MPTP诱导帕金森病小鼠亚急性与慢性模型的比较及评价

doi:10.12307/2022.231

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (8): 1247-1252.doi: 10.12307/2022.231

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MPTP诱导帕金森病小鼠亚急性与慢性模型的比较及评价

陈世坚1，李舸2，张钰2，关雅伦2，李雪娇2，刘书华2，李永超2，李韵峰2，高金风1，魏小月1，赵宇红1

1广东药科大学，广东省广州市 510006；2广东省实验动物重点实验室，广东省实验动物监测所，广东省广州市 510663

收稿日期:2020-11-17 修回日期:2020-11-19 接受日期:2021-01-31 出版日期:2022-03-18 发布日期:2021-11-02
通讯作者: 赵宇红，博士，副教授，广东药科大学，广东省广州市 510006
作者简介:陈世坚，男，1995年生，广东省揭阳市人，汉族，广东药科大学在读硕士，主要从事神经药理学研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(31702074)，项目负责人：李舸；广东省科技计划项目基金(2017A03030303080)，项目负责人：赵宇红

Comparison and evaluation of MPTP-induced subacute and chronic models of Parkinson’s disease in mice

Chen Shijian1, Li Ge2, Zhang Yu2, Guan Yalun2, Li Xuejiao2, Liu Shuhua2, Li Yongchao2, Li Yunfeng2, Gao Jinfeng1, Wei Xiaoyue1, Zhao Yuhong1

1Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China; 2Guangdong Key Laboratory of Experimental Animals, Guangdong Laboratory Animal Monitoring Institute, Guangzhou 510663, Guangdong Province, China

Received:2020-11-17 Revised:2020-11-19 Accepted:2021-01-31 Online:2022-03-18 Published:2021-11-02
Contact: Zhao Yuhong, MD, Associate professor, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China
About author:Chen Shijian, Master candidate, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 31702074 (to LG); the Science and Technology Plan of Guangdong Province, No. 2017A03030303080 (to ZYH)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(1-Methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP)：具有神经毒性，经常用于实验动物帕金森疾病模型的构建。MPTP在全身给药后，因其高度亲脂性而迅速穿过血脑屏障，一旦进入大脑，原毒素MPTP通过非多巴胺能细胞内的单胺氧化酶B(MAO-B)代谢成1-甲基-4-苯基-2，3-二氢吡啶鎓，然后迅速催化生成活性毒性化合物1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)。它一旦进入多巴胺能神经元，便可被分离到突触体囊泡中或被浓缩在线粒体内，抑制线粒体复合物Ⅰ并耗尽神经元ATP的储存，从而导致多巴胺能神经元的丢失。
酪氨酸羟化酶(tyrosine Hydroxylase，TH)：催化酪氨酸生成左旋多巴，是介导多巴胺生物合成的关键限速步骤。因此，运动评价和TH的表达及活性检测是帕金森病的重要指标，能较好地反映帕金森的疾病发展进程。
背景：1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(1-Methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP)诱导的帕金森病小鼠模型是较为广泛使用的帕金森病动物模型之一，可以部分反映帕金森病的发病过程和病理特征。
目的：利用MPTP诱导建立小鼠亚急性和慢性帕金森病模型，观察两种动物模型在行为学、组织病理学及相关蛋白水平变化上的异同及其与疾病临床症状的差异性。
方法：C57BL/6J雄性小鼠40只随机分为4组：亚急性模型组小鼠腹腔注射MPTP，25 mg/kg，1次/d，连续注射7 d诱导亚急性模型；对照1组腹腔注射生理盐水；慢性模型组小鼠皮下注射MPTP(25 mg/kg)并腹腔注射丙磺舒(Probenecid，250 mg/kg)，每间隔3.5 d注射1次，共10次诱导慢性模型；对照2组腹腔注射Probenecid溶剂。通过疲劳转棒实验与爬杆实验测试小鼠行为变化；利用免疫荧光染色检测脑黑质区酪氨酸羟化酶阳性细胞分布；采用免疫印迹法检测脑组织中酪氨酸羟化酶蛋白表达水平。研究所涉及的动物实验获得广东省实验动物监测所AAALAC认证机构动物实验动物使用与管理委员会(IACUC)批准[IACUC2020137]。
结果与结论：①在亚急性小鼠模型中，疲劳转棒实验结果显示小鼠在加速转动的转棒上停留时间较对照1组显著降低(P < 0.05)；在爬杆实验中，小鼠从杆顶部运动到底部的时间较对照1组显著增加(P < 0.05)，但黑质区的酪氨酸羟化酶的阳性细胞数及酪氨酸羟化酶蛋白表达与对照1组相比无显著差异；②在慢性模型小鼠中，疲劳转棒的停留及爬杆实验总时间与对照2组相比均无显著差异，但黑质区酪氨酸羟化酶阳性细胞数量及酪氨酸羟化酶蛋白表达水平显著低于对照2组(P < 0.05)；③结果说明，MPTP诱导的亚急性和慢性帕金森小鼠模型由于造模方式的差异，分别在运动损伤和病理改变中表现出与人帕金森病部分相似的表型，提示在利用上述两种模型开展相关研究中，需根据实验目的选择适当的动物模型开展。

https://orcid.org/0000-0003-2976-5595 (赵宇红)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 帕金森病, MPTP, 亚急性模型, 慢性模型, 酪氨酸羟化酶

Abstract: BACKGROUND: A mouse model of Parkinson's disease that is inducted by 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine (MPTP) is one of the widely used animal models that partly reflects the pathogenesis and pathological characteristics of Parkinson’s disease.
OBJECTIVE: To establish subacute and Chronic Parkinson's disease models using MPTP, and to observe the similarities and differences between the two animal models in behavior, histopathology, and changes in related protein levels, and their differences with the clinical symptoms of the disease.
METHODS: Forty C57BL/6J mice were randomized into four groups. In subacute model group, mice were injected with MPTP 25 mg/kg/d intraperitoneally for 7 days. In control group 1, injected with normal saline intraperitoneally; chronic model group, injected with MPTP subcutaneously at 25 mg/kg, and then with probenecid at 250 mg/kg intraperitoneally. In the chronic model group, MPTP+probenecid were injected at an interval of 3.5 days for a total of 10 times to induce a chronic model. In control group 2, mice were injected with probenecid intraperitoneally. The behavioral changes of mice were tested by the rotarod and the pole tests, and the distribution of tyrosine hydroxylase positive cells in the substantia nigra was detected by immunofluorescence staining, and the expression level of tyrosine hydroxylase protein in brain tissue was detected by western blot. The study protocol was approved by the Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) of Guangdong Laboratory Animal Monitoring Institute with AAALAC Certification (No. IACUC 2020137).
RESULTS AND CONCLUSION: In the subacute mouse model, the results of the rotarod test showed that the residence time of the mice on the accelerated rotating rod was significantly reduced compared with the control group 1 (P < 0.05). In the pole test, the time for the mice to move from the top of the pole to the bottom increased significantly compared with the control group 1 (P < 0.05). However, the number of tyrosine hydroxylase positive cells in the substantia nigra and the expression of tyrosine hydroxylase protein were not significantly different from those of the control group 1. In the chronic mouse model, there was no significant difference in the total time of rotarod stay and the pole test compared with the control group 2, but the number of tyrosine hydroxylase positive cells in the substantia nigra and the tyrosine hydroxylase protein expression level were significantly lower than those of the control group 2 (P < 0.05). Therefore, MPTP-induced subacute and chronic Parkinson’s model mouse models show partial similar phenotypes to human Parkinson's disease in sports injuries and pathological changes due to differences in modeling methods, suggesting that it is necessary to select an appropriate animal model based on the study purpose.

Key words: Parkinson’s disease, MPTP, subacute model, chronic model, tyrosine hydroxylase

中图分类号:

陈世坚, 李舸, 张钰, 关雅伦, 李雪娇, 刘书华, 李永超, 李韵峰, 高金风, 魏小月, 赵宇红. MPTP诱导帕金森病小鼠亚急性与慢性模型的比较及评价[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1247-1252.

Chen Shijian, Li Ge, Zhang Yu, Guan Yalun, Li Xuejiao, Liu Shuhua, Li Yongchao, Li Yunfeng, Gao Jinfeng, Wei Xiaoyue, Zhao Yuhong. Comparison and evaluation of MPTP-induced subacute and chronic models of Parkinson’s disease in mice[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(8): 1247-1252.

图/表（结果） 4

2.1 实验动物数量分析实验选用小鼠40只，分为4组，实验过程无死亡，全部进入结果分析。
2.2 小鼠一般状态观察亚急性模型组和慢性模型组小鼠均在给予MPTP半小时后出现、立毛、弓背、肢体僵硬、行动缓慢，随后出现平衡障碍、身体震颤等现象，对外界刺激反应低下，12 h后恢复正常状态。
2.3 行为学检测
2.3.1 疲劳转棒实验实验结果表明，亚急性模型组在转棒上的停留时间相较于对照1组小鼠显著降低。在慢性实验中，慢性模型组小鼠的停留时间较慢性对照2组稍有减少，但无显著性差异，亚急性模型组与慢性模型组相比，在转棒的停留时间上，慢性模型组显著增加(P < 0.05)，见表1。 2.3.2 爬杆实验实验结果显示，在亚急性实验中，相比对照1组，亚急性模型组小鼠完成爬杆实验的时间明显增加，两组数据对比差异有显著性。在慢性实验中，对照2组小鼠和慢性模型组小鼠的平均爬杆时间无明显差异；亚急性模型组与慢性模型组小鼠相比，完成爬杆所需的时间慢性模型组完成时间更短，差异有显著性意义(P < 0.05)，见表1。

2.4 黑质区酪氨酸羟化酶多巴胺能神经元数目对脑黑质区酪氨酸羟化酶阳性细胞免疫荧光染色后显示，亚急性模型组的黑质致密部酪氨酸羟化酶阳性细胞分布较对照1组有减少趋势，但进一步对酪氨酸羟化酶阳性细胞计数显示，亚急性模型组较对照1组无显著性差异；慢性模型组黑质致密部酪氨酸羟化酶阳性细胞分布较对照2组减少，进一步对酪氨酸羟化酶阳性细胞计数显示，慢性模型组较对照2组差异有显著性意义(P < 0.001)。慢性模型组相比较于亚急性模型组，脑黑质区酪氨酸羟化酶阳性细胞数显示有降低的趋势，但差异无显著意义(P > 0.05)，见表2，图1。

2.5 酪氨酸羟化酶蛋白定量分析为进一步比较两种模型造模后多巴胺神经元的损伤情况，利用Western blot对脑半球的酪氨酸羟化酶蛋白水平进行了定量分析。结果显示，亚急性模型组虽然有下降趋势，但与对照1组相比差异无显著性意义；而慢性模型组脑组织内酪氨酸羟化酶的表达量显著低于对照2组(P < 0.001)，慢性模型组相较于亚急性模型组脑内酪氨酸羟化酶蛋白表达有降低的趋势，但差异无显著意义(P > 0.05)，见表3，图2。

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引言

帕金森病是一种常见于中老年人的神经退行性疾病。其主要临床表现为静止性震颤、肌强直、姿势调节障碍、运动迟缓、严重者伴有记忆障碍等痴呆症状[1-2]。帕金森病的主要病理变化是黑质致密带的多巴胺能神经元选择性消除、残存神经元胞质内路易小体的出现及纹状体内神经末梢的退行性变[3-4]。
帕金森病发病机制复杂，目前临床帕金森病主要以辅助治疗为主[5]。为了更深入地理解帕金森病的病理进程，开发新的治疗方案，建立能够较好模拟患者症状的动物模型将是开展上述研究的基础。目前已建立的帕金森病动物模型主要分为神经毒剂损伤模型和基因工程模型[3，6-7]，前者主要包括1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶(1-Methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP)和6-羟基多巴诱导的大小鼠模型，以及利血平、鱼藤酮、百草枯等诱导的线虫模型等；后者主要是在小鼠和果蝇等模式动物上建立的基因修饰模型。其中，MPTP诱导的帕金森病小鼠模型是较为广泛使用的帕金森病动物模型之一[8-9]，可以部分反映帕金森病的发病过程和病理特征。根据造模方式的不同，MPTP诱导的小鼠帕金森病模型又可以分为急性和慢性模型，其中，急性模型损伤发生较快且在较短的时间内发生恢复[10-12]，很难模拟人类帕金森病长期缓慢进展的特征。而通过MPTP诱导的小鼠慢性帕金森病动物模型主要表现为纹状体多巴胺含量缓慢下降并维持在较低的水平[10，13-14]，并且在模型形成过程中神经损伤和修复是同时存在的，与人类帕金森病慢性进行性的病程特点较为一致[15-16]。但目前关于慢性模型与急性模型的比较研究还相对较少，因此，此次研究通过比较亚急性和慢性帕金森病模型的动物行为和组织病理学变化，对比验证慢性模型在研究帕金森病发病机制中的可靠性。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。
1.2 时间及地点实验于2020年11月在广东省实验动物监测所以及广东药科大学完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 12周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠40只由广东省实验动物监测所提供，许可证号：SYXK(粤)2016-0122，所有小鼠于广东省实验动物监测所SPF级小鼠设施饲养，许可证号：SCXK(粤)2018-0044，饲养期间动物自由采食饮水。研究所涉及的动物实验获得广东省实验动物监测所AAALAC认证机构动物实验动物使用与管理委员会(IACUC)批准[IACUC2020137]。
1.3.2 主要仪器与试剂 MPTP，丙磺舒(Probenecid)，FluoroshieldTM with DAPI(M0896，P8761，F6057，SIGMA，美国)；Tris-HCl，1 mol/L，pH 6.8(B101-05，GenStar，中国)；生理盐水(A20020302，江西科伦药业有限公司，中国)；小鼠抗酪氨酸羟化酶 (tyrosine hydroxylase，TH) 单克隆抗体(MAB318，Millipore，美国)；Anti-mouse IgG Alexa Fluor(R)488，Anti-mouse
IgG HRP-linked antibody(4408s，7074S，Cell Signaling Technology，美国)；0.01 mol/L PBS，浓缩型正常山羊血清，柠檬酸钠抗原修复液(AR0030，AR1009，AR0024，博士德生物，中国)；冰冻切片机，正置荧光显微镜(CM1950，DM2500，Leica，德国)；疲劳转棒仪(ZB200，泰盟，中国)，自制爬杆行为学测试系统。
1.4 实验方法
1.4.1 动物分组及处理 C57BL/6J雄性小鼠共有40只，20只用于对照和建立亚急性帕金森病模型[17]，20只用于对照和建立慢性帕金森病模型。适应性饲养7 d，随机分为4组，每组10只，动物在造模前连续进行3 d行为学预训练。
亚急性模型组给予MPTP腹腔注射7 d，停药后第2天开始行为学实验，实验持续3 d，实验完成第2天处死，按文献方法[18]，用生理盐水心脏灌注固定后，将右脑于40 g/L多聚甲醛4 ℃保存，进行免疫荧光实验，左脑冻存在-80 ℃，进行蛋白检测，见图1A。

慢性模型组给予MPTP+Probenecid处理，每隔3.5 d注射1次，共10次，停药后第2天开始行为学实验，实验持续3 d，实验完成第2天处死，解剖取脑组织，用生理盐水心脏灌注固定后，将右脑于40 g/L多聚甲醛4 ℃保存，进行免疫荧光实验，左脑冻存在-80 ℃，进行蛋白检测，见图1B。

造模阶段，将MPTP溶解于灭菌生理盐水后配制成 5 g/L的溶液，Probenecid溶于1 mol/L Tris-HCl(pH 6.8)后加入到0.1 mol的NaOH配置成250 mg/kg的溶液。亚急性模型组小鼠腹腔注射MPTP，25 mg/kg，1次/d，连续注射7 d，对照1组注射生理盐水；慢性模型小鼠皮下注射MPTP， 25 mg/kg，腹腔注射Probenecid，250 mg/kg，两种药物每间隔3.5 d注射1次，共10次，对照2组注射对应的溶剂。
1.4.2 疲劳转棒测试参考文献[19-20]方法，造模前3 d进行预训练，正式实验在最后一次给药后24 h进行。实验方法如下，将动物置于旋转棒上。将旋转棒设置为在300 s内以10-40 r/min的线性加速旋转。当动物从杆上掉下被自动传感器捕获并记录在旋转棒上停留的时间。在预训练期间，小鼠每天进行3次实验，每实验间隔最少为30 min。每天进行疲劳转棒实验，以正式实验3 d测得的停留时间的平均值作为实验结果。
1.4.3 爬杆测试按文献[21-22]方法，制作一个直径1 cm，长50 cm并且顶端固定有一个直径为5 cm小球的杆，并且在杆上缠上纱布以增加动物攀爬的摩擦，将杆垂直放置。将小鼠头朝小球放置在杆上，记录小鼠完全转为头向下爬到爬杆底部的时间。每只小鼠每天3次实验，每次试验间隔最少为30 min，连续3 d，记录数据，取均值。

1.4.4 免疫荧光染色检测脑黑质区酪氨酸羟化酶的阳性细胞数按文献[18]方法，组织样品在4 ℃下20%，30%梯度蔗糖中沉淀过夜后，浸泡于40 g/L多聚甲醛溶液保存。取出后OCT包埋，于冰冻切片机冠状切片，按照小鼠脑定位图谱[23]，在黑质区(从前囟-2.69 mm到前囟-4.03 mm)连续切片，制作厚度10 μm的冰冻切片，将切片烘干后，浸泡在柠檬酸钠抗原修复液中，微波炉中高火加热5 min进行抗原修复，晾至室温后，0.01 mol/L PBS溶液洗涤3次×5 min，加山羊血清封闭液(0.01 mol/L PBS+山羊血清)，封闭1 h后，加入小鼠抗酪氨酸羟化酶+0.01 mol/L PBS配制一抗孵育液(1∶200)，4 ℃孵育过夜，0.01 mol/L PBS溶液洗涤3次×5 min，Anti-mouse IgG Alexa Fluor(R)488二抗孵育液+0.01 mol/L PBS(1∶100)，室温孵育1 h，加Fluoroshield with DAPI封固。按文献[24]方法计数，在荧光显微镜100倍视野观察，将右半脑区域分成4个部分，每个部分拍一张图，再将4张图拼接后形成整个右半脑图，并计数每个脑图黑质区酪氨酸羟化酶的阳性细胞数目取平均值，图像结果运用Image J软件进行分析。
1.4.5 Western Blot检测小鼠脑半球的酪氨酸羟化酶蛋白表达按文献[18]方法取出的脑组织(约50 mg)，按1∶10的体积比加入预冷的RIPA裂解液后充分匀浆至完全裂解，12 000 r/min在冷冻机上离心30 min，取上清定量，10% SDS-PAGE电泳分离，湿转至PVDF膜，5 % BSA封闭1 h，加入酪氨酸羟化酶一抗(稀释比例1∶1 000)后4 ℃孵育过夜，TBST洗脱3次×10 min，HRP抗小鼠IgG室温孵育2 h后，TBST洗脱1 h，经曝光、显影后，利用Image J图像分析软件选取目标条带的图像，设置8-bit图像，分析灰度值，通过软件计算灰度值的峰面积，再以下列公式计算蛋白表达的相对定量。
相对蛋白定量=目的蛋白的灰度值/内参的灰度值
1.5 主要观察指标 ①小鼠一般状态观察；②行为学变化；③黑质区酪氨酸羟化酶多巴胺能神经元数目；④酪氨酸羟化酶蛋白定量分析。
1.6 统计学分析实验数据用SPSS 13.0和Image J软件进行统计学分析，图像用GraphPad Prism 6软件进行分析，采用因素方差分析的统计学方法，实验结果采用x±s表示，组间比较采用 t 检验进行比较。P < 0.05为差异有显著性意义； P < 0.01为差异有非常显著性意义；P < 0.001为差异有极显著性意义。

讨论

帕金森病的行为学特征表现为肌肉震颤、运动迟缓等，主要的病理学特征是黑质致密部多巴胺能神经-胆碱能神经功能失衡，帕金森病患者由于黑质病变，导致多巴胺合成减少，纹状体内多巴胺含量降低，引起黑质-纹状体通路多巴胺能神经功能减弱，胆碱能神经功能进而占相对优势，使锥体外系功能失调，出现肌张力增高等症状，最终导致帕金森病发生[25-27]。酪氨酸羟化酶催化酪氨酸生成左旋多巴，是介导多巴胺生物合成的关键限速步骤[28]。因此，运动评价和酪氨酸羟化酶的表达及活性检测是帕金森病的重要指标，能较好地反映帕金森的疾病发展进程。
在此次研究中，利用不同的给药方式，通过MPTP诱导构建亚急性和慢性小鼠帕金森动物模型，两种模型动物在给予MPTP半小时后均出现立毛、弓背、肢体僵硬、行动缓慢等表型，给予MPTP 12 h后逐渐恢复正常，分别利用经典的疲劳转棒实验和爬杆实验评价造模后动物的运动和平衡功能损伤程度，结果显示，亚急性模型组在两项行为学测试中较对照1组表现出运动和平衡功能损伤，而慢性模型组与对照2组相比无显著差异。但在后续针对脑黑质区多巴胺能神经元标志物酪氨酸羟化酶的定位和定量分析检测发现，亚急性模型组小鼠脑内损伤的细胞酪氨酸羟化酶表达下降，但是部分未损伤的细胞代偿性导致酪氨酸羟化酶释放增加，从而导致亚急性模型组酪氨酸羟化酶的表达与对照1组无显著差异；而慢性模型组则显示出酪氨酸羟化酶阳性细胞数量和表达水平显著下降，提示慢性模型组多巴胺能神经元损伤程度较高。
有研究报道多巴胺能神经元损伤程度与帕金森病引起的运动功能损伤程度不呈线性相关[29]。前期研究表明，人和帕金森病动物模型中纹状体多巴胺水平下降到正常值的70%-80%，才会引起黑质致密部中多巴胺能神经元损失50%-60%，但这种损失是否会引起运动功能损伤目前还尚不明确[30-31]。此外，由于纹状体多巴胺能系统存在“过度补偿”这一机制，在黑质致密部中，多巴胺释放和多巴胺能神经元轴突发芽的增加已被证实为帕金森病脑中的补偿机制[32]，因此，“代偿机制”降低了MPTP对多巴胺能神经元的毒性影响，抵消了纹状体中多巴胺含量的降低并防止帕金森病症状的出现[33-34]，这也解释了在亚急性模型组和慢性模型组中观察到运动功能损伤而酪氨酸羟化酶水平改变不显著的现象。除此之外，有研究表明，通过检测神经递质及其代谢物的含量，研究者们发现在慢性模型组中疲劳转棒实验的表现与皮质的去甲肾上腺素变化相关，这表明神经递质及其代谢物可能作为代偿机制影响行为学的表型[22]。
帕金森病的病理变化核心是黑质致密部的多巴胺能神经元的丢失，而MPTP在全身给药后，因其高度亲脂性而迅速穿过血脑屏障。一旦进入大脑，原毒素MPTP通过非多巴胺能细胞内的单胺氧化酶B(MAO-B)代谢成1-甲基-4-苯基-2，3-二氢吡啶鎓，然后迅速催化生成活性毒性化合物1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)。它一旦进入多巴胺能神经元，便可被分离到突触体囊泡中或被浓缩在线粒体内，抑制线粒体复合物Ⅰ并耗尽神经元ATP的储存，从而导致多巴胺能神经元的丢失[35-37]。在此次研究的慢性动物模型构建中，利用丙磺舒降低MPTP及其代谢物从肾脏和脑中的清除来增强神经毒性，尽管在慢性动物模型中未能观察到预期出现的运动损伤，但相关研究显示纹状体多巴胺能神经元耗竭是一个缓慢的过程[38]，并且在病理学上表现出帕金森病的病理学表征，因此，作者推测通过提高MPTP给药浓度或延长给药时间等策略，在慢性动物模型中仍然可能出现类似于帕金森临床患者的运动损伤症状。然而增加MPTP给药浓度以及延长给药时间可能产生较大的神经毒性，动物在实验过程中容易出现死亡，不利于模型的长期建模。
综上所述，此次研究中，通过构建亚急性和慢性帕金森动物模型，并从行为学和多巴胺能神经元标志物等方面分析比较模型表型，初步显示两种模型在模拟帕金森症状方面的特点，为利用上述模型开展帕金森病的致病机制及治疗策略研究提供潜在有效的帮助，同时也为进一步对模型构建及评价技术优化提供依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

MPTP诱导帕金森病小鼠亚急性与慢性模型的比较及评价

Comparison and evaluation of MPTP-induced subacute and chronic models of Parkinson’s disease in mice

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