物学过程发挥作用，初步明确了黄芪桂枝五物汤治疗疾病的潜在靶点方向，为经方的临床应用和后续实验研究提供理论基础。
但文章存在一定局限性：首先，该文为数据分析研究，初步预测药物作用机制，还需开展后续基础实验佐证；其次，方剂不同配比，血清中药物活性成分含量以及对靶点的定量分析不能完全纳入文章，因此预测结果只能间接指导研究方向，其确切机制仍需进一步深入探索。
据此课题组未来将围绕以下内容展开研究：①目前尚无颈椎病伴焦虑症的动物模型，需要开展相关模型的制备研究。同时，尚无槲皮素与黄芪其他活性成分对颈椎病或颈椎病合并焦虑症相关的基础研究，未来将进一步探索其“异病同治”颈椎病和焦虑症的作用机制。②中药复方的网络药理学分析多为药物-靶点的定性分析，缺乏药物效应的定量分析，应纳入多种数据信息，如代谢组学、血清药物化学等，有机结合，相互验证。并设计新的网络模块搜索以及节点排序算法，以期增加网药预测结果的准确性和可靠性。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

黄芪桂枝五物汤对颈椎病和焦虑症“异病同治”作用机制的网络药理学分析

Mechanisms of Huangqi Guizhi Wuwu Decoction in the treatment of cervical spondylosis and anxiety disorder based on the principle of “treating different diseases with the same method”: a network pharmacology analysis

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