灸法预处理减轻脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激损伤的机制

doi:10.12307/2024.308

中国组织工程研究 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (16): 2488-2493.doi: 10.12307/2024.308

• 组织构建实验造模 experimental modeling in tissue construction • 上一篇下一篇

灸法预处理减轻脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激损伤的机制

蒋洁1，刘娟2，于燕艳1，杨越1，王千慧1

1新疆医科大学中医学院，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054；2新疆医科大学附属中医医院，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830000

收稿日期:2023-02-22 接受日期:2023-04-18 出版日期:2024-06-08 发布日期:2023-07-29
通讯作者: 蒋洁，硕士，副教授，新疆医科大学中医学院，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市 830054
作者简介:蒋洁，女，1981年生，新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市人，汉族，2008年上海中医药大学毕业，硕士，副教授，主要从事针灸作用机制的研究。
基金资助:
新疆维吾尔自治区高校科研计划项目(XJEDU2021Y025)，项目负责人：蒋洁；“十四五”自治区高等学校重点学科(特色学科)中医学

Mechanism by which moxibustion pretreatment attenuates oxidative stress injury in a rat model of cerebral ischemia-reperfusion

Jiang Jie1, Liu Juan2, Yu Yanyan1, Yang Yue1, Wang Qianhui1

1School of Traditional Chinese Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China; 2Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830000, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China

Received:2023-02-22 Accepted:2023-04-18 Online:2024-06-08 Published:2023-07-29
Contact: Jiang Jie, School of Traditional Chinese Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
About author:Jiang Jie, Master, Associate professor, School of Traditional Chinese Medicine, Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, Xinjiang Uygur Autonomous Region, China
Supported by:
Xinjiang Uygur Autonomous Region University Research Program, No. XJEDU2021Y025 (to JJ); Key (Special) Disciplines of Traditional Chinese Medicine in Xinjiang Uygur Autonomous Region Universities during the 14th Five-Year Plan

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

灸法预处理：属于中医治未病的范畴，在前驱症状出现时给予艾灸预处理在多种疾病发病过程中可明显减轻发病症状，延缓发病进程。
氧化应激：是指体内氧化与抗氧化作用失衡的一种状态，在脑缺血后的再灌注损伤过程中发挥重要作用。

背景：艾灸预处理属于中医治未病的范畴，在前驱症状出现时给予艾灸预处理在多种疾病发病过程中可明显减轻发病症状，延缓发病进程，但其具体起效机制仍待研究。

目的：探讨SIRT1/FoxO3通路在灸法预处理改善脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激损伤的作用机制。
方法：将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、灸法预处理组、灸法预处理+EX527(SIRT1抑制剂)组，每组各12只。灸法预处理组在造模前给予百会、大椎、足三里麦粒灸，每穴灸3壮，每日1次，共治疗7 d；灸法预处理+EX527组在每次艾灸前30 min给予腹腔注射SIRT1抑制剂EX527(15 mg/kg)。在末次艾灸30 min后，除假手术组外，其他各组采用大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉栓塞大鼠模型，脑缺血处理2 h后，拔除中动脉线栓，再灌注12 h；假手术组仅给予颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉剥离，而并不插入线栓。再灌注12 h后对大鼠进行神经功能缺损评分，采用TTC染色法计算各组大鼠脑梗死体积，试剂盒检测梗死组织中氧化应激因子水平，Western-blot法检测大脑皮质缺血区中SIRT1、FoxO3、p-FoxO3、脑源性神经营养因子的蛋白表达。
结果与结论：①缺血再灌注12 h后，大鼠神经行为学评分模型组明显高于假手术组(P < 0.01)，灸法预处理组明显低于模型组(P < 0.01)，灸法预处理组低于灸法预处理+EX527组(P < 0.05)。②假手术组大鼠脑组织未见明显梗死灶，模型组大鼠右侧脑组织可见明显缺血灶(P < 0.01)，灸法预处理组大鼠右侧梗死体积较模型组明显减少 (P < 0.01)，灸法预处理+EX527组大鼠右侧梗死体积较灸法预处理组变大 (P < 0.01)。③再灌注12 h后，与假手术组比较，模型组丙二醛表达明显升高(P < 0.01)，超氧化物歧化酶表达明显降低(P < 0.01)；与模型组和灸法预处理+EX527组相比，灸法预处理组丙二醛表达明显降低(P < 0.01，P < 0.05)，超氧化物歧化酶表达明显升高(P < 0.01，P < 0.05)。④与假手术组比较，模型组SIRT1、FoxO3、p-FoxO3、脑源性神经营养因子蛋白表达均明显升高(P < 0.01)；与模型组比较，灸法预处理组SIRT1、FoxO3、脑源性神经营养因子明显升高(P < 0.01)，p-FoxO3表达明显降低(P < 0.01)；与灸法预处理+EX527组相比，灸法预处理组SIRT1、FoxO3、脑源性神经营养因子升高(P < 0.05)，p-FoxO3表达差异无显著性意义(P > 0.05)。⑤结论：灸法预处理可显著改善脑缺血再灌注后大鼠的神经功能，其机制可能与激活SIRT1/FoxO3通路减轻脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激损伤有关。

https://orcid.org/0000-0001-6517-8617(蒋洁)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 灸法预处理, 缺血再灌注, 氧化应激, SIRT1, FoxO3

Abstract: BACKGROUND: Pretreatment with moxibustion is a preventive treatment in traditional Chinese medicine. Pretreatment with moxibustion at the onset of prodromal symptoms can significantly reduce the symptoms and delay the onset of many diseases, but the exact mechanism remains to be studied.
OBJECTIVE: To investigate the mechanism of SIRT1/FoxO3 pathway in moxibustion pretreatment to ameliorate oxidative stress injury in cerebral ischemia-reperfusion model rats.
METHODS: Forty-eight Sprague-Dawley rats were randomly divided into sham-operated group, model group, moxibustion pretreatment group, and moxibustion pretreatment+EX527 (SIRT1 inhibitor) group, with 12 rats in each group. The moxibustion pretreatment group was given moxibustion with seed-sized moxa cone at Baihui, Dazhui, and Zusanli before modeling, three moxa-cones per acupoint, once a day for 7 days. In the model group, moxibustion pretreatment group and moxibustion pretreatment+EX527 group, the rat model of middle cerebral artery occlusion was made by suturing of the middle cerebral artery 30 minutes after the last moxibustion. After 2 hours of cerebral ischemia, the middle artery suture was removed and the rats were reperfused for 12 hours. In the sham-operated group, only the common carotid artery, internal carotid artery, and external carotid artery were dissected without suturing the middle cerebral artery. In the moxibustion pretreatment+EX527 group, EX527 (15 mg/kg) was given intraperitoneally 30 minutes before each moxibustion. After 12 hours of reperfusion, the rats were scored for neurological deficits, and the cerebral infarct volume was calculated by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride staining method. The levels of oxidative stress factors in the infarcted tissues were detected by the kit method, and western-blot method was used to detect the expression levels of SIRT1, FoxO3, p-FoxO3 and brain-derived neurotrophic factor in the ischemic area of the cerebral cortex.
RESULTS AND CONCLUSION: After 12 hours of reperfusion, the neurobehavioral score in the model group was significantly higher than that in the sham-operated group (P < 0.01), while the score in the moxibustion pretreatment group was significantly lower than that in the model group (P < 0.01) and moxibustion pretreatment+EX527 group (P < 0.05). There were no obvious infarct foci in the brain tissue of the sham-operated rats, but obvious ischemic foci were observed in the right side of the brain tissue of the rats in the model group (P < 0.01). The right infarct volume in the moxibustion pretreatment group was significantly reduced compared with the model group (P < 0.01), while the right infarct volume in the moxibustion pretreatment+EX527 group was significantly enlarged compared with the moxibustion pretreatment group. After 12 hours of reperfusion, the level of malondialdehyde was significantly elevated (P < 0.01) and the expression of superoxide dismutase was significantly decreased (P < 0.01) in the model group compared with the sham-operated group. The levels of malondialdehyde was significantly decreased (P < 0.01, P < 0.05) and the expression of superoxide dismutase was significantly increased (P < 0.01, P < 0.05) in the moxibustion pretreatment group compared with the model group and the moxibustion pretreatment+EX527 group. Western blot results showed that the expression levels of SIRT1, FoxO3, p-FoxO3, and brain-derived neurotrophic factor proteins were significantly higher in the model group compared with the sham-operated group (P < 0.01); compared with the model group, the expression levels of SIRT1, FoxO3, and brain-derived neurotrophic factor were significantly higher in the moxibustion pretreatment group (P < 0.01), and p-FoxO3 expression was significantly lower (P < 0.01); compared with the moxibustion pretreatment+EX527 group, the expression levels of SIRT1, FoxO3, and brain-derived neurotrophic factor were elevated in the moxibustion pretreatment group (P < 0.05), and no statistically significant difference was found in the p-FoxO3 expression (P > 0.05). To conclude, moxibustion pretreatment can significantly improve neurological function in rats after cerebral ischemia-reperfusion, and the mechanism may be related to the activation of SIRT1/FoxO3 pathway to reduce oxidative stress injury in the rat model of cerebral ischemia-reperfusion.

Key words: moxibustion pretreatment, ischemia-reperfusion, oxidative stress, SIRT1, FoxO3

中图分类号:

蒋洁, 刘娟, 于燕艳, 杨越, 王千慧. 灸法预处理减轻脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激损伤的机制[J]. 中国组织工程研究, 2024, 28(16): 2488-2493.

Jiang Jie, Liu Juan, Yu Yanyan, Yang Yue, Wang Qianhui. Mechanism by which moxibustion pretreatment attenuates oxidative stress injury in a rat model of cerebral ischemia-reperfusion[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2024, 28(16): 2488-2493.

图/表（结果） 4

2.1 实验动物数量分析在实验过程中，4 组48 只大鼠均无脱失，全部进入结果分析。
2.2 大鼠神经行为学评分结果显示，假手术组大鼠未表现出神经功能丧失症状；模型组大鼠神经行为学症状较明显，表现为左前肢不能充分伸展，呈瘫痪状，行走时可表现为向左环行转圈样运动；灸法预处理组仅出现轻度局灶神经功能丧失症状，较模型组明显减轻；SIRT1抑制剂EX527降低了灸法预处理的疗效。模型组神经行为学评分明显高于假手术组(P < 0.01)，模型组、灸法预处理组、灸法预处理+EX527组神经行为学评分分别为2.87±0.10，1.78±0.23，2.28±0.31，经统计显示，灸法预处理组神经行为学评分明显低于模型组和灸法预处理+EX527组(P < 0.01)，见图1。

2.3 大鼠脑梗死体积 TTC 染色法观察结果显示：假手术组大鼠脑组织未见明显梗死灶，模型组、灸法预处理组、灸法预处理+EX527组可见明显缺血灶，灸法预处理组大鼠右侧梗死体积小于模型组和灸法预处理+EX527组(P < 0.01，P < 0.05)，见图2。

2.4 梗死组织中氧化应激因子水平试剂盒检测结果显示：再灌注12 h后，与假手术组比较，模型组丙二醛表达明显升(P < 0.01)，超氧化物歧化酶表达明显降低(P < 0.01)；与模型组和灸法预处理+EX527组相比，灸法预处理组丙二醛表达明显降低(P < 0.01，P < 0.05)，超氧化物歧化酶表达明显升高(P < 0.01，P < 0.05)。结果见表1。

2.5 脑组织SIRT1、FoxO3、p-FoxO3、BDNF蛋白表达 Western-blot检测结果显示，与假手术组比较，模型组SIRT1、FoxO3、p-FoxO3、BDNF蛋白表达均明显升高(P < 0.01)；与模型组比较，灸法预处理组SIRT1、FoxO3、BDNF明显升高(P < 0.01)，p-FoxO3表达明显降低(P < 0.01)；与灸法预处理+EX527组相比，灸法预处理组SIRT1、FoxO3、BDNF升高(P < 0.05)，p-FoxO3表达未见明显统计学差异(P > 0.05)，见图3。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，组间比较采用单因素方差分析与LSD-t检验。
1.2 时间及地点实验于2022年6月至2023年1月在新疆医科大学完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物及分组 SPF级健康雄性SD大鼠48 只，体质量(250.0±5.0) g，由新疆医科大学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK(新)2018-0003。分笼饲养，饲养环境模拟自然昼夜条件，明暗周期12 h，温度(21±2) ℃，湿度40%-50%，自由饮水，适应性饲养7 d。采用随机数字表法将大鼠随机分为假手术组、模型组、灸法预处理组、灸法预处理+EX527 组，每组12 只。
实验方案经新疆医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为IACUC-20210303-26)。动物的使用符合科技部《关于善待实验动物的指导性意见》相关规定。
1.3.2 主要仪器和试剂 MCAO线栓(北京默沙东生物技术有限公司)，BX43显微镜(日本OLYMPUS公司)，戊巴比妥钠(阿拉丁试剂有限公司)，SIRT1抑制剂EX527(美国 Selleck 公司)，丙二醛(批号20210120)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD，批号 20210113)试剂盒购自南京建成生物工程研究所；兔抗鼠SIRT1、FoxO3、p-FoxO3、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)抗体及山羊抗兔IgG二抗(Abcam公司)。
1.4 实验方法
1.4.1 造模方法大脑中动脉栓塞模型的造模方法参照LONGA等[10]改良后的大脑中动脉线栓法，具体方法如下：以3%戊巴比妥钠(60 mg/kg)腹腔注射麻醉，将大鼠腹腔注射麻醉后，从大鼠颈部右侧剪开切口，仔细分离并暴露右侧颈总动脉、颈内动脉及颈外动脉。结扎颈总动脉近心端和颈外动脉，然后用微动脉夹夹闭远端颈内动脉。在颈总动脉上近分叉处3.0-4.0 mm处剪一“V”型切口，将备好的线栓经颈总动脉插入颈内动脉，当感觉到有少许阻力感时，表明已阻断大脑中动脉入口处，插入18-20 mm，之后结扎颈内动脉，常规行手术缝合，预留部分线栓在皮肤外。在缺血2 h后，拔除线栓到颈总动脉主干分叉处，使血流再灌注24 h。假手术组仅给予颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉剥离，而并不插入线栓。

待大鼠自然苏醒后，采用LONGA等[10]的5 分制评分法对所有大鼠进行神经功能缺损评定，评分标准：0 分，无神经功能损伤；1 分，不能完全伸展对侧前肢；2 分，行走时向对侧转圈；3 分，行走时向对侧倾倒；4 分，不能自发行走，意识丧失。评分在2-4 分为造模成功。

1.4.2 干预方法假手术组和模型组不进行灸法治疗，灸法预处理组在正式造模前7 d开始给予艾灸预处理，方法如下：将大鼠固定于操作台上，选取大鼠百会、大椎、足三里，穴位定位标准参照《实验针灸学》常用实验动物穴位图谱[11]。以麦粒型艾炷(南阳汉医艾绒有限责任公司，质量约10 mg/壮)在大鼠百会、大椎、足三里穴行麦粒灸3 壮，每天每穴治疗1 次，共治疗7 d。末次艾灸30 min后造模。灸法预处理+EX527组在每次艾灸前30 min给予腹腔注射EX527(15 mg/kg)。各组分别在缺血再灌注后12 h麻醉后处死大鼠进行同步取材。
1.4.3 TTC染色测定各组大鼠脑梗死百分比各组大鼠均随机选取6 只取脑组织，-20 ℃冰箱冷藏后将脑组织置于脑槽内沿冠状面进行切片，切片厚度2-2.5 μm，将切好的薄片放置在2%TTC溶液中，用锡箔纸包好后放入37 ℃温箱孵育20 min，期间不断上下翻动切片，以保证脑组织可以均匀沾染染色液；用40 g/L多聚甲醛固定2 h后进行拍照。采用Image J软件测量大鼠脑梗死体积。计算公式：梗死脑体积百分比(%)=梗死区体积/整个大脑体积×100%。
1.4.4 试剂盒检测梗死组织中氧化应激因子水平取5 mg脑梗死组织放于1.5 mL EP管中，制备成脑组织匀浆液后，采用酶联免疫吸附法检测梗死区脑组织中丙二醛、超氧化物歧化酶的表达。
1.4.5 Western-blot检测各组随机选取6 只大鼠麻醉后处死取脑组织，取等量缺血区脑组织(100 mg)放入1.5 mL EP管中，加入1 mL预冷的组织蛋白裂解液，用匀浆机研磨均匀，放置于冰上裂解20 min，然后，于4 ℃、14 000×g离心机离心10 min，取上清液，BCA蛋白定量试剂盒测定总蛋白浓度。取裂解蛋白50 μg，80 V电泳至浓缩胶与分离胶分界线处，然后换为100 V电泳70 min，以大体观察溴酚蓝的条带距胶底1 cm左右停止电泳，换100 V电转70 min，5%的脱脂奶粉封闭2 h，一抗(SIRT1、FoxO3、p-FoxO3、BDNF抗体，1∶1 000)4 ℃孵育过夜，辣根过氧化物酶标记的二抗孵育1 h，洗膜后加入显影试剂，化学发光、显影。Alpha Innotech® Fluor Chem FC2凝胶成像系统采集图像，用Image J软件对条带计算SIRT1、FoxO3、p-FoxO3、BDNF蛋白表达的灰度值。以目的蛋白/GAPDH表示蛋白相对表达。
1.5 主要观察指标 ①大鼠神经行为学评分；②脑梗死体积；③梗死组织中氧化应激因子水平；④脑组织中SIRT1、FoxO3、p-FoxO3、BDNF蛋白表达。
1.6 统计学分析应用SPSS 21. 0统计软件进行统计学处理，各组数据以x±s表示。结果采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，服从正态分布且方差齐的数据组间比较采用LSD-t检验法，方差不齐时采用Welch检验。以P < 0.05为差异有显著性意义，P < 0.01为差异有非常显著性意义。文章的统计学方法已经新疆医科大学生物统计学专家审核。

讨论

脑卒中是继癌症和冠心病之后全球第三大死亡原因，并导致80%的患者出现永久性残疾[12-13]。缺血性脑卒中约占所有卒中类型的70%，其余亚型为脑内出血或蛛网膜下腔出血[12]。目前，静脉溶栓和血管内取栓可以恢复血流，被认为是治疗脑缺血的有效方法[14-15]。然而，在脑卒中后的康复过程中，后续的神经功能丧失仍然难以解决。脑缺血后会出现一系列的代谢和细胞损伤，包括神经炎症[16]、氧化应激损伤[17]、自噬和凋亡的交替[18]、兴奋性毒性等[19]。
艾灸是通过灸法刺激腧穴局部，从而起到调节全身、活血通络、调和阴阳的目的，灸法治疗脑卒中已在针灸临床得到广泛应用。艾灸预处理属于“逆灸”范畴，指的是在发病之前或发病之初即对患者进行治疗，达到舒经通络，提高机体免疫能力，从而防止疾病发生、延缓疾病进展的效果，其理论基础属于中医学“治未病”思想。艾灸预处理的机制一部分可用针灸良性预应激假说进行阐述[20]，但其具体机制仍待阐述。此次研究选择百会、大椎、足三里3个穴位作为干预穴位，百会穴、大椎穴属督脉穴位，督脉循行“上至风府，入属于脑，上巅，循额，至鼻柱，属阳脉之海”，且百会穴为手足三阳经的交会穴，具有振奋阳气、醒脑开窍的作用。《灵枢•口问》：“故上气不足，脑为之不满，耳为之苦聋，头为之苦倾，目为之眩”。足三里为足阳明经之穴位，具有明确的补气功效，气足则脑清。
此次研究结果发现：灸法预处理可显著降低大鼠的神经行为学评分，减小缺血再灌注后的脑组织梗死面积，增加SIRT1、FoxO3、超氧化物歧化酶、BDNF蛋白表达，降低丙二醛蛋白表达，应用SIRT1抑制剂EX527后，灸法预处理的效应被抑制，说明灸法预处理可显著改善缺血再灌注后大鼠的神经功能，其机制可能与激活SIRT1/FoxO3通路减轻脑缺血再灌注后氧化应激损伤有关。该结论与前人部分研究结果类似[21]。
在脑卒中发病过程中，活性氧的过度产生和随后的脑损伤有关[22-23]。脑卒中后，线粒体过度产生活性氧，然后通过破坏蛋白质、脂质和核酸，对细胞功能产生一系列破坏性影响[24]。此外，细胞死亡途径可由活性氧作为细胞内信使发出信号[25]。因此，减少活性氧产生一直是脑卒中治疗研究的重点。氧化应激是机体内活性氧生成过多或清除能力降低，丙二醛是细胞膜脂质过氧化终产物，超氧化物歧化酶是氧自由基清除剂之一，因此丙二醛和超氧化物歧化酶被作为衡量机体氧化应激水平的常用指标。此次研究发现艾灸预处理可显著增加超氧化物歧化酶表达，降低丙二醛表达，说明艾灸预处理可显著改善脑缺血再灌注后氧化应激。
SIRT1，也被称为sirtuin 1，是一种位于细胞核中的NAD依赖性去乙酰化酶[25]。SIRT1已被证明在调节广泛的生理过程中发挥了关键作用，包括细胞凋亡、DNA修复、炎症反应、代谢、癌症和压力[26]。以前的研究表明，SIRT1可以在不同的研究领域，包括缺血再灌注诱导的肾脏、大脑和心脏损伤中，对氧化应激炎症起保护作用[27]。近年来，SIRT1被认为在脑卒中的发病机制中特别重要，大量研究表明，SIRT1可以保护神经元免受FOXO、核因子κB和p53诱导的氧化和炎症损伤[28]。FOXO3已被证明在调节氧化应激方面起着重要作用，它能上调几种抗氧化蛋白的表达，包括超氧化物歧化酶、锰超氧化物歧化酶和过氧化氢酶(CAT)，FOXO3可以被磷酸化和去乙酰化以调节其转录活性[29]。此外，有研究表明，SIRT1能使组蛋白和非组蛋白去乙酰化，包括FOXO，SIRT1通过去乙酰化和激活FOXO增加细胞对氧化应激的抵抗力，从而促进抗氧化蛋白如超氧化物歧化酶的表达[30]。SIRT1对FOXO3的去乙酰化可以防止FOXO3诱发的细胞死亡，在对刺激的反应中，FOXO3a会磷酸化并与细胞核中的14-3-3蛋白结合，这抑制了FOXO3a依赖的转录[31-32]。细胞可以通过与SIRT1一起使FOXO3去乙酰化来抵抗氧化应激，并诱导周期停滞。
WU等[33]发现，lncRNA SNHG12通过激活SIRT1/FOXO3途径抑制缺血再灌注模型的氧化应激反应。在DUAN等[34]的研究中，Akt/SIRT1/FOXO3a/PGC-1α途径被证明受到来自Aralia taibaiensis(sAT)的皂苷的调节，保护脑细胞免受缺血和再灌注引起的线粒体功能障碍。此次研究发现灸法预处理可显著增加SIRT1、FoxO3蛋白表达，应用SIRT1抑制剂EX527后，灸法预处理的效应被抑制，说明灸法预处理起效机制可能与激活SIRT1/FoxO3通路有关。
综上所述，此次研究认为灸法预处理可显著改善缺血再灌注后大鼠的神经功能，其机制可能与激活SIRT1/FoxO3通路减轻脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激损伤有关。
此次研究为临床应用灸法预处理防治脑卒中提供了一定的实验依据，然而研究仍存在一定的局限性，首先，研究的样本量稍显不足，以致在统计时部分数值误差值较大；其次，研究仅进行了再灌注12 h的疗效，未进行多个时间点的动态观察，在灸法预处理的动态疗效方面仍缺少一定的数据支撑；第三，仅选择了大鼠样本进行观察，此后仍需要在其他物种中进一步验证灸法预处理对脑卒中缺血再灌注后氧化应激损伤的疗效。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

灸法预处理减轻脑缺血再灌注模型大鼠氧化应激损伤的机制

Mechanism by which moxibustion pretreatment attenuates oxidative stress injury in a rat model of cerebral ischemia-reperfusion

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