点穴调膝法改善膝骨关节炎模型大鼠关节软骨形态结构及炎症水平

doi:10.12307/2026.429

中国组织工程研究 ›› 2026, Vol. 30 ›› Issue (33): 8639-8644.doi: 10.12307/2026.429

• 软骨组织构建 cartilage tissue construction • 上一篇下一篇

点穴调膝法改善膝骨关节炎模型大鼠关节软骨形态结构及炎症水平

许辉1，2，王真1，杨方莉1，李濛濛2，时明伟2，王晓艳1，石洪霞3，杨涛1，刁杰尧1，周运峰1

1河南中医药大学针灸推拿学院，河南省郑州市 450046；2河南中医药大学第三附属医院，河南省郑州市 450003；3河南中医药大学第一附属医院，河南省郑州市 450008

收稿日期:2025-09-09 修回日期:2026-01-09 出版日期:2026-11-28 发布日期:2026-06-10
通讯作者: 李濛濛，硕士，主治医师，河南中医药大学第三附属医院，河南省郑州市 450003
作者简介:许辉，男，1990年生，河南省周口市人，汉族，副教授，博士，主要从事推拿治疗骨伤科疾病的研究工作。
基金资助:
2025年度河南省国际科技合作项目(培育项目)(252102521021)，项目负责人：许辉；2024年度河南省科技研发计划联合基金项目(242301420104)，项目负责人：时明伟；2023年度河南省中医学“双一流”创建科学研究专项项目(HSRP-DFCTCM-2023-7-09)，项目负责人：许辉；2024年度河南省中医药科学研究专项课题(2024ZY3060)，项目负责人：许辉；2025年度河南省中医药科研专项联合共建课题(河南中医药大学第三附属医院)(2025LHZX3008)，项目负责人：李濛濛

Acupoint-pressing and knee-regulating therapy improves the morphological structure and inflammatory level of articular cartilage in rats with knee osteoarthritis

Xu Hui1, 2, Wang Zhen1, Yang Fangli1, Li Mengmeng2, Shi Mingwei2, Wang Xiaoyan1, Shi Hongxia3, Yang Tao1, Diao Jieyao1, Zhou Yunfeng1

1School of Acupuncture and Moxibustion, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, Henan Province, China; 2The Third Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450003, Henan Province, China; 3The First Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450008, Henan Province, China

Received:2025-09-09 Revised:2026-01-09 Online:2026-11-28 Published:2026-06-10
Contact: Li Mengmeng, MS, Attending physician, The Third Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450003, Henan Province, China
About author:Xu Hui, PhD, Associate professor, School of Acupuncture and Moxibustion, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, Henan Province, China; The Third Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450003, Henan Province, China
Supported by:
2025 Henan Provincial International Science and Technology Cooperation Project (Cultivation Project), No. 252102521021 (to XH); 2024 Provincial Science and Technology Research and Development Joint Fund Project, No. 242301420104 (to SMW); 2023 Henan Provincial Special Scientific Research Project for the Creation of "Double First-Class" in Traditional Chinese Medicine, No. HSRP-DFCTCM-2023-7-09 (to XH); 2024 Henan Provincial Special Scientific Research Project for Traditional Chinese Medicine, No. 2024ZY3060 (to XH); 2025 Henan Provincial Special Scientific Research Project for Traditional Chinese Medicine - Joint Construction Program (The Third Affiliated Hospital of Henan University of Chinese Medicine), No. 2025LHZX3008 (to LMM)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
点穴调膝法：是传承国医大师施杞教授“调衡筋骨”学术思想，同时融合丁氏推拿流派“坐位调膝法”膝骨关节炎诊疗经验凝练而来的一套有效推拿方案，主要由点按局部腧穴和坐位调膝法两部分操作组成。
膝骨关节炎：是临床常见的退行性骨关节疾病，病理特征包括软骨退化、骨重塑、骨赘形成、半月板撕裂和滑膜炎症，发病机制与生物力学、炎症和免疫系统的复杂生物学反应等有关。

背景：前期研究发现，推拿可以缓解膝骨关节炎软骨组织损伤、减轻炎症并抑制软骨细胞凋亡。
目的：观察点穴调膝法对膝骨关节炎大鼠关节软骨形态结构及炎症水平的影响。
方法：采用随机数字表法将32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、推拿组与药物组，每组8只，模型组、药物组和推拿组右膝关节腔注射半胱氨酸活化木瓜蛋白酶溶液(第1，4，7天注射)建立膝骨关节炎模型，造模结束后，推拿组接受点穴调膝法治疗，药物组灌胃给予塞来昔布溶液，空白组、模型组腹腔注射生理盐水，每天1次，连续干预2周。干预结束后，测量大鼠右膝关节直径、关节活动度、缩足反射阈值，ELISA法检测血清中白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶1水平，苏木精-伊红染色观察膝关节软骨退变程度。
结果与结论：①模型组大鼠膝关节直径大于空白组(P < 0.05)，膝关节活动度、缩足反射阈值小于空白组(P < 0.05)；推拿组与药物组大鼠膝关节直径小于模型组(P < 0.05)，膝关节活动度、缩足反射阈值大于模型组(P < 0.05)。②与空白组比较，模型组白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶1水平升高(P < 0.05)；与模型组比较，推拿组与药物组白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶1水平降低(P < 0.05)。③苏木精-伊红染色结果显示，空白组关节软骨表面光滑，软骨细胞形态结构正常、排列规则；模型组关节软骨表面不光滑，局部可见少量软骨细胞坏死溶解，潮线结构不清，未见明显炎性细胞浸润；推拿组关节软骨表面较光滑，软骨细胞数量增多，可见簇集形细胞团，潮线结构不清，未见明显炎性细胞浸润；药物组关节软骨表面较光滑，软骨细胞数量增多，可见簇集形细胞团，潮线结构不清，未见明显的炎性细胞浸润。模型组Markin评分高于其他3组(P < 0.05)。④结果表明，点穴调膝法能有效改善膝骨关节炎大鼠的关节软骨超微结构、减轻炎症反应。
https://orcid.org/0000-0002-0719-1116 (许辉)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 骨组织工程, 推拿, 点穴调膝法, 膝骨关节炎, 软骨, 炎性因子, 组织构建

Abstract: BACKGROUND: Preliminary studies have found that massage therapy can alleviate damage to cartilage tissue, reduce inflammation, and inhibit chondrocyte apoptosis in knee osteoarthritis.
OBJECTIVE: To observe the effects of acupoint-pressing and knee-regulating therapy on the morphological structure of articular cartilage and inflammatory levels in rats with knee osteoarthritis.
METHODS: Thirty-two Sprague-Dawley rats were randomly divided into a blank group, a model group, a medication group, and a massage group, with eight rats in each group. Rats in the model, medication, and massage groups were subjected to intra-articular injection of a mixture of papain and L-cysteine into the right knee joint (on days 1, 4, and 7) to establish a rat model of knee osteoarthritis. After modeling, the massage group received acupoint-pressing and knee-regulating therapy, while the medication group was treated with celecoxib via gavage. The remaining two groups received intraperitoneal injection of saline solution, once daily, for continuous 2 weeks. The diameter of the right knee joint, range of motion, and the paw withdrawal threshold were recorded. ELISA was used to detect serum levels of interleukin-6, interleukin-18, tumor necrosis factor-α, and matrix metallopeptidase 1. Hematoxylin-eosin staining was used to observe the degree of cartilage degeneration.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) The knee joint diameter in the model group was greater than that in the blank group (P < 0.05), while knee joint range of motion and paw withdrawal threshold were lower than those in the blank group (P < 0.05). In the massage and medication groups, the knee joint diameter was smaller than that in the model group (P < 0.05), while knee joint range of motion and paw withdrawal threshold were higher than those in the model group (P < 0.05). (2) Compared with the blank group, there were elevated levels of interleukin-6, interleukin-18, tumor necrosis factor-α, and matrix metalloproteinase-1 in the model group (P < 0.05). Compared with the model group, the levels of interleukin-6, interleukin-18, tumor necrosis factor-α, and matrix metalloproteinase-1 were reduced in both the massage and medication groups (P < 0.05). (3) Hematoxylin-eosin staining revealed that the articular cartilage surface in the blank group was smooth, with normal chondrocyte morphology and regular arrangement. However, the articular cartilage surface in the model group appeared irregular, showing chondrocyte necrosis and dissolution in local areas, unclear tidal line structure, and no significant inflammatory cell infiltration. The massage group exhibited relatively smooth articular cartilage surface, increased chondrocyte counts, visible cell clusters, unclear tide line structure, and no significant inflammatory cell infiltration. The medication group also showed relatively smooth articular cartilage surface, increased chondrocyte counts, visible cell clusters, unclear tide line structure, and no significant inflammatory cell infiltration. The Markin score in the model group was higher than that in the other three groups (P < 0.05). To conclude, acupoint-pressing and knee-regulating therapy can effectively improve the articular cartilage ultrastructure and reduce inflammatory reactions in rats with knee osteoarthritis.

Key words: bone tissue engineering, massage, acupoint-pressing and knee-regulating therapy, knee osteoarthritis, cartilage, inflammatory factors, tissue construction

中图分类号:

许辉, 王真, 杨方莉, 李濛濛, 时明伟, 王晓艳, 石洪霞, 杨涛, 刁杰尧, 周运峰. 点穴调膝法改善膝骨关节炎模型大鼠关节软骨形态结构及炎症水平[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(33): 8639-8644.

Xu Hui, Wang Zhen, Yang Fangli, Li Mengmeng, Shi Mingwei, Wang Xiaoyan, Shi Hongxia, Yang Tao, Diao Jieyao, Zhou Yunfeng. Acupoint-pressing and knee-regulating therapy improves the morphological structure and inflammatory level of articular cartilage in rats with knee osteoarthritis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2026, 30(33): 8639-8644.

图/表（结果） 4

2.1 实验动物数量分析 32只SD大鼠全部进入结果分析。
2.2 各组大鼠膝关节直径的比较造模结束后，模型组、药物组、推拿组大鼠膝关节直径大于空白组(P < 0.01)，模型组、药物组、推拿组大鼠膝关节直径比较差异无显著性意义(P > 0.05)；干预结束后，模型组大鼠膝关节直径大于空白组(P < 0.01)，药物组和推拿组大鼠膝关节直径小于模型组(P < 0.05)，药物组和推拿组大鼠膝关节直径比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见图1。

2.3 各组大鼠膝关节活动度的比较造模结束后，模型组、药物组、推拿组大鼠膝关节活动度小于空白组(P < 0.01)，模型组、药物组、推拿组大鼠膝关节活性度比较差异无显著性意义(P > 0.05)；干预结束后，模型组大鼠膝关节活性度小于空白组(P < 0.01)；与模型组比较，药物组和推拿组均增加(P < 0.05)；药物组和推拿组之间的差异无显著性意义(P > 0.05)，见图2。
2.4 各组大鼠缩足反射阈值的比较造模结束后，模型组、药物组、推拿组大鼠缩足反射阈值低于空白组(P < 0.01)，模型组、药物组、推拿组大鼠缩足反射阈值比较差异无显著性意义(P > 0.05)；干预结束后，模型组大鼠缩足反射阈值低于空白组(P < 0.01)，药物组和推拿组大鼠缩足反射阈值大于模型组(P < 0.05)，药物组和推拿组大鼠缩足反射阈值比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见图3。

2.5 各组大鼠血清炎症因子水平的比较干预结束后，与空白组比较，模型组血清白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶1水平升高(P < 0.01)；与模型组比较，药物组、推拿组血清白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶1水平降低(P < 0.05)；与药物组比较，推拿组血清白细胞介素6、基质金属蛋白酶1水平降低(P < 0.05)，见图4。
2.6 各组大鼠膝关节软骨形态学改变苏木精-伊红染色结果显示，空白组关节软骨表面光滑，软骨细胞形态结构正常、排列规则；模型组关节软骨表面不光滑，局部可见少量软骨细胞坏死溶解(黑色箭头)，潮线结构不清，未见明显炎性细胞浸润；推拿组关节软骨表面较光滑，软骨细胞数量增多(黑色箭头)，可见簇集形细胞团，潮线结构不清，未见明显炎性细胞浸润；药物组关节软骨表面较光滑，软骨细胞数量增多(黑色箭头)，可见簇集形细胞团，潮线结构不清，未见明显的炎性细胞浸润，见图5。
模型组Markin评分高于空白组(P < 0.01)，药物组、推拿组Markin评分低于模型组(P < 0.05)，推拿组与药物组Markin评分比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见图6。

参考文献

[1] CUI A, LI H, WANG D, et al. Global,regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies. EClinicalMedicine. 2020;29-30:100587.
[2] 赵盾,祁令臣,徐金凡,等.膝骨关节炎疼痛领域热点与前沿的可视化分析[J].中国组织工程研究,2025,29(15):3280-3289.
[3] FRANCISCO V, PÉREZ T, PINO J, et al. Biomechanics, obesity, and osteoarthritis. The role of adipokines: When the levee breaks. J Orthop Res. 2018;36(2):594-604.
[4] MOBASHERI A, RAYMAN MP, GUALILLO O, et al. The role of metabolism in the pathogenesis of osteoarthritis. Nat Rev Rheumatol. 2017;13(5):302-311.
[5] KOLASINSKI SL, NEOGI T, HOCHBERG MC, et al. 2019 American College of Rheumatology/Arthritis Foundation guideline for the management of osteoarthritis of the hand, hip, and knee. Arthritis Rheumatol. 2020;72(2):220-233.
[6] 王晓萍,何帮靖,周明旺,等.滑膜巨噬细胞极化在膝骨关节炎中的作用与调控机制[J].中国骨质疏松杂志,2025,31(5):765-769,775.
[7] 李泽亚,卢斌,李奇,等.下肢肌肉力量训练对内侧间室膝骨关节炎生物力学影响的研究进展[J].中国康复,2025,40(1):45-49.
[8] 林璐璐,石广霞,屠建锋,等.膝骨关节炎疼痛机制研究进展[J].中国疼痛医学杂志,2022,28(6):454-459.
[9] SAFIRI S, KOLAHI AA, SMITH E, et al. Global, regional and national burden of osteoarthritis 1990-2017: a systematic analysis of the Global Burden of Disease Study 2017. Ann Rheum Dis. 2020;79(6):819-828.
[10] GBD 2021 Osteoarthritis Collaborators. Global, regional, and national burden of osteoarthritis, 1990–2020 and projections to 2050: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2021. Lancet Rheumatol. 2023;5(9):e508-e522.
[11] PENDLETON A, ARDEN N, DOUGADOS M, et al. EULAR recommendations for the management of knee osteoarthritis: report of a task force of the Standing Committee for International Clinical Studies Including Therapeutic Trials (ESCISIT). Ann Rheum Dis. 2003;62(12):1145-1155.
[12] HUNTER CW, DEER TR, JONES MR, et al. Consensus guidelines on interventional therapies for knee pain (STEP Guidelines) from the American Society of Pain and Neuroscience. J Pain Res. 2022;15:2683-2745.
[13] 中华医学会骨科学分会关节外科学组.中国骨关节炎疼痛管理临床实践指南(2020年版)[J].中华骨科杂志,2020,40(8):469-476.
[14] 许辉,周斌,周运峰,等.推拿促进损伤软骨修复治疗膝骨关节炎作用机制研究进展[J].中华中医药杂志,2024,39(9):4803-4806.
[15] WANG Z, XU H, WANG Z, et al. Traditional Chinese Manual Therapy (Tuina) Improves Knee Osteoarthritis by Regulating Chondrocyte Autophagy and Apoptosis via the PI3K/AKT/mTOR Pathway: An in vivo Rat Experiment and Machine Learning Study. J Inflamm Res. 2024;17:6501-6519.
[16] 郭义,赵雪.实验针灸学实验指导[M].5版.北京:中国中医药出版社,2021.
[17] 张帅攀,朱清广,郭光昕,等.膝骨性关节炎“筋骨失衡”生物力学评价的临床对照研究[J].中华中医药杂志,2022,37(9):5508-5511.
[18] 张帅攀,朱清广,房敏.房敏教授推拿防治膝痹临证经验[J].世界中医药, 2024,19(21):3341-3343,3348.
[19] 吕世伟,关雪峰,杨永菊,等.膝骨关节炎之中医病因病机概述[J].中华中医药学刊,2024,42(11):85-88.
[20] 陈军涛,许辉,周运峰,等.基于“筋骨失衡”理论探讨膝骨关节炎发病机制及推拿治疗研究进展[J].中华中医药杂志,2024,39(11):6026-6031.
[21] 常赢,程露露,孙韫頔,等.基于筋骨平衡理论探讨推拿治疗膝骨关节炎的机制[J].湖南中医杂志,2024,40(10):85-88.
[22] 陈林,施杞,笪巍伟,等.筋骨平衡理论指导下五步整膝手法治疗膝骨关节炎浅析[J].中国中医骨伤科杂志,2024,32(9):89-93.
[23] 易周萍,朱在师,茆敏,等.从经筋理论探析膝骨关节炎筋骨同治的诊疗策略[J].福建中医药,2024,55(1):29-31.
[24] 许辉,康冰心,钟声,等.点按局部腧穴与坐位调膝法联用治疗膝关节骨关节炎：随机对照研究[J].中国组织工程研究,2021,25(2):216-221.
[25] 许辉,解骏,肖涟波,等.点按局部腧穴与坐位调膝法联用治疗膝关节骨关节炎疼痛的临床观察[J].世界科学技术-中医药现代化,2021,23(6):2125-2131.
[26] 娄本敬,次旺,严华韬,等.膝骨关节炎相关炎性因子研究进展[J].风湿病与关节炎,2024,13(2):67-71.
[27] TANG Z, SHU L, CAO Z, et al. Osteoarthritis rat serum-derived extracellular vesicles aggravate osteoarthritis development by inducing NLRP3-mediated pyroptotic cell death and cellular inflammation. Human Cell. 2024;37(6):1624-1637.
[28] CHAN CM, MACDONALD CD, LITHERLAND GJ, et al. Cytokine-induced MMP13 Expression in Human Chondrocytes Is Dependent on Activating Transcription Factor 3 (ATF3) Regulation. J Biol Chem. 2017;292(5):1625-1636.
[29] WISNIEWSKA E, LAUE D, SPINNEN J, et al. Infrapatellar fat pad modulates osteoarthritis-associated cytokine and MMP expression in human articular chondrocytes. Cells. 2023;12(24):2850.
[30] MILARAS C, LEPETSOS P, DAFOU D, et al. Association of matrix metalloproteinase (MMP) gene polymorphisms with knee osteoarthritis: a review of the literature. Cureus. 2021;13(10):e18607.
[31] JIANG X, WANG Q, WANG C, et al. The association between genetic polymorphisms of matrix metalloproteinases and knee osteoarthritis: a systematic review and meta-analysis. Int J Rheum Dis. 2024;27(3):e15123.
[32] KOH SM, CHAN CK, TEO SH, et al. Elevated plasma and synovial fluid interleukin-8 and interleukin-18 may be associated with the pathogenesis of knee osteoarthritis. Knee. 2020;27(1):26-35.
[33] KARILA T, TERVAHARTIALA T, COHEN B, et al. The collagenases: are they tractable targets for preventing cartilage destruction in osteoarthritis? Expert Opin Ther Targets. 2022;26(2):93-105.
[34] WONG PF, KAMARUL T. Targeting Ubiquitin-Proteasome System (UPS) in Treating Osteoarthritis. Eur J Pharmacol. 2025;989:177237.
[35] WANG M, ZHOU Y, HUANG W, et al. Association between matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) protein level and the risk of rheumatoid arthritis and osteoarthritis: a meta-analysis. Braz J Med Biol Res. 2020;54(2):e10366.
[36] KUMAR S, KUMAR H, MITTAL A, et al. Correlation Between Synovial Fluid Levels of Matrix Metalloproteinase’s (MMP-1, MMP-3, and MMP-9) and TNF-α with the Severity of Osteoarthritis Knee in Rural Indian Population. Indian J Orthop. 2023;57(10):1659-1666.
[37] 常家乐,贾燕飞,郝廷,等.骨关节炎软骨细胞死亡与调控机制研究进展[J].中国骨与关节杂志,2025,14(1):89-95.
[38] 吴佳航.基于“筋为骨用”理论研究“舒筋”手法促进膝骨关节炎软骨修复的作用机制[D].成都:成都中医药大学,2018.
[39] 金祥雨.基于TLR4-MyD88-NF-κB信号通路探讨理筋正骨手法治疗膝骨性关节炎的作用机制[D].合肥:安徽中医药大学,2022.
[40] 李鑫,汪宗保,唐巍,等.理筋手法对膝骨关节炎兔软骨Wnt/β-catenin信号通路的影响[J].安徽中医药大学学报,2023,42(2):74-77.
[41] 姚梦莉.基于RhoA/ROCK信号通路探讨理筋正骨手法对膝骨关节炎模型兔软骨细胞的作用及其机制[D].合肥:安徽中医药大学,2020.
[42] 郭啸.基于ROCK/LIMK1/Cofilin信号通路探讨推拿对膝骨关节炎大鼠软骨的影响[D].重庆:重庆医科大学,2022.

引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。
1.2 时间及地点实验于2024年9-11月在河南中医药大学动物实验中心完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物与分组选用成年雄性SD大鼠32只，8周龄，SPF级，体质量240-280 g，购自北京维通利华实验有限公司，许可证号：SCXK(京)2021-0015。由河南中医药大学动物实验中心统一采购，环境严格控制，每天给予12 h/12 h昼夜循环光照，环境温度(21±2) ℃，空气湿度40%-60%，大鼠自由摄食和饮水。实验设计均严格遵守国际疼痛研究学会(International Association for the Study of Pain，IASP)颁布的动物保护及使用规范，操作规程严格遵守国科发财字(2006)398号《关于善待实验动物的指导性意见》。适应性喂养1周后，采用随机数字表法将32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、推拿组与药物组，每组8只。研究方案经河南中医药大学实验动物福利伦理委员会备案批准(编号：IACUC-202401018)。
1.3.2 主要试剂与仪器无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司，100092683)，二甲苯(国药集团化学试剂有限公司，10023418)，中性树胶(国药集团化学试剂有限公司，10004160)，苏木精-伊红染液套装(武汉赛维尔生物科技有限公司，G1003)，酶标仪(美国赛默飞，Thermo Multiskan FC)，各量程移液器(澳洲宝德，Genex Beta)，白细胞介素6ELISA检测试剂盒(江苏酶免，MM-0190R2)，白细胞介素18 ELISA检测试剂盒(江苏酶免，MM-0194R2)，肿瘤坏死因子α ELISA检测试剂盒(江苏酶免，MM-0212R2)，基质金属蛋白酶1(江苏酶免，MM-0110R2)，木瓜蛋白酶(上海源叶生物科技有限公司，S27241)，L-半胱氨酸(上海创赛科技有限公司，52-90-4)，塞来昔布胶囊(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H20193349)，医用游标卡尺(日本三丰，CD-10AX)，量角器(宁波诺科森工具有限公司，S102)，Von Frey纤维丝测痛仪(法国Bioseb，BIO-EVF4)。
1.4 实验方法
1.4.1 膝骨关节炎造模方法取模型组、药物组和推拿组大鼠，参照课题组前期半胱氨酸活化木瓜蛋白酶溶液关节腔内注射法建立膝骨关节炎模型[15]。将木瓜蛋白酶溶解在无菌生理盐水中，得到4%木瓜蛋白酶溶液；将L-半胱氨酸溶解在无菌生理盐水中，得到0.03 mol/L L-半胱氨酸溶液；将4%木瓜蛋白酶与0.03 mol/L L-半胱氨酸按2∶1的体积比混合，室温孵育30 min。禁食12 h后，腹腔注射3%戊巴比妥钠30 mg/kg麻醉大鼠后置于手术台上，刮取右膝毛并用碘伏消毒，将大鼠膝关节弯曲45°，以髌骨下髌骨肌腱外缘为注射点，将0.2 mL L-半胱氨酸活化木瓜蛋白酶溶液缓慢注入关节腔内，严格按照上述程序注射3次(第1，4，7天)。空白组大鼠于相同时间点膝关节腔注射等量生理盐水。
注射结束后，使用Lequesne MG评分量表评估大鼠行为学变化，包括疼痛程度、膝关节肿胀程度和关节活动度，以评分> 4为造模成功标准。
1.4.2 分组干预方法造模成功后，药物组灌胃给予10 mL/kg塞来昔布溶液(2.4 mg/mL)，每天1次，连续干预2周。空白组、模型组腹腔注射1 mL/kg生理盐水，每天1次，连续干预2周。
推拿组：在未进行麻醉的情况下将大鼠固定于鼠板，进行以下操作：①点按局部腧穴：选取大鼠右后肢梁丘、血海、阴陵泉、阳陵泉、足三里5个穴位，腧穴定位参考《实验针灸学》[16]，使用项目组研发的“一种动物点穴按摩量化仪器”(专利号：CN211986271U)对以上腧穴进行点按，参数刺激力度为3-5 N，频率为60次/min，每个穴位按压2 min；②坐位调膝法：使大鼠弯曲膝关节，然后用单手拇指点按于髌骨下缘，发力的同时伸展大鼠膝关节，采用美国PPS公司Finger TPS手指触感测量系统(规格：CapSense2)进行参数刺激力度为质控，重复10次。每天推拿1次，连续干预2周。
1.4.3 膝关节直径测量造模结束后与干预结束后，采用游标卡尺测量各组大鼠右侧膝关节直径，重复测量3次，统计3次测得的平均值。
1.4.4 关节活动度测量造模结束后与干预结束后，腹腔注射3%戊巴比妥钠麻醉后，采用量角器测量大鼠右膝关节被动屈伸的最大角度，计算屈伸活动度差值。差值=最大伸展角度-最大屈曲角度。

1.4.5 缩足反射阈值测量造模结束后与干预结束后，采用Von Frey纤维丝测痛仪测量大鼠缩足反射阈值。将大鼠单独置于金

属笼中，确保大鼠爪子可自由活动，在测试前进行至少30 min的适应。待大鼠安静下来后，将探头垂直应用于右后爪的中足底面，评估大鼠缩足反射阈值。在显示屏上记录数据，直至施加的力量引发伤害性反应。此过程重复3次，每次刺激间隔3 min，取3次测试的平均值用于统计分析。

1.4.6 ELISA法检测相关炎症细胞因子干预结束后次日，采用ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶1水平。腹腔注射3%戊巴比妥钠麻醉大鼠后固定四肢，腹部消毒后做一个倒“T”形切口，通过20°倾斜的针头插入下腔静脉，连接到真空促凝采血器中，体外心脏压迫加速采血；血液静置30 min后分层，3 000 r/min离心10 min后取血清，置于-80 ℃冷冻管中备用。通过涡旋振荡在适量的蒸馏水中重新溶解各组血清样本，将标准品与稀释液按1∶1体积比混合，生成最高浓度的标准曲线，根据ELISA检测试剂盒说明，将检测抗体、检测缓冲液和样品添加到标准品孔和样品孔中；加入酶、孵育和洗板，然后在暗处加入显色底物TMB，在室温下孵育5-30 min；向每个孔中加入100 μL终止液，混合后颜色由蓝色变为黄色，在30 min内使用酶标记仪在450 nm波长处测量吸光度值。
1.4.7 苏木精-伊红染色观察关节软骨退变程度采血完成后，取胫骨平台及股骨下端的关节软骨，将关节软骨制备成厚度5 μm的石蜡切片，依次置于二甲苯Ⅰ液和Ⅱ液、无水乙醇Ⅰ液和Ⅱ液、体积分数95%乙醇、体积分数90%乙醇、体积分数80%乙醇及蒸馏水中，置于改良Lillie-Mayer苏木精染色液中5 min，盐酸乙醇分化，蒸馏水反蓝，置于伊红染色液中5 min，冲洗、脱水、透明、封固，置于光镜200倍视野下观察。对每组大鼠的软骨染色情况采用Mankin评分进行赋分[15]，判断软骨退变程度，Mankin评分越高表明软骨退变越严重。
1.5 主要观察指标各组大鼠右膝关节直径、关节活动度、缩足反射阈值、血清炎症因子水平以及膝关节软骨退变程度。
1.6 统计学分析通过SPSS 26.0统计软件和GraphPad Prism (v8.0)数据分析平台完成数据处理与可视化工作。实验数据以x±s形式呈现。采用单因素方差分析进行组间比较，采用Bonferroni进行校正。P < 0.05为差异有显著性意义。文章所涉及的统计学方法已通过河南中医药大学统计学专家审核。

讨论

膝骨关节炎属于中医学“膝痹”“骨痹”“鹤膝风”等范畴，该病主要是由于筋骨失衡而致[17-19]。“筋骨”是维持膝关节动静稳定的最为核心要素，《杂病源流犀烛》记载：“筋者，所以束节络骨，为一身之关纽，利全体之运动者也”，筋附着于骨上，并对骨进行约束。《灵枢·经脉》提出：“骨为干，脉为营，筋为刚。”骨是人立身之主干，具有支撑作用。筋束骨、骨张筋，筋靠骨静力附着，骨靠筋动力移位，“筋骨平衡”膝关节才能正常运动[20-23]。当外感六淫侵袭或劳损伤及膝关节时，首先至筋，引起疼痛、痉挛、困重等症状，筋病则必然会导致骨的异常，正所谓“肌筋不正，骨缝必错”，骨的损伤又会加重筋的代偿以及损害，使得筋骨结构和功能发生异常改变，最终发展成为膝骨关节炎。
点穴调膝法主要由点按局部腧穴和坐位调膝法两部分操作组成：点按局部腧穴能通过点按周围经脉、经筋，有利于气血通利，松解粘连，促进血液循环、炎症吸收，减轻疼痛，加强膝关节的稳定性以及灵活性，达到“筋归其槽，骨入其位”的效果；坐位调膝法操作时“以顺为纲”，有利于膝关节骨性异常结构的调整，增大关节间隙，改变关节腔内的应力集中位置，从而达到“骨正筋柔”的效果[24-25]。点穴调膝法能够促进膝骨关节炎患者“筋束骨，骨张筋”生理功能的恢复，这与膝骨关节炎的治则相符合。此次研究膝关节直径测量结果显示，与模型组比较，药物组和推拿组膝关节直径均缩小；缩足反射阈值结果显示，与模型组比较，药物组和推拿组均增加，表明点穴调膝法能够显著改善膝骨关节炎模型大鼠的体征和行为学表现。
现代医学认为，炎症因子白细胞介素6、白细胞介素18是膝骨关节炎的重要触发因素，可促进炎症反应加剧[26-27]；基质金属蛋白酶具有降解软骨细胞外基质的能力，同时能够促进软骨细胞凋亡的发生。在骨关节炎中，关节细胞和免疫细胞会产生如白细胞介素6、白细胞介素18和肿瘤坏死因子α等炎症递质，这些炎症递质会刺激基质金属蛋白酶的产生，降解软骨细胞外基质[28-31]。KOH等[32]报道白细胞介素1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素18、基质金属蛋白酶等炎症因子与骨关节炎软骨降解密切相关。基质金属蛋白酶1在骨关节炎中具有主要作用，它可以降解胶原蛋白，从而破坏软骨细胞外基质[33-36]。肿瘤坏死因子α在关节组织中主要由滑膜、软骨细胞、成骨细胞等分泌，可通过激活相应的分子途径诱导软骨细胞凋亡或炎症[37]。此次研究结果显示，点穴调膝法可降低膝骨关节炎大鼠血清中白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶1水平，表明膝骨关节炎大鼠的炎性反应在经过点穴调膝法干预后得以明显缓解。近年来，有不少机制研究已证实推拿在改善膝骨关节炎炎症微环境时的显著疗效，例如：吴佳航[38]研究发现，“舒筋”手法可降低膝骨关节炎模型兔膝关节液中白细胞介素1β含量；金祥雨[39]研究发现，理筋正骨手法可以减少膝骨关节炎模型兔膝关节液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6以及白细胞介素1β等炎症因子含量，对膝骨关节炎滑膜炎症具有显著治疗作用；李鑫等[40]研究证实，理筋手法可阻断膝骨关节炎模型兔软骨中的Wnt/β-catenin信号通路，从而降低基质金属蛋白酶13表达、抑制肿瘤坏死因子α与白细胞介素1β炎症因子渗出，减轻炎症反应。
此次研究苏木精-伊红染色结果显示，推拿组大鼠关节软骨病理损害经过干预后相较于模型组有明显改善，并且能够有利于减少软骨细胞的过度凋亡，因此推测点穴调膝法治疗膝骨关节炎模型大鼠的作用机制可能是通过减少白细胞介素6、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶1等炎症递质释放，从而抑制软骨细胞的过度凋亡以及修复软骨细胞外基质来实现的。目前，推拿抑制软骨细胞凋亡及改善软骨细胞外基质代谢干预膝骨关节炎的部分作用机制已被证实。姚梦莉[41]研究证实，理筋正骨手法可通过抑制RhoA/ROCK信号通路降低Ras同源基因家族成员A、Rho相关蛋白激酶表达，从而有效减少软骨细胞凋亡、减轻软骨损伤程度。另有研究证实，推拿干预膝骨关节炎模型大鼠能够抑制ROCK、LIM激酶1、丝切蛋白的表达和LIM 结构域激酶1、肌动蛋白丝切蛋白磷酸化，从而改善软骨细胞骨架重排所引起的细胞功能受损，延缓软骨组织退变[42]。
综上所述，此次研究结果表明，点穴调膝法能够有效缓解膝骨关节炎大鼠的炎症因子渗出，减轻炎症反应，延缓关节退行性损害。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

点穴调膝法改善膝骨关节炎模型大鼠关节软骨形态结构及炎症水平

Acupoint-pressing and knee-regulating therapy improves the morphological structure and inflammatory level of articular cartilage in rats with knee osteoarthritis

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[1]	方凤超, 杨文武, 吴鸿涛, 彭鹏, 梁智业, 姜涛, 陈伟坚, 刘文刚, 赵传喜. 线粒体动力学失衡与骨关节炎软骨退变的关联分析[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(在线): 1-8.
[2]	陈秋函, 杨龙, 袁代柱, 吴展羽, 邹梓豪, 叶川. 膝关节周围截骨治疗膝骨关节炎：治疗策略的优化[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(9): 2303-2312.
[3]	潘鸿飞, 庄圳冰, 徐白云, 杨章阳, 林恺瑞, 詹冰晴, 蓝靖涵, 高恒, 张南波, 林家煜. 不同浓度金诺芬抑制M1型巨噬细胞功能及修复糖尿病小鼠伤口的价值[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1390-1397.
[4]	彭志伟, 陈雷, 佟磊. 木犀草素促进糖尿病小鼠创面愈合的作用与机制[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1398-1406.
[5]	李豪, 陶红成, 曾平, 刘金富, 丁强, 牛驰程, 黄凯, 康宏誉. 丝裂原活化蛋白激酶信号通路调控骨关节炎的发生发展：指导中药靶点治疗[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1476-1485.
[6]	吕晓凡, 黄懿, 丁留成. 糖尿病膀胱病的线粒体机制与干预治疗[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1508-1515.
[7]	曹新燕, 于子夫, 冷晓轩, 高世爱, 陈金慧, 刘西花. 重复经颅磁刺激和经颅直流电刺激对脑瘫患儿运动功能及步态影响的网状Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1539-1548.
[8]	郭英, 田峰, 王春芳. 类风湿关节炎潜在药物靶点：来自欧洲数据库的大样本分析[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1549-1557.
[9]	陈驹, 郑锦畅, 梁振, 黄成硕, 林颢, 曾莉. β-石竹烯对小鼠膝骨关节炎的作用及机制[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1341-1347.
[10]	温广伟, 甄颖豪, 郑泰铿, 周淑怡, 莫国业, 周腾鹏, 李海山, 赖以毅. 异银杏素对破骨细胞分化的影响和机制[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1348-1358.
[11]	李林臻, 焦泓焯, 陈伟南, 张铭哲, 王建龙, 张君涛. 淫羊藿苷含药血清对脂多糖诱导人软骨细胞炎症损伤的影响[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1368-1374.
[12]	杨志杰, 赵瑞, 杨昊霖, 李小韵, 李扬博, 黄佳纯, 林燕平, 万雷, 黄宏兴. 绝经后骨质疏松症：肌肉质量、握力、四肢骨骼肌质量指数的预测价值[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(5): 1073-1080.
[13]	张倩, 黄东锋. 加权基因共表达网络分析结合机器学习筛选及验证骨关节炎生物标记物[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(5): 1096-1105.
[14]	阴勇成, 赵相瑞, 杨志杰, 李政, 李芳, 宁斌. 过氧化物还原酶1在脊髓损伤后小胶质细胞炎症反应中的作用及机制[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(5): 1106-1113.
[15]	张久轩, 张晋楠, 眭肖凡, 裴霞霞, 魏建宏, 苏强, 李甜. 氨中毒对小鼠认知行为和海马神经元突触的影响[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(5): 1122-1128.