人甲壳质酶蛋白40通过PI3K/Akt信号通路调控膝骨性关节炎兔软骨细胞的凋亡

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2856

中国组织工程研究 ›› 2020, Vol. 24 ›› Issue (32): 5108-5113.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2856

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人甲壳质酶蛋白40通过PI3K/Akt信号通路调控膝骨性关节炎兔软骨细胞的凋亡

田胜兰1，王国延1，杨扬2

1武汉科技大学医院，湖北省武汉市 430065；2武汉科技大学临床学院，湖北省武汉市 430064

收稿日期:2019-12-17 修回日期:2019-12-24 接受日期:2020-02-12 出版日期:2020-11-18 发布日期:2020-09-24
通讯作者: 杨扬，博士，主任医师，硕士生导师，武汉科技大学临床学院，湖北省武汉市 430064
作者简介:田胜兰，女，1971年生，湖南省益阳市人，汉族，武汉科技大学医院主任医师，副教授，主要从事骨关节疼痛诊疗研究。
基金资助:
湖北省卫生厅科研项目(WJ2017M178)

Mechanism of YKL-40 regulating apoptosis of rabbit osteoarthritis chondrocytes via PI3K/Akt signaling pathway

Tian Shenglan1, Wang Guoyan1, Yang Yang2

1Wuhan University of Science and Technology Hospital, Wuhan 430065, Hubei Province, China; 2School of Clinical Medicine, Wuhan University of Science and Technology, Wuhan 430064, Hubei Province, China

Received:2019-12-17 Revised:2019-12-24 Accepted:2020-02-12 Online:2020-11-18 Published:2020-09-24
Contact: Yang Yang, MD, Chief physician, Master’s supervisor, School of Clinical Medicine, Wuhan University of Science and Technology, Wuhan 430064, Hubei Province, China
About author:Tian Shenglan, Chief physician, Associate professor, Wuhan University of Science and Technology Hospital, Wuhan 430065, Hubei Province, China
Supported by:
the Scientific Research Project of Hubei Health Department, No. WJ2017M178

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

膝骨关节炎(knee osteoarthritis，KOA)：常发生在中老年人群，其病理过程涉及软骨基质退行性病变、软骨细胞性状显著性改变和数量明显减少。在外力及内部环境改变等因素影响下，软骨细胞外基质、软骨细胞及软骨下骨的合成和降解动态平衡出现紊乱，软骨细胞大量凋亡使得软骨修复、重塑等稳定状态出现异常，上述情况均可诱导膝骨关节炎的发生。

人甲壳质酶蛋白40(YKL-40)：是一种广泛存在于关节滑膜细胞、软骨细胞中的软骨糖蛋白，具有多种生物学功能作用：①促进软骨细胞、成骨细胞的增殖生长及分化；②促进新生血管组织的形成；③调控细胞外基质的重构过程；④协助细胞适应生长环境的显著性改变及缺氧等病理损伤，此外在软骨细胞凋亡方面也发挥一定作用。

背景：由于PI3K/Akt信号通路与骨组织生理代谢之间存在着密切的联系，而人甲壳质酶蛋白40(YKL-40)对乳腺癌发病机制中的PI3K/Akt信号通路具有一定调控作用，由此推测YKL-40可能通过PI3K/Akt信号通路对膝骨性关节炎软骨细胞凋亡进行调控。

目的：研究YKL-40通过PI3K/Akt信号通路调控膝骨性关节炎兔软骨细胞凋亡的作用机制。

方法：①将新西兰大白兔随机分为2组，膝骨性关节炎模型组采用前交叉韧带离断术制作右后膝骨性关节炎动物模型，正常对照组仅切开右后膝关节囊，造模后第6周取材并分离软骨细胞，予以软骨组织苏木精-伊红染色及Mankin组织学评分，同时免疫组化染色检测软骨细胞Ⅱ型胶原表达；②正常对照组兔第2代软骨细胞为正常对照组；将膝骨性关节炎模型组兔第2代软骨细胞分为4组，模型组仅予以含体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养，模型+YKL组培养基中加入100 μg/L YKL-40干预，模型+LY组培养基中加入50 µmol/L PI3K通路抑制剂LY294002干预，模型+YKL+LY组：培养基中加入100 μg/L YKL-40和50 µmol/L LY294002干预，采用免疫印迹法检测各组软骨细胞Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶13、Akt、p-Akt、P53、Bcl-2蛋白表达水平。

结果与结论：①经软骨组织苏木精-伊红染色、Mankin组织学评分及软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色证实，膝骨性关节炎动物模型构建和软骨细胞培养均获得成功；②模型组Ⅱ型胶原、Bcl-2、p-Akt蛋白表达明显低于正常对照组(P < 0.05)，基质金属蛋白酶13、P53蛋白表达明显高于正常对照组(P < 0.05)；与模型组比较，模型+YKL组上述指标得到明显改善(P < 0.05)，而模型+LY组上述指标则进一步恶化(P < 0.05)，模型+YKL+LY组上述指标与模型组比较无显著性差异(P > 0.05)，但与模型+YKL组和模型+LY组比较有显著性差异(P < 0.05)；各组Akt蛋白表达水平比较无显著性差异(P > 0.05)。提示：YKL-40可通过激活活化PI3K/Akt信号通路，起到抑制兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡，加快软骨损伤修复和延缓软骨退行性改变的作用，可作为临床治疗膝骨性关节炎的新作用靶点。

ORCID: 0000-0002-7889-445X(田胜兰)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 膝, 骨性关节炎, 人甲壳质酶蛋白40, 磷脂酰肌醇3-激酶, 通路, 软骨细胞, 凋亡, 实验

Abstract:

BACKGROUND: Due to the close relationship between the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt signaling pathway and the physiological metabolism of bone tissue, human chitinase protein 40 (YKL-40) can regulate the PI3K/Akt signaling pathway related to breast cancer pathogenesis. Therefore, it is speculated that YKL-40 may regulate apoptosis in knee osteoarthritis (KOA) chondrocytes through the PI3K/Akt signaling pathway.

OBJECTIVE: To study the mechanism by which YKL-40 regulates apoptosis in rabbit KOA chondrocyte s through the PI3K/Akt signaling pathway.

METHODS: (1) New Zealand white rabbits were randomized into two groups. An animal model of KOA was made using anterior cruciate ligament dissection in the model group, whereas the right posterior knee joint capsule was cut but not dissected in the control group. Chondrocytes were extracted from the rabbits at 6 weeks after modeling. Hematoxylin-eosin staining and Mankin histological scoring of the cartilage tissue were performed, whereas immunohistochemical staining was used to detect type II collagen expression in chondrocytes. (2) The second-generation chondrocytes in the control group were used as normal control group, and those in the model group were further divided into four groups, followed by culture with high glucose DMEM medium containing 10% fetal bovine serum in KOA model group, 100 μg/L YKL-40 in KOA + YKL group, 50 µmol/L LY294002 in KOA + LY group, and 50 µmol/L LY294002 + 100 μg/L YKL-40 in KOA + YKL + LY group. The expression levels of collagen type II, matrix metalloproteinase 13, Akt, p-Akt, P53, Bcl-2 proteins in chondrocytes were detected by western blot.

RESULTS AND CONCLUSION: Hematoxylin-eosin staining, Mankin histological score, and collagen type II immunohistochemical staining confirmed the successful construction of KOA animal model and successful chondrocyte culture. Compared with the normal control group, the collagen type II, Bcl-2, p-Akt protein expression levels in chondrocytes were significantly reduced in the KOA model group (P < 0.05), and matrix metalloproteinase 13 and P53 protein expression levels were significantly increased in the KOA model group (P < 0.05). Compared with the KOA model group, these indicators were significantly improved in the KOA + YKL group (P < 0.05), significantly worsened in the KOA + LY group (P < 0.05), and had no significant changes in the KOA + YKL + LY group (P > 0.05). However, there were significant differences between the KOA + YKL group and the KOA + LY group (P < 0.05). In addition, the expression level of p-Akt protein in chondrocytes had no difference among groups (P > 0.05). To conclude, YKL-40 can inhibit the apoptosis of KOA chondrocytes, accelerate the repair of KOA cartilage damage and delay the degeneration of cartilage by activating the PI3K/Akt signaling pathway. Therefore, YKL-40 can be used as a new target for clinical treatment of KOA.

Key words: knee, osteoarthritis, human chitinase protein 40, phosphatidylinositol 3-kinase, pathway, chondrocyte, apoptosis, experiment

中图分类号:

田胜兰, 王国延, 杨扬. 人甲壳质酶蛋白40通过PI3K/Akt信号通路调控膝骨性关节炎兔软骨细胞的凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(32): 5108-5113.

Tian Shenglan, Wang Guoyan, Yang Yang. Mechanism of YKL-40 regulating apoptosis of rabbit osteoarthritis chondrocytes via PI3K/Akt signaling pathway[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2020, 24(32): 5108-5113.

图/表（结果） 7

2.1.1 膝关节软骨组织学变化正常对照组及膝骨性关节炎模型组兔膝关节软骨组织予以苏木精-伊红染色处理，结果显示：正常对照组软骨表面平滑，且染色均匀，软骨细胞数量正常(图1A)；膝骨性关节炎模型组软骨表面凹凸不平，染色有明显缺失，软骨细胞数量减少显著(图1B)。

2.1.2 膝关节软骨组织Mankin评分比较膝骨性关节炎模型组兔膝关节软骨组织Mankin评分及纤维化、基质分布、软骨细胞缺失、软骨细胞集落等评分均明显高于正常对照组(P < 0.05)，见表1。

2.1.3 软骨细胞免疫组化表现对软骨细胞予以Ⅱ型胶原免疫组化染色处理后，膝骨性关节炎模型组胞浆颗粒染色强度明显浅于正常对照组，见图2A，B。

2.2.1 YKL-40对软骨细胞Ⅱ型胶原、MMP-13、P53、Bcl-2蛋白表达的影响模型组Ⅱ型胶原、Bcl-2蛋白表达明显低于正常对照组(P < 0.05)，而MMP-13、P53蛋白表达明显高于正常对照组(P < 0.05)，差异均有显著性意义；模型+ YKL组Ⅱ型胶原、Bcl-2蛋白表达明显高于模型组(P < 0.05)，而MMP-13、P53蛋白表达明显低于模型组(P < 0.05)，模型+LY组Ⅱ型胶原、Bcl-2蛋白表达明显低于模型组(P < 0.05)，MMP-13、P53蛋白表达水平明显高于模型组(P < 0.05)，差异均有显著性意义；模型+YKL+LY组Ⅱ型胶原、MMP-13、P53、Bcl-2蛋白表达与模型组比较无显著性差异(P > 0.05)，但与模型+YKL组和模型+LY组比较差异均有显著性意义(P < 0.05)。见表2及图3。

2.2.2 YKL-40对软骨细胞Akt、p-Akt蛋白表达的影响模型组p-Akt蛋白表达明显低于正常对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)，而两组Akt蛋白表达比较差异无显著性意义(P > 0.05)；模型+YKL组p-Akt蛋白表达明显高于模型组，差异有显著性意义(P < 0.05)，模型+LY组p-Akt蛋白表达明显低于模型组，差异有显著性意义(P < 0.05)，模型+YKL+ LY组p-Akt蛋白表达与模型组比较差异无显著性意义(P > 0.05)，但与模型+YKL组和模型+LY组比较差异有显著性意义P < 0.05)；各组Akt蛋白表达比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见表3及图4。

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引言

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点实验于2018年6月至2019年10月在武汉科技大学临床医学院实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 30只新西兰大白兔购自华中科技大学附属同济医学院动物实验中心，均为8月龄健康雄性兔，体质量(2 532.5±306.7) g，由专人在清洁级饲养室饲养。

1.3.2 实验试剂及仪器胎牛血清(杭州四季青生物制品公司)，高糖DMEM培养基(美国Giboco公司)，胰蛋白酶(美国Bio Basic Unit公司)，纯化YKL-40蛋白(美国Quidel公司)，LY294002(PI3K/Akt抑制剂，美国Sigma公司)，Ⅱ型胶原(COL2)抗体(德国Calbiochem公司)，Akt抗体及p-Akt抗体(美国Bioworld 公司)，基质金属蛋白酶13 (matrixmetalloproteinase-13，MMP-13)抗体、Bcl-2抗体、P53抗体(美国Santa Cruz公司)，电泳检测仪及转移槽(西安瑞迈分析仪器有限责任公司)，凝胶成像系统(上海山富科学仪器有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 膝骨性关节炎造模方法随机取24只实验兔为膝骨性关节炎模型组，采用前交叉韧带离断术制备右后膝骨性关节炎模型^[10]；剩余6只兔作为正常对照组，仅将右后膝关节囊切开处理。手术结束后，所有兔肌注20×10⁴U青霉素预防感染，2次/d，连续肌注3 d。动物模型制作3 d后每日在笼外放养1 h，使得右后膝关节可主动屈伸运动。

1.4.2 软骨细胞分离及培养方法所有实验兔造模后第6周均采用空气栓塞法处死，剥取右后膝关节软骨后分离软骨细胞，在高糖DMEM培养基(含体积分数10%的胎牛血清)中培养和细胞传代，待细胞传至第2代后行后续实验。

1.4.3 软骨细胞分组研究将仅右后膝关节囊切开处理的实验兔第2代软骨细胞作为正常对照组，膝骨性关节炎模型兔第2代软骨细胞分为4组(细胞浓度为5×10⁸ L^-1)：①模型组：仅予以含体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养；②模型+YKL组：培养基中加入100 μg/L YKL-40干预(配置方法：10 mg YKL-40溶于100 mL无菌生理盐水中)；③模型+LY组：培养基中加入50 µmol/L PI3K通路抑制剂LY294002溶液干预(配置方法：5 µmol LY294002溶于100 mL无菌生理盐水中)；④模型+YKL+LY组：培养基中加入100 μg/L YKL-40和50 µmol/L LY294002溶液干预。

1.5 主要观察指标

1.5.1 软骨组织苏木精-伊红染色及改良Mankin评分膝骨性关节炎模型组和正常对照组兔膝关节软骨组织经常规固定、脱水及脱钙制作成石蜡块并予以切片，苏木精-伊红染色处理后病理分析，同时采用改良Mankin评分法对正常对照组和膝骨性关节炎模型组兔股骨内髁、外髁、内侧和外侧胫骨平台等部位的软骨组织学评分^[11]，评分分值范围为4-16分，取平均值作为最终评分，得分越高病理变化越严重。由2名病理科主治医师采用双盲法进行评分。

1.5.2 免疫组化法检测软骨细胞Ⅱ型胶原表达经细胞爬片处理后，采用免疫组化法检测各组软骨细胞Ⅱ型胶原表达情况。细胞固定处理后采用5%BSA溶液室温封闭处理5 min，一抗(Ⅱ型胶原工作浓度为1︰100)室温孵育过夜并使用PBS洗涤3次后，二抗37 ℃温度条件下孵育30 min，再次PBS洗涤3次后二氨基联苯胺溶液显色处理，经复染、分色、脱水及透明操作后固定，最后在光学显微镜下进行观察、摄片及分析。

1.5.3 免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白表达采用Western blot法检测各组软骨细胞Ⅱ型胶原、MMP-13、Akt、p-Akt、P53、Bcl-2的蛋白表达水平。常规方法提取蛋白质、BCA法进行蛋白定量，上样量50 μg，聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电转移至PVDF膜，5%脱脂牛奶室温封闭2 h，根据膜面积加入一抗，除GAPDH抗体的稀释度为1︰5 000外，其余均为1︰500，4 ℃孵育过夜，PBS漂洗三四次后，加入辣根过氧化酶-IgG(1︰2 000)室温孵育2 h，ECL显色，在荧光凝胶成像系统中显像，摄片，保存记录。最后采用凝胶图像处理系统进行分析。

1.6 统计学分析采用SPSS 20.0软件分析数据，各组Mankin评分及相关蛋白表达水平比较采用t 检验，以P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

较多研究证实，在外力及内部环境改变等因素影响下，软骨细胞外基质、软骨细胞及软骨下骨的合成和降解动态平衡出现紊乱，软骨细胞大量凋亡使得软骨修复、重塑等稳定状态出现异常，上述情况均可诱导膝骨性关节炎的发生^[12-13]。临床研究则发现，膝骨性关节炎患者膝关节软骨细胞数量较正常膝关节明显减少，提示膝骨性关节炎与膝关节软骨细胞凋亡存在密切关系，且细胞凋亡数量与膝骨性关节炎患者病情严重程度相关^[10]。因此，该研究采用前交叉韧带离断术制作膝骨性关节炎动物模型，然后通过体外培养软骨细胞和YKL-40、LY294002(PI3K/Akt信号通路抑制剂)刺激作用，探讨YKL-40抑制软骨细胞凋亡的作用机制。对正常对照组及膝骨性关节炎模型组兔膝关节软骨组织予以苏木精-伊红染色，对软骨细胞予以Ⅱ型胶原免疫组织化学染色检测，结果显示膝骨性关节炎模型组软骨表面明显不规则，苏木精-伊红染色呈缺失表现，软骨细胞数量较正常对照组明显减少，且Ⅱ型胶原免疫组化染色较正常对照组明显变浅，此外，膝骨性关节炎模型组兔膝关节软骨组织Mankin评分及纤维化、基质分布、软骨细胞缺失、软骨细胞集落等评分均明显高于正常对照组(P < 0.05)，提示膝骨性关节炎动物模型构建和软骨细胞培养均获得成功，可用于后续实验研究。

软骨细胞外基质主要由Ⅱ型胶原构成，而后者由软骨细胞合成和分泌释放，MMP-13则是主要降解Ⅱ型胶原的基质金属蛋白酶分子^[14]。研究证实，软骨细胞凋亡与软骨细胞外基质降解之间存在密切联系，膝骨性关节炎软骨细胞大量凋亡可导致软骨细胞外基质合成总量明显减少，进而形成一种恶性循环过程，是膝关节软骨退行性改变并逐渐发展成膝骨性关节炎的重要原因^[15]。此次研究显示，与正常对照组比较，膝骨性关节炎模型组软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白表达水平明显降低(P < 0.05)，而MMP-13蛋白表达水平明显升高(P < 0.05)，与上述研究相符。PI3K/Akt是调控软骨细胞增殖生长、抑制软骨细胞凋亡及软骨细胞外基质重塑的重要信号通路，其中PI3K可通过接收细胞膜上的各种传入信号，进而直接或间接激活活化处于下游部位的Akt，后者磷酸化作用于P53、NF-κB及Caspase-9，最终发挥特异性的生物学效应作用^[16-17]。研究发现，PI3K/Akt信号通路与P53、Bcl-2之间存在着明显的相关性关系，P53可表达在正常软骨细胞及膝骨性关节炎软骨细胞内，且后者表达水平明显升高，抑制P53表达可有效阻止膝骨性关节炎软骨细胞的凋亡发生^[18]。此外，P53可有效促进Bax的蛋白表达，而明显抑制Bcl-2蛋白表达，提示P53、Bcl-2在调节和控制细胞凋亡方面发挥着重要的作用。此次研究显示，模型组Bcl-2蛋白表达明显低于正常对照组(P < 0.05)，而P53蛋白表达明显高于正常对照组(P < 0.05)，与上述研究相符。

近些年研究证实，YKL-40具有多种生物学功能作用^[3，19-20]：①促进软骨细胞、成骨细胞的增殖生长及分化；②促进新生血管组织的形成；③调控细胞外基质的重构过程；④协助细胞适应生长环境的显著性改变及缺氧等病理损伤。临床研究发现，骨关节炎软骨细胞YKL-40 mRNA表达水平明显高于正常软骨细胞^[21-23]。还有研究证实，与正常对照组比较，YKL-40在膝骨性关节炎患者关节液及血清中的表达显著性升高，提示YKL-40在膝骨性关节炎发病过程中占有重要地位，但其机制尚不清^[24]。此次研究显示，加用YKL-40刺激作用膝骨性关节炎模型兔第2代软骨细胞后，p-Akt表达水平明显升高的同时，MMP-13、P53表达水平明显降低，而Bcl-2、Ⅱ型胶原表达水平明显升高；加用LY294002(PI3K/Akt信号通路抑制剂)刺激作用膝骨性关节炎模型兔第2代软骨细胞后，p-Akt表达水平明显降低的同时，MMP-13、P53表达水平明显升高，而Bcl-2、Ⅱ型胶原表达水平明显降低；同时加用YKL-40和LY294002刺激作用后，Ⅱ型胶原、MMP-13、P53、Bcl-2及p-Akt与膝骨性关节炎模型组比较无显著性差异，但与其他两组存在显著性差异。上述结果提示YKL-40可通过激活活化PI3K/Akt信号转导通路，进而有效抑制MMP-13、P53的蛋白表达和促进Ⅱ型胶原、Bcl-2的蛋白表达，最终起到抑制膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的作用。

综上所述，YKL-40可通过激活活化PI3K/Akt信号通路，起到抑制兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡、加快膝骨性关节炎软骨损伤修复和延缓软骨退行性改变的作用，可作为临床治疗膝骨性关节炎的新作用靶点。骨性关节炎的发生发展是生物力学异常改变、多种细胞因子及生长因子等多因素参与的病变过程。此次研究证实YKL-40在抑制软骨细胞凋亡方面发挥一定的作用，但其对细胞因子、生长因子发挥何种作用及其作用机制仍不清楚，还需以后深入研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

人甲壳质酶蛋白40通过PI3K/Akt信号通路调控膝骨性关节炎兔软骨细胞的凋亡

Mechanism of YKL-40 regulating apoptosis of rabbit osteoarthritis chondrocytes via PI3K/Akt signaling pathway

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本文评价

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[2]	李大地, 朱梁, 郑力, 赵凤朝. 全膝关节置换疗效及患者满意度与人格特征的关联性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1346-1350.
[3]	韦玮, 李剑, 黄林海, 兰敏东, 卢显威, 黄绍东. 全膝或全髋关节置换后老年人首次活动时跌倒恐惧的影响因素[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1351-1355.
[4]	王金军, 邓增发, 刘康, 何智勇, 余新平, 梁建基, 李晨, 郭洲洋. 全膝关节置换静脉滴注氨甲环酸联合含氨甲环酸鸡尾酒局部应用的止血效果及安全性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1356-1361.
[5]	肖国庆, 刘选泽, 严钰皓, 钟喜红. 后交叉韧带替代型假体全膝关节置换术后屈曲受限的影响因素[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1362-1367.
[6]	彭智浩, 冯宗权, 邹勇根, 牛国庆, 吴峰. 活动平台单髁置换后下肢力线与外侧间室骨关节炎进展的关系[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1368-1374.
[7]	黄泽晓, 杨妹, 林诗炜, 何和与. 血清n-3多不饱和脂肪酸水平与全膝关节置换早期股四头肌肌力变化的相关性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1375-1380.
[8]	袁家威, 张海涛, 揭珂, 曹厚然, 曾意荣. 基于网络药理学研究桃红四物汤治疗假体周围感染的潜在靶点和机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1428-1433.
[9]	张超, 吕欣. 髋臼骨折固定后的异位骨化：危险因素、预防及其治疗进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1434-1439.
[10]	顾霞, 赵敏, 王平义, 李一梅, 李文华. 低氧诱导因子1α与低氧相关疾病信号通路的关系[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1284-1289.
[11]	吴训, 孟娟红, 张建运, 王亮. 浓缩生长因子修复兔髁突全层软骨损伤[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1166-1171.
[12]	李静, 谢建山, 崔慧林, 曹锡梅, 杨艳萍, 李海荣. 不同毛色小鼠背部皮肤中甘油二酯激酶ζ和蛋白激酶CβⅡ的表达和定位[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1196-1200.
[13]	柴乐, 吕建兰, 胡劲涛, 胡华辉, 许庆军, 余进伟, 全仁夫. 诱导急性脊髓损伤模型大鼠炎症反应信号通路的变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1218-1223.
[14]	耿秋东, 葛海雅, 王和鸣, 李楠. 基于网络药理学探讨龟鹿二仙胶治疗骨关节炎的作用及机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1229-1236.
[15]	刘翔翔, 黄云梅, 陈文列, 林如辉, 卢小冬, 李钻芳, 许亚晔, 黄美雅, 李西海. 早期骨关节炎模型大鼠半月板白区细胞的超微结构变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1237-1242.