基于TMT蛋白质组学分析骨疏康胶囊治疗骨质疏松模型大鼠的机制

doi:10.12307/2021.216

中国组织工程研究 ›› 2021, Vol. 25 ›› Issue (32): 5141-5147.doi: 10.12307/2021.216

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基于TMT蛋白质组学分析骨疏康胶囊治疗骨质疏松模型大鼠的机制

林若慧1，陈赛楠2，叶云金2，陈娟2，谢丽华2，黄景文2，葛继荣2，李生强2

1福建中医药大学，福建省福州市 350122；2福建省中医药科学院骨质疏松证候基因组学研究室，福建省福州市 350003

收稿日期:2020-11-18 修回日期:2020-11-21 接受日期:2021-01-09 出版日期:2021-11-18 发布日期:2021-07-26
通讯作者: 李生强，副研究员，硕士生导师，福建省中医药科学院骨质疏松证候基因组学研究室，福建省福州市 350003
作者简介:林若慧，女，1995年生，浙江省瑞安市人，汉族，福建中医药大学在读硕士，主要从事中医药防治骨质疏松的研究
基金资助:
福建省科技厅省属公益类科研院所基本科研专项(2019R1003-1)，项目负责人：李生强

Protective mechanism of Gushukang granule in a rat osteoporosis model based on TMT proteomic analysis

Lin Ruohui1, Chen Sainan2, Ye Yunjin2, Chen Juan2, Xie Lihua2, Huang Jingwen2, Ge Jirong2, Li Shengqiang2

1Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, Fujian Province, China; 2Osteoporosis Syndrome Genomics Laboratory, Fujian Academy of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350003, Fujian Province, China

Received:2020-11-18 Revised:2020-11-21 Accepted:2021-01-09 Online:2021-11-18 Published:2021-07-26
Contact: Li Shengqiang, Associate researcher, Master’s supervisor, Osteoporosis Syndrome Genomics Laboratory, Fujian Academy of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350003, Fujian Province, China
About author:Lin Ruohui, Master candidate, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou 350122, Fujian Province, China
Supported by:
Basic Scientific Research Project of Fujian Provincial Department of Science and Technology, No. 2019R1003-1 (to LSQ)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
TMT技术：由Thermo Scientific公司推出的一种基于体外等重同位素标记的相对与绝对定量技术。该技术利用同位素试剂标记多肽末端氨基或赖氨酸侧链氨基基团，经高分辨质谱仪串联分析，可同时比较多达10种样品之间的蛋白质表达量，是近年来定量蛋白质组学常用的高通量筛选技术。
骨疏康胶囊：是在依据中医“补肾、益气、壮骨”等理论下构建，具有补肾益气、活血壮骨功效的中成药。近年来被广泛应用于临床防治绝经后骨质疏松症，可显著改善患者腰膝酸软、腰背疼痛、下肢痿弱等症状。
背景：骨疏康治疗骨质疏松症的具体机制及作用靶点尚未明确，需进一步深入研究。
目的：探究骨疏康保护骨质疏松模型大鼠骨代谢的机制，对差异表达蛋白进行生物信息学分析。
方法：36只雌性SD大鼠，去势法建立骨质疏松症模型大鼠24只，其中模型组12只，骨疏康组12只；假手术组12只为对照组。造模后，骨疏康组大鼠给予骨疏康灌胃[4.32 g/(kg·d)]，1次/d；假手术组和模型组给予等体积生理盐水，1次/d。连续灌胃3个月后，测定大鼠胫骨骨密度；利用TMT-LC-MC/MC联用技术进行骨质疏松模型大鼠腰椎蛋白质组学分析，筛选出差异表达蛋白，对其进行GO、KEGG通路、蛋白互作分析，并构建蛋白质相互作用网络。实验方案经福建省中医药科学院动物实验伦理委员会批准。
结果与结论：①筛选出骨疏康组/模型组之间32个上调和49个下调的差异表达蛋白；②GO富集分析表明，他们参与免疫球蛋白受体结合、血管内皮生长因子受体结合等生物过程及核酸模板转录、RNA生物合成等分子功能；③KEGG富集分析表明，骨疏康组与模型组的差异表达蛋白主要参与酪氨酸代谢、乙醇代谢、JAK-STAT等信号通路；④PPI分析表明，骨疏康组和模型组的共同差异蛋白中Mecp2、Aldh3b1、Ryr1、Myoz1位于蛋白质互作网络的节点且与骨代谢关系密切；⑤结果显示，骨疏康可能通过调控差异蛋白及酪氨酸代谢、JAK-STAT等重要信号通路参与保护骨质疏松模型大鼠的骨代谢过程。

https://orcid.org/0000-0002-1384-817X (林若慧)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 骨疏康, TMT技术, 蛋白质组学, 差异蛋白, 骨质疏松模型大鼠, 骨代谢, 生物信息学, 中医药

Abstract: BACKGROUND: The specific mechanism and target of Gushukang in the treatment of osteoporosis are still unclear, which need further explorations.
OBJECTIVE: To explore the protective mechanism of Gushukang on bone metabolism in osteoporotic rats and to analyze the differentially expressed proteins by bioinformatics.
METHODS: Twenty-four osteoporosis model rats were established by ovariectomy, 12 in model group and 12 in Gushukang group. Another 12 rats without ovariectomy were used as sham operation group. Gushukang capsule, 4.32 g/kg/d, was intragastrically administered once a day in the Gushukang group, and rats in the other two groups were given the same volume of normal saline. Treatment in each group lasted for 3 months. Bone mineral density of the tibia was measured. The proteomic analysis of the lumbar vertebrae of osteoporotic rats was carried out by TMT-LC-MC/MC technique, and the differentially expressed proteins were screened, analyzed by gene ontology, Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathway and protein-protein interaction, thereby constructing a protein-protein interaction network. An ethical approval was obtained from the Animal Ethics Committee of Fujian Academy of Traditional Chinese Medicine.
RESULTS AND CONCLUSION: A total of 32 up-regulated and 49 down-regulated proteins were screened between Gushukang group and model group. Gene ontology enrichment analysis showed that these differentially expressed proteins were involved in biological processes, such as immunoglobulin receptor binding and vascular endothelial growth factor receptor binding, and molecular functions, such as nucleic acid template transcription and RNA biosynthesis. KEGG enrichment analysis showed that the differentially expressed proteins in the Gushukang group and model group were mainly involved in tyrosine metabolism, ethanol metabolism, JAK-STAT and other signal pathways. Protein-protein interaction analysis showed that among the common differential proteins in the Gushukang group and model group, Mecp2, Aldh3b1, Ryr1 and Myoz1 were located at the nodes of protein interaction network and were closely related to bone metabolism. These findings indicate that Gushukang granule may be involved in protecting the bone metabolism of osteoporotic rats by regulating differential proteins, tyrosine metabolism, JAK-STAT and other important signal pathways.

Key words: Gushukang, TMT technology, proteomics, differential protein, rat osteoporosis model, bone metabolism, bioinformatics, traditional Chinese medicine

中图分类号:

林若慧, 陈赛楠, 叶云金, 陈娟, 谢丽华, 黄景文, 葛继荣, 李生强. 基于TMT蛋白质组学分析骨疏康胶囊治疗骨质疏松模型大鼠的机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(32): 5141-5147.

Lin Ruohui, Chen Sainan, Ye Yunjin, Chen Juan, Xie Lihua, Huang Jingwen, Ge Jirong, Li Shengqiang. Protective mechanism of Gushukang granule in a rat osteoporosis model based on TMT proteomic analysis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2021, 25(32): 5141-5147.

图/表（结果） 9

2.1 实验动物数量分析实验选用大鼠36只，分为3组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。
2.2 各组大鼠胫骨骨密度比较与假手术组相比，模型组骨密度显著降低(P < 0.05)；与模型组相比，骨疏康组骨密度显著提高(P < 0.05)；骨疏康组与假手术组骨密度比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见表1。

2.3 蛋白质鉴定及差异表达蛋白质筛选在3组中共鉴定到 3 614个蛋白质。以上述实验方法中提到的差异蛋白筛选条件为标准，进行了组间差异表达蛋白数目比较。模型组与假手术组相比，共有125个差异表达蛋白，其中上调的蛋白有76个，下调的蛋白有49个；与模型组相比，给予骨疏康治疗后，共有81个差异表达蛋白质，其中上调的蛋白有32个,下调的蛋白有49个。蛋白质定量结果统计以火山图形式展示，见图1，2。

2.4 差异表达蛋白质GO功能富集分析
2.4.1 去势手术后差异表达蛋白质GO功能富集分析将模型组与假手术组数据进行差异表达蛋白GO基因功能注释及富集分析，结果发现他们主要包含细胞、细胞器、膜部分、胞外区域等细胞组分(cellular compoent，CC)；具有结合、结构分子活性、外切酶活性等分子功能(molecular function，MF)；并参与细胞过程、核转录mRNA分解代谢过程、应激反应等生物过程(biological process，BP)，见图3。

2.4.2 骨疏康治疗后差异表达蛋白质GO功能富集分析将骨疏康组与模型组数据进行差异表达蛋白GO基因功能注释及富集分析，结果发现他们主要包含细胞、细胞器部分、蛋白复合物、膜部分等细胞组分；具有核酸模板转录、RNA生物合成等分子功能；并参与免疫球蛋白受体结合、血管内皮生长因子受体结合等生物过程，见图4。

2.5 差异表达蛋白质KEGG通路富集分析
2.5.1 去势手术后差异表达蛋白质KEGG通路富集分析将模型组与假手术组数据进行差异表达蛋白富集分析，富集到KEGG pathway共14条，见图5。其中，富集程度显著性最高的有1型糖尿病代谢、RNA降解、嘌呤和叶绿素代谢、抗原加工和提呈、补体和凝血级联反应等重要通路。

2.5.2 骨疏康治疗后差异表达蛋白质KEGG通路富集分析将骨疏康组与模型组数据进行差异表达蛋白富集分析，富集到KEGG pathway共3条，包括酪氨酸代谢、JAK-STAT信号通路、乙醇代谢等重要通路，见图6。

2.6 共同差异表达蛋白统计统计模型组/假手术组差异蛋白在骨疏康组的表达情况。模型组表达上调，而在骨疏康组表达下调的蛋白有25个；模型组表达下调，而在骨疏康组表达上调的蛋白有2个，即模型组共有27个异常表达的蛋白在骨疏康组得到纠正，见表2。

2.7 共同差异表达蛋白PPI分析为获得蛋白质的更多功能信息，通过STRING蛋白相互作用网络分析工具分析，发现共同差异蛋白中Gstz1[10]、Cxxc1[11]、Mecp2、Aldh3b1、Tspan14[12]、Ryr1、Myoz1位于功能网络节点，其余蛋白均在网络边缘，见图7。图中Gstz1、Cxxc1、Mecp2之间存在相互作用，Aldh3b1与Tspan14、Ryr1与Myoz1之间存在相互作用。

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引言

骨质疏松症是一种以骨量丢失、骨组织的微小结构破坏，引起骨强度下降和骨脆性增加为特征的全身代谢性疾病，其临床表现以疼痛、脊柱弯曲为主[1]。骨质疏松症被传统医学认为属于“骨痿”“骨枯”等范畴。目前临床中医药治疗在辨证论治的指导下具有明显的疗效和优势[2-3]，能较好的改善西药治疗的药物不良反应及安全性问题。中药及中药复方有效活性成分众多，但部分化学成分尚不明确，且中药成分于复杂的机体内分泌及代谢环境中的作用机制尚不清楚[4]。随着蛋白质组学发展迅速以及生物信息学理论的建立，逐步解决了中药复方作用机制方面检测灵敏度不高、可靠评价指标少等问题[5]，并为中药复方治疗疾病的作用靶点研究提供了一个新的研究策略。
骨疏康胶囊是一种治疗骨质疏松症的中成药，其有服用方便、疗效稳定、不良反应小的特点[6]，已被临床广泛应用。已有研究表明骨疏康能减少骨质疏松症小鼠的骨细胞凋亡、提高骨密度和骨矿含量，能较好的调节骨质疏松症患者骨代谢水平[7-8]，改善临床症状。同时最近研究表明骨疏康可促进破骨细胞凋亡、抑制骨质疏松大鼠的骨吸收，从而延缓骨丢失和治疗骨质疏松症[9]。但目前骨疏康治疗骨质疏松症的具体机制及作用靶点尚不明确，且基于分子水平相关研究报道较少，故仍需深入探究。此次研究利用TMT(Tandem mass tag，TMT)标记联合液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)技术研究骨疏康干预骨质疏松症大鼠腰椎的差异蛋白表达，运用生物信息学进行GO及信号通路分析，预测骨疏康治疗骨质疏松症可能的作用靶点，进一步阐释其保护骨质疏松症大鼠骨代谢的作用机制。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。
1.2 时间及地点实验于2018年9月至2019年9月分别于在福建省中医药科学院比较学中心和福建省中医药科学院基础研究所实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 36只3月龄清洁级雌性SD大鼠，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，实验动物生产许可证号：SCXK(沪)2007-0005，合格证编号：2007000530078；在福建省中医药科学院比较医学实验中心继续饲养至6月龄，实验许可证号：SYXK(闽) 2009-000。各组动物在温度20-22 ℃，适宜湿度和光照的环境中饲养。
1.3.2 实验药物、试剂与仪器骨疏康胶囊(辽宁康辰药业有限公司，国药准字：Z20060270)，主要成分：淫羊藿、熟地黄、骨碎补、黄芪、丹参、木耳、黄瓜籽；BCA 定量试剂盒(中国碧云天)；SDT 裂解液、TMT标记试剂盒(美国Thermo Fisher公司)；Discovery W双能X射线骨密度仪(变异系数1.0 CV%，精度0.25%，美国Hologic 公司)；Q-Exactive质谱仪(美国Thermo Fisher公司)；Easy nLC 色谱系统 (美国Thermo Scientific)。
1.4 实验方法
1.4.1 动物分组、造模及给药 36只6月龄大鼠按照随机数字表法分成骨疏康组(n=12)、模型组(n=12)、假手术组(n=12)。根据文献方法施行大鼠双侧卵巢切除术建立骨质疏松症模型[9]；假手术组切除卵巢旁等体积的脂肪组织。术后3 d肌注青霉素80万单位/d。造模后，骨疏康组大鼠给予骨疏康灌胃[骨疏康换算后给药量为0.32 g/(kg·d)，用生理盐水配成药液]，1次/d；假手术组和模型组每只给予等体积生理盐水，1次/d，连续3个月。各组给予普通饲料、自由饮水和活动。

1.4.2 取材连续干预3个月后，用2%戊巴比妥钠40 mg/kg注射麻醉处死各组大鼠，分离第1，2腰椎，迅速放入液氮中；取左侧胫骨用于骨密度检测；选择大鼠腰椎用于提取蛋白，并将各组每4只大鼠腰椎蛋白混合成1个样品，即每组分为3个蛋白样品用于检测。

1.4.3 大鼠胫骨骨密度检测采用双能X射线骨密度仪检测各组大鼠左侧胫骨骨密度，严格按照仪器说明进行操作。
1.4.4 腰椎总蛋白制备取腰椎样品加入适量SDT裂解液，沸水浴后，离心取上清液提取蛋白质。采用 BCA法进行蛋白质定量后-80 ℃保存。
1.4.5 TMT标记及肽段分级每个样品取适量蛋白质进行胰蛋白酶酶解，肽段定量(A280)。按照TMT标记试剂盒说明书，每份样品分别取100 μg肽段进行标记后等量混合再进行分级。首先采用乙腈和0.1%三氟乙酸(TFA)进行柱平衡，然后将混合的标记肽段样品上样，将其脱盐处理、梯度洗脱、真空干燥后用适量0.1%FA复溶冻干样品，A280测定肽段浓度。
1.4.6 液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS) 采用纳升流速的HPLC液相系统Easy nLC对每份分级样品进行分离；样品经色谱分离后用Q-Exactive质谱仪进行质谱分析，正离子检测方式，母离子扫描范围300-1 800 m/z。多肽和多肽碎片的质量电荷比采集方式：每次全扫描后采集20个碎片图谱(MS2 scan，HCD)。
1.4.7 蛋白质鉴定和定量分析 LC-MS/MS 质谱分析原始数据使用软件Mascot 2.2和Proteome Discoverer 1.4进行查库鉴定及定量分析。蛋白数据库为：UNIPROT_Rattus_norvegicus_36107_20190524；定量方式根据唯一肽段定量值的中位数。最大漏切数2；可变修饰有Oxidation (M)，TMT6/10 plex(Y)，固定修饰Carbamidomethyl (C)，TMT6/10 plex(N-term)，TMT6/10 plex(K)；可信肽段的筛选标准≤0.01。
1.5 主要观察指标 ①差异表达蛋白；②Gene Ontology(GO)功能富集分析(Blast2Go软件，http://www.blast2go.com/)；③Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG，http://www.kegg.jp/)信号通路分析；④蛋白质相互作用网络分析(PPI，STRING数据库，http://string-db.org/)。
1.6 统计学分析和生物信息学分析应用 SPSS 22.0 软件对数据进行统计学处理，结果以x±s表示，根据数据是否符合正态性检验，选择非参数检验；研究数据为多组间均数比较，采用单因素方差分析再进一步两两比较；P < 0.05认为差异有显著性意义。差异蛋白筛选条件为：倍数变化 >1.2倍且P < 0.05(上调 >1.2倍或者下调 < 0.83)，符合条件进行后续GO、KEGG通路、蛋白互作分析和展示。

讨论

3.1 既往他人的研究贡献及存在不足随着骨质疏松症发病率逐年攀升，成为世界性健康问题和社会公共问题[13]。探索骨疏康等中医药治疗骨质疏松症的作用机制，可为临床应用提供更多实验依据，为骨质疏松症的中医药治疗及预防提供更大的优势和理论补充。临床研究表明，骨疏康治疗原发性骨质疏松症效果显著[14-15]，从调整全身功能入手防治骨质疏松症为其特点。药理学研究显示骨疏康对骨吸收、骨形成、修复骨微结构等方面具有一定作用[16]：WANG等[17]实验表明骨疏康可抑制去卵巢小鼠破骨细胞的生成和刺激成骨细胞的生成；CHAI等[18]研究发现骨疏康干预通过上调相关成骨因子而显著增强BMP-2/Smads信号通路，且改善骨质疏松大鼠的骨微结构；LI等[19]用不同剂量的骨疏康处理卵巢切除术小鼠，能显著提高维生素D和钙的代谢水平。随着蛋白组学的迅速发展，成为近年来的研究热点，部分文献报道骨疏康防治骨质疏松症的具体作用机制尚未阐释其相关作用靶点，其分子机制尚未明确。
3.2 研究的意义利用新兴的蛋白组学技术和生物信息学分析，从蛋白质组学角度挖掘骨疏康治疗骨质疏松症的新靶点和信号通路，为临床应用提供实验基础。
此次研究中骨疏康组大鼠骨密度显著提高。从差异表达蛋白GO功能富集分析来看，骨疏康组/模型组差异蛋白主要参与免疫球蛋白受体结合、血管内皮生长因子受体结合等生物过程。最新研究表明免疫球蛋白家族23(IGSF23)介导破骨细胞分化，抑制其表达可逆转去卵巢小鼠的骨流失[20]；并且研究也显示血管内皮生长因子与血管内皮生长因子受体结合诱导血管生成，而血管侵入参与骨重建过程[21-22]。从差异表达蛋白KEGG通路分析来看，骨疏康组/模型组差异蛋白主要富集于酪氨酸代谢、乙醇代谢、JAK-STAT信号通路等，同时与模型组/假手术组差异蛋白共同富集于酪氨酸代谢信号通路。已有研究表明将四环素与一个酪氨酸结合形成一个新化合物抑制了去卵巢后所致骨小梁的丢失，改善骨小梁空间结构，增加骨小梁板的厚度，其机制与抑制破骨细胞介导的骨吸收有关[23]。从共同差异表达蛋白来看，模型组Zc3hc1[24-25]、Svs3b、Hbe2、Mecp2、Myoz1等27个异常表达蛋白在骨疏康组得以纠正，提示了骨疏康的治疗作用。结合骨质疏松症病理生理特点以及GO功能注释、KEGG通路富集分析、PPI互作分析结果筛选出与骨代谢相关的Mecp2、Aldh3b1、Ryr1、Myoz14个共同差异表达蛋白和重要通路进行分析。
Mecp2是一种能与甲基化DNA特异性结合的甲基化调控蛋白[26]。文献报道，Mecp2缺乏或突变可致骨小梁质量下降，骨矿物质含量和骨形成率相应减少[27]；也使得成骨细胞形态改变和数量减少，与骨形成相关的Ⅰ型胶原、Runx2等mRNA表达下降[28]。XIAO等[29]首次建立人类B细胞基因表达研究，实时PCR证实了低骨密度与高骨密度组之间8个基因的差异表达，研究证实低骨密度组中Mecp2下调也与以往研究一致[30]。此次研究发现Mecp2在模型组中表达下调，而在骨疏康组中表达上调，其表达趋势与其他蛋白不同，由此推测骨疏康可能通过提高Mecp2的甲基化水平从而抑制骨量减少，具体机制有待进一步探究。Aldh3b1是乙醛脱氢酶ALDH家族成员，其功能与细胞内活性氧的清除相关。研究发现骨质疏松症与氧化应激密切相关[31]，绝经后妇女体内雌激素水平和抗氧化水平随着年龄增大而下降，机体内累积的活性氧无法及时清除，从而诱导了氧化应激的发生导致成骨细胞和骨细胞的损伤[32]。而ALDH可以通过多种醛类代谢减少氧化应激。Ryr1是骨骼肌中的主要Ca2+离子通道，严格调控正向和逆向的钙通量，对维持Ca2+稳态有着直接或间接的作用[33-34]，而钙稳态的失调可引发骨质疏松症等病理性结果。Myoz1是一种主要在骨骼肌中表达的α-肌动蛋白和γ-丝氨酸结合的Z线蛋白，影响肌纤维发育[35]。越来越多的研究证明肌肉与骨质疏松之间密切的病理机制，在骨质下降的同时一定程度影响骨骼肌含量[36-37]。此次研究中骨疏康组Myoz1表达上调，其表达趋势与其他蛋白不同，故推测骨疏康很可能通过上调Myoz1表达水平影响骨骼肌含量从而起到骨保护作用。
从通路分析可见，骨疏康抗骨质疏松的分子机制与参与骨代谢的信号通路有关。酪氨酸是体内重要的氨基酸，已有文献表明氨基酸代谢利于骨质疏松症的治疗和预防[38]。同时酪氨酸是合成甲状腺素的主要原料，而过量的甲状腺素会引发骨质疏松症[39]。Jak/Stat信号通路参与了胚胎形成、免疫反应、细胞增殖等生物学过程。相关研究表明一些炎症因子、激素可影响Jak/Stat通路而导致骨代谢变化[40]。马铭等[41]研究结果发现炎症因子白细胞介素37可能通过调节巨噬粒细胞集落刺激因子的表达和IL-6-JAK2/STAT3信号通路的激活来抑制骨髓间充质干细胞的增殖并抑制成骨细胞的凋亡。也有不少中药复方通过调控该通路干预治疗骨质疏松症[42]，陈娟等[43]研究表明六味地黄丸可能通过上调JAK/STAT通路中干扰素调节因子(IRF1)基因的表达，调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证免疫功能。长期酗酒或酒精中毒可引起骨密度的减少[44]，有研究发现腹腔注射过量的酒精可完全抑制胫骨干physi端骨膜的形成，减少胫骨近端松质骨形成，提示了乙醇代谢与骨代谢的关系[45]。同时，大量酒精摄入对骨代谢表现出毒副作用，而这种毒副作用可能涉及促炎因子，氧化应激、Wnt/β-catenin、PI3K/AKT/mTOR和RANKL/RANK等通路参与其中[46]。
综上所述，此次研究采用TMT蛋白质组学技术及生物信息学分析方法分析了骨疏康胶囊对骨质疏松模型大鼠腰椎蛋白质的作用，筛选出差异表达的蛋白并分析，结果显示骨疏康胶囊可能通过调控差异蛋白及酪氨酸代谢、JAK-STAT等重要信号通路参与保护骨质疏松模型大鼠的骨代谢过程。该研究为骨质疏松症的中医药治疗提供了新的靶点和研究新思路，对骨质疏松症的发病机制、新靶点药物开发、临床治疗等具有重要指导意义。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

基于TMT蛋白质组学分析骨疏康胶囊治疗骨质疏松模型大鼠的机制

Protective mechanism of Gushukang granule in a rat osteoporosis model based on TMT proteomic analysis

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