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miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响

郭隽馥, 李乡南, 马天驰, 苗兰英

中国组织工程研究 2022, 26 (19): 3030-3035. DOI: 10.12307/2022.382

摘要（476）

PDF （1482KB）（87）

文题释义：
成球性：具有自我更新能力的肿瘤干细胞能够从癌细胞系和肿瘤活检组织中分离出来，并在三维肿瘤球状体悬浮培养物中生长。为检测肿瘤细胞的成球能力，一般需要将单细胞悬液加入超低吸附多孔培养板中并在培养液中加入多种生长因子以模拟体内肿瘤的生长环境。
软琼脂集落：肿瘤干细胞具有多向分化潜能，在体外培养基中能够由一个祖先细胞增殖形成细胞团也就是集落。利用低熔点琼脂糖制备双层琼脂(上层0.3%流动性较好，下层0.5%相对固定)，再将单细胞悬液加入其中，也是模拟体内肿瘤生长环境的一种手段。

背景：miR-7在胃癌等多种肿瘤组织中表达下调，主要发挥抑癌作用。现已证实，miR-7能够影响胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭等多种细胞生物学功能。然而，目前有关miR-7与胃癌细胞干样特性关系的研究较少，机制尚不明确。
目的：探讨miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响。
方法：以胃癌细胞株SGC-7901为模型，用NC、miR-7-5p mimics、inhibitor NC及miR-7-5p inhibitor转染细胞，转染48 h后采用倒置荧光显微镜观察转染效率，RT-qPCR方法检测miR-7-5p、Nanog和Sox2 mRNA表达水平，采用成球实验和软琼脂集落实验检测细胞成球能力和软琼脂集落形成能力，流式细胞术检测CD24+CD44+细胞亚群比例。
结果与结论：①与inhibitor NC或NC组比较，转染miR-7-5p inhibitor或mimics后，胃癌SGC7901细胞中miR-7-5p的表达量显著降低或升高(P < 0.01)；②与NC组比较，miR-7-5p mimics组成球数量和软琼脂集落形成数量明显减少(P < 0.05，P < 0.01)，而miR-7-5p inhibitor组成球数量和集落形成数量则明显高于miR-7-5p inhibitor NC组(P < 0.05，P < 0.01)；③miR-7-5p mimics组CD24+CD44+细胞比例明显低于NC组(P < 0.01)，而miR-7-5p inhibitor组CD24+CD44+细胞的比例显著高于inhibitor NC组(P < 0.01)；④miR-7-5p mimics组Nanog和Sox2 mRNA表达明显低于NC组，miR-7-5p inhibitor组Nanog和Sox2 mRNA表达显著高于inhibitor NC组(P < 0.05，P < 0.01)；⑤结果表明，miR-7-5p可以通过减弱胃癌细胞的成球能力、软琼脂集落形成能力以及降低胃癌细胞中CD24+CD44+细胞亚群比例等方式抑制胃癌细胞的干样特性，其机制可能与调控干性相关基因Nanog和Sox2的表达有关。

https://orcid.org/0000-0001-5034-2824 (郭隽馥)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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CD44+膀胱癌干细胞中角蛋白6B的表达和调控

刘璐, 杨宇明, 商艾晨, 刘翠, 孙策, 王静

中国组织工程研究 2022, 26 (1): 76-83. DOI: 10.12307/2022.013

摘要（470）

PDF （2166KB）（61）

文题释义：

角蛋白6B：角蛋白6B基因位于染色体12q13，由9个外显子组成，其编码的蛋白是Ⅱ型角蛋白家族中的一员，属于高分子量角蛋白。
CD44：是一种跨膜糖蛋白，其基因位于11号染色体上，转录后经过选择性剪切形成多个异构体，其中包括CD44v6。CD44在多种恶性肿瘤中异常表达，尤其在肿瘤干细胞中表达升高。

背景：膀胱癌干细胞参与促进膀胱癌的术后复发及耐药性，而多项研究表明角蛋白6B参与多个不同类型肿瘤的发生和进展，并与肿瘤的预后密切相关。
目的：观察角蛋白6B在CD44+膀胱癌干细胞中的表达差异及其对膀胱癌干细胞增殖、迁移及自我更新的影响，并进一步探讨角蛋白6B表达对膀胱癌患者预后的影响。
方法：①使用免疫磁珠分选法分选出人CD44+ 5637膀胱癌干细胞，使用RT-PCR检测分选后的相关干性基因SOX2，OCT4和NANOG的表达，采用体外肿瘤球形成实验进一步验证CD44+细胞具有肿瘤干细胞的自我更新能力，RT-PCR检测CD44+膀胱癌干细胞中的角蛋白6B的表达情况；②将CD44+ 5637膀胱癌干细胞分为2组，其中角蛋白6B沉默组将角蛋白6B小干扰RNA转染至分选后的CD44+膀胱癌干细胞，未转染的CD44+膀胱癌干细胞作为空白对照组，转染2 d后收集细胞，分别用平板克隆实验、划痕实验和体外肿瘤球形成实验检测角蛋白6B沉默后膀胱癌干细胞的增殖，迁移和自我更新能力；③采用免疫组织化学染色检测膀胱癌患者24例膀胱肿瘤组织切片的角蛋白6B和CD44v6的表达；④利用ONCOMINE数据库比较膀胱肿瘤组织中角蛋白6B的表达情况对患者总生存率的影响。
结果与结论：①分选后的CD44+细胞中相关干性基因(SOX2，OCT4，NANOG)和角蛋白6B表达高于CD44-细胞(P < 0.05)，其细胞增殖，迁移和体外成球能力显著升高(P < 0.05)，角蛋白6B小干扰RNA可下调角蛋白6B在CD44+膀胱癌干细胞中的表达(P < 0.05)；②与空白对照组相比，角蛋白6B小干扰RNA转染后的CD44+膀胱癌干细胞增殖和迁移能力显著降低(P < 0.05)，肿瘤球的数量明显降低(P < 0.05)，而Notch1和Hes1 mRNA表达升高(P < 0.05)；③角蛋白6B与CD44v6在患者膀胱癌组织中的表达差异有显著性意义(P=0.006)，其中角蛋白6B高表达的膀胱癌患者总生存率低于角蛋白6B低表达的患者；④上述数据证实，角蛋白6B可在CD44+膀胱癌干细胞中可高度表达，并且促进膀胱癌干细胞的增殖、迁移和自我更新，角蛋白6B高表达有助于膀胱癌患者生存情况的改善。

https://orcid.org/0000-0002-1365-3073 (Yang Yuming)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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LINC02532靶向miR-145影响胰腺癌干细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

孟德峰, 李长仔, 吴春涛

中国组织工程研究 2022, 26 (1): 52-58. DOI: 10.12307/2022.009

摘要（432）

PDF （2401KB）（82）

文题释义：

长链非编码RNA(lncRNA)：长度超过200个核苷酸的小分子非编码RNA，参与调控细胞的增殖、分化和凋亡等生命活动，与肿瘤的发生发展密切相关，是肿瘤治疗的潜在分子靶点。
微小RNA(miRNA)：长度为18-25个核苷酸的小分子非编码RNA，可与其靶基因的3'非翻译区靶向结合，调控其靶基因的表达，进而影响细胞增殖、迁移和侵袭等生命活动。研究还表明，lncRNA可作为竞争性内源性RNA与miRNA靶向结合，进而调控其靶基因的表达。

背景：长链非编码RNA(lncRNA)和微小RNA(miRNA)是两类参与调控细胞增殖、凋亡和迁移等生命活动的小分子非编码RNA，且lncRNA还可作为竞争性内源性RNA与miRNA靶向结合，调控miRNA靶基因的表达，在肿瘤的发生发展中起重要作用。LINC02532可靶向结合miR-129-5p和miR-490-5p促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭，但对胰腺癌干细胞生物学行为的影响及作用机制还未知。
目的：探讨LINC02532对胰腺癌干细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制。
方法：①选取2017年1月至2018年6月于华北理工大学附属医院经病理检测证实为胰腺癌且经手术切除的56例患者胰腺癌组织及癌旁组织，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测LINC02532和miR-145的表达水平；②以CD24+CD44+ESA+为表面标记，流式细胞术在人胰腺癌细胞PANC-1中分选胰腺癌干细胞，分为正常组、si-LINC02532组(转染LINC02532小干扰RNA)、si-NC组(转染乱序无意义阴性序列)、
si-LINC02532+anti-miR-145组(共转染LINC02532小干扰RNA和miR-145抑制剂)和si-LINC02532+anti-miR-NC组(共转染LINC02532小干扰RNA和miR-145抑制剂阴性对照序列)。转染12 h后，RT-qPCR检测各组细胞中LINC02532和miR-145表达水平，CCK-8法检测细胞存活率，克隆形成实验检测细胞克隆形成数，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot法检测细胞中P21、Bax、Caspases-3、E-钙黏附素和基质金属蛋白酶2蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-145与LINC02532调控关系。

结果与结论：①与癌旁组织比较，胰腺癌组织中LINC02532表达水平升高(P < 0.05)，miR-145表达水平降低(P < 0.05)；②与si-NC组比较，si-LINC02532组胰腺癌干细胞存活率、克隆形成数、细胞迁移和侵袭数及基质金属蛋白酶2蛋白表达水平降低(P < 0.05)，细胞凋亡率及P21、Bax、Caspase-3和E-钙黏附素蛋白表达水平升高(P < 0.05)，而si-NC组与正常组各检测指标比较差异无显著性意义(P > 0.05)；③LINC02532在胰腺癌干细胞中靶向负调控miR-145表达。与si-LINC02532+anti-miR-NC组比较，si-LINC02532+anti-miR-145组胰腺癌干细胞存活率、克隆形成数、细胞迁移和侵袭数及基质金属蛋白酶2蛋白表达水平升高(P < 0.05)，细胞凋亡率及P21、Bax、Caspase-3和E-钙黏附素蛋白表达水平降低(P < 0.05)；④结果表明，LINC02532在胰腺癌组织中表达上调，下调其表达可能通过靶向上调miR-145表达进而抑制胰腺癌干细胞增殖、迁移和侵袭，并诱导细胞凋亡。

https://orcid.org/0000-0003-4434-9637(孟德峰)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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β-catenin基因沉默对肝癌干细胞干性转录因子的影响

孙华, 覃艳春, 荣震, 李祖隆, 蒋锐沅, 钟晓婷

中国组织工程研究 2023, 27 (15): 2297-2303. DOI: 10.12307/2023.364

摘要（342）

PDF （1941KB）（64）

文题释义：
肿瘤干细胞：是具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞亚群，同时具有致瘤性、连续传代能力及多向分化潜能。
RNA干扰：又称转录后基因沉默，是指将特异性同源双链RNA导入细胞内，使目的基因不表达或者表达水平下降。

背景：肝癌干细胞是导致癌细胞形成、更新和增殖的原因，寻找针对肝癌干细胞治疗的关键靶点，并进一步拓展肝癌综合治疗手段是重要研究课题。
目的：观察β-catenin基因沉默后CD133+HepG2细胞干性转录因子变化，探讨β-catenin调控肝癌干细胞干性的作用机制。
方法：采用免疫磁珠筛选CD133+HepG2细胞，然后经干细胞培养基诱导、扩增方案获得CD133+HepG2肝癌干细胞，流式细胞术鉴定CD133+HepG2细胞阳性率，RNA干扰技术构建沉默β-catenin基因表达的 β-catenin-shRNA慢病毒质粒，转染CD133+HepG2肝癌干细胞72 h，荧光标记并评估转染效率。确认β-catenin沉默后，平板克隆形成实验观察CD133+HepG2肝癌干细胞增殖情况，流式细胞术检测CD133+HepG2肝癌干细胞的细胞周期，qRT-PCR和Western blot检测干性转录因子SOX2，NANOG，OCT4的mRNA及蛋白表达水平。
结果与结论：与空白对照组和病毒空载组相比，病毒干扰组的细胞克隆形成能力明显降低，G0/G1期细胞百分比明显增多，S期和G2/M期细胞百分比降低，NANOG、SOX2、OCT4的蛋白和mRNA表达水平明显降低(P < 0.05)，提示下调β-catenin表达可能对抑制肝癌干细胞的干性水平具有潜在作用。
https://orcid.org/0000-0001-6435-1393(孙华)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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miR-206调控小细胞肺癌干细胞EVI1基因表达及细胞生物学行为

王继芳, 鲍祯, 乔亚红

中国组织工程研究 2022, 26 (7): 1027-1031. DOI: 10.12307/2022.139

摘要（327）

PDF （1394KB）（96）

文题释义：
miRNA-206：定位于人类第6号染色体上，最早从骨骼肌中发现，它参与人体中一系列的生物学过程例如细胞增殖、组织器官的生长及肿瘤的发生等。最近大量研究显示miR-206在肿瘤细胞中表达失调，在肿瘤的生长、增殖、凋亡及侵袭、转移、耐药中发挥重要作用。
EVI1：EVI1基因定位于人染色体3q26上，能够与多种重要基因的启动子DNA序列进行有效结合，进而调控基因的转录。EVI1位点可产生剪切变异，与其他基因产生融合。EVI1在正常人骨髓和外周血细胞中均不表达，但在部分恶性肿瘤，如胃癌、白血病中可高表达。
背景：通过对小细胞肺癌体外分选鉴定，可以发现肿瘤干细胞的存在是促使肿瘤细胞恶性增殖的重要因素。肿瘤的发生与细胞内多种分子的异常表达以及靶向基因的调控障碍密切相关。前期研究发现，EVI1具备原癌基因特性，在肺癌中其表达上调。miR-206可靶向调控EVI1基因和蛋白的表达。
目的：探讨miR-206靶向调控EVI1转录基因的表达对小细胞肺癌干细胞增殖和分裂周期的影响。
方法：首先采用miR-206转染实验验证靶向调控EVI1基因，实验分3组：miR-206 mimics组、miR-206 inhibitor组和miR-NC组，分别转染小细胞肺癌干细胞，Western blot法检测细胞中EVI1蛋白的表达。然后采用慢病毒干扰法下调小细胞肺癌干细胞中miR-206表达验证细胞的信号转导通路和生物学行为，实验分3组：pLB-miR-206组、空载体组和对照组，RT-PCR法检测细胞中miR-206和EVI1 mRNA表达水平，Western blot法检测p-Akt和p-JNK蛋白表达，MTT法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞周期中分裂细胞和凋亡细胞的百分比。
结果与结论：①miR-206 mimics组Evi1蛋白水平显著高于miR-NC组(P < 0.05)，miR-206 inhibitor组Evi1蛋白水平显著低于miR-NC组(P < 0.05)，提示miR-206可能靶向调控小细胞肺癌干细胞EVI1基因的表达；②经miR-206慢病毒转染后，pLB-miR-206组miR-206和EVI1 mRNA表达水平明显低于空载体组和对照组，p-Akt和p-JNK蛋白表达水平下降，细胞增殖率减少，分裂细胞比例下降(P < 0.05)，提示miR-206可能通过靶向调控小细胞肺癌干细胞中EVI1基因的表达和Akt/JNK信号通路的激活，对细胞增殖和分裂周期产生影响。

https://orcid.org/0000-0002-6372-3500(王继芳)

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中药复方敷和备化方对CD133+HepG2肝癌干细胞增殖及相关自噬蛋白影响的机制

李祖隆, 荣震, 孙华, 蒋锐沅, 钟晓婷, 莫春梅

中国组织工程研究 2022, 26 (31): 4988-4995. DOI: 10.12307/2022.992

摘要（300）

PDF （1831KB）（180）

文题释义：
肝癌干细胞：是存在于肝癌细胞中一个微小群体，具有很强的自我更新能力和多分化潜能，在肝癌的发生发展、复发和转移中都起着十分重要的作用。肝癌细胞的干性是肝癌产生复发、转移和化学抗性的主要原因，也是肿瘤治疗的主要障碍。随着研究的深入，肝癌干细胞被认为是治疗肝癌的一个重要靶点，也是肿瘤细胞维持高增殖水平、高侵袭水平的关键。
自噬：是一个吞噬自身细胞质蛋白或细胞器并使其包被进入囊泡，与溶酶体融合形成自噬溶酶体，降解其所包裹内容物的过程，借此实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。肝癌发生自噬能够促使肝癌细胞维持高代谢水平和高侵袭转移水平，并能通过细胞自噬以实现对化疗药物的逃避杀伤。

背景：肝癌干细胞是肝癌不断发生发展和高异质性产生的关键细胞，目前尚无针对肝癌干细胞相关自噬通路为靶点的中药复方研究，因此中药复方抑制肝癌干细胞自噬的研究十分具有必要性。
目的：探讨中药复方制剂敷和备化方对CD133+HepG2肝癌干细胞PI3K/AKT/mTOR通路及相关自噬蛋白影响的机制。
方法：免疫磁珠法分选出CD133+HepG2细胞，用体积分数为2%，4%，8%，16%敷和备化方含药血清作用CD133+HepG2细胞，CCK-8法检测细胞增殖活力，选出最佳干预体积分数的敷和备化方含药血清。将CD133+HepG2细胞分为血清对照组、空白对照组、雷帕霉素组和敷和备化方组，分别用含体积分数16%空白大鼠血清的DMEM/F12培养基、无血清DMEM/F12培养基、含0.05%雷帕霉素的DMEM/F12培养基、含体积分数16%敷和备化方含药血清的DMEM/F12培养基培养。流式细胞术检测各组CD133+HepG2肝癌干细胞百分比；RT-PCR法检测各组细胞中PI3K、AKT、mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达水平；Western blot 法检测各组细胞中PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、LC3-Ⅱ的蛋白表达水平；免疫荧光法检测各组细胞中LC3、LC3-Ⅱ的表达水平。
结果与结论：①敷和备化方含药血清有抑制CD133+HepG2细胞增殖的作用，其中体积分数为16%敷和备化方含药血清干预72 h抑制作用最明显(P < 0.05)；②与血清对照组、空白对照组相比，敷和备化方组和雷帕霉素组CD133+HepG2细胞百分比下降(P < 0.05)，PI3K、AKT、p-mTOR、mTOR、LC3-Ⅱ的蛋白表达水平均明显下调(P < 0.05)；PI3K、AKT、mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达水平均明显下调(P < 0.05)；LC3、LC3-Ⅱ的荧光信号强度均明显下调(P < 0.05)；③与雷帕霉素组相比，敷和备化方组CD133+HepG2细胞中的PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、LC3-Ⅱ蛋白表达水平均明显下调(P < 0.05)，PI3K、AKT、mTOR、LC3-Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达水平均明显下调(P < 0.05)， LC3、LC3-Ⅱ的荧光信号强度均明显下调(P < 0.05)；④结果表明，敷和备化方能抑制肝癌干细胞自噬和增殖，其机制与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路有关。

https://orcid.org/0000-0001-7387-2588 (李祖隆)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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枸杞多糖联合奥沙利铂可逆转结肠癌干细胞的耐药

艾芳芳, 肖红燕, 汪芳, 朱永朝, 马丽君

中国组织工程研究 2024, 28 (1): 74-79. DOI: 10.12307/2024.106

摘要（279）

PDF （2209KB）（40）

文题释义：

枸杞多糖：宁夏枸杞是中国药典收载的唯一正品，枸杞具有调节免疫、抗炎、保护细胞、血管、神经以及抗衰老和抗肿瘤等多种药理作用。枸杞多糖是其主要生物活性成分，主要由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、半乳糖醛酸与多种氨基酸或脂质构成的水溶性复合多糖。

结肠癌干细胞：结肠癌组织中表达干细胞标记物的细胞，具有更强的迁移和分化能力，因此在肿瘤的转移和复发过程中起到关键性作用。

背景：结肠癌临床主要采用以氟尿嘧啶、伊立替康及奥沙利铂为基础的治疗方法，研究发现这些药物的转运与ABC转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette transport protein of G2，ABCG2)等膜转运蛋白相关，然而当患者对这些化疗药物产生耐药后，ABCG2的高表达致使治疗效果明显下降，引起了结肠癌的耐药问题。临床急切需要新的药物及治疗方法来提高疗效，枸杞多糖具有广泛的生物学活性，将多糖作为抗肿瘤药物，可以克服化疗和放疗过程中杀死肿瘤细胞的同时对机体正常细胞的损伤。
目的：通过体外实验探索枸杞多糖联合奥沙利铂对结肠癌干细胞耐药的逆转作用，进而探讨枸杞多糖逆转结肠癌耐药的可能分子机制。
方法：选用结肠癌细胞株HCT116以及奥沙利铂耐药细胞株HCT116-OXR进行体外实验，采用CCK8检测细胞增殖情况确定枸杞多糖和奥沙利铂的最适干预浓度和干预时间，进一步分为HCT116对照组，HCT116-OXR空白处理组，枸杞多糖组(2.5 mg/mL枸杞多糖)，奥沙利铂组
(10 μmol/L奥沙利铂)，枸杞多糖+奥沙利铂组(2.5 mg/mL枸杞多糖+10 μmol/L奥沙利铂)，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，免疫荧光和Western blot检测磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase，PMI)和ABCG2的表达，Western blot检测PI3K，AKT，Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。

结果与结论：①HCT116-OXR相较HCT116对枸杞多糖更敏感(P < 0.05)；②与HCT116-OXR空白处理组比较，奥沙利铂联合枸杞多糖促进了HCT116-OXR细胞凋亡(P < 0.05)，Bcl-2蛋白表达明显下调(P < 0.05)，Bax蛋白表达明显上调(P < 0.05)，ABCG2、PMI、PI3K、AKT的蛋白表达明显下调(P < 0.05)；③结果表明枸杞多糖通过抑制PMI/PI3K/AKT通路逆转结肠癌耐药，为研究枸杞多糖增敏化疗作用的分子机制奠定了基础。

https://orcid.org/0000-0001-8716-5251(艾芳芳)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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