腰突颗粒对人髓核细胞核因子κB信号通路的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.33.010

中国组织工程研究 ›› 2016, Vol. 20 ›› Issue (33): 4933-4939.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.33.010

• 组织构建细胞学实验 cytology experiments in tissue construction • 上一篇下一篇

腰突颗粒对人髓核细胞核因子κB信号通路的影响

何升华1，谭伟伟2，孙志涛1，王业广1，王建1，赖居易3

1深圳市中医院骨三科，广东省深圳市 518000；2安徽中医药大学，安徽省合肥市 230000；3广州中医药大学，广东省广州市 510000

收稿日期:2016-06-27 出版日期:2016-08-12 发布日期:2016-08-12
作者简介:何升华，男，1965年生，安徽省安庆人，汉族，2003年安徽中医学院毕业，硕士，主任医师，主要从事脊柱外科研究。
基金资助:
深圳市卫生计生系统科研项目(201401066)；深圳市科技计划项目(JCYJ20150401163247232)；广东省科技厅(自筹项目)(2015[110号])

Effects of Yaotu Granules on nuclear factor-kappaB signaling pathway in human nucleus pulposus cells

He Sheng-hua1, Tan Wei-wei2, Sun Zhi-tao1, Wang Ye-guang1, Wang Jian1, Lai Ju-yi3

1Third Department of Orthopedics, Shenzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine, Shenzhen 518000, Guangdong Province, China; 2Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230000, Anhui Province, China; 3Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510000, Guangdong Province, China

Received:2016-06-27 Online:2016-08-12 Published:2016-08-12
About author:He Sheng-hua, Master, Chief physician, Third Department of Orthopedics, Shenzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine, Shenzhen 518000, Guangdong Province, China
Supported by:
Research Project of Health and Family Planning Commission of Shenzhen, China, No. 201401066; the Science and Technology Program of Shenzhen, China, No. JCYJ20150401163247232; the Science and Technology Project of Guangdong, China, No. 2015-110

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
腰突颗粒：系临床经验方，具有较好的临床效果，由独活、桑寄生、牛膝、杜仲、熟地黄、川芎、当归、芍药、茯苓、甘草、地龙、土鳖、蜈蚣、三棱、莪术组成，诸药合用，是为标本兼顾，扶正祛邪之剂。
人髓核细胞：髓核是乳白色半透明胶状体，富于弹性，为椎间盘结构的一部分，位于两软骨终板与纤维环之间。发育成熟的髓核是一个由软骨样细胞分散在细胞间质内，周围围绕着一个比较致密的胶原纤维网的含水球。髓核细胞即其中类软骨样细胞。

摘要
背景：核因子κB在退变椎间盘中呈高表达，经验方腰突颗粒治疗腰椎间盘突出症临床效果良好，通过核因子κB信号通路试探讨其治疗作用的机制。
目的：探讨腰突颗粒含药血清对人髓核细胞核因子κB信号转导通路的影响。
方法：将8只新西兰大白兔随机等分为生理盐水组和低、中、高剂量组，分别以生理盐水及10，20，40 mL腰突颗粒水煎剂灌胃7 d。于最后一次灌胃2 h后颈总动脉采血，收集血清，分别配成体积分数10%含药血清的DMEM培养液保存备用，分别干预人髓核细胞24 h。
结果与结论：体积分数10%含药血清干预后，与生理盐水组相比，低剂量组、中剂量组、高剂量组人髓核细胞中白细胞介素8、肿瘤坏死因子α、p-P65、P50、IκB-α和IKK-β mRNA相对表达水平均降低，且细胞中p-P65、P50、IκB-α和IKK-β蛋白表达水平降低，同时随着灌服腰突颗粒剂量的增加，白细胞介素8、肿瘤坏死因子α、p-P65、P50、IκB-α和IKK-β mRNA相对表达水平逐渐降低，p-P65、P50、IκB-α和IKK-β蛋白表达水平降低。提示腰突颗粒含药血清能阻断人髓核细胞中核因子κB信号转导通路，进而减缓髓核细胞的退变，起到保护人髓核细胞的作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0003-2435-0227(何升华)

关键词: 组织构建, 骨组织工程, 髓核细胞, 含药血清, 核因子κB信号通路, 腰突颗粒, 白细胞介素8, 肿瘤坏死因子α

Abstract:

BACKGROUND: Nuclear factor-κB (NF-κB) is highly expressed in the degenerated intervertebral disc. The Herbal Compound formula Yaotu Granules for lumbar disc herniation has achieved good clinical results; however, the underlying mechanisms remain poorly understood.
OBJECTIVE: To explore mechanisms underlying the effects of the drug serum of Yaotu Granules on NF-κB signaling pathway.
METHODS: Eight New Zealand white rabbits were randomly divided into normal saline group, low-, middle-, and high-dose drug groups. Normal saline, 10, 20, and 40 mL of water decoction of Yaotu Granules were administered intragastrically in the normal saline, low-, middle-, and high-dose drug groups for 7 days, respectively. The drug serum of Yaotu Granules was prepared using serum samples obtained from the common carotid artery at 2 hours after the last administration. Human nucleus pulposus cells were maintained in DMEM containing 10% (v/v) drug serum for 24 hours.
RESULTS AND CONCLUSION: The expression levels of interleukin (IL)-8, tumor necrosis factor (TNF)-α, p-P65, P50, IκB-α (the NF-κB inhibitor), and IκB kinase β (IKK-β) mRNA in human nucleus pulposus cells in three drug serum groups were significantly decreased compared with the normal saline group; in addition, a similar change in the expression levels of p-P65, P50, IκB-α, and IKK-β protein between groups were detected. Noticeably, the expression levels of IL-8, TNF-α, p-P65, P50, IκB-α, and IKK-β mRNA, as well as the expression levels of p-P65, P50, IκB-α, and IKK-β protein were gradually decreased with the increased drug dose. All these results suggest that the drug serum of Yaotu Granules can protect nucleus pulposus cells and delay their degeneration through blocking NF-κB signaling pathway.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Intervertebral Disk, NF-kappa B, Drugs, Chinese Herbal, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

何升华，谭伟伟，孙志涛，王业广，王建，赖居易. 腰突颗粒对人髓核细胞核因子κB信号通路的影响[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(33): 4933-4939.

He Sheng-hua, Tan Wei-wei, Sun Zhi-tao, Wang Ye-guang, Wang Jian, Lai Ju-yi. Effects of Yaotu Granules on nuclear factor-kappaB signaling pathway in human nucleus pulposus cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(33): 4933-4939.

图/表（结果） 2

参考文献

[1] Hughes SP, Freemont AJ, Hukins DW, et al. The pathogenesis of degeneration of the intervertebral disc and emerging therapies in the management of back pain. J Bone Joint Surg Br. 2012;94(10):1298-1304.
[2] 刘勇君.腺相关病毒介导BMP-7和SOX9双基因共同转染兔退变椎间盘体内试验研究[D].青岛:青岛大学,2013.
[3] Vadalà G, Sowa G, Hubert M, et al. Mesenchymal stem cells injection in degenerated intervertebral disc: cell leakage may induce osteophyte formation. J Tissue Eng Regen Med. 2012;6(5):348-355.
[4] 周逸驰,李景峰,董视师,等.干细胞治疗椎间盘退变性疾病:现状与展望[J].中国组织工程研究,2015,19(10): 1635-1639.
[5] Mizuno H, Roy AK, Vacanti CA, et al. Tissue-engineered composites of anulus fibrosus and nucleus pulposus for intervertebral disc replacement. Spine (Phila Pa 1976). 2004;29(12):1290-1297; discussion 1297-1298.
[6] Mercuri JJ, Gill SS, Simionescu DT. Novel tissue-derived biomimetic scaffold for regenerating the human nucleus pulposus. J Biomed Mater Res A. 2011; 96(2):422-435.
[7] Frith JE, Cameron AR, Menzies DJ, et al. An injectable hydrogel incorporating mesenchymal precursor cells and pentosan polysulphate for intervertebral disc regeneration. Biomaterials. 2013;34(37):9430-9440.
[8] 孙中仪.NF-kB信号通路与椎间盘退变的研究进展[J].中国矫形外科杂志,2012,20(23):2162-2164.
[9] McBeth J, Jones K. Epidemiology of chronic musculoskeletal pain. Best Pract Res Clin Rheumatol. 2007;21(3):403-425.
[10] Dagenais S, Caro J, Haldeman S. A systematic review of low back pain cost of illness studies in the United States and internationally. Spine J. 2008;8(1):8-20.
[11] Roughley P, Hoemann C, DesRosiers E, et al. The potential of chitosan-based gels containing intervertebral disc cells for nucleus pulposus supplementation. Biomaterials. 2006;27(3):388-396.
[12] Sakai D. Future perspectives of cell-based therapy for intervertebral disc disease. Eur Spine J. 2008;17 Suppl 4:452-458.
[13] 赵献峰,刘浩,丰干均,等.脊索细胞促进髓核软骨样细胞增殖及表型维持[J].中国修复重建外科杂志,2008,22(8): 939-943.
[14] 王磊,吴小涛,史志英,等.转化生长因子β1和胰岛素样生长因子1对体外培养人退变髓核细胞生物学活性的影响[J].中国脊柱脊髓杂志,2007,17(3):218-221.
[15] 王锋,郑陈静美,吴小涛.人退变椎间盘髓核细胞体外平面培养的形态学及活性观察[J].中国矫形外科杂志,2013, 21(13):1346-1351.
[16] 王会仁,袁凤来,段平国,等.酶预消化组织块贴壁法培养人退变椎间盘髓核细胞[J].中华创伤杂志,2012,28(11): 1032-1036.
[17] 王祺,何君仁,牛建鹏,等.正常与退变髓核细胞Ⅱ型胶原蛋白和番红染色的研究[J].中国医疗前沿,2012,7(1):4-5.
[18] Nerlich AG, Bachmeier BE, Schleicher E, et al. Immunomorphological analysis of RAGE receptor expression and NF-kappaB activation in tissue samples from normal and degenerated intervertebral discs of various ages. Ann N Y Acad Sci. 2007;1096: 239-248.
[19] 吴庆能,雷刚刚,钟青山,等.退变椎间盘中NF-κB?MMP-13的表达及意义[J].实用临床医学, 2009,10(2): 5-7,10.
[20] Wang P, Qiu W, Dudgeon C, et al. PUMA is directly activated by NF-kappaB and contributes to TNF-alpha-induced apoptosis. Cell Death Differ. 2009; 16(9):1192-1202.
[21] 乔晓峰,李长德,解云川,等.腰椎间盘突出症患者髓核组织TNF-α?IL-8以及IL-10的表达及其意义[J].中国老年学杂志,2013,33(17):4276-4277.
[22] Burke JG, Watson RW, McCormack D, et al. Intervertebral discs which cause low back pain secrete high levels of proinflammatory mediators. J Bone Joint Surg Br. 2002;84(2):196-201.
[23] Hoyland JA, Le Maitre C, Freemont AJ. Investigation of the role of IL-1 and TNF in matrix degradation in the intervertebral disc. Rheumatology (Oxford). 2008;47(6): 809-814.
[24] Zhao CQ, Zhang YH, Jiang SD, et al. ADAMTS-5 and intervertebral disc degeneration: the results of tissue immunohistochemistry and in vitro cell culture. J Orthop Res. 2011;29(5):718-725.
[25] Yurube T, Takada T, Suzuki T, et al. Rat tail static compression model mimics extracellular matrix metabolic imbalances of matrix metalloproteinases, aggrecanases, and tissue inhibitors of metalloproteinases in intervertebral disc degeneration. Arthritis Res Ther. 2012;14(2):R51.
[26] Nerlich AG, Bachmeier BE, Schleicher E, et al. Immunomorphological analysis of RAGE receptor expression and NF-kappaB activation in tissue samples from normal and degenerated intervertebral discs of various ages. Ann N Y Acad Sci. 2007;1096: 239-248.
[27] Podichetty VK. The aging spine: the role of inflammatory mediators in intervertebral disc degeneration. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 2007; 53(5):4-18.
[28] Vo NV, Hartman RA, Yurube T, et al. Expression and regulation of metalloproteinases and their inhibitors in intervertebral disc aging and degeneration. Spine J. 2013;13(3):331-341.
[29] Ji Q, Zhang Q, Wang Y. Research progress of a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motif 4 and 5 in osteoarthritis. Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 2013;27(9):1080-1084.
[30] Fink K, Boratyński J. The role of metalloproteinases in modification of extracellular matrix in invasive tumor growth, metastasis and angiogenesis. Postepy Hig Med Dosw (Online). 2012;66:609-628.
[31] Sivan SS, Wachtel E, Roughley P. Structure, function, aging and turnover of aggrecan in the intervertebral disc. Biochim Biophys Acta. 2014;1840(10): 3181-3189.

引言

材料方法

设计随机对照细胞学研究。

1.2 时间及地点实验于2014年11月至2016年2月在北京大学深圳医院中心实验室完成。

1.3 材料

人髓核细胞：取深圳市中医院2例确诊为腰椎间盘突出症患者行脊柱内镜手术摘除的髓核组织，患者均为男性，年龄分别为25和36岁，其中L₄/L₅、L₅/S₁髓核突出各1例。经患者知情同意，实验由深圳市中医院伦理委员会论证审核通过。

实验动物：新西兰大白兔8只，兔龄2个月，体质量(1.5±0.1) kg，由广州医学动物实验中心提供，许可证号：SCXK(粤)2014-0035。

药物：腰突颗粒由独活15 g、桑寄生15 g、牛膝10 g、杜仲10 g、熟地黄10 g、川芎10 g、当归10 g、芍药10 g、茯苓10 g、甘草5 g、地龙10 g、土鳖10 g、蜈蚣2条、三棱10 g、莪术10 g组成，由深圳市中医院药剂科提供。将每剂药泡入500 mL水中1 h，然后进行一剂药的煎煮，先武火煮沸，再改文火慢煎取汁300 mL左右，倒出药液。将每剂药的药液收集一起，进行浓缩，制成浓度为1.5×10³ g/L的腰突颗粒水煎浓缩剂。

腰突颗粒防治椎间盘退变实验使用的主要试剂与仪器：
试剂与仪器	来源
胎牛血清	Gibco
胰蛋白酶	Corning
免疫组化试剂盒	福州迈新生物技术开发有限公司
抗Ⅱ型胶原蛋白抗体	北京博奥森生物技术有限公司
反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒	Promega
核因子κB抑制蛋白α亚基(IκB-α)、核因子抑制剂κB激酶β亚基(IKK-β)、抗体	Immuno Way
p-P65抗体	Cell signaling
P50抗体	Abcam
山羊抗兔IgG	Southern biotech
细胞培养箱，离心机	Thermo Fisher Scientific
超净台	苏净集团安泰公司
正立显微镜	OLYMPUS
实时荧光定量PCR仪	LightCycler
凝胶成像系统	ProteinSimple
倒置显微镜	上海上光新光学科技有限公司

1.4 方法

1.4.1 含药血清的制备将8只新西兰大白兔随机分为4组：高、中、低剂量组和生理盐水组。适应性喂养1周后，分别以40，20，10 mL 1.5 kg/L腰突颗粒水煎浓缩剂及10 mL生理盐水灌胃，2次/d，连续7 d。最后一次灌胃2 h后，采用颈总动脉采血，收集血清，离心，灭活，过滤，冻存备用。

1.4.2 人髓核细胞原代培养术中取出的髓核组织，放入培养基，含青链霉素双抗PBS清洗2遍，放入培养皿中，剪碎，离心，去上清，加入0.2%胰蛋白酶(1∶3)，消化30 min，离心，弃上清，加入0.25%Ⅱ型胶原酶 (1∶6)，消化2 h，待组织大部消化，150目滤网过滤，加入全培液，离心，去上清，加入含体积分数15%胎牛血清培养基，吹打均匀，37 ℃，体积分数5%CO₂培养瓶中培养，每天倒置显微镜下观察，每3 d换液1次，待细胞80%融合后，予以传代培养。

1.4.3 髓核细胞的鉴定

甲苯胺蓝/番红O染色：取出24孔板中第2代细胞爬片培养2 d后，吸出原培养液，PBS清洗3次，每次5 min，40 g/L多聚甲醛固定15min，PBS清洗3次，每次5 min，1%甲苯胺蓝/番红O染色30min，吸去染液，自来水清洗3 min，脱水，固定，光镜观察。

免疫组化染色：取出24孔板中第2代细胞爬片培养 2 d后，吸出原培养液，PBS洗3次，每次5 min；40 g/L多聚甲醛固定20 min(4 ℃冰箱中)；PBS冲洗3×3 min；Triton X-100打孔10 min，PBS冲洗3×3 min；加入封闭内源性过氧化物酶孵育10 min；PBS洗3×3 min；加入血清封闭非特异性蛋白孵育30 min；去血清，1∶300的Ⅱ型胶原一抗(兔抗人)于湿盒内4 ℃过夜；37 ℃下复温45 min，PBS洗3×3 min；生物素标记的二抗37 ℃孵育30 min，PBS洗3×3 min；滴加已稀释的链霉亲和素-过氧化物酶室温孵育0.5-1.0 h，PBS洗3×3 min； DAB显色。苏木精染色2 min，自来水洗，盐酸乙醇分化，PBS(pH 7.4)冲洗返蓝(约5 min)，脱水，固定，光镜观察。

1.4.4 含药血清干预取第2代人髓核细胞，予以分为高、中、低剂量组和生理盐水组，细胞占瓶底80%时，分别采用10%高剂量组血清，10%中剂量组血清，10%低剂量组血清，10%生理盐水组血清干预24 h。

1.4.5 反转录PCR检测 Trizol法提取细胞总RNA，利用NCBI Primer BLAST设计核因子κB信号通路中P50、IKK-β、IΚB-α、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α、β-actin的引物，由南京金斯瑞生物科技有限公司合成。引物序列见表1。按照Promega反转录试剂盒及qPCR试剂盒说明书操作，反应体系为20 μL，实验重复3次。

1.4.6 Western blot分析提取每组细胞蛋白，检测各组细胞p-P65、P50、IκB-α、IKK-β的表达，用扫描仪对胶片进行扫描，摄像。软件分析各组条带的灰度值，各组指标与GAPDH灰度值的比值作为蛋白的相对表达量。

1.5 主要观察指标人髓核细胞中白细胞介素8、肿瘤坏死因子α、P50、IΚB-α和IKK-β mRNA的表达水平及p-P65、p50、IκB-α和IKK-β蛋白的表达情况。

表1 荧光定量PCR所测基因的引物序列

Table 1 Primer sequences of genes measured by quantitative PCR

基因	正义链序列(5’-3’)	反义链序列(5’-3’)	产物长度(bp)
白细胞介素8	GGT GCA GTT TTG CCA AGG AG	TTC CTT GGG GTC CAG ACA GA	183
肿瘤坏死因子α	CTA GAC ACT GAT GAC CCC GC	GAA TTC CTT CCA GCG CAA CG	72
P50	TTG GGA AGG CCT GAA CAA ATG	TGA AGG TAT GGG CCA TCT GC	116
IΚB-α	GAA GTG ATC CGC CAG GTG AA	CTG CTC ACA GGC AAG GTG TA	189
IKK-β	TTG TAG CAA GGT CCG TGG TC	TTG TAG CAA GGT CCG TGG TC	170
β-actin	GGG CAT GGG TCA GAA GGA TT	TCG ATG GGG TAC TTC AGG GT	81

表2 腰突颗粒含药血清对人退变髓核细胞中核因子κB信号通路相关mRNA和白细胞介素8及肿瘤坏死因子α mRNA表达水平的影响 (x(_)±s，2^-^??Ct)

Table 2 Effects of the drug serum of Yaotu Granules on the expression levels of interleukin-8, tumor necrosis factor-α, P50, IκB-α, and IκB kinase β mRNA in human nucleus pulposus cells

组别	p-P65	P50	IκB-α	IKK-β
生理盐水组	0.157±0.005	0.282±0.008	0.048±0.001	0.538±0.022
低剂量组	0.143±0.004^a	0.216±0.007^a	0.034±0.001^a	0.497±0.008^a
中剂量组	0.067±0.001^ab	0.196±0.004^ab	0.003±0.001^ab	0.095±0.002^ab
高剂量组	0.049±0.004^abc	0.094±0.008^abc	0.002±0.001^abc	0.070±0.005^abc

表注：与生理盐水组比，^aP < 0.05；与低剂量组相比，^bP < 0.05；与中剂量组相比，^cP < 0.05。

表3 腰突颗粒含药血清对人退变髓核细胞核因子κB通路相关蛋白表达水平的影响 (x(_)±s，与GAPDH灰度值的比值)

Table 3 Effects of the drug serum of Yaotu Granules on the expression levels of p-P65, P50, IκB-α, and IκB kinase β protein in human nucleus pulposus cells

组别	白细胞介素8	肿瘤坏死因子α	P50	IΚB-α	IKK-β
生理盐水组	2.28±0.38	1.50±0.09	1.89±0.33	3.79±0.57	2.69±0.48
低剂量组	1.07±0.02^a	1.17±0.14^a	1.46±0.10^a	1.84±0.36^a	1.22±0.31^a
中剂量组	0.42±0.06^ab	0.66±0.06^ab	1.17±0.20^ab	0.90±0.10^ab	1.15±0.32^ab
高剂量组	0.27±0.05^abc	0.53±0.05^abc	0.94±0.06^abc	0.74±0.13^abc	0.13±0.07^abc

表注：与生理盐水组相比，^aP < 0.05；与低剂量组相比，^bP < 0.05；与中剂量组相比，^cP < 0.05。

1.6 统计学分析数据以x(_)±s表示，采用SPSS 17.0统计分析，组间比较，正态性数据且方差齐者采用one-way ANOVA分析(LSD/SNK-q)，方差不齐者采用Dunnett T3分析；非正态性数据采用非参数检验。a=0.05，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

据流行病学显示，人的一生中约有半数会经历腰部疼痛，并且由此产生的巨大社会负担与经济负担^[9-10]。而腰痛的主要病因是由腰椎间盘突出症等腰椎退行性变引起的。椎间盘退行性变是指髓核、纤维环和软骨终板等椎间盘组织的老化退变。其显著性改变是指髓核中蛋白聚糖含量的下降，以及其伴随水分的减少^[11]。椎间盘的退变导致其力学特征的改变，从而引起相应的临床症状和体征。

髓核组织中髓核细胞属类软骨细胞，目前研究认为尚无特异性标志物对其进行鉴定^[12]，主要通过细胞形态及普通染色和特殊染色检测细胞质内蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达来鉴别^[13-14]。甲苯胺蓝染色主要显示髓核细胞中的蛋白多糖，细胞被染呈现天蓝色^[15-16]。番红O染色显示，细胞胞浆被染成红色，体现其中蛋白多糖的含量，核周蛋白多糖含量丰富，染色较红；并且随着细胞的老化退变，其蛋白多糖含量逐渐减少，染色变淡^[17]。髓核细胞属类软骨细胞，其表达Ⅱ型胶原^[13]，因此可通过检测Ⅱ型胶原的存在，来鉴定髓核细胞，实验通过收集术中取出髓核组织，进行胰蛋白酶及Ⅱ型胶原酶消化，获得贴壁细胞，经过甲苯胺蓝染色、番红O染色及Ⅱ型胶原酶染色，鉴定贴壁细胞为髓核细胞，从而进行下一步含药血清的干预。

近年来，相关研究表明椎间盘的退变与核因子κB介导的信号通路存在一定的联系。目前已有实验证明，在动物造模椎间盘髓核中的髓核细胞及软骨终板中的软骨细胞中核因子κB阳性表达，而在其自身对照的椎间盘中的髓核细胞与软骨细胞核因子κB呈阴性或弱阳性表达^[18]，另有研究在人退变椎间盘组织中也发现核因子κB 的高表达，并认为核因子κB在椎间盘退变中可能起重要作用^[19]。研究发现，退变椎间盘髓核细胞内核因子κB信号转导通路的激活，可能的机制有：①椎间盘髓核细胞内核因子κB通路的激活，可能上调一氧化氮、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1、白细胞介素8等炎性因子的表达，引起椎间盘内局部炎症反应，从而导致椎间盘髓核细胞变性坏死，最终引起椎间盘的退变。②椎间盘髓核细胞内核因子κB转导通路的激活，能促进椎间盘髓核细胞内坏死受体DR5、Bax、Apo-1/CD95配体等细胞凋亡调节子的表达^[20]，使椎间盘髓核细胞大量凋亡，进而致使椎间盘髓核细胞外基质的合成减少，最终引起椎间盘退变。

肿瘤坏死因子α的释放促进血管内皮细胞释放白细胞介素8、白细胞介素6等，进而引发临近神经根的水肿及血管内凝血损害等。因此，其被认为是触发及维持神经根性疼痛过程中一个关键性因子^[21]。实验结果发现腰突颗粒含药血清干预人髓核细胞后，人髓核细胞中白细胞介素8、肿瘤坏死因子α的表达量下降，说明含药血清可以降低人髓核细胞中炎性因子的表达，抑制炎症反应的启动。

据文献报道，退变的椎间盘中不仅有炎性因子、聚集蛋白聚糖酶、基质金属蛋白酶等表达水平的提高，其髓核组织中更有大量激活的核因子κB出现，这些均反映出核因子κB信号通路与椎间盘退变的发生关系密切^[22-31]。核因子κB信号通路的激活主要是外源性刺激物(如肿瘤坏死因子α)与受体结合，激活核因子κB诱导性激酶，随后激活IKK，IKK使IκB磷酸化泛素化，后者被降解，与核因子κB二聚体分离，二聚体易位入核，与DNA结合，从而转录表达。实验结果说明腰突颗粒含药血清能明显抑制核因子κB中p-P65、P50、IκB-α、IKK-β的表达，抑制核因子κB信号通路的激活。

祖国医学将腰椎间盘突出症归属于“腰痛”、“痹症”范畴，在《内经》、《诸病源候论》、《三因极一病证方论》中均有论述，将其病因归为肾虚、外感、伤湿、损伤等；病机为体虚标实，体虚为肾精受损，无以濡养；邪实为瘀血，风寒湿邪、痰积。经络不通、气滞血瘀，不通则痛为其病机之关键。这一认识与现代研究腰椎间盘突出症的病因病机是相符的。腰突颗粒是临床经验方，具有较好的临床效果，方中用独活、桑寄生祛风湿，养血和营，活络通痹为主药；牛膝、杜仲、熟地黄补肝肾，强筋骨为辅药；川芎、当归、芍药补血活血；茯苓、甘草益气扶脾，均为佐药，使气血旺盛，有助于祛除风湿；又佐以地龙、土鳖、蜈蚣以通络止痛，三棱、莪术破血除瘀，各药合用，是为标本兼顾，扶正祛邪之剂。实验结果发现腰突颗粒含药血清可抑制核因子κB信号通路的激活,减轻炎性因子的释放，抑制炎症反应的激活，进而减缓人髓核细胞的退变，起到保护人髓核细胞的作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

腰突颗粒对人髓核细胞核因子κB信号通路的影响

Effects of Yaotu Granules on nuclear factor-kappaB signaling pathway in human nucleus pulposus cells

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[1]	刘志超, 张帆, 孙旗, 康晓乐, 袁巧妹, 柳根哲, 陈江. 不同静水压下人椎间盘髓核细胞的形态和活性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1172-1176.
[2]	吴子健, 胡昭端, 谢有琼, 王峰, 李佳, 李柏村, 蔡国伟, 彭锐. 3D打印技术与骨组织工程研究文献计量及研究热点可视化分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 564-569.
[3]	李晓壮, 段浩, 王伟舟, 唐志宏, 王旸昊, 何飞. 骨组织工程材料治疗骨缺损疾病在体内实验中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 626-631.
[4]	陈崧, 何远丽, 谢雯佳, 钟林娜, 王剑. 磷酸钙纳米颗粒药物递送系统在骨组织工程研究与应用中的优势[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(22): 3565-3570.
[5]	张振华, 刘姿辰, 禹宝庆. 聚己内酯及其复合材料在组织工程骨构建中的地位与问题[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(22): 3571-3577.
[6]	许辉, 康冰心, 钟声, 高晨鑫, 赵翅, 邱国伟, 孙松涛, 解骏, 肖涟波, 施杞. 点按局部腧穴与坐位调膝法联用治疗膝关节骨关节炎：随机对照研究[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(2): 216-221.
[7]	付远飞, 何升华, 赖居易, 孙志涛, 冯华龙, 蓝志明. 地龙提取物抑制核因子κB信号通路延缓椎间盘髓核细胞的退变[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(2): 264-268.
[8]	覃艳春, 荣震, 蒋锐沅, 付彬, 洪晓华, 莫春梅. 中药复方制剂抑制CD133+肝癌干细胞增殖及干性转录因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(19): 3016-3023.
[9]	张凯, 张晓勃, 施锦涛, 王克平, 周海宇. 间充质干细胞治疗椎间盘退行性疾病：基于Web of Science数据库的文献计量及可视化分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(19): 3031-3038.
[10]	汪鎏, 宋东哲, 黄定明. 骨形态发生蛋白9调控干细胞分化与骨再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(19): 3064-3070.
[11]	付力伟, 杨振, 李浩, 高仓健, 眭翔, 刘舒云, 郭全义 . 亲和肽在软骨组织工程中应用的新策略和问题[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(16): 2569-2574.
[12]	李晏乐, 岳肖华, 聂真, 张峻玮, 李朝辉, 聂伟志, 姜红江. 生物可吸收材料特点及在骨科中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(16): 2612-2617.
[13]	吴子健, 胡昭端, 周晓红, 李佳, 李柏村, 蔡国伟, 彭锐. 通督活血汤含药血清可抑制椎间盘纤维环细胞的焦亡[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(14): 2148-2153.
[14]	何升华, 付远飞, 蓝志明, 孙志涛, 赖居易, 冯华龙, 郭子宾, 李盖. 腰突颗粒通过调控miR-221表达干预髓核细胞的增殖与凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(14): 2177-2182.
[15]	韩宁宁, 左进富, 孙淼, 唐胜建, 刘方军. 脐带间充质干细胞在骨组织工程中的应用与进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(13): 2079-2086.