多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构人工骨对兔骨缺损修复及成血管的影响

doi:10.12307/2022.452

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (34): 5436-5441.doi: 10.12307/2022.452

• 组织工程骨材料 tissue-engineered bone • 上一篇下一篇

多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构人工骨对兔骨缺损修复及成血管的影响

龙智生1，熊龙2，龚飞鹏1，李经堂1，曾建华1，邓颖1，兰敏1，孔维豪1，陈钢1

1南昌大学附属人民医院骨科，江西省南昌市 330006；2南昌大学第二附属医院骨科，江西省南昌市 330006

收稿日期:2021-02-22 接受日期:2021-03-24 出版日期:2022-12-08 发布日期:2022-04-15
通讯作者: 熊龙，主任医师，南昌大学第二附属医院骨科，江西省南昌市 330006
作者简介:龙智生，男，1983年生，湖南省娄底市人，汉族，硕士，主治医师，主要从事骨组织工程再生研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(32060222)，项目负责人：龙智生；国家自然科学基金项目(81560355)，项目负责人：曾建华

Effect of artificial bone with multi-scale hydroxyapatite/chitosan microtubule structure on rabbit bone defect repair and angiogenesis

Long Zhisheng1, Xiong Long2, Gong Feipeng1, Li Jingtang1, Zeng Jianhua1, Deng Ying1, Lan Min1, Kong Weihao1, Chen Gang1

1Department of Orthopedics, Jiangxi Provincial People’s Hospital Affiliated to Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China; 2Department of Orthopedics, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China

Received:2021-02-22 Accepted:2021-03-24 Online:2022-12-08 Published:2022-04-15
Contact: Xiong Long, Chief physician, Department of Orthopedics, Second Affiliated Hospital of Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China
About author:Long Zhisheng, Master, Attending physician, Department of Orthopedics, Jiangxi Provincial People’s Hospital Affiliated to Nanchang University, Nanchang 330006, Jiangxi Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 32060222 (to LZS); the National Natural Science Foundation of China, No. 81560355 (to ZJH)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构：是指利用化学合成技术，构建以羟基磷灰石/壳聚糖为基础的多孔微管支架，该支架的空隙相通，具有多尺度的微观结构，该结构具有良好的细胞吸附能力和成骨及成血管功效。
材料不同层级的结构功能：小尺度结构(< 10 μm)更容易被组织液浸渍，提供更多的细胞吸附位点；中等尺度结构(20-40 μm)有利于原始巨噬细胞向M2型转化，并上调抗炎基因表达抑制宿主对移植物的免疫反应，这对于宿主细胞特别是间充质干细胞长入至关重要；大尺度(> 100 μm)有利于血管形成、细胞归巢、定植，为形成细胞集落提供场所。

背景：前期研究证实多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管成骨优良，而血管再生在成骨过程中较为关键，探索多尺度微管结构在其成血管中的作用及相关机制意义重大。
目的：探索多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构对兔骨缺损修复及成血管的影响。
方法：构建多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构与羟基磷灰石/壳聚糖单体结构，将两种材料分别与骨髓间充质干细胞共培养，21 d后电镜下观察材料对细胞的吸附能力及细胞状态。在48只成年新西兰大白兔桡骨部位制作骨缺损模型，实验组(n=24)植入多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构材料，对照组(n=24)植入羟基磷灰石/壳聚糖单体结构材料，术后4，8，12周分别进行放射性核素骨显像、X射线片检查、组织形态学、CD31免疫组化染色及血管内皮生长因子蛋白检测。动物实验得到江西省人民医院伦理委员会批准。
结果与结论：①电镜下可见，多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构材料孔隙相通，具有良好的空间结构，其表面吸附的骨髓间充质干细胞多于羟基磷灰石/壳聚糖单体结构材料。②放射性核素骨显像显示，实验组术后各时间点的血池成像均高于对照组(P < 0.05)。③X射线片显示，实验组各时间点的骨痂形成多于对照组。④苏木精-伊红染色显示，实验组术后12 周时骨缺损植骨区域内可见大量的新生血管及成骨，对照组术后12周时仅见骨折断端少许再生血管及成骨细胞附着；CD31免疫组化染色显示，实验组各时间点的微血管密度高于对照组(P < 0.05)。⑤Western Blot检测显示，实验组各时间点的血管内皮生长因子蛋白表达均高于对照组(P < 0.05)。⑥结果表明，多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构材料较其单体结构具有更加良好的成骨与成血管能力。

https://orcid.org/0000-0003-4899-6049 (龙智生)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 成骨, 成血管, 多尺度微管结构, 组织工程骨, 羟基磷灰石, 壳聚糖, 人工骨

Abstract: BACKGROUND: Early studies have confirmed that multi-scale hydroxyapatite/chitosan microtubules are excellent in osteogenesis. Angiogenesis is critical in the process of osteogenesis. It is significant to explore the role of tube structure with multi-scale microtubules in its vascularization and related mechanisms.
OBJECTIVE: To explore the effect of multi-scale hydroxyapatite/chitosan microtubule structure on rabbit bone defect repair and vascularization.
METHODS: Multi-scale hydroxyapatite/chitosan microtubule structure and hydroxyapatite/chitosan monomer structure were constructed and co-cultured with bone marrow mesenchymal stem cells for 21 days. The adsorption ability of the material to cells and the cell state were observed under the electron microscope. Bone defect models were made on the radius of 48 adult New Zealand white rabbits. Rabbits in the experimental group (n=24) were implanted with multi-scale hydroxyapatite/chitosan microtubule structure material. Rabbits in the control group (n=24) were implanted with hydroxyapatite/chitosan monomer structure material. Emission computed tomography, X-ray, histomorphological examination, and immunohistochemistry for CD31 and vascular endothelial growth factor protein detection were performed at 4, 8, and 12 weeks after surgery. The animal experiment was approved by the Ethics Committee of Jiangxi Provincial People’s Hospital.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Under the electron microscope, the multi-scale hydroxyapatite/chitosan microtubule structure materials were interlinked and had a good spatial structure. The number of bone marrow mesenchymal stem cells on the multi-scale hydroxyapatite/chitosan microtubule structure material was more than that on the hydroxyapatite/chitosan monomer structure material. (2) Emission computed tomography exhibited that the blood pool image was higher in the experimental group than that in the control group at various time points after surgery (P < 0.05). (3) X-ray films showed that the formation of multi-scale microtubules was more obvious in the experimental group than that in the control group. (4) Hematoxylin-eosin staining demonstrated that at 12 weeks after surgery, the appearance of osteoblasts and angiogenesis was obvious in the experimental group; only a few regenerated blood vessels and osteoblast attachment were found at the fractured end in the control group. Immunohistochemistry for CD31 exhibited that the microvessel density of the experimental group was higher than that of the control group at each time point (P < 0.05). (5) Western blot assay results displayed that the expression of vascular endothelial growth factor protein in the experimental group was higher than that in the control group at each time point (P < 0.05). (6) The results showed that the multi-scale hydroxyapatite/chitosan microtubule structure had better osteogenesis and vascularization ability than its monomer structure.

Key words: osteogenesis, angiogenesis, multi-scale microtubule structure, tissue-engineered bone, hydroxyapatite, chitosan, artificial bone

中图分类号:

龙智生, 熊龙, 龚飞鹏, 李经堂, 曾建华, 邓颖, 兰敏, 孔维豪, 陈钢. 多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构人工骨对兔骨缺损修复及成血管的影响[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(34): 5436-5441.

Long Zhisheng, Xiong Long, Gong Feipeng, Li Jingtang, Zeng Jianhua, Deng Ying, Lan Min, Kong Weihao, Chen Gang. Effect of artificial bone with multi-scale hydroxyapatite/chitosan microtubule structure on rabbit bone defect repair and angiogenesis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(34): 5436-5441.

图/表（结果） 8

2.1 骨髓间充质干细胞的形态光镜下可见第3代骨髓间充质干细胞呈单一均匀梭形，贴壁生长，见图1。

2.2 多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构及对细胞的吸附能力电镜下观察通过生化过程所合成的多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构材料，可见多级微管结构孔隙相连，多个管道相通，具有较为理想的立体空间结构，见图2A、B；羟基磷灰石/壳聚糖单体结构形态单一，无相应的孔隙及微管连接。电镜扫描下可见多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构材料表面的骨髓间充质干细胞附着良好，见图2C，而羟基磷灰石/壳聚糖单体结构表面的骨髓间充质干细胞附着较少，见图2D。

2.3 两组动物体内成骨能力评价结果两组术后的血池像感兴趣区平均计数逐渐升高，至术后8周时达到高峰，随后下降，多尺度微管组术后各时间点的血池像感兴趣区平均计数均高于单体结构组(P < 0.05)，见表1。

2.4 两组动物体内骨缺损部位X射线片检查结果术后不同时间点两组骨缺损部位X射线片检查结果，见图3。

微管结构组术后4 周截骨处有少量骨痂影形成，材料与骨折断端分界仍清楚；8 周时截骨处骨痂影形成较4 周明显增多；12 周时植入材料与受体断端结合紧密，骨量进一步增加，骨折线模糊。单体结构组术后4 周时植入材料少部分降解，断端骨痂影形成，截骨线稍清晰；8 周时植入材料与宿主骨之间接触界清晰，骨痂影增多不明显；12 周时骨量比8周稍多。
2.5 两组体内骨缺损部位苏木精-伊红染色结果见图4。

微管结构组术后4 周时植入材料骨髓腔一侧可见一些游离的骨质，骨细胞数量丰富，排列较紊乱，可见明显的新生血管，骨质表面可见附着的成骨细胞；8周时见数量较多骨细胞增生及周围新生血管长入；12 周可见骨缺损植骨区域内大量的新生血管及成骨。单体结构组术后4 周时骨细胞及新生血管不明显，8 周时骨折断端少许再生血管及成骨细胞附着，12 周时类似8周时成骨及血管情况。
2.6 两组体内骨缺损部位CD31免疫荧光及血管生成结果随着手术后时间的推移，微管结构组CD31表达逐渐升高，单体结构组升高不明显，微管结构组各时间点的微血管密度计数多于单体结构组(P < 0.05)，见图5。

2.7 两组体内骨缺损部位血管内皮生长因子蛋白表达两组植入材料周围均有血管内皮生长因子蛋白表达，对两组灰度条进行相应分析可见，随着时间推移，微管结构组血管内皮生长因子蛋白表达不断升高，8周后达到顶峰，单体结构组升高不明显；微管结构组术后不同时间点的血管内皮生长因子蛋白表达均高于单体结构组(P < 0.05)，见图6。

2.8 材料生物相容性由体外细胞吸附实验与体内修复实验可知，多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构材料具有良好的生物相容性。

参考文献

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引言

材料方法

1.1 设计体内、外观察性实验，采用两样本均数的t检验。
1.2 时间及地点实验于2020年1-12月在江西省人民医院临床试验中心完成。
1.3 材料羟基磷灰石微球、聚己内酯微球购自北京北科新材料科技有限公司。
1.3.1 实验动物 48只成年雄性新西兰大白兔，体质量2.5-3.0 kg；2只4周龄雌性SD大鼠，体质量约100 g，均由南昌大学医学院动物科研所提供，许可证号：SYXK(赣)2010-0002。实验已经江西省人民医院伦理委员会批准。
1.3.2 实验试剂与仪器酶标仪(RT-6100，Rayto)；研磨仪(KZ-II，Servicebio)；台式高速冷冻离心机(D3024R，DRAGONLAB)；掌上离心机(D1008E，Servicebio)；涡旋混合器(MX-F，Servicebio)；磁力搅拌器(MS-PB)；超声波细胞破碎仪(JY92-11N，宁波新芝生物)；灰度分析软件(alphaEaseFC，alphaEaseFC)；化学发光仪(6 300，CLINX)；RIPA裂解液(G2002，Servicebio)；BCA蛋白定量检测试剂盒(G2026， Servicebio)；SDS-PAGE凝胶制备试剂盒(G2003，Servicebio)；蛋白Marker(26617，Servicebio)；β-actin(GB12001，Servicebio)；HRP标记山羊抗兔(G2006，Servicebio)；HRP标记驴抗山羊(G2013， Servicebio)；TBS缓冲液(G0001-2L，Servicebio)；电泳缓冲液(G2018，Servicebio)；大鼠CD31/CD34 抗体(一抗)、羊抗兔 IgG(二抗)(北京博奥森生物技术有限公司)；血管内皮生长因子A抗体(Servicebio)；倒置相差显微镜、光学显微照相系统(日本，Olympus公司)；扫描电子显微镜(日本， HITACHI公司)。
1.4 实验方法
1.4.1 羟基磷灰石/壳聚糖多尺度微管结构的构建将羟基磷灰石微球、聚己内酯微球溶于30%的丙酮溶液中，并加入莰烯，摸索不同羟基磷灰石微球、莰烯、聚己内酯微球的比例，在50 ℃高温下进行12 h的球磨均质化处理。将制作出支架模型进入平台上的乙醇/蒸馏水温控床，通过调节乙醇/蒸馏水比例、温度，使之初步形成12 mm×12 mm×1 mm格状微管道并带有最大300 μm×300 μm孔隙的结构多尺度微孔道结构，经过12 h的干燥最终形成固态中空羟基磷灰石微球修饰多级微管多孔仿生骨。后期依据本团队前期(YAO等[5]方法)探索的相应条件将多级仿生骨与壳聚糖进行相应的混合，得到多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构复合材料。其相应单体结构为单纯羟基磷灰石/壳聚糖混合形成，所有材料均由南昌大学材料研究所提供。
1.4.2 骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定麻醉后处死2只4周龄SD大鼠，取四肢股骨，用DMEM培养基反复冲洗骨髓腔，过滤组织块得到细胞悬液，1 000 r/min 离心5 min，弃上清液，加入3 mL含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液吹打混匀，以细胞浓度为(6-8)×109 L-1接种于培养皿，置于 37 ℃、体积分数5%CO2培养箱中培养，当细胞达到约80%融合量时消化传代，显微镜下观察细胞形态，鉴定细胞为骨髓间充质干细胞。当传至第3代时，消化制备细胞浓度为3×108 L-1的悬液备用[6]。
1.4.3 细胞与支架复合培养实验分为2组，将多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构与羟基磷灰石/壳聚糖单体结构材料分别与含骨髓间充质干细胞的DMEM培养液共培养，材料尺寸为10 mm×5 mm×2 mm，细胞接种浓度为3×108 L-1，培养液体积为50 mL，细胞数量为4×104。将培养板平稳放入培养箱静置，间隔 30 min取出，按上述细胞悬液及培养液比例循环滴加6次，培养至21 d备用。
1.4.4 细胞的吸附能力取共培养的21 d支架，PBS冲洗，电镜固定液固定，无水乙醇梯度脱水、干燥，电镜下观察骨髓间充质干细胞的吸附能力及细胞状态。
1.4.5 动物实验
骨缺损造模及分组处理：取48只成年新西兰大白兔，腹腔注射3%戊巴比妥钠10 mL/kg麻醉，常规一侧前臂脱毛、消毒、手术铺巾，前臂前外侧3.0-4.0 cm 纵行切口，暴露桡骨干，在暴露的桡骨中段测量出12 mm 长度用线锯连同骨膜一并切除。随机分2组处理，每组24只，分别植入多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构材料与羟基磷灰石/壳聚糖单体结构材料，分两层缝合。局部不作内外固定，术后常规喂养，每天一次肌注青霉素80×104 U，共3 d，预防手术伤口感染。观察动物术后活动、饮食及手术创口是否感染及伤口的反应。
放射性核素骨显像评估成骨能力：术后4，8，12 周，两组中随机选取4只动物麻醉后进行放射性核素骨显像。由耳缘静脉植入静脉针按18.5 MBq/kg 呈“弹丸式”将放射性同位素制剂99Tcm-亚锡亚甲基二膦酸盐注入，注意防止药液外渗组织中，立即进行1帧/5 min，采集20帧，获得一幅全身动脉血流影像即“血流像”，接着按1 帧/min采集5 帧，即“血池像”。应用Pegasys 软件包于骨缺损区与对侧相应感兴趣区0.5 cm×0.5 cm，利用感兴趣区平均计数进行统计学分析。
X射线片检查：术后4，8，12周，对两组实验动物骨缺损处进行X射线片检查，记录大体骨缺损愈合情况。
苏木精-伊红染色：术后4，8，12 周，每组取出完整桡骨植入材料复合物，进行多聚甲醛固定、EDTA脱钙、石蜡包埋、切片、苏木精-伊红染色，倒置显微镜下观察及拍照，评估其成骨及血管生成状态。
CD31免疫组织荧光染色：术后4，8，12 周，每组取出兔桡骨植入材料复合物，进行多聚甲醛固定、EDTA脱钙、石蜡包埋、切片、脱蜡。正常山羊血清封闭，37 ℃孵育10 min，滴加一抗4 ℃过夜，PBS洗片5 min×3 次。滴加二抗37 ℃孵育 30 min，PBS 洗片5 min×3 次。鼠抗CD31荧光素酶抗体(0.1%牛血清白蛋白稀释抗体，均为 1∶50)；放置至室温，PBS冲洗3 次，每次5 min；滴加荧光二抗，37 ℃ 放置1 h；PBS摇床晃洗3次，每次15 min；DAPI 1∶1 000 稀释滴加于切片上，染色5 s；PBS清洗5 min×3次，荧光封固剂封固，-20 ℃ 保存；荧光显微镜拍照，CD31阳性表达组织发出红色荧光，新生血管情况采用微血管密度计数。计数参照 Weidner法，先于低倍(×40)光学显微镜下浏览切片，找寻血管密集、染色对比度较高的区域；然后随机观察3个高倍镜(×200)视野，取其平均值为微血管密度[7]。
Western Blot检测血管内皮生长因子蛋白表达：术后4，8，12 周，将组织块桡骨植入材料复合物用预冷的PBS洗涤两三次，去除血污，剪成小块置于匀浆管中，加入一两个3 mm的匀浆珠，加入10倍组织体积的裂解液(使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂)，设置匀浆程序进行匀浆；如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少裂解液体积；将匀浆完成的匀浆管取出，放置冰上裂解液30 min，每隔5 min震荡一次确保组织完全裂解；4℃下12 000 r/min离心10 min，收集上清。加入TEMED后立即混合均匀，将分离胶灌到适当的的高度，灌胶之前可以用梳子试一下，梳子齿距离分离胶上液面5-8 mm为宜。然后将纯水缓慢均匀加入到分离胶上层，直至加满。大约30 min后待分离胶凝固即可倒去分离胶上层水并用吸水纸将剩余水吸干，制胶器放入电泳槽后加足够的电泳液后上电泳。浓缩胶电压75 V，分离胶用120 V。电泳至溴酚蓝里最底部大约1 cm即可终止电泳进行转膜，回收内皮生长因子A一抗，用TBST快速涮洗膜3次，然后加入TBST，放置脱色摇床上快速洗脱，每次5 min，洗3次；将HRP 标记的二抗用TBST按照1∶5 000的比例进行稀释，然后加入孵育槽中，放置摇床上慢摇，室温下孵育30 min；用TBST快速涮洗膜3次，然后再加入TBST，放置脱色摇床上快速洗脱，每次5 min，洗3次。胶片进行扫描存档，PhotoShop整理去色，Alpha软件处理系统分析目标带的光密度值。
1.5 主要观察指标 ①两组材料对骨髓间充质干细胞的吸附能力；②两组材料的体内成骨与成血管能力；③两组材料术后不同时间点成血管相应分子CD31及血管内皮细胞生长因子蛋白表达情况。
1.6 统计学分析实验数据均以x±s 表达，使用SPSS 20.0软件进行统计学分析，计量资料表达情况采用两样本均数的T检验，P < 0.05代表两组之间差异有显著性意义。

讨论

骨组织工程技术的兴起和快速发展为解决大段骨缺损修复难题带来了新的希望[8]，骨组织工程构成的重要因素是骨生长支架，它在调控种子细胞募集、血管再生及成骨微环境中发挥重要作用[9-10] 。良好的支架结构可以通过其空间的拓扑结构及微观尺度差异实现相应的细胞附着及血管内皮生成，从而实现良好的骨再生[11]。因此，如何构建理想支架并促进成血管成骨是骨缺损修复亟待解决的问题，其中仿生骨构建是重要研究方向[12]。目前在仿生骨构建过程中发现多级微管结构能够起到良好的成骨作用，其成骨过程是否与其空间结构特殊相关及是否能够促进周边新生血管的再生，并无文献证实。多级微管结构与天然骨结构具有较为类似的空间构造 [13-14]，如何更深层次地探索天然骨组织的空间结构能为研究并设计多级微管提供参考。可喜的是，近20年来人们在天然骨组织的空间层级结构上有了新的认识，1998 年WEINER等[15]最早提出天然骨包含了从纳米层级的胶原分子到宏观的整体骨骼尺度各异的共7 级结构。随着纳米级3D成像的出现，2014年定义了9个层次级别，2018年国际著名期刊《Science》刊文显示最低级别已至纳米级，并且提出骨骼的12个层级结构理论[16]。天然骨组织空间结构上的研究极大地推动了骨组织工程的发展，同时也为多级微管治疗骨缺损提供了相应的参考。

设计微管三维结构目前有物理、化学及3D 打印等方法，物理或化学方法构建的微管孔隙精确度、形状难以控制，而3D 打印技术空间分辨率有限，很难构建微纳米级以下结构，因此结合两者的优点制备理想的微管结构成为骨支架构建的趋势，但模仿出与天然骨内在微细结构完全一样的微管还不能实现[17]。目前研究证实，不同层级的结构功能不同，小尺度结构(< 10 μm)更容易被组织液浸渍，提供更多的细胞吸附位点；中等尺度结构(20-40 μm)有利于原始巨噬细胞向M2型转化，并上调抗炎基因表达抑制宿主对移植物的免疫反应，这对于宿主细胞特别是间充质干细胞长入至关重要；大尺度(> 100 μm)有利于血管形成、细胞归巢、定植，为形成细胞集落提供场所[18]。微纳米级多级微管结构使黏附的巨噬细胞发生相应的形变，导致细胞骨架张力的增加，张力的变化导致M型巨噬细胞向M2型转化，M2 型巨噬细胞上调血管内皮生长因子基因的表达，分泌血管内皮生长因子，促进血管生成[19]。微纳米级多级结构抑制免疫排斥反应，减少炎症因子生成，进而提供了促进血管生成的微环境[20]。因此尽量模拟出天然骨的不同层级结构，包涵从纳米、微米至毫厘米不同尺度，再按功能需求组配，成为构建具有良好功能的多级微管重要指导思想。通过兔桡骨骨缺损修复实验得出，相对于单体结构，羟基磷灰石/壳聚糖多级微管结构在成骨与成血管方面具有明显优势，电镜图显示多级微管结构空隙相通，为间充质干细胞的附着归巢提供了良好的空间场所，该研究从现象上证实了多级微管的空间结构具有优良的成骨及成血管能力，为后续更深层次机制的探索奠定了基础。

总之，多级微管结构通过空间方面的优势能为成骨及成血管创造良好的条件，其成骨的优势可能与新生血管相关，后期通过对其机制的进一步探索，为下一步工程人工骨的构建可提供新的指导思想。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

多尺度羟基磷灰石/壳聚糖微管结构人工骨对兔骨缺损修复及成血管的影响

Effect of artificial bone with multi-scale hydroxyapatite/chitosan microtubule structure on rabbit bone defect repair and angiogenesis

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