葡萄糖依赖性肠促胰岛素类似物DAIa2GIP对大鼠膝关节损伤软骨的保护效应

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1281

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (22): 3549-3555.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1281

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葡萄糖依赖性肠促胰岛素类似物DAIa2GIP对大鼠膝关节损伤软骨的保护效应

杨烜，韩鹏飞，周新，卢建功，王世川，王宇泽

山西医科大学第二医院骨科骨与软组织损伤修复山西省重点实验室，山西省太原市 030001

收稿日期:2019-03-14
通讯作者: 王宇泽，医学博士，副主任医师，山西医科大学第二医院骨科骨与软组织损伤修复山西省重点实验室，山西省太原市 030001
作者简介:杨烜，男，1983年生，甘肃省平凉市人，汉族，山西医科大学在读硕士，主治医师，主要从事关节方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金(31200728)，项目负责人：王宇泽；山西医科大学第二医院博士启动基金(20120408)，项目负责人：王宇泽

Protective effect of glucose-dependent incretin analogue DAIa2GIP on knee cartilage injury of rats

Yang Xuan, Han Pengfei, Zhou Xin, Lu Jiangong, Wang Shichuan, Wang Yuze

Department of Orthopedics, Second Hospital of Shanxi Medical University, Shanxi Provincial Key Laboratory of Bone and Soft Tissue Injury Repair, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China

Received:2019-03-14
Contact: Wang Yuze, MD, Associate chief physician, Department of Orthopedics, Second Hospital of Shanxi Medical University, Shanxi Provincial Key Laboratory of Bone and Soft Tissue Injury Repair, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China
About author:Yang Xuan, Master candidate, Attending physician, Department of Orthopedics, Second Hospital of Shanxi Medical University, Shanxi Provincial Key Laboratory of Bone and Soft Tissue Injury Repair, Taiyuan 030001, Shanxi Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 31200728 (to WYZ); the Doctoral Startup Foundation of the Second Hospital of Shanxi Medical University, No. 20120408 (to WYZ)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽：是由位于十二指肠和空肠的K细胞分泌的一个由42个氨基酸残基构成的多肽，其受体是一种Ⅱ型蛋白偶联受体，葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽与胰岛β细胞的相应受体相互结合，提高cAMP水平，进一步升高胞内钙离子浓度，最终增强含有胰岛素分泌小泡的胞吐作用。但葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽的半衰期较短，为2-7 min。

DAIa2GIP：由于葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽的半衰期较短，故在葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽的基础上，用同分异构体的右旋丙氨酸取代了第2位的左旋丙氨酸，形成了葡萄糖依赖性肠促胰岛素类似物DAla2GIP，这样可以增加葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽对二肽基肽酶Ⅳ裂解作用的抵抗性，使其半衰期明显延长至5.0-6.0 h。

背景：已有研究证实，葡萄糖依赖性肠促胰岛素类似物DAla2GIP可直接调节成骨细胞的生长发育，但有关其在软骨细胞上的作用鲜有报道。

目的：探讨葡萄糖依赖性肠促胰岛素类似物DAIa2GIP对SD大鼠骨性关节炎软骨损伤的保护效应及潜在机制。

方法：将50只雄性SD大鼠(山西医科大学实验动物中心提供)随机分5组，每组10只：正常对照组不进行任何干预；模型对照组、模型治疗组切断双后膝关节前交叉韧带、内侧副韧带并摘除内侧半月板；假手术对照组、假手术治疗组只打开双侧膝关节囊。造模后第8周，模型治疗组、假手术治疗组腹腔注射25 nmol/kg的DAIa2GIP，模型对照组、假手术对照组腹腔注射等量生理盐水，2次/周，注射8周。造模16周后，取各组大鼠膝关节，进行苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色、透射电镜观察及免疫组织化学染色。实验方案经山西医科大学伦理委员会批准(2017008)。

结果与结论：①苏木精-伊红染色显示，模型对照组软骨4层结构不清；模型治疗组软骨可见4层结构，软骨层较模型对照组增厚；其余3组软骨表面光滑，4层结构清晰；②番红O-固绿染色显示，模型对照组蛋白多糖表达明显不均匀，软骨厚度变薄；模型治疗组蛋白多糖表达基本均匀，软骨厚度较模型对照组增加；其余3组蛋白多糖表达均匀，软骨厚度适中；③透射电镜显示，模型对照组软骨细胞胞质内可见脂滴，线粒体、粗面内质网等细胞器消失；模型治疗组可见数量不等线粒体、粗面内质网等细胞器，并且结构基本恢复正常；其余组细胞结构正常；④免疫组织化学染色显示，与正常对照组比较，模型对照组胶原酶13蛋白表达升高(P < 0.05)，Ⅱ型胶原蛋白表达降低(P < 0.05)；与模型对照组比较，模型治疗组胶原酶13蛋白表达降低(P < 0.05)，Ⅱ型胶原蛋白表达升高(P < 0.05)；⑤结果表明，DAIa2GIP可能通过抑制关节软骨中胶原酶13表达、减少Ⅱ型胶原的破坏，对SD大鼠骨性关节炎中关节软骨发挥保护作用。

ORCID: 0000-0002-8637-1616(杨烜)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 葡萄糖依赖性肠促胰岛素类似物, GIP, DAIa2GIP, 骨性关节炎, 胶原酶13, Ⅱ型胶原, 软骨细胞, 软骨损伤

Abstract:

BACKGROUND: Glucose-dependent incretin analogue DAIa2GIP has been shown to directly regulate the growth and development of osteoblasts, but its effect on chondrocytes is rarely reported.

OBJECTIVE: To investigate the protective effect and potential mechanism of glucose-dependent incretin analogue DAIa2GIP on cartilage injury in Sprague-Dawley rats with osteoarthritis.

METHODS: Fifty male Sprague-Dawley rats provided by Laboratory Animal Center of Shanxi Medical University were randomly divided into five groups (n=10/group): normal control group (no intervention), model control group (anterior cruciate ligament and medial collateral ligament resection, and medial meniscus removal at bilateral posterior knees + normal saline), model treatment group (anterior cruciate ligament and medial collateral ligament resection, and medial meniscus removal at bilateral posterior knees + 25 nmol/kg DAIa2GIP) and sham control group (opening articular capsule of bilateral knees + normal saline), and sham treatment group (opening articular capsule of bilateral knees + 25 nmol/kg DAIa2GIP). The intraperitoneal administration was given at 8 weeks after modeling, twice weekly for 8 consecutive weeks. The knee joint was removed at 16 weeks after modeling for hematoxylin-eosin staining, safranin O-fast green staining, transmission electron microscope and immunohistochemistry. The study was approved by the Ethics Committee of Shanxi Medical University, approval number: 2017008.

RESULTS AND CONCLUSION: (1) Hematoxylin-eosin staining: the four layers of the cartilage structure in the model control group were obscure. The four layers of the cartilage structure were visible in the model treatment group, and the cartilage lay was thicker than that in the model group. In the other three groups, the cartilage surface was smooth with clear four layers. (2) Safranin O-fast green staining: the expression of proteoglycan in the model control group was uneven, and cartilage thickness was thin. The expression of proteoglycan in the model treatment group was even, and the cartilage thickness was increased compared with the model control group. The expression of proteoglycan in the other three groups was even, with moderate cartilage thickness. (3) Transmission electron microscope: there were lipid droplets in the model control group, and mitochondria and rough endoplasmic reticulum disappeared. In the model treatment group, some mitochondria and rough endoplasmic reticulum were observed, and the structure returned to be normal. The other three groups showed the normal structure. (4) Immunohistochemistry: compared with the normal control group, the expression level of collagenase 13 was significantly increased (P < 0.05), and the expression level of collagen type II was significantly decreased in the model control group (P < 0.05). Compared with the model control group, the expression level of collagenase 13 was significantly decreased (P < 0.05), and the expression level of collagen type II was significantly increased in the model treatment group (P < 0.05). (5) To conclude, DAIa2GIP exerts protective effect on articular cartilage in Sprague-Dawley rats with osteoarthritis possibly by inhibiting the expression of collagenase 13 and reducing collagen type II destruction in articular cartilage.

Key words: glucose-dependent incretin analogue, GIP, DAIa2GIP, osteoarthritis, collagenase 13, collagen type II, chondrocytes, cartilage injury

中图分类号:

杨烜，韩鹏飞，周新，卢建功，王世川，王宇泽. 葡萄糖依赖性肠促胰岛素类似物DAIa2GIP对大鼠膝关节损伤软骨的保护效应[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(22): 3549-3555.

Yang Xuan, Han Pengfei, Zhou Xin, Lu Jiangong, Wang Shichuan, Wang Yuze. Protective effect of glucose-dependent incretin analogue DAIa2GIP on knee cartilage injury of rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(22): 3549-3555.

图/表（结果） 9

2.1 各组软骨形态大体观结果见图1。

正常对照组软骨面光滑，有弹性，边缘整齐；模型对照组软骨表面粗糙，色泽灰暗，弹性差，软骨厚度变薄、软骨下骨外露现象明显，ICRS评分为3.80±0.79，明显低于正常对照组(P < 0.001)；模型治疗组软骨欠光滑，有光泽，仍然可见少发裂纹，软骨层较模型对照组厚，未见骨外露现象，ICRS评分为7.10±1.20，明显高于模型对照组(P < 0.001)；假手术对照组、假手术治疗组软骨表面呈胶冻样，光滑有弹性，边缘规整，未见纤维化及裂纹形成，ICRS评分分别为15.60±0.52，15.80±0.42，此两组评分与正常对照组比较无明显差异(P > 0.05)，见图2。

2.2 各组软骨苏木精-伊红染色观察结果见图3。

正常对照组软骨表面光滑，4层结构清晰，软骨细胞排列整齐，基质无淡染；模型对照组典型的软骨细胞4层结构不清，细胞大小不一，软骨层薄；模型治疗组软骨可见4层结构，软骨层较模型对照组增厚，细胞大小基本一致；假手术对照组关节软骨结构层次清晰，无簇聚现象，软骨细胞大小均匀，基质无淡染；假手术治疗组软骨表面光滑、整齐，4层结构清晰，中层细胞呈柱状排列。

2.3 各组软骨番红O-固绿染色观察结果见图4。

正常对照组蛋白多糖表达均匀，软骨厚度适中，Mankin评分为0.40±0.52；与正常对照组相比，模型对照组蛋白多糖表达明显不均匀，软骨厚度变薄，纤维化程度和范围重而且大，Mankin评分为12.90±0.74，评分低于正常对照组(P < 0.001)；模型治疗组蛋白多糖表达基本均匀，软骨厚度较模型对照组增加，Mankin评分为7.30±1.16，评分低于模型对照组(P < 0.001)；假手术对照组、假手术治疗组蛋白多糖表达均匀，软骨厚度正常，Mankin评分分别为0.60±0.70，0.80±0.789，此两组评分与正常对照组比较无明显差异(P > 0.05)，见图5。

2.4 各组软骨细胞透射电镜观察结果见图6。

正常对照组细胞核呈卵圆形，染色质分布均匀，细胞内可见大量粗面内质网、线粒体等细胞器，胶原纤维排列呈束状；模型对照组细胞胞浆丢失严重，胞质内见数个脂滴、电子密度增加，胞质内多数细胞器溶解、消失，偶见线粒体、内质网、高尔基体，胶原纤维排列紊乱；模型治疗组染色质分布尚均匀，线粒体较少且线粒体嵴消失，粗面内质网肿胀出现空泡化，可见数量不等的线粒体、内质网、游离核糖体、高尔基体，部分胶原纤维成束装排列；假手术模型组、假手术治疗组细胞核呈椭圆形，染色质分布均匀，细胞内可见大量粗面内质网、线粒体、游离核糖体、高尔基体等细胞器。

2.5 各组胶原酶13、Ⅱ型胶原蛋白的表达见图7，8。

正常对照组、假手术对照组、假手术治疗组胶原酶13蛋白呈低表达，Ⅱ型胶原蛋白呈高表达，2组间两指标比较差异无显著性意义(P > 0.05)；与正常对照组比较，模型对照组胶原酶13蛋白呈高表达(P < 0.001)，Ⅱ型胶原蛋白呈低表达(P < 0.001)；与模型对照组比较，模型治疗组胶原酶13蛋白表达显著降低(P < 0.001)，Ⅱ型胶原蛋白表达明显增高(P < 0.001)，见表1。各组胶原酶13、Ⅱ型胶原蛋白累积吸光度值，见图9。

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引言

骨性关节炎是一种严重危害中老年人健康的慢性退变性关节疾病，其发生率与年龄相关，在全球范围内，骨性关节炎已成为影响人们正常生活的重大公共健康问题之一。目前认为骨性关节炎是生物学与力学因素作用下关节软骨合成代谢与分解代谢失衡的结果^[1]，其病因至今不明，因此对该病尚缺乏有效的治疗药物，临床一般以药物和物理方法治疗，且效果多不确切^[2]。

葡萄糖依赖性促胰岛素释放肽(glucose-dependent insulinotropic polypeptide，GIP)是一种重要的胃肠激素^[3]，从肠内分泌K细胞中释放的激素，食物摄入后增强胰岛素分泌^[4]。由于GIP半衰期比较短^[5]，故在GIP的基础上用同分异构体的右旋丙氨酸(D-Ala)取代了第2位的左旋丙氨酸，形成了葡萄糖依赖性肠促胰岛素类似物DAla2GIP，这样可增加GIP对二肽基肽酶Ⅳ裂解作用的抵抗性，使其在动物体内半衰期明显延长至5.0-6.0 h。虽然研究表明GIP受体在胰腺β细胞及脂肪、骨等组织中表达^[6-7]，GIP在靶器官与其受体结合发挥生理作用，比如增加胰岛素敏感性、治疗肥胖^[8]。Nasteska等^[8]建立了GIP缺陷小鼠，发现GIP缺陷小鼠表现出骨质减少、骨小梁数量减少、破骨细胞数量增加的迹象。在一项关于功能性错义GIP变体Glu354Gln (rs1800437)人类携带者的研究中，携带这种变异的妇女骨折风险增加了50%以上^[9]。在体外，GIP还可增加成骨细胞cAMP和细胞内Ca²⁺水平，导致Ⅰ型胶原和碱性磷酸酶表达增加^[10]，而这3种物质在骨代谢方面扮演着不可或缺的角色。已有研究结果证实DAla2GIP可直接调节成骨细胞的生长发育^[11]，但其在软骨细胞上的作用鲜有报道。Bollag等^[12]首次报道了GIP受体存在于软骨细胞中，这就为GIP在软骨领域方面研究奠定了基础。由此推断，DAla2GIP可能是一种治疗骨性关节炎的潜在药物。实验通过骨性关节炎模型大鼠腹腔注射DAla2GIP后，探讨DAla2GIP是否可延缓软骨组织的损伤及其潜在的机制。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计对比观察动物实验。

1.2 时间及地点实验于2017年5月至2018年2月在山西医科大学骨科实验室完成。

1.3 材料 DAla2GIP(上海强耀生物科技有限公司)；兔抗胶原酶13多克隆抗体(Abcam公司，英国，abl88570)；兔抗Ⅱ型胶原多克隆抗体(Abcam公司，英国，abl67216)；SABC免疫组织化学染色试剂盒(SA1022，武汉博士德生物科技有限公司SA1022)。

实验动物：3月龄健康雄性SD大鼠50只，体质量(360±40)g，由山西医科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXX(晋)2015-0001，均喂养在恒温、恒湿的清洁环境中，环境温度为(25±2)℃，湿度为70%，每天12 h光照/黑暗。

1.4 实验方法实验方案经山西医科大学伦理委员会批准(2017008)。

将50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、模型治疗组、假手术对照组、假手术治疗组，每组10只。正常对照组不作任何处理。取正常对照组外的大鼠，采用3%水合氯醛腹腔麻醉(0.4 mL/kg)，待麻醉起效后，双后腿膝关节周围剃毛，常规消毒铺无菌巾，模型对照组、模型治疗组切断双膝关节前交叉韧带、内侧副韧带并摘除内侧半月板，止血并关闭伤口，再次消毒后肌肉注射青霉素20×10⁴ U/只；假手术对照组、假手术治疗组只打开双侧膝关节囊，缝合处理伤口，再次消毒后肌肉注射青霉素20×10⁴ U/只。术后不固定患肢，置于标准动物饲养笼中，允许其自由活动及进食。

造模8周后，模型治疗组、假手术治疗组大鼠腹腔注射25 nmol/kg的DAIa2GIP，模型对照组、假手术对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水，2次/周，共8周。

1.5 主要观察指标造模16周后，各组动物腹腔注射3%水合氯醛麻醉处死，解剖出双膝关节。

大体观察：骨关节炎软骨破坏修复情况，根据国际软骨修复协会(ICRS)软骨修复评分标准进行大体评分^[13]，分数0-16分，评分越高代表软骨修复越好。

苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色：选取一部分样本，置于40 g/L多聚甲醛固定二三天后，后置于含10%脱钙液的脱钙机中脱钙35-50 d(针刺法观察脱钙情况，以刺破双侧皮质为准)，切取膝关节胫骨关节面软骨组织，常规脱水、浸蜡、包埋，切片(厚度5 μm)，进行苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色。依据Mankin骨关节病组织评分系统对光镜下软骨形态进行评分^[14]，分数为0-14分，评分越高代表软骨组织病理改变越严重。

透射电镜观察：选取另外一部分样本的膝关节胫骨关节面软骨组织，立即2%戊二醛固定，1%银酸固定，逐级脱水，环氧树脂包埋，后进行超薄切片(70 nm厚度)，透射电镜下观察软骨细胞超微结构变化。

免疫组织化学染色测定软骨基质金属蛋白酶13、Ⅱ型胶原蛋白表达：梯度脱蜡；除去氧化物；胃蛋白酶复合消化酶抗原修复；滴加一抗；标记二抗；DAB显色；苏木精染色；梯度脱水；中性树脂封固。利用 Image ProPlus6.0 图像分析软件测定累积吸光度值。

1.6 统计学分析采用IBM SPSS 19.0统计学软件处理数据，数据表示为x(_)±s，根据实验设计使用单因素方差中的 LSD(L)多重比较。P < 0.05认为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

骨性关节炎中细胞外基质的合成和分解失衡，导致关节软骨功能丧失及关节软骨的破坏^[15]。细胞外基质主要由Ⅱ型胶原、蛋白多糖和水分组成，基质金属蛋白酶家族是骨性关节炎发病机制中引起分解代谢的主要蛋白酶，其中胶原酶13主要降解细胞外基质90%的Ⅱ型胶原，是介导细胞外基质降解的关键酶，胶原酶13分泌增多是引起细胞外基质降解的根本原因^[16-17]。

GIP对骨代谢转换具有良好的调节作用。Mieczkowska等^[18]发现GIP受体敲除小鼠骨的硬度与抗压作用明显减弱，同时出现关节组织损伤，胶原成熟度显著降低16%。而胶原蛋白与骨骼的韧性及拉伸强度有关。用稳定的GIP激动剂治疗健康哥本哈根大鼠，可使胶原成熟度增加13%^[19]。有研究报道了GIP受体基因缺失小鼠的骨小梁微结构发生了巨大改变。以上研究都表明当GIP受体缺失后，骨强度、骨骼韧性下降，容易发生骨质疏松甚至骨折，而用GIP激动剂逆转了上述情况，提示了GIP对骨健康的有效性。有研究报道软骨细胞上有GIP受体表达，并且受GIP的正向调控^[20]。课题组前期实验也证实了软骨细胞上存在GIP受体的说法^[21]。此次实验采用改良Hulth法造模^[22]，切除内侧半月板，减少或消失缓冲作用，加大胫股关节面的应力，同时改变了关节的力学轴线，并切断内侧副韧带、前交叉韧带，改变关节内的生理结构，使胫骨平台软骨原本的着力点发生变化，造成软骨中胶原酶13与Ⅱ型胶原蛋白表达的变化。实验观察腹腔注射DAIa2GIP对软骨损伤的实验效应^[23]，同时为了消除手术损伤给实验带来的偏差，设立了假手术对照组和假手术治疗组。

大体和光镜下病理改变可见，模型对照组软骨面色泽灰暗、粗糙、变薄，可见多发裂纹，软骨缺损及软骨下骨外露，组织学染色显示无典型的4层结构，软骨层变薄，软骨缺损区以纤维组织为主，蛋白多糖基本不表达，Mankin评分高于正常对照组，而ICRS评分低于正常对照组；模型治疗组较模型对照组软骨面光泽、有光滑，可见少发裂纹，软骨缺损区可见再生软骨，无软骨下骨外露现象，组织学观察明显可见软骨4层结构，软骨层变厚，软骨纤维化的范围和程度轻，但蛋白多糖表达仍欠均匀，Mankin评分低于模型对照组，ICRS评分明显高于模型对照组。

相关研究表明，胶原酶13在骨性关节炎患者滑膜中高水平表达^[24]，且胶原酶13与骨性关节炎的发生呈正相关性^[25]。多种骨性关节炎小鼠模型实验表明，骨性关节炎进展的许多途径最终汇聚于胶原酶13的表达和活性上^[26]。Li等^[27]利用RNAi技术发现骨性关节炎软骨细胞中胶原酶13表达增高。由于胶原酶13是降解Ⅱ型胶原蛋白的关键和主要酶，即Ⅱ型胶原蛋白的降解和破坏导致软骨支架结构的崩塌，软骨细胞赖以发挥功能的结构基础遭到破坏，进一步破坏了细胞外基质环境的平衡。故胶原酶13的表达增加与骨性关节炎的发生发展密切相关。此次实验免疫组织化学结果显示，模型对照组胶原酶13蛋白表达量远高于其余4组，Ⅱ型胶原蛋白表达量明显低于其余4组，说明DAIa2GIP下调了胶原酶13蛋白的表达，上调Ⅱ型胶原蛋白的表达。

此次实验透射电镜观察显示，模型对照组软骨细胞胞质内可见脂滴，而线粒体、粗面内质网等细胞器消失；腹腔注射DAIa2GIP后，可见数量不等的线粒体、粗面内质网等细胞器，并且结构基本恢复正常。Phull等^[28]观察到软骨再生基质中可见偶尔拉长的线粒体、增大的高尔基体和嗜碱性细胞质，与此次实验观点相符。由此推测GIP是通过其受体抑制炎症递质胶原酶13释放，减少Ⅱ型胶原的降解，进而维持细胞外基质的合成分解代谢平衡，最终减弱骨性关节炎的发生及软骨细胞凋亡。此外，GIP还可刺激转化生长因子β的合成^[29-30]，包括有5个亚型，其中转化生长因子β1、转化生长因子β2、转化生长因子β3是软骨细胞中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的有效刺激因子，参与了间充质干细胞的分化，转化生长因子β在软骨细胞的后期分化中起关键作用^[28]。

Howard等^[31]证实转化生长因子β可促进未分化和分化早期的软骨细胞复制DNA，促进软骨细胞增殖、合成蛋白多糖与Ⅱ胶原，诱导间充质细胞转化为软骨细胞，同时指出该途径是通过抑制胶原酶的表达来实现的，这就说明了GIP可通过下调胶原酶13表达来抑制细胞外基质的降解。此次实验获得了相同的结果，表明GIP直接或间接通过其受体抑制炎症递质胶原酶13的释放，减少Ⅱ型胶原的降解，保持相对稳定的细胞外基质环境，发挥保护软骨的作用。

实验仅检测了关节软骨中胶原酶13和Ⅱ型胶原蛋白的表达，局限性较大，而胶原酶13和Ⅱ型胶原蛋白的作用机制涉及多种细胞因子复杂调控。DAla2GIP对于关节软骨损伤的修复作用究竟如何，仍需要大量的动物实验和临床研究进一步证实。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

葡萄糖依赖性肠促胰岛素类似物DAIa2GIP对大鼠膝关节损伤软骨的保护效应

Protective effect of glucose-dependent incretin analogue DAIa2GIP on knee cartilage injury of rats

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