泼尼松龙可抑制转化生长因子β激活激酶1诱导的成骨细胞凋亡

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1306

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (23): 3630-3635.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1306

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泼尼松龙可抑制转化生长因子β激活激酶1诱导的成骨细胞凋亡

张雯1，张蕾1，任守忠1，刘日升2

(1海南医学院第一附属医院，海南省海口市 570102；2海南省肿瘤医院，海南省海口市 570102)

收稿日期:2019-03-29 出版日期:2019-08-18 发布日期:2019-08-18
通讯作者: 刘日升，副主任药师，海南省肿瘤医院，海南省海口市 570102
作者简介:张雯，1981年生，海南省海口市人，2009年中国药科大学毕业，主管药师，主要从事药学研究。
基金资助:
海南省卫生计生行业科研项目(16A200077)，项目负责人：张蕾

Prednisolone inhibites osteoblast apoptosis induced by transforming growth factor beta activated kinase 1

Zhang Wen1, Zhang Lei1, Ren Shouzhong1, Liu Risheng2

(1the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China; 2Hainan Cancer Hospital, Haikou 570102, Hainan Province, China)

Received:2019-03-29 Online:2019-08-18 Published:2019-08-18
Contact: Liu Risheng, Associate chief pharmacist, Hainan Cancer Hospital, Haikou 570102, Hainan Province, China
About author:Zhang Wen, Pharmacist-in-charge, the First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China
Supported by:
the Hainan Provincial Health and Family Planning Research Project, No. 16A200077 (to ZL)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
碱性磷酸酶染色：碱性磷酸酶较多存在于成熟中性粒细胞中。在碱性条件下，碱性磷酸酶经镁离子激活后能将磷酸酯水解为磷酸钠和甘油，磷酸钠再与氯化钙、硝酸钴、硫化铵发生一系列化学反应，生成棕色的硫化钴定位于胞质内，可用于评估成骨细胞分化能力。
钙结节染色：成骨分化是干细胞的一个重要特性。在特定的诱导培养基作用一段时间后，干细胞可分化为成骨细胞，在细胞表面沉积钙盐，形成钙结节。应用茜素红的复合物，可用于鉴定干细胞是否已成功向成骨细胞转化。

摘要
背景：研究显示转化生长因子β激活激酶1(transforming growth factor beta activated kinase 1，TAK1)在骨、关节的发育以及骨形态信号转导中发挥着重要作用，与骨关节炎的发生也存在一定的相关性。
目的：探究泼尼松龙通过抑制TAK1表达对诱导成骨细胞凋亡的影响。
方法：将M3T3-E1成骨细胞经原代培养后传代培养。取第3代细胞分为3组，正常细胞组(对照组)、阴性转染+泼尼松龙组、TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组。采用碱性磷酸酶染色和钙结节染色评估成骨细胞分化能力的变化；采用免疫印迹法(Western blot)检测细胞内磷酸化(p)-TAK1、TAK1、磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK)、JNK蛋白表达，MTT法检测M3T3-E1细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞周期以及细胞凋亡变化。
结果与结论：①TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组细胞的碱性磷酸酶红染程度较少，阴性转染+泼尼松龙组次之，正常细胞组碱性磷酸酶染色最多；钙结节染色显示与正常细胞组相比，阴性转染+泼尼松龙组钙结节数量明显减少，TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组结节数量最少；②荧光显微镜显示，阴性转染+泼尼松龙组细胞出现破碎，形态发生改变，TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组破碎细胞数量明显增加；③Western Blot 显示，3组间p-TAK1、p-JNK 蛋白表达量逐渐降低(P < 0.05)；④MTT检测显示，3组间TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组细胞增殖抑制率最高(P < 0.05)；在12-48 h随着时间的延长，细胞增殖抑制率呈逐渐上升趋势，在72 h时开始下降；⑤流式细胞仪检测结果显示，TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组G2期细胞比例高于其他2组，S期细胞比例显著低于其他2组(P < 0.05)；⑥TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组细胞凋亡率明显高于正常细胞组、阴性转染+泼尼松龙组(P < 0.05)；⑦结果说明，沉默TAK1表达后能够增强泼尼松龙诱导成骨细胞凋亡的作用，可能与JNK信号通路相关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0002-2395-5948(张雯)

关键词: 转化生长因子β激活激酶1, 泼尼松龙, 成骨细胞, 细胞凋亡, JNK信号通路, TAK1, 基因沉默

Abstract:

BACKGROUND: Transforming growth factor beta activated kinase 1 (TAK1) has been shown to play important roles in development of bone and joint and bone morphology signal transduction, and is related to osteoarthritis.
OBJECTIVE: To explore the influence of prednisolone on osteoblast apoptosis induced by inhibiting TAK1 expression.
METHODS: M3T3-E1 osteoblasts were cultured and passaged. The third generation of cells were divided into three groups: control group (normal group), negative transfection + prednisolone group, and TAK1 siRNA transfection + prednisolone group. The changes of osteoblast differentiation ability were evaluated by alkaline phosphatase staining and calcium nodule staining. Intracellular phosphorylation (p)-TAK1, and TAK1, phosphorylated c-jun amino, terminal kinase (p-JNK), and JNK protein expression levels were detected by western blot assay. MTT assay was used for M3T3-E1 cell proliferation. Flow cytometry was used to detect the cell cycle and apoptosis.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Alkaline phosphatase staining showed that the number of stained cells in the TAK1 siRNA transfection + prednisolone group was least, followed by negative transfection + prednisolone group, and most in the control group. Calcium nodule staining showed that the number of intracellular calcium nodules in the negative transfection + prednisolone and TAK1 siRNA transfection + prednisolone groups decreased compared with the control group, especially the TAK1 siRNA transfection + prednisolone group. (2) Fluorescence microscope showed that the cells in the negative transfection + prednisolone group were broken and the morphology changed. The number of broken cells in the TAK1 siRNA transfection + prednisolone group increased significantly. (3) Western blot assay showed that the expression levels of p-TAK1 and p-JNK protein decreased gradually (P < 0.05). (4) MTT assay showed that TAK1 siRNA transfection + prednisolone group had highest cell inhibition rate (P < 0.05). Within 12 to 48 hours, the cell inhibition rate was on a rise, and then decreased at 72 hours. (5) The results of flow cytometry showed that the proportion of G2 phase cells in the TAK1 siRNA transfection + prednisolone group was higher than that in the other two groups, and the proportion of S phase cells was lower than that in the other two groups (P < 0.05). (6) The apoptosis rate in the TAK1 siRNA transfection + prednisolone group was higher than that in the other two groups (P < 0.05). (7) These results suggest that silencing TAK1 expression can increase the apoptosis of osteoblasts induced by prednisolone, which may be related to JNK signaling pathway.

Key words: transforming growth factor beta activated kinase 1, prednisolone, osteoblast, apoptosis, JNK signaling pathway, TAK1, gene silencing

中图分类号:

R446

张雯, 张蕾, 任守忠, 刘日升. 泼尼松龙可抑制转化生长因子β激活激酶1诱导的成骨细胞凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(23): 3630-3635.

Zhang Wen, Zhang Lei, Ren Shouzhong, Liu Risheng . Prednisolone inhibites osteoblast apoptosis induced by transforming growth factor beta activated kinase 1[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(23): 3630-3635.

图/表（结果） 1

2.1 M3T3-E1细胞碱性磷酸酶染色、钙结节染色结果通过大体拍摄采集图片和显微镜下观察，发现不同培养方式处理的细胞其组间碱性磷酸酶染色程度有很大差异，主要表现为：稳定沉默TAK1表达的TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组细胞的碱性磷酸酶红染程度较少，仅有约10%的部分细胞可呈现出阳性表达；阴性转染+泼尼松龙组细胞的红染现象明显，阳性率可高达20%；而正常细胞组碱性磷酸酶染色最多，可达40%。将钙化结节所占面积比例量化显示，与正常细胞组相比，阴性转染+泼尼松龙组钙结节数量明显减少，TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组结节数量少于阴性转染+泼尼松龙组。免疫荧光检测，阴性转染+泼尼松龙组细胞出现破碎，形态发生改变，TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组破碎细胞明显增加。见图1。

2.2 M3T3-E1细胞中p-TAK1、TAK1、p-JNK、JNK 蛋白的表达 Western Blot显示，正常细胞组、阴性转染+泼尼松龙组、TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组3组间TAK1、JNK蛋白表达量并无明显变化，差异无显著性意义(P > 0.05)。p-TAK1、p-JNK 蛋白表达量3组间逐渐降低，与正常细胞组相比，阴性转染+泼尼松龙组p-TAK1、p-JNK 蛋白表达量降低，TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组蛋白表达量低于阴性转染+泼尼松龙组(P < 0.05)。见图2。

2.3 沉默TAK1后泼尼松龙对M3T3-E1细胞增殖的影响 MTT检测显示，与正常细胞组相比，阴性转染+泼尼松龙组和TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组细胞增殖抑制率均有所升高，且TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组升高更为明显(P < 0.05)；在12-48 h随着时间的延长，细胞增殖抑制率呈逐渐上升趋势，在72 h时开始下降。见图3。

2.4 沉默TAK1后泼尼松龙对M3T3-E1细胞周期的影响流式细胞仪检测结果显示，TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组处于G₂期细胞比例明显高于正常细胞组、阴性转染+泼尼松龙组[(15.34±4.66)%，(8.23±2.64)%，(4.23±1.64)%]，处于S期细胞比例明显低于正常细胞组、阴性转染+泼尼松龙组[(2.18±0.45)%，(3.56±1.03)%，(4.73±0.87)%，P < 0.05]。见图4。

2.5 沉默TAK1后泼尼松龙对M3T3-E1细胞凋亡的影响流式细胞仪检测显示左下象限为正常细胞，右下象限代表晚期凋亡细胞，右上象限代表早期凋亡细胞，正常细胞组中细胞凋亡不明显，阴性转染+泼尼松龙组细胞少量出现细胞凋亡，TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组凋亡细胞数量明显增多。TAK1 siRNA转染+泼尼松龙组细胞凋亡率[(33.64±6.37)%]显著高于正常细胞组、阴性转染+泼尼松龙组[(13.16± 0.87)%，(3.83±0.76)%，P < 0.05]。见图5。

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引言

材料方法

1 材料和方法 Materials and methods

1.1 设计细胞学实验观察。

1.2 时间及地点实验于2018年1至9月在海南医学院中心实验室和海南省药物安全性评价研究中心完成。

1.3 材料

1.3.1 实验细胞小鼠M3T3-E1成骨细胞系购自于中国科学院细胞库。

1.3.2 实验用主要试剂与仪器泼尼松龙(浙江仙琚制药股份有限公司；批号：20150716；规格：5 mL/125 mg)，胎牛血清、RPMI-1640培养基、青霉素链霉素双抗溶液(美国Gibco公司)；胰蛋白酶(美国Amresco公司)；BCA蛋白浓度测定试剂盒、碱性磷酸酶(ALP)染色剂(碧云天公司)；MTT、茜素红(美国sigma 公司)；2×SYBR Premix Ex Taq II(宝生物工程(大连)有限公司)；兔抗鼠p-TAK1、TAK1、p-JNK、JNK 抗体均(美国Gibco公司)；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔二体(美国R&D公司)；RNA提取和反转录试剂盒(北京天根生化科技有限公司)；Annexin V/PI双染试剂盒(美国Coulter公司)；Lipofectamine^TM2000转染试剂(Invitrogen公司)；Annexin V FITC/PI凋亡检测试剂盒[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]；CO₂培养箱(Forma Scientific公司)；低温离心机、蛋白凝胶成像仪(Bio-Red公司)；BX31光学显微镜(奥林巴斯公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 M3T3-E1细胞培养 M3T3-E1细胞常温下解冻后，加入5 mL PBS洗涤，添加体积分数10%FBS、100 U/mL的RPMI-1640培养液，置于37 ℃，体积分数5%CO₂培养箱内培养48 h，细胞融合后添加0.2%胰蛋白酶消化，RPMI-1640培养液清洗2次后，1 500 r/min离心5 min，保留细胞沉淀，置于添加体积分数10%FBS、100 U/mL的RPMI-1640培养液中，制备单细胞悬浮液，细胞密度调整为10³L^-1，当细胞贴壁生长至瓶底的80%时，加入胰蛋白酶消化，用RPMI-1640培养基洗涤3次，800 r/min离心 3 min，收集细胞。48 h传代1次，按照1∶3比例进行传代培养，第3代细胞用于后续研究。

1.4.2 TAK1siRNA转染M3T3-E1细胞取第3代培养细胞，培养2 d后更换新鲜培养基，细胞浓度调整为4×10 ⁸L^-1，接种细胞培养板中，参照Lipofectamine^TM2000转染试剂盒进行操作，TAK1siRNA序列：F：5’GCU CAU GCC AUG AGC UGG UGU UUA C-3’；R：5’GUA AAC ACC GCU CAU GGC AUG AGC-3’；转染后进行相关指标检测。

1.4.3 实验分组将细胞接种96孔细胞培养板，分为3组，①正常细胞组(M3T3-E1细胞对照组)：正常培养基进行培养；②阴性(空白)转染+泼尼松龙组：M3T3-E1细胞转染阴性siRNA后添加0.002 mol/L泼尼松龙继续培养；③TAK1 siRNA+泼尼松龙组：MC3T3-E1细胞转染TAK1 siRNA后添加0.002 mol/L泼尼松龙继续培养；荧光显微镜下观察。

1.4.4 钙结节染色、碱性磷酸酶染色

(1)钙结节染色：培养后的细胞用PBS清洗后置于体积分数70%乙醇中固定1 h，加入PBS清洗3次，加入茜红素染色剂染色30 min，PBS清洗后，置于显微镜下观察记录。

(2)碱性磷酸酶染色：细胞培养后用PBS清洗，消化离心后保留细胞沉淀，加入培养基重悬细胞，接种于载玻片中，随后采用钙钴法染色，操作为：PBS冲洗玻片后进入冷丙醇中10 min，流水冲洗3次，每次3 min，加入碱性磷酸酶孵育液，37 ℃孵育4 h，蒸馏水冲洗2 min，加入2%硝酸钴溶液37 ℃孵育5 min，蒸馏水洗5 min，加入1%的硫化铵中2 min。加入中性树脂进行封固，置于100倍显微镜下，进行细胞计数。

1.4.5 Western blot检测p-TAK1、TAK1、p-JNK、JNK蛋白的表达收集处理后的细胞液加入细胞裂解液后提取细胞总蛋白，参照BCA试剂盒测定提取细胞总蛋白浓度，配制8%、12%的分离胶与浓缩胶，取25 μg样品进行上样，蛋白Marker 6 μL，样品进入浓缩胶时电压为80 V，进入分离胶后电压调整为120 V，反应结束将蛋白凝胶转移至PVDF膜上，加入脱脂牛奶进行封闭4 h，加入一抗(兔抗鼠p-TAK1、TAK1、p-JNK、JNK 单抗)4 ℃震荡过夜，加入PBS清洗3次，每次10 min，加入辣根过氧酶标记山羊抗兔二抗，室温下反应2 h，加入PBS清洗3次，每次10 min。将蛋白凝胶用EXL发光后，在暗室中曝光，利用凝胶成像仪对Western blot产生的条带进行定量分析。

1.4.6 MTT法检测M3T3-E1细胞增殖情况收集培养后的细胞制备单细胞悬浮液，调整细胞浓度为5×10⁴L^-1接种，置于37 ℃、体积分数5%CO₂培养箱中分别培养12，24，48，72 h，培养结束后加入10 μL MTT孵育4 h，加入100 μL二甲基亚砜溶液，在570 nm处测定A值。细胞抑制率=(实验组A-空白A)/空白A×100%。

1.4.7 流式细胞仪检测细胞周期以及细胞凋亡变化收集培养后的细胞制备单细胞悬浮液，调整细胞浓度为5× 10⁴ L^-1接种，置于37 ℃、体积分数5%CO₂培养箱中培养，当细胞数量至80%时，加入0.25%胰蛋白酶消化细胞收集细胞后加入预冷PBS进行洗涤，体积分数70%乙醇溶液中进行固定1 h，PBS清洗细胞后加入PI进行染色重悬后置于流式细胞仪中检测细胞周期变化。在细胞悬浮液中加入Annexin V-APC室温下黑暗中孵育15 min，在细胞流式仪中检测细胞凋亡情况。

1.5 主要观察指标 ①M3T3-E1细胞碱性磷酸酶染色、钙结节染色结果；②M3T3-E1细胞中p-TAK1、TAK1、p-JNK、JNK蛋白表达；③沉默TAK1后泼尼松龙对M3T3-E1细胞增殖的影响；④沉默TAK1后泼尼松龙对M3T3-E1细胞周期的影响；⑤TAK1沉默后泼尼松龙对M3T3-E1细胞凋亡的影响。

1.6 统计学分析应用SPSS 21.0软件对数据进行统计学分析，计量资料以x(_)±s表示，组间对比采用单因素方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

讨论

泼尼松龙属于临床常用糖皮质激素，具有消炎、抑菌、抑制免疫应答反应等作用，但长期服用也会导致肥胖症、类固醇糖尿病等，这些不良反应的产生限制糖皮质激素的临床应用^[7]。骨质疏松以及骨折是较严重的不良反应，大部分患者骨重建功能、骨修复能力降低，骨量流失，同时骨脆性增加，使发生骨折的风险增加^[8]。有研究显示糖皮质激素量越高，发生骨折的风险越大。长期服用糖皮质激素导致骨折主要包括以下几方面：糖皮质激素能够簇集成骨细胞的聚集，增强其活性；降低骨保护素水平，提高氧化应激反应，促进成骨细胞凋亡^[9-10]，因此探究泼尼松龙诱导成骨细胞凋亡的机制对于降低泼尼松龙不良反应的发生十分有必要。

成骨细胞增殖受抑制及分化程度降低，是造成骨质疏松症的重要原因之一^[11]。已有研究证实，泼尼松龙能够促进成骨细胞凋亡，降低骨量、破坏骨微损伤，增加骨质疏松发生的风险^[12-13]。碱性磷酸酶是成骨细胞在分化早期形成的酶蛋白，是骨形成的标志性蛋白，特异性较强，一般用来鉴定成骨细胞的生化能力^[14]。相关学者研究显示碱性磷酸酶活性的微小降低直接影响成骨细胞矿化形成过程^[15]。此次研究碱性磷酸酶染色显示空白转染联合泼尼松龙处理后，细胞出现破裂，且数量有所降低，而转染TAK1 siRNA联合泼尼松龙处理后，细胞破裂程度加重，细胞数量明显降低，说明泼尼松龙处理后能够使M3T3-E1细胞受损，沉默TAK1后细胞受损程度加重，钙结节染色也显示沉默TAK1基因表达后，钙结节数量明显降低，提示TAK1与M3T3-E1细胞成骨能力相关。

TAK1属于丝裂原蛋白激酶激酶激酶家族成员，较多研究已证实TAK1介导信号通路在调控细胞增殖、分化、凋亡中发挥重要作用^[16-17]。TAK1是MAPK和NF-κB信号转导通路中的关键因子，其单独状态下并不能发挥重要，在MAPK通路中激活后的TAK1与MEKK3/6 共同激活JNK、P38发生磷酸化，进而激活AP-1细胞核转录蛋白，对相应基因蛋白进行调控；在NF-κB信号通路中，TAK1与膜受体蛋白结合后激活NIK，使IκB发生磷酸化介导NF-κB进入细胞核中调控通路下游靶基因表达^[⁴^]。有研究已证实在软骨细胞中MAPK和NF-κB信号通路在软骨细胞外基质的降解中发挥重要作用^[1⁸^]。体外研究显示沉默TAK1表达，能够促进软骨细胞外基质降解，因此推测TAK1作为MAPK和NF-κB两个信号通路共同的上游信号转导分子，在骨病的发生中起着重要的调控作用^[¹⁹^]。国内学者研究发现敲除小鼠TAK1基因能够导致小鼠造血干细胞出现大量凋亡，且能够使JNK蛋白失活^[2⁰^]。国外学者研究发现小鼠角质化细胞中沉默TAK1，能够促进表皮细胞的凋亡^[2¹^]。有关研究证实TAK1过表达能够造成软骨细胞出现细胞增殖减缓、周期阻滞、分解以及坏死与合成代谢平衡失调等骨性关节炎样病变^[⁶^]。转化生长因子β对骨有主要调节作用，它主要是通过 ALK-5、SMAD3、PKA和PI3K路径调节β-catenin信号通路及人类间充质干细胞的成骨细胞分化，通过ALK5、PKA 和JNK 路径调节成骨细胞生成^[2²^]。此次研究Western blot 结果表明，细胞转染TAK1后，TAK1、JNK蛋白表达量并无明显变化，而p-TAK1、p-JNK 蛋白表达量明显降低，表明沉默TAK1表达后能够抑制TAK1、JNK蛋白磷酸化。

此次研究MTT检测显示转染联合泼尼松龙处理后在一定时间内M3T3-E1细胞增殖受到抑制，且抑制程度明显高于阴性转染组，且在48 h抑制程度最明显，提示沉默TAK1表达具有抑制M3T3-E1细胞增殖的作用。细胞周期阻滞能够为细胞修复提供额外时间，当损伤无法完全进行修复时，就会启动凋亡程序。国外学者研究显示二氧化硅纳米粒子能够诱导人脐静脉表皮细胞凋亡，并使细胞处于G₂/ M期，细胞凋亡率也明显升高^[2³^]。国外研究显示将白血病细胞分别同步至G₁、S及G₂/M期并进行紫杉醇处理，结果显示处于G₂/M期细胞凋亡率高于G₁、S期，凋亡数量也高于G₁、S期^[2⁰^]。此次研究结果显示TAK1沉默后可导致M3T3-E1细胞周期阻滞于G₂期，影响细胞增殖，这与MTT结果相符。以上结果提示，抑制TAK1表达后可能够增强泼尼松龙诱导成骨细胞凋亡，进而在骨质疏松发展中发挥重要调控作用。

细胞凋亡是细胞生理性的死亡现象，对于维持机体细胞数量平衡，对抗细胞异常增殖以及清楚有害细胞的一种重要生理机制，研究肿瘤细胞凋亡机制对于阐明疾病发生发展具有重要意义^[2⁴^]。较多研究均证实泼尼松龙类糖皮质激素能够抑制成骨细胞增殖、分化诱导其凋亡^[2⁵^]。体外研究也证实糖皮质激素能够促进成骨细胞凋亡，但关于诱导凋亡机制目前还不清楚^[2⁶^]。此次研究显示沉默TAK1基因表达后细胞凋亡率明显增加，表明沉默TAK1后能够进一步加强泼尼松龙诱导成骨细胞凋亡的作用，推测TAK1参与成骨细胞凋亡途径。

此次研究也存在一定的局限性，未进行药物处理浓度研究，后期需要设置不同浓度梯度的组进行进一步验证，此外并未对下游凋亡通路进行深入研究，以便探究沉默TAK1基因与成骨细胞凋亡机制的联系。总之，沉默TAK1表达后能够增强泼尼松龙诱导成骨细胞凋亡的作用，可能与JNK信号通路相关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

泼尼松龙可抑制转化生长因子β激活激酶1诱导的成骨细胞凋亡

Prednisolone inhibites osteoblast apoptosis induced by transforming growth factor beta activated kinase 1

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