间充质干细胞对去除CD4+CD25+调节性T细胞哮喘小鼠气道炎症的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.05.015

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (5): 742-747.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.05.015

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间充质干细胞对去除CD4⁺CD25⁺调节性T细胞哮喘小鼠气道炎症的影响

颛孙永勋¹，张炜²，杜雨末¹，冉丕鑫³，陈瑞¹，林琳¹，李建国¹

1中山大学孙逸仙纪念医院呼吸内科，广东省恶性肿瘤表观遗传与基因调控重点实验室，广东省广州市 510120
2深圳市第二人民医院普通内科，广东省深圳市 518035
3广州医科大学第一附属医院广州呼吸疾病研究所，广东省广州市 510120

出版日期:2017-02-18 发布日期:2017-03-20
通讯作者: 李建国，博士，教授，硕士生导师，中山大学呼吸疾病研究所，中山大学孙逸仙纪念医院呼吸内科，广东省广州市 510120
作者简介:颛孙永勋，男，1982年生，山东省兖州市人，汉族，2007年中山大学毕业，硕士，主治医师，主要从事支气管哮喘的病因及发病机制研究。
基金资助:
广东省医学科研基金(B2014128)；广东省自然自由申请项目(2015A030313134)

Effect of mesenchymal stem cells on airway inflammation in asthmatic mice depleted of CD4+CD25+ regulatory T cells

Zhuansun Yong-xun¹, Zhang Wei², Du Yu-mo¹, Ran Pi-xin³, Chen Rui¹, Lin Lin¹, Li Jian-guo¹

1Department of Respiratory Medicine, Guangdong Provincial Key Laboratory of Malignant Tumor Epigenetics and Gene Regulation, Sun Yat-Sen Memorial Hospital, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China
2Department of Internal Medicine, Shenzhen Second People’s Hospital, Shenzhen 518035, China
3the State Key Laboratory of Respiratory Disease, the First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China

Online:2017-02-18 Published:2017-03-20
Contact: Li Jian-guo, M.D., Professor, Master’s supervisor, Department of Respiratory Medicine, Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China
About author:Zhuansun Yong-xun, Master, Attending physician, Department of Respiratory Medicine, Guangdong Provincial Key Laboratory of Malignant Tumor Epigenetics and Gene Regulation, Sun Yat-Sen Memorial Hospital, Sun Yat-Sen University, Guangzhou 510120, Guangdong Province, China
Supported by:
the Medical Scientific Research Foundation of Guangdong Province, No. B2014128; the Natural Science Foundation of Guangdong Province, No. 2015A030313134

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
异基因间充质干细胞可进入受体免疫器官并较长期存在：近年的研究表明，间充质干细胞除具有多向分化潜能外，还具有免疫调节作用，且间充质干细胞不表达或仅表达可以忽略水平的主要组织相容性复合体MHC-Ⅱ类分子、Fas配体和T细胞共刺激分子B7-1、B7-2、CD40、CD40L，因此间充质干细胞不易被宿主免疫细胞识别，并能逃避免疫系统的免疫排斥。异基因间充质干细胞不但可以进入受体免疫器官，而且可较长期存在。因而，间充质干细胞在支气管哮喘治疗方面亦有广阔的应用前景。前期研究表明，间充质干细胞能抑制哮喘小鼠气道炎症，并上调哮喘小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Treg，但间充质干细胞抑制哮喘小鼠气道炎症发挥免疫调节作用的机制确不明确。
支气管哮喘(哮喘)：是由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病。糖皮质激素是目前治疗哮喘的最有效药物，特别是吸入糖皮质激素的应用使哮喘病程和预后有了根本改观，但长期应用激素可导致严重的不良反应，有相当比例的患者激素不能很好控制，部分患者激素治疗无效，因此有必要寻求新的哮喘防治方法。

摘要
背景：间充质干细胞具有免疫调节作用，可抑制哮喘小鼠气道炎症，但其机制尚不明确。前期研究表明，间充质干细胞可上调哮喘小鼠外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞(Treg)。
目的：观察骨髓间充质干细胞移植对去除CD4⁺CD25⁺Treg哮喘小鼠气道炎症的影响。
方法：将40只BALB/c小鼠随机分为5组：正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、去除Treg细胞哮喘模型组(C组)、MSCs处理组(D组)、去除Treg细胞哮喘模型MSCs处理组(E组)。除A组外，其余各组以卵白蛋白致敏和激发的方法建立哮喘动物模型；C组和E组在激发前1 d及激发实验第3天经尾静脉注射大鼠抗小鼠CD25⁺单克隆抗体，以去除CD4⁺CD25⁺Treg；D组、E组于诱导哮喘的第10天尾静脉注射0.2 mL骨髓间充质干细胞(1×10⁹ L ^-1)。最后1次激发后24 h，检测各组小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Treg占淋巴细胞的比例，支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数及分类计数，并进行肺组织病理观察。
结果与结论：①外周血CD4⁺CD25⁺Treg占淋巴细胞比例：B组、D组低于A组(P < 0.01)，D组高于B组(P < 0.01)；②支气管肺泡灌洗液中炎症细胞计数：B组﹑C组﹑D组炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数均显著高于A组(P < 0.01)，C组炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数显著高于B组(P < 0.01)，D组炎症细胞总数、酸性粒细胞计数显著低于B组(P < 0.01)，E组炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数显著低于C组(P < 0.01)；③肺组织病理：间充质干细胞可显著抑制哮喘小鼠气道炎症；去除Treg细胞可加重哮喘小鼠气道炎症，但间充质干细胞仍能显著抑制去除外周血CD4⁺CD25⁺Treg哮喘小鼠的气道炎症；④结果表明：间充质干细胞可显著抑制去除CD4⁺CD25⁺Treg哮喘小鼠的气道炎症反应。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-1281-0559(李建国)

关键词: 干细胞, 分化, 间充质干细胞, 调节性T细胞, 哮喘, 免疫调节

Abstract:

BACKGROUND: Mesenchymal stem cells have an immunoregulatory capacity to suppress the airway inflammation of asthmatic mice, but the mechanism remains unclear. Our preliminary studies indicated that mesenchymal stem cells can upregulate the CD4⁺CD25⁺ regulatory T cells (Treg) of the asthmatic mice.
OBJECTIVE: To study the effect of mesenchymal stem cells on the airway inflammation in asthmatic BALB/c mice depleted of CD4⁺CD25⁺ Treg.
METHODS: Forty BALB/c mice were randomly divided into five groups: normal control group (group A), asthmatic group (group B), asthmatic group depleted of CD4⁺CD25⁺Treg (group C), mesenchymal stem cells group (group D), and asthmatic group depleted of CD4⁺CD25⁺Treg and administrated with mesenchymal stem cells (group E). Except group A, mice in the other groups were sensitized and challenged by ovalbumin to establish asthma models. In group C and group E, each mouse was treated with anti-CD25⁺ monoclonal antibody to deplete CD4⁺CD25⁺Treg. In group D and group E, mice were intravenously administered with 0.2 mL mesenchymal stem cells 1×10⁹/L) at 10 days after sensitization. At 24 hours after the final activation, the number of CD4⁺CD25⁺Treg in the peripheral blood was detected by flow cytometry. The total cell number of inflammatory cells in the bronchoalveolar lavage fluid, and the number of eosinophils, lymphocytes and neutrophils were counted to analyze the degree of inflammation of the airway together with pathological observation.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) The proportion of CD4⁺CD25⁺Treg in peripheral lymphocytes was ranged as follows: group B < group D < group A (P < 0.01). (2) Number of inflammatory cells in the bronchoalveolar lavage fluid: Regarding the total cell number and the number of eosinophils in the bronchoalveolar lavage fluid, ranking was as follows: groups B, C, D, E were significantly higher than group A (P < 0.01), group C was significantly higher than group B ( P < 0.01), group D was significantly lower than group B (P < 0.01), group E was significantly lower than group C (P < 0.01). (3) Pathological observation of the lung: Mesenchymal stem cells could significantly inhibit the airway inflammation of asthmatic mice. The asthmatic mice appeared to have severer airway inflammation when CD4⁺CD25⁺Treg were depleted from the peripheral blood. However, mesenchymal stem cells could also significantly inhibit the airway inflammation of asthmatic mice depleted of CD4⁺CD25⁺Treg. Taken together, our data indicate that mesenchymal stem cells can significantly inhibit the airway inflammation of asthmatic mice depleted of CD4⁺CD25⁺Treg.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Stem Cells, Mesenchymal Stem Cells, Asthma, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

颛孙永勋，张炜，杜雨末，冉丕鑫，陈瑞，林琳，李建国. 间充质干细胞对去除CD4⁺CD25⁺调节性T细胞哮喘小鼠气道炎症的影响[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(5): 742-747.

Zhuansun Yong-xun, Zhang Wei, Du Yu-mo, Ran Pi-xin, Chen Rui, Lin Lin, Li Jian-guo. Effect of mesenchymal stem cells on airway inflammation in asthmatic mice depleted of CD4+CD25+ regulatory T cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(5): 742-747.

图/表（结果） 1

2.1 MSCs细胞形态观察及鉴定结果

MSCs的原代培养：骨髓细胞接种于塑料培养瓶后，细胞在培养瓶散在分布，呈圆形；24 h后就见有细胞贴壁；72 h后，首次全量换液去除未贴壁细胞，此时贴壁的细胞为单个，形态大部分为圆形；第1次换液后5-7 d，可见由几十个到数百个细胞组成的集落，细胞形态呈梭形、三角形或星形，其中夹杂一些圆形细胞。

原代培养10 d左右，细胞快速增殖，形成细胞小集落，每个小集落中的细胞不断增殖，呈“漩涡状”；培养2周左右，每个小集落形成约数百致上千个细胞的大集落，集落交界处出现重叠、融合，细胞形态呈梭形、三角形或星形，仍有圆形细胞夹杂其中。

MSCs的传代培养：经胰酶消化后的MSCs呈圆形，胞体较大，传代24 h内完全贴壁伸展，呈成纤维细胞样形态，即呈梭形、三角形、星形，传代后的MSCs增殖能力不断增加，第1，2代细胞约经7 d左右融合，第3代以后细胞经4 d左右融合。第1代细胞仍可见很多圆形细胞夹杂其中；第2代细胞圆形细胞明显减少；第3代以后细胞均呈梭形、三角形、星形，未见圆形细胞。细胞融合时，MSCs细胞呈成纤维细胞样细胞形成的集落(图1)。

MSCs鉴定：①细胞黏附于塑料培养瓶的特性，集落样生长，呈成纤维细胞样集落，细胞形态为成纤维细胞样形态，具有快速增殖能力；②MSCs表面标志CD44及CD29抗原表达为阳性，造血干细胞表面标志CD45、CD11b抗原表达为阴性，表达阳性率如下：CD44 (98.46%)、CD29 (99.36%)、CD45(3.34%)、CD11b (2.41%)，见图2；③诱导分化：MSCs可诱导分化为成骨细胞，茜素红S染色见大量钙化的细胞外基质沉淀，见图3A；MSCs也可诱导分化为脂肪细胞，油红O染色见大量脂肪空泡，见图3B。

2.2 实验动物数量分析 造模过程中无动物死亡，40只BALB/c小鼠均进入结果分析。

2.3 外周血CD4⁺CD25⁺Treg比例 流式细胞仪检测示，A、B、C、D、E组外周血CD4⁺CD25⁺Treg占淋巴细胞比例分别为(5.86±0.48)%、(3.60±0.41)%、(0.32±0.11)%、(4.72±0.22)%及(0.33±0.11)%；B组外周血CD4⁺CD25⁺Treg占淋巴细胞比例较A组显著减少(P < 0.01)；D组外周血CD4⁺CD25⁺Treg占淋巴细胞比例较B组显著提高(P < 0.01)，较A组仍显著减少(P < 0.01)。

2.4 支气管肺泡灌洗液炎症细胞计数 B组﹑C组﹑D组﹑E组支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数均显著高于A组(P < 0.01)，C组支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数显著高于B组(P < 0.01)，D组支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数显著低于B组(P < 0.01)，E组支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数显著低于C组(P < 0.01)，D组和E组炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见表1。

2.5 肺组织病理变化 镜下观察，B组﹑C组﹑D组﹑E组支气管、细支气管上皮下和小血管周围可见明显炎性细胞浸润，气道上皮细胞部分脱落，管腔内渗出增加，上皮下充血水肿明显，肺泡间质增厚，亦可见炎性细胞浸润；与其他4组比较，A组支气管、小支气管、伴行小动脉及肺泡结构清晰，气道纤毛上皮排列整齐，气管/血管周围无炎性细胞浸润、无充血水肿；D组﹑E组气道炎症改变较B组和C组有所减轻，支气管、细支气管和伴行小血管周围炎症细胞浸润程度减轻，充血水肿状况改善；C组较B组炎症改变有所加重；D组和去E组炎症改变无显著差异，见图4。

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引言

材料方法

1.1 设计 随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 实验于2014年10月至2016年1月在中山大学孙逸仙纪念医院中心实验室完成。

1.3 材料

实验动物：SPF级BALB/C小鼠43只，其中三四周龄雄鼠3只，用于制备骨髓间充质干细胞；6周龄雌鼠40只，体质量(18±2) g，用于建立小鼠哮喘实验模型。以上小鼠均由中山大学实验动物中心提供，许可证号：SYXK(粤)2012-0081。

主要试剂与仪器：胎牛血清(Hyclone公司)；DMEM/F12培养基(Invitrogen公司)；左旋谷氨酰胺(威佳公司)；青霉素、链霉素(吉诺生物医药有限公司)；荧光标记的抗体(Anti- CD29-PE、Anti-CD44-FITC、Anti-CD45-FITC、Anti-CD11b- FITC(eBioscience公司)；地塞米松、2-磷酸抗坏血酸、β-磷酸甘油(吉诺生物医药有限公司)；流式细胞仪(BD公司，美国)；显微镜、光学纤维镜(NIKON，日本)；大鼠抗小鼠CD25⁺单克隆抗体(Biolegeng，美国)；茜素红S(Sigma)。

1.4 实验方法

1.4.1 小鼠骨髓MSCs的分离、培养及扩增 取健康三四周龄BALB/C小鼠，无菌条件取出股骨和胫骨，培养基冲出骨髓，1 000 r/min离心5 min，细胞以完全培养基(DMEM/F12培养基+体积分数10%胎牛血清+2 mmol/L左旋谷氨酰胺+100 U/mL青霉素+100 mg/L链霉素)重悬，接种至25 cm²培养瓶，72 h后首次全量换液去除未贴壁细胞，以后每3 d全量换液，细胞达到90%融合时传代^[6]。

1.4.2 MSCs表面标志的检测 取融合达90%的第4代MSCs，以胰酶/EDTA消化成单细胞悬液，以PBS洗涤3遍，血细胞计数板计数，调整细胞浓度为1×10⁹ L^-¹，分别加入荧光标记的抗体(Anti-CD29-PE、Anti-CD44-FITC、Anti-CD45-FITC、Anti-CD11b-FITC )，4 ℃孵育30 min，PBS洗去未标记抗体，10 g/L多聚甲醛固定，应用流式细胞仪分析样本中细胞相应标记抗原的阳性表达率，同型IgG作为相应的阴性对照。

1.4.3 MSCs诱导分化(根据Lindolfo描述的方法^[7])

成骨诱导分化：当第4代MSCs接近融合时，将其置于成骨诱导培养基中(DMEM/F12完全培养基+10^-⁸ mol/L地塞米松+5 mg/L 2-磷酸抗坏血酸+10 mmol/L β-磷酸甘油)培养3周，每天换液。3周后以PBS冲洗1遍，茜素红S (pH=4.2)室温染色5 min，蒸馏水冲洗掉多余的茜素红S，显微镜下观察。

成脂诱导分化：当第4代MSCs接近融合时，将其置于成脂诱导培养基(DMEM/F12完全培养基+10^-⁸ mol/L地塞米松+5 mg/L胰岛素)中培养3周，每3 d换液，相差倒置显微镜下观察细胞形态。3周后40 g/L多聚甲醛室温下固定 1 h，油红O溶液(3份溶于异丙醇的3.75%油红O+2份蒸馏水)室温染色5 min。

1.4.4 哮喘小鼠模型的制备

实验动物分组：将40只健康6周龄BALB/c小鼠随机分为5组，每组8只，分别为：正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、去除Treg细胞哮喘模型组(C组)、MSCs处理组(D组)、去除Treg细胞哮喘模型MSCs处理组(E组)。

哮喘小鼠模型：除A组外，将其余4组每只小鼠腹腔注射抗原溶液0.2 mL(卵白蛋白100 μg/明矾20 mg)进行致敏，第14天(D14)和第21天(D21)以同样剂量、方法加强，第28天(D28)至第34天(D34)，将小鼠放于自制的密闭容器内，以5%卵白蛋白溶液雾化吸入，30 min/d，连续7 d诱发哮喘。A组以生理盐水代替卵白蛋白；C组和E组小鼠在激发前1 d尾静脉注射0.25 mg大鼠抗小鼠CD25⁺单克隆抗体，并在激发实验第3天强化注射0.25 mg大鼠抗小鼠CD25⁺单克隆抗体，维持Treg细胞低水平^[8]；D组与E组在诱导哮喘的第10天经尾静脉注入0.2 mL浓度为1×10⁹ L^-¹的MSCs，其余3组经尾静脉注入等量PBS。

灌洗液细胞涂片的制作、细胞计数和分类：所有小鼠均在最后一次激发后24 h，收集支气管肺泡灌洗液。所有小鼠戊巴比妥钠麻醉后分离气管，在喉软骨下作一小横切口，经气管缓缓插入22号穿刺针。然后用1 mL注射器吸取0.7 mL PBS，通过导管将PBS缓慢注入肺内，可见小鼠肺脏逐渐膨胀、变白，缓慢回抽灌洗液，再将其缓慢注入肺内，如此反复3次，最后将收集到的支气管肺泡灌洗液盛入1.5 mL EP管中，此为第一次灌洗，重复上述操作2次，收集全部支气管肺泡灌洗液，4 ℃、3 000 r/min离心5 min，弃上清，加入红细胞裂解液100 μL，室温孵育10 min，3 000 r/min离心5 min，弃上清，以1 mL PBS重悬，血细胞计数板计数。余液再次离心后吸出上清，以少许PBS重悬后涂片，空气中晾干后，放于固定液(50%乙醚和体积分数50%乙醇)固定过夜，次日冲洗后行常规苏木精-伊红染色，光学纤维镜下进行细胞分类计数，计数200个细胞，求出百分比。

肺的病理组织学检查：将肺脏组织置于体积分数10%甲醛中浸泡固定24 h，常规石蜡切片，苏木精-伊红染色，光镜下观察支气管、肺组织病理变化。

外周血CD4⁺CD25⁺Treg检测：最后一次激发后24 h，尾静脉采血0.2 mL，取50 μL血标本，加入5 μL FITC anti-mouse CD4、5 μL PE anti-mouse CD25，混匀，避光孵育20 min，加入红细胞裂解液1 mL，混匀，避光孵育10 min，1 000 r/min离心5 min，弃上清，再用2 mL PBS洗1遍，弃上清，加入200 μL PBS，流式细胞仪检测。

1.5 主要观察指标 各组小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Treg占淋巴细胞的比例、支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数与分类计数及肺组织病理观察。

1.6 统计学分析 由第一作者采用SPSS 13.0软件进行t检验或单因素方差分析，数据用均数±标准差表示，以P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

研究表明，静脉输注MSCs能上调哮喘小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Treg比例并抑制哮喘小鼠气道炎症；去除CD4⁺CD25⁺Treg可显著加重哮喘小鼠气道炎症，但MSCs仍可显著抑制去除CD4⁺CD25⁺Treg哮喘小鼠的气道炎症；与未去除CD4⁺CD25⁺Treg哮喘小鼠相比，MSCs对去除CD4⁺CD25⁺Treg哮喘小鼠气道炎症的抑制作用有所减弱，但无显著性差异。结果进一步表明外周血CD4⁺CD25⁺Treg比例下降参与了哮喘小鼠气道炎症的形成，MSCs上调外周血CD4⁺CD25⁺Treg比例仅仅是其抑制哮喘小鼠气道炎症的机制之一，MSCs对哮喘小鼠气道炎症的抑制作用还存在其他重要机制。

调节性T(Treg)细胞是CD4⁺T淋巴细胞的一个亚群，能积极的控制或抑制其他免疫细胞的功能，抑制免疫反应，从而对机体免疫系统产生重要的调节作用^[9-12]。支气管哮喘是气道慢性炎症性疾患，同时也是外周免疫耐受机制发生缺陷的疾病，而CD4⁺CD25⁺Treg与在外周维持机体自身免疫耐受有着密切的关系，实验研究表明，哮喘患者CD4⁺CD25⁺Treg比例下降或功能失调在支气管哮喘的发生发展过程中发挥着重要作用^[13-18]。因此，恢复哮喘患者CD4⁺CD25⁺Treg的数量和功能可能是治疗哮喘的一个有效途径。

近年的研究表明，MSCs除具有多向分化潜能外，还具有免疫调节作用^[19-22]，且MSCs不表达或仅表达可以忽略水平的主要组织相容性复合体MHC-Ⅱ类分子、Fas配体和T细胞共刺激分子B7-1、B7-2、CD40、CD40L，因此MSCs不易被宿主免疫细胞识别，并能逃避免疫系统的免疫排斥^[23-26]。异基因MSCs不但可以进入受体免疫器官，而且可较长期存在^[27-28]。因而，MSCs在支气管哮喘治疗方面亦有广阔的应用前景。前期研究表明，MSCs能抑制哮喘小鼠气道炎症，并上调哮喘小鼠外周血CD4⁺CD25⁺Treg，但MSCs抑制哮喘小鼠气道炎症发挥免疫调节作用的机制确不明确。MSCs可能通过多种机制发挥免疫调节作用，间充质干细胞除了能够上调CD4⁺CD25⁺Treg比例，还可通过HO-1、PD-1抑制T淋巴细胞的增殖反应^[29-30]，关于MSCs抑制哮喘小鼠气道炎症的机制，后期还可进行更为深入的研究。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

间充质干细胞对去除CD4⁺CD25⁺调节性T细胞哮喘小鼠气道炎症的影响

Effect of mesenchymal stem cells on airway inflammation in asthmatic mice depleted of CD4+CD25+ regulatory T cells

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