2.1   ECd的制备及成分测定   ECd的制备流程见图1A。与对照组(15.77±0.25) pg/mL相比，内皮细胞条件培养基和ECd中VEGF含量均显著增加，含量分别为(218.84±11.90) pg/mL和(138.89±3.79) pg/mL (图1B)。蛋白含量检测结果显示，与对照组(0.92±0.01)mg/mL相比，内皮细胞条件培养基和ECd均明显增加，含量分别为3.14±0.11 mg/mL和3.16±0.11 mg/mL(图1C)。   



2.2   PCL取向纳米纤维的表征   如图2A所示，PCL纳米纤维具有良好的取向性，能够为细胞增殖、迁移提供良好的地形引导。纤维直径达到纳米级别，即700±150 nm(图2B)。
2.3   ECd在PCL取向纳米纤维膜上的沉积与表征   如图2C所示，PCL取向纳米纤维膜上的ECd以微粒形式沉积，且纤维保持良好的取向性，表明沉积ECd微粒的PCL纳米纤维能够同时为细胞提供地形线索和生物信号。如图2D所示，罗丹明B标记的ECd能够以微粒方式均匀分布于PCL取向纳米纤维膜上(见图2D)。




2.4   PCL纳米纤维的亲水性   如图3所示，未经等离子体处理的PCL取向纳米纤维的接触角为128.78±2.78°，具有疏水性；经等离子体处理后，未沉积与沉积ECd微粒的PCL取向纳米纤维均具有超亲水性，接触角为0°。



2.5   ECd最佳沉积时间
2.5.1   不同PCL-ECd纳米纤维表面ECd的沉积量   通过静电纺丝和静电喷雾技术制备了沉积ECd微粒10、20、30 min的PCL取向纳米纤维，分别记为PCL-ECd1、PCL-ECd2、PCL-ECd3。为了观察不同PCL-ECd纳米纤维表面ECd的含量，对其ECd中的蛋白含量进行了研究。与PCL-ECd1(0.11±0.01 mg/mL)相比，PCL-ECd2、PCL-ECd3中蛋白含量均显著增加(P < 0.001)，含量分别为0.23±0.07 pg/mL和0.37±0.02 mg/mL；同时，PCL-ECd3中蛋白含量显著高于PCL-ECd2(P < 0.05)。因此，随着沉积时间增加，ECd在PCL纳米纤维表面的沉积量增加(图4)。



2.5.2   人脐静脉内皮细胞增殖情况   CCK-8结果显示，与对照组相比，第1天和第3天PCL-ECd1组的人脐静脉内皮细胞增殖无明显降低，与PCL-ECd2、PCL-ECd3组细胞的增殖相比均显著增加(P < 0.05)。第5天PCL-ECd1组的人脐静脉内皮细胞的增殖与PCL、PCL-ECd2、PCL-ECd3组相比均显著增加(P < 0.01)(图5)。



2.5.3   施万细胞增殖情况   如图6所示，第5天时PCL-ECd1组与对照组相比，有统计学差异，已在图中进行标注。施万细胞的增殖与PCL-ECd2、PCL-ECd3组细胞的增殖相比均显著增加(P < 0.05)，该结果与人脐静脉内皮细胞增殖相似。



2.5.4   人脐静脉内皮细胞和施万细胞在不同PCL-ECd表面的生长情况   如图7所示，人脐静脉内皮细胞、施万细胞与各组样品培养3天后的荧光显微图片显示，与对照组相比，在未沉积与沉积ECd微粒的PCL取向纳米纤维膜上细胞沿着纤维的方向生长。根据人脐静脉内皮细胞、施万细胞增殖结果和生长形貌，最终选取ECd微粒沉积时间为10 min。



2.6   ECd微粒的单向线性梯度结果   上述实验结果表明适当的ECd沉积可以促进细胞增殖。根据上述沉积时间，通过改变载玻片的遮挡范围，即载玻片的遮挡范围依次为四个区域、三个区域、两个区域、一个区域和无载玻片遮挡区域，使每个区域ECd的沉积量逐渐减少最终获得ECd微粒单向线性梯度的沉积，制备流程见图8A。在罗丹明B标记的ECd微粒单向梯度涂层的PCL取向纳米纤维膜上，荧光强度逐渐增加，并且最高侧的荧光强度约为最低侧的40倍，表明在取向PCL纳米纤维上成功地沉积了ECd线性梯度(图8B)。如图8C所示，荧光显微照片显示以罗丹明B标记的ECd微粒在PCL取向纳米纤维膜上的均一与单向线性梯度沉积。



2.7   沉积ECd微粒的PCL取向纳米纤维对施万细胞的调控
2.7.1   施万细胞的活性结果   CCK-8检测显示，与对照组相比，均一与梯度组施万细胞的活性(98.09±0.03%、100.65±0.02%)均无显著降低；PCL组施万细胞的活性(93.49±0.024%)显著降低，但所有组细胞的活性均大于标准化细胞活力(70%)[20](图9)。




2.7.2   施万细胞的形态结果   施万细胞与各组样品培养3天后，荧光显微图片结果显示，与对照组相比，在PCL取向纳米纤维膜与沉积ECd微粒的PCL取向纳米纤维膜上细胞沿着纤维的方向生长，且生长状态良好，见图10。



2.7.3   施万细胞的迁移结果   如图11A所示，免疫荧光染色结果显示，与对照组相比，均一沉积和梯度沉积组施万细胞均有不同程度的迁移，Gradient组能够迁移至最远的位置。经量化统计分析，与对照组相比，均一沉积和梯度沉积组施万细胞迁移总数均有显著增加(P < 0.001)；均一沉积和梯度沉积组施万细胞迁移总数无明显差异(P > 0.05)，然而与PCL组相比细胞迁移总数明显增加(P < 0.001)。将迁移区平分为三个区域，在迁移Ⅰ区，梯度沉积组与均一沉积组比较有统计学差异。施万细胞的迁移数量明显高于对照组和PCL组(P < 0.001)；在迁移Ⅱ、Ⅲ区，梯度沉积组施万细胞的迁移数量显著高于对照组、PCL组与均一沉积组(P < 0.01)，见图11B-C。因此，ECd的单向线性梯度可以驱使施万细胞迁移更远。这种效应可能归因于梯度形成的物理和化学信号，蛋白质的均一沉积会使生化信号在微环境中相对均匀分布，细胞接收到的信息较为一致，可能引起细胞整体上向某一特定方向迁移；而梯度沉积会造成生化信号在空间上的不均匀分布，细胞通过在不同位置获取不同信号以满足行为需求，从而影响细胞迁移的方向和速度[21，22]。

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细胞具有对外界各种物理或化学线索做出反应的能力，这些线索包括可扩散生物分子的梯度，生物蛋白和细胞外基质的刚度[1]。地形线索是外界环境所提供的最为关键的物理信号之一，细胞在与外界环境接触时，能够感知到地形的物理特性，并将这些信号转化为细胞内的生化反应[2]。通过这些反应，细胞调整自身行为，如改变迁移方向、速度或方式。此外，地形线索还可以与生化线索相结合，共同调控细胞的行为[3，4]。例如沉积密度梯度重组人酸性成纤维细胞生长因子的取向PCL纳米纤维能够促进轴突生长和髓鞘化[5]。

在周围神经损伤后，施万细胞的定向迁移在神经修复过程中发挥着至关重要的作用[6]。神经损伤后，施万细胞会通过分裂和增殖，形成“Büngner”带。这种带状结构能够引导轴突沿着特定方向生长，确保再生轴突能够正确地连接到目标组织[7，8]。此外，施万细胞能够分泌多种神经营养因子，促进受损神经元的修复和再生[9]。在神经组织工程中，如何通过地形线索和生化信号高效地指导施万细胞的行为值得关注。

周围神经修复过程还伴随着血管生成、髓鞘形成和轴突再生[7]。其中，血管生成尤为重要，它能够为神经再生提供必要的初始微环境支持，而血管内皮生长因子作为血管生成过程中的关键因子，诱导新生血管形成，为神经修复提供生化信号[10]。血管小生境不仅为损伤部位提供持续的氧气和营养供应，而且支持施万细胞的存活、增殖和功能发挥[9]。静电纺纳米纤维能够模拟天然细胞外基质，为细胞提供地形线索从而引导细胞的定向迁移和轴突的定向延伸[11-12]。纳米纤维的高比表面积有利于药物和生物活性物质的释放，同时为细胞的黏附、铺展及增殖提供足够的空间，这对于神经组织的快速修复具有重要意义[13-15]。通过调整静电纺丝的参数、溶液浓度等可以精确控制纤维的拓扑结构。其中，取向纳米纤维提供的地形线索能够引导细胞沿着纤维的方向快速迁移和生长[16]。此外，静电喷雾技术能够将含有药物或生物活性物质的溶液转化为微粒，在空间上形成浓度梯度，为药物递送、细胞培养和组织工程等领域提供有力支持[17-19]。综上，微粒与纳米纤维结合构筑的三维结构能够为神经组织的再生和修复提供良好的微环境，为神经细胞行为调控和干细胞分化提供物理、化学和生物等多重诱导信号。

1.1   设计   单组之间的差异比较选择t检验，多组间比较采用单因素方差分析。
1.2   时间及地点   实验于2023年11月至2024年12月在青岛大学松山校区及青岛大学附属医院西海岸院区医学研究中心完成。
1.3   材料
1.3.1   细胞   人脐静脉内皮细胞、大鼠施万细胞由青岛大学先进生物材料与再生医学课题组细胞冻存库提供。
1.3.2   主要试剂和仪器   六氟异丙醇、罗丹明B、二氯甲烷(上海麦克林生化科技股份有限公司)；聚己内酯、猪皮Ⅰ型明胶和多聚赖氨酸溶液(美国 Sigma‒Aldrich 公司)；静电纺丝机(中国永康乐业)；真空等离子设备(北京欧倍尔科学仪器有限公司)；胎牛血清(德国 PAN 公司)；高糖DMEM培养基、青霉素-链霉素溶液(武汉普诺赛生命科技有限公司)；0.25%胰酶消化液(北京兰杰柯科技有限公司)；BCA蛋白浓度测定试剂盒、DAPI溶液(北京索莱宝科技有限公司)；细胞计数试剂盒-8(CCK-8)(美国 GlpBio 公司)；Phalloidin-iFluor 488试剂(英国 Abcam 公司)；人血管内皮生长因子酶联免疫吸附测定试剂盒(中国江莱生物科技有限公司)；冷冻干燥机(宁波新芝冻干设备有限公司)；水接触角测量仪(德国Tantec 公司)；扫描电镜(日本Regulus8100 公司)；二氧化碳培养箱(美国Thermo 公司)；酶标仪(美国Thermo 公司)；荧光显微镜(美国Echo 公司)。
1.4   实验方法 
1.4.1   细胞培养   采用含有10%胎牛血清和1%双抗的高糖DMEM培养基培养人脐静脉内皮细胞和施万细胞，每天进行换液，每2天传代一次。两种细胞均选择冻存后第2代用于后续实验。
1.4.2   ECd的制备及成分测定
      ECd的制备：从人脐静脉内皮细胞中提取ECd。具体来说，将生长状态良好的人脐静脉内皮细胞以5×105个/瓶的密度接种于30 mL高糖DMEM培养基中。培养3天后，收集人脐静脉内皮细胞条件培养基，以1 000 rmp速度离心处理5 min后获得上清液。将上清液置于-80 ℃保存24 h后进行冷冻(-55 ℃)干燥1天。处理得到ECd，将ECd置于-80℃超低温冰箱保存备用。
      血管内皮生长因子含量的测定：根据购买的人血管内皮生长因子的酶联免疫吸附测定试剂盒说明书进行血管内皮生长因子的测定。首先，使用试剂盒中通用稀释液对标准品进行倍比稀释，即浓度分别为200、100、50、25、12.5、6.25、3.12和0 pg/mL。样品为含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基、人脐静脉内皮细胞条件培养基、ECd水溶液(5 mg/mL)。将样品或不同浓度标准品加入酶标板内，每孔100 μL。盖上封板膜后于37 ℃孵育60 min后，弃去酶标板内液体，直接加入生物素化抗体工作液100 μL于在37 ℃中进行孵育。温育60 min后，移除酶标板内液体并进行3次洗涤，每孔加入300 μL洗涤液。之后每孔加入100 μL酶结合物工作液，并温育30 min。温育后吸走酶标板内液体，每孔加入300 μL洗涤液重复洗涤3次，加入底物，每孔90 μL，37 ℃下避光孵育15 min。15 min后每孔加入50 μL终止液，使用酶标仪立即检测在450 nm处的吸光度值，根据标准曲线计算出ECd中血管内皮生长因子的含量。
       蛋白含量的测定：使用购买的BCA蛋白浓度测定试剂盒进行蛋白含量的测定。首先，以试剂盒中BSA蛋白作为标准品，使用PBS对标准品进行稀释，即浓度分别为5、4、2、1、0.5、0 mg/mL。样品分别为含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基、人脐静脉内皮细胞条件培养基。BCA试剂与Cu2+试剂按体积比50∶1配制成工作液，充分混匀。将配制好的工作液以200 μL/孔的密度加入到96孔板中，每组3个重复。之后每孔加入50 μL标准品或样品。将96孔板于37 ℃孵育15 min，使用酶标仪检测在562 nm处的吸光度值，根据标准曲线计算出ECd中蛋白的含量。
1.4.3   PCL取向纳米纤维的制备与表征
       PCL取向纳米纤维的制备：采用静电纺丝技术制备PCL纳米纤维。将PCL溶于六氟异丙醇中，配制成终浓度为10 wt%的静电纺丝溶液。通过22号针头以1 mL/h的速度推动注射器；将铝箔纸包覆在滚筒(3 000 rpm)上，作为静电纺纳米纤维的接收装置。针头与滚筒之间施加15 kV的直流电压，接收距离为15 cm，接收时间为2.5 h。
       PCL取向纳米纤维的表征：将制备的PCL取向纳米纤维喷金20 s，电压10 kV，使用扫描电子显微镜观察纳米纤维的形态与直径，使用ImageJ软件测量和分析图像以计算纤维平均直径。
1.4.4   ECd微粒在PCL取向纳米纤维上的沉积与表征
       ECd微粒的沉积：采用静电喷雾技术，将ECd以微粒形式沉积于PCL取向纳米纤维表面。首先，将ECd以1∶1体积比溶于明胶水溶液中，制得ECd、明胶浓度均为5 wt%的静电喷雾混合溶液。之后，使用真空等离子设备(对PCL取向纳米纤维表面进行改性处理，使纤维由疏水变为亲水，然后使用浓度为0.1 mg/mL多聚赖氨酸溶液包被过夜，37 ℃烘干。在静电喷雾过程中，PCL取向纳米纤维作为接收装置，针头与接收装置之间施加20 kV的直流电压，推注速度为0.3 mL/h，接收距离为10 cm。ECd微粒的沉积时间分别为10 min、20 min、30 min，并用于后续参数筛选。
       ECd微粒的表征：为了可视化ECd微粒在PCL纳米纤维表面的分布情况，在静电喷雾溶液中加入1 mg/mL罗丹明B，使用上述方法获得在PCL纳米纤维表面沉积的ECd微粒。使用尼康正置显微镜观察纤维表面ECd微粒的分布情况，使用扫描电子显微镜观察沉积ECd微粒的PCL取向纳米纤维的形态。
1.4.5   纳米纤维的亲水性   将等离子体处前后的PCL与经等离子体处理后沉积ECd的PCL取向纤维置于载玻片上，使用水接触角测量仪将超纯水(5 μL)滴于纤维表面，测量水滴和纤维表面的接触角。
1.4.6   ECd最佳沉积时间   通过静电纺丝和静电喷雾技术制备沉积ECd微粒0、10、20、30 min的PCL取向纳米纤维并置于24孔板中，分别记为PCL、PCL-ECd1、PCL-ECd2、PCL-ECd3，以空白玻片作为对照，将人脐静脉内皮细胞、施万细胞以5×103个/孔的密度接种于上述样品上，分别加入含体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM培养基400 μL，每组3个重复，置于CO2培养箱中培养。
      不同PCL-ECd纳米纤维表面ECd的沉积量：首先对上述制备的不同PCL-ECd纳米纤维进行裁剪，大小为5×8 cm，使用二氯甲烷和超纯水对其进行溶解，其中二氯甲烷与超纯水按体积比1∶1配制。待不同PCL-ECd纳米纤维溶解后，使用购买的BCA蛋白浓度测定试剂盒进行蛋白含量的测定。BCA试剂与Cu2+试剂按体积比50∶1配制成工作液，充分混匀。将配制好的工作液每孔200 μL加入96孔板，每组3个重复。之后每孔加入50 μL不同PCL-ECd纳米纤维溶解后的溶液。将96孔板于37 ℃孵育15 min，使用酶标仪检测在562 nm处的吸光度值，根据标准曲线计算出不同PCL-ECd纳米纤维表面ECd的沉积量。
      不同PCL-ECd纳米纤维对人脐静脉内皮细胞、施万细胞增殖的影响：在第1、3、5天时，用含体积分数10%的CCK-8新鲜培养基替代原有的细胞培养基。37 ℃避光孵育2 h后，每孔吸取100 μL，使用酶标仪测量在450 nm处吸光度值，每组3个重复。
       不同PCL-ECd纳米纤维对人脐静脉内皮细胞、施万细胞形态的影响：按上述分组与人脐静脉内皮细胞、施万细胞培养3天后，使用4%细胞组织固定液固定细胞30 min，用PBS洗涤2次，然后用0.1% Triton X-100渗透10 min，1%牛血清白蛋白封闭1 h，加入Phalloidin-iFluor 488染料孵育30 min。随后，用DAPI染色封固剂封固，置于倒置荧光显微镜下观察细胞形态。
1.4.7   单向线性梯度ECd的制备   使用上述静电喷雾参数，在ECd混合溶液中加入1 mg/mL罗丹明B，将载玻片划分为5个相同大小的区域并在载玻片上方覆盖遮挡板。通过改变遮挡板的覆盖区域即由覆盖4个区域逐步递减至覆盖0个区域以改变静电场分布，从而获得ECd微粒的梯度沉积，最终产生ECd微粒的单向线性梯度，通过ImageJ软件测量载玻片上不同区域的平均相对荧光强度。
1.4.8   PCL-ECd纳米纤维调控施万细胞实验   通过静电纺丝和静电喷雾技术分别制备未沉积、均一与单向线性梯度沉积ECd微粒的PCL取向纳米纤维，分别记为PCL、均一沉积组和梯度沉积组，以空白玻片作为对照，样品放置于6孔板中进行实验。
        施万细胞活性实验：将施万细胞以2.5×104个/孔的密度接种于上述不同样品上，分别加入2 mL含1%体积分数胎牛血清的高糖DMEM培养基，每组3个重复，置于CO2培养箱中培养。第3天用CCK-8体积分数为10%的新鲜培养基替代细胞培养基，37 ℃避光孵育2 h后，每孔吸取100 μL使用酶标仪测量450 nm处的吸光度值。细胞活性=实验组吸光度值/对照组吸光度值×100%。
        施万细胞的形态实验：按上述分组与施万细胞培养后，固定、破膜、封闭后加入Phalloidin-iFluor 488染料孵育30 min。随后，用DAPI染色封固剂封固，置于倒置显微镜下观察细胞形态。
        施万细胞的迁移实验：在每个样品上距离左侧5 mm的位置放置聚二甲基硅氧烷矩形模具，左边的空白区域用于细胞种植。施万细胞以1×105个/孔的密度接种于种植区，待细胞粘附后，移除细胞迁移模具，加入3 mL含1%胎牛血清的高糖DMEM培养基，每组3个重复。3天后，样品进行固定、破膜、封闭后，加入Phalloidin-iFluor 488染料孵育30 min，最后用DAPI进行封片。使用正置荧光显微镜对样品进行观察、成像。通过ImageJ软件对各组细胞迁移总数以及迁移区中的细胞数目进行统计和计算。
1.5   主要观察指标   纳米纤维取向性，ECd均一与梯度的沉积以及其对施万细胞活性、形貌和迁移的影响。
1.6   统计学分析   数据采用SPSS软件进行分析，统计数据均以x±s表示。两组间比较选择t检验分析，多组间比较采用单因素方差分析。所有实验均重复3次以上，P < 0.05表示差异有显著性意义。文章统计学方法已通过青岛大学生物统计学专家审核。

周围神经损伤已成为最常见的神经系统损伤之一，影响着全球数百万病人[23]。周围神经损伤能够导致运动和感觉功能障碍甚至造成残疾，给患者和家属带来极大的心理负担[24]。因此，有效促进周围神经损伤后的神经修复已成为临床研究的重点。周围神经损伤后，神经再生微环境重塑非常重要[25，26]。神经修复早期，血管生成在周围神经损伤修复过程中扮演着至关重要的角色[27]，其作用体现在再生神经血管生态位的重建，以及提供充足的氧气和营养支持。有研究表明，通过在损伤部位给予如NGF、BDNF、VEGF等营养因子，以及为缺损部位的细胞提供充足的氧气、葡萄糖等可以改善神经再生微环境[28，29]。此外，一项研究发现内皮细胞在不同细胞密度条件下培养后所获得的条件培养基对背根神经节轴突生长的促进作用存在显著差异，造成这种差异的原因可能与内皮细胞分泌因子的浓度密切相关[30]。因此，本研究从神经再生初期的微环境出发，首先通过培养人脐静脉内皮细胞制备了ECd，其富含VEGF和蛋白，它们能够提供营养物质以改善神经再生微环境，从而促进神经损伤的修复。

静电纺丝技术与其他技术相比因其操作简单、成本低和可调性强，在组织修复与再生研究中备受关注[31，32]。PCL是组织工程支架的基础材料之一，因其为疏水性合成聚合物，因此表面不利于细胞初期粘附[33]。然而，材料表面具有亲水性对细胞的粘附和生长至关重要[34]。等离子体处理技术通过改变材料表面化学结构与形貌，增强亲水性，促进细胞粘附和生长，满足不同组织修复需求。过去，组织工程支架主要由单一材料构成，如天然材料、高分子聚合物[28，35]。单一材料的使用具有一定的缺陷。为满足组织工程的功能化需求，目前更多支架采用了材料与蛋白相结合的方式[36]。本研究使用等离子体对PCL表面进行改性使其具有超亲水性，并将PCL取向纳米纤维与ECd结合，通过扫描电子显微镜和荧光显微镜能够观察到PCL纳米纤维的取向结构和ECd的均匀沉积。通过将沉积ECd的PCL纳米纤维与细胞共培养表明适当的ECd沉积可以促进细胞增殖，可能是由于蛋白质沉积密度过高、浓度达到过饱和状态，以及细胞与基质间的粘附效率较低所致[37]。

与中枢神经系统不同，周围神经系统具有一定的自我修复潜能，这主要归因于施万细胞显著的可塑性[38]。在周围神经修复过程中，由于神经两个断端之间缺损距离较长而无法有效传递信号，因此促进施万细胞进行长距离的迁移是改善周围神经功能、促进周围神经修复的一项关键策略。本研究通过静电纺丝和静电喷雾技术制备沉积ECd微粒的PCL取向纳米纤维，其中PCL取向纳米纤维作为基础材料具有良好的生物相容性和生物可降解性，为施万细胞生长提供地形线索；然后，ECd微粒作为纤维表面的二级结构为施万细胞迁移提供接触诱导。细胞的迁移具有趋化性和趋触性，细胞能够感知周围环境中的化学信号以及细胞外基质的梯度方向，驱动细胞与表面受体结合并引发细胞内部信号传递从而使细胞沿着这一方向发生定向迁移[39，40]。这种化学信号和细胞外基质通常可以是各种蛋白、多糖、药物或多肽等，它们为细胞提供一个有利微环境[41]。通过神经营养和神经保护作用从而为施万细胞形成“Büngner”带提供所需的营养物质[42]。本研究通过改变电场分布获得单向线性梯度ECd微粒的修饰，引导施万细胞定向迁移。荧光显微镜拍摄结果可见施万细胞在ECd微粒修饰的纤维膜上有明显的细胞迁移现象，同时在ECd微粒单向线性梯度修饰的纤维膜上细胞能够迁移至更远的距离。

然而，这项研究仍有一些局限性。本研究已初步证明ECd中含有VEGF和蛋白，而对于所含蛋白的类型并未进行分析，因此，未来的研究可以聚焦于ECd中所含的多糖、蛋白，包括胶原蛋白、糖胺聚糖等，对其成分进行蛋白质组学分析，从而能够针对性研究[43，44]。轴突再生也是周围神经修复过程中重要的一环[45]，本研究进行了沉积ECd微粒的PCL取向纳米纤维对施万细胞迁移调控的初步探索，尚未进一步验证其对轴突再生的潜在促进作用。该研究主要通过细胞实验为ECd促进施万细胞迁移提供了一些基本的见解。未来的研究仍需要对ECd调控神经细胞的具体作用机制做进一步阐述，同时进行动物水平的研究以更好地了解血管微环境与神经间的相互作用。

综上所述，本研究制备的PCL取向纳米纤维具有良好的细胞相容性、有序的取向结构和超亲水性等多功能性。ECd富含VEGF和多种蛋白，通过静电喷雾技术能够以微粒方式附着于纤维表面。这种创新性的结合能够促进人脐静脉内皮细胞、施万细胞的增殖和施万细胞定向迁移，为周围神经的修复与再生领域开辟了新的途径。

文题释义：
施万细胞：周围神经再生过程中最重要的功能细胞，能够支持受损神经元的存活、促进轴突再生和髓鞘重建、提供多种神经营养因子、减轻炎症反应。
内皮细胞衍生物：从人脐静脉内皮细胞中提取，以微粒形式存在，含有血管内皮生长因子和生物活性蛋白物质，能够为细胞提供营养物质、黏附位点和方向指引。

细胞具备感知并响应外界物理或化学线索的能力，能够通过与微环境的相互作用感知地形特性，从而调控自身行为，如迁移方向、速度及方式的调整。在周围神经损伤后，施万细胞的定向迁移在神经修复过程中扮演着关键角色，其通过分泌神经营养因子，促进受损神经元的修复与再生。周围神经修复过程涉及血管生成、髓鞘形成及轴突再生等多个环节，其中血管内皮生长因子作为血管生成的核心调控因子，为神经修复提供了重要的生化信号。血管小生境不仅为损伤部位持续输送氧气和营养物质，还支持施万细胞的存活、增殖及功能发挥。基于此，此次研究聚焦于周围神经修复中损伤微环境的重塑，通过梯度沉积内皮细胞衍生物的纳米纤维系统研究其对施万细胞行为的调控机制。

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