白藜芦醇干预小鼠软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2及基质金属蛋白酶13的表达

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0577

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (36): 5772-5777.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0577

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白藜芦醇干预小鼠软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2及基质金属蛋白酶13的表达

袁昊，曾晖，陈科，于斐，林健静

(北京大学深圳医院骨关节科，广东省深圳市 518036)

收稿日期:2018-07-20 出版日期:2018-12-28 发布日期:2018-12-28
通讯作者: 曾晖，博士，硕士生导师，主任医师，北京大学深圳医院骨关节科，广东省深圳市 518036
作者简介:袁昊，男，1988年生，河南省淮阳县人，汉族，2016年北京大学毕业，硕士，医师，主要从事骨关节炎相关研究。
基金资助:
深圳市科技研发资金项目(JCYJ20170307111755218，JCYJ20160428173412866)

Resveratrol regulates the expression of sterol regulatory element-binding protein-2 and matrix metalloproteinase 13 in mouse chondrocytes

Yuan Hao, Zeng Hui, Chen Ke, Yu Fei, Lin Jianjing

(Department of Orthopedics, Peking University Shenzhen Hospital, Shenzhen 518036, Guangdong Province, China)

Received:2018-07-20 Online:2018-12-28 Published:2018-12-28
Contact: Zeng Hui, MD, Master’s supervisor, Chief physician, Department of Orthopedics, Peking University Shenzhen Hospital, Shenzhen 518036, Guangdong Province, China
About author:Yuan Hao, Master, Physician, Department of Orthopedics, Peking University Shenzhen Hospital, Shenzhen 518036, Guangdong Province, China
Supported by:
the Science and Technology Research and Development Project of Shenzhen, No. JCYJ20170307111755218 and JCYJ20160428173412866

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
固醇调节元件结合蛋白(SREBP)：是位于内质网的细胞内胆固醇敏感器，通过Insig-Srebp-Scap途径对细胞内胆固醇进行反馈调节。
白藜芦醇：是多酚类化合物，主要来源于花生、葡萄(红葡萄酒)、虎杖、桑椹等植物。白藜芦醇是一种生物性很强的天然多酚类物质，又称为芪三酚，是肿瘤的化学预防剂，同时也可降低血小板聚集，预防和治疗动脉粥样硬化、心脑血管疾病。

摘要
背景：新近研究表明，固醇调节元件结合蛋白2及基质金属蛋白酶13在骨关节炎软骨细胞中表达上调。白藜芦醇对于骨关节炎的防治作用被认为与其可以减少软骨细胞凋亡及滑膜炎症有关。
目的：进一步分析白藜芦醇对软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2及基质金属蛋白酶13表达的影响。
方法：体外分离培养小鼠膝关节软骨细胞，采用Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞。根据加入物的不同分为3 组：空白对照组、脂多糖干预组(1 mg/L)和白藜芦醇干预组(100 μmol/L白藜芦醇+1 mg/L脂多糖)。采用Westernblot检测软骨细胞中基质金属蛋白酶13的蛋白表达水平，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2的表达量。
结果与结论：①荧光显微镜下显示Ⅱ型胶原染色阳性细胞数占95%以上，证实所培养细胞为软骨细胞；②脂多糖组固醇调节元件结合蛋白2、基质金属蛋白酶13表达量较空白组明显升高，白藜芦醇组固醇调节元件结合蛋白2、基质金属蛋白酶13表达量较脂多糖组下降，但仍高于空白组；③结果表明，表明白藜芦醇可抑制小鼠软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2和基质金属蛋白酶13的表达。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0001-6087-1455(袁昊)

关键词: 骨关节炎, 退行性变, 膝关节, 软骨细胞, 小鼠, 脂多糖, 白藜芦醇, 固醇调节元件结合蛋白2, SREBPs, 基质金属蛋白酶13, 组织构建

Abstract:

BACKGROUND: Recent studies suggest that sterol regulatory element-binding protein (SREBP)-2 and matrix metalloproteinase 13 (MMP-13) are up-regulated in chondrocytes of patients with osteoarthritis. The role of resveratrol in the prevention and treatment of osteoarthritis is considered to be involved in the reduction of chondrocyte apoptosis and synovial inflammation.
OBJECTIVE: To further investigate the effect of resveratrol on the expression of MMP-13 and SREBP-2 in chondrocytes.
METHODS: Mouse knee chondrocytes were isolated and cultured in vitro, and identified by immunofluorescence staining with collagen type II. The experiment was divided into three groups according to the different addition materials: blank control group, lipopolysaccharide group (1 mg/L) and resveratrol group (100 μmol/L resveratrol plus 1 mg/L lipopolysaccharide). The expression level of MMP-13 protein in chondrocytes was detected by western blot assay. The expression level of SREBP-2 in chondrocytes was determined by ELISA method.
RESULTS AND CONCLUSION: Fluorescence microscopy showed that the number of cells positive for collagen type II accounted for more than 95%, confirming that the cultured cells were chondrocytes. Compared with the blank control group, the expression levels of SREBP-2 and MMP-13 in the lipopolysaccharide group were significantly increased, and the expression levels of SREBP-2 and MMP-13 in the resveratrol group were lower than those in the lipopolysaccharide group, but they were still higher than those in the blank control group. In summary, resveratrol can inhibit the expression of SREBP-2 and MMP-13 in mouse chondrocytes.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Osteoarthritis, Chondrocytes, Sterol Regulatory Element Binding Protein 2, Matrix Metalloproteinases

中图分类号:

R318

袁昊，曾晖，陈科，于斐，林健静. 白藜芦醇干预小鼠软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2及基质金属蛋白酶13的表达[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(36): 5772-5777.

Yuan Hao, Zeng Hui, Chen Ke, Yu Fei, Lin Jianjing. Resveratrol regulates the expression of sterol regulatory element-binding protein-2 and matrix metalloproteinase 13 in mouse chondrocytes[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(36): 5772-5777.

图/表（结果） 3

2.1 小鼠原代细胞镜下观察倒置相差显微镜下可见，小鼠软骨细胞在不同培养阶段其生长特点不同：①未贴壁的软骨细胞具有明显的折光性，悬浮于培养液中呈球形，大小均一，单个或多个均匀分散在培养瓶中，见图1A；②细胞于12 h左右开始贴壁，24 h后贴壁细胞明显增多，细胞开始伸展，形态发生明显变化，大多为梭形，少数呈多角形，均匀散在生长，见图1B；③7 d左右细胞铺满瓶底，当单层铺满皿底时呈“铺路石”样改变，见图1C；④细胞长满后进行传代，传代后细胞生长速度加快，6代以后细胞内黑色颗粒增多，细胞活性下降。

2.2 细胞活性检测分离培养的原代软骨细胞在未贴壁前呈圆球形，此时检测活细胞率为90%左右。传代后，软骨细胞活性增高可达到95%以上。随着传代次数增多，尤其是在传至6代以后，细胞活性出现明显降低状态，细胞内出现黑色颗粒，且细胞形态变化明显，大小不一。

2.3 软骨细胞Ⅱ型胶原免疫荧光鉴定 Ⅱ型胶原主要由软骨细胞分泌，是软骨细胞基质内的主要成分，因此可以将Ⅱ型胶原的合成与分泌作为鉴定软骨细胞的特定指标^[10]。荧光显微镜下见图2所示，软骨细胞由于表达Ⅱ型胶原而被荧光染料染红色荧光，软骨细胞胞核被DAPI复染成蓝色。而且，细胞Ⅱ型胶原免疫荧光阳性率达95%以上，证明所培养的细胞为软骨细胞，可以用于该次实验。

2.4 酶联免疫吸附实验SREBP-2检测结果 SREBP-2蛋白3组表达量分别为：脂多糖组(319.6±10.82) ng/L、白藜芦醇组(174.7±24.59) ng/L、空白对照组(234.1±23.25) ng/L，其中脂多糖组高于空白对照组(P < 0.05)，白藜芦醇组明显低于脂多糖组(P < 0.01)，见图3。

2.5 Western blot检测基质金属蛋白酶13表达与空白对照组相比，脂多糖组基质金属蛋白酶13的表达量明显增多。与脂多糖组相比白藜芦醇组基质金属蛋白酶13表达降低，见图4。

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引言

骨关节炎是临床上最常见的慢性关节疾病，主要影响到负重关节如膝关节、髋关节、腰骶部脊柱关节，以及非负重关节如手指关节，是40岁以上老龄人致残的主要原因^[1]。骨关节炎的危险因素包括遗传、年龄、肥胖等，随着人口老龄化的日益加剧以及肥胖率的不断升高，骨关节炎患者的数量也逐年增加^[2]。然而骨关节炎的确切发病机制尚不明确，除了临床对症治疗缓解症状或行关节置换外，目前还没有非常有效的治疗方法。最近研究表明骨关节炎是一种代谢性疾病，各种脂类相关基因和蛋白质在骨关节炎软骨细胞和正常软骨细胞中的表达不同。骨关节炎软骨组织由软骨细胞、软骨基质和胶原纤维构成，软骨内无血管，其营养供应主要来自于软骨基质。固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins，SREBPs)和基质金属蛋白酶13均可由软骨细胞分泌，分别参与脂类代谢及软骨基质的降解，与骨关节炎的发生发展密切相关。

白藜芦醇(resveratrol，Res)，又称芪三酚，是一种非黄酮类多酚化合物，广泛存在于葡萄、虎杖、桑葚和花生等植物^[3]，其中在葡萄皮中的表达量最多。多项研究表明白藜芦醇具有广泛的生物活性及药理作用，对肿瘤、脑缺血、骨关节炎等多种疾病具有良好的治疗作用，这可能与其抵抗或延缓衰老、抗氧化活性以及改善细胞内能量代谢等作用机制有关^[4-5]。Ⅱ型胶原是软骨细胞基质内的主要构成成分，主要由软骨细胞产生，大多存在于骨骼、关节和肌腱等组织。软骨组织中的纤维网状组织主要由Ⅱ型胶原(90%-95%)构成，纤维网状组织受损可能在骨关节炎的病理过程中起着关键的作用^[6]。基质金属蛋白酶13属于胶原酶类蛋白，其裂解Ⅱ型胶原的活性最强，在骨关节炎的软骨破坏过程中尤为重要^[7]。因此，研究白藜芦醇对软骨细胞基质金属蛋白酶13表达的影响对于临床应用白藜芦醇治疗骨关节炎具有重要的理论意义。

SREBPs属于含有“碱性螺旋-环-螺旋-亮氨酸拉链”结构的核转录调节因子家族，在调节靶基因的转录激活过程中具有重要作用，主要参与调节体内胆固醇及脂肪酸的生物合成。哺乳动物中SREBPs包含3种亚型：SREBP-1a、SREBP-1c和SREBP-2。其中SREBP-2基因位于22q13，主要参与胆固醇合成酶基因的调控。有研究证实，参与胆固醇合成酶基因调节的SREBP-2及其各种单核苷酸多态性(SNPs)在骨关节炎病理过程中起着重要作用^[8-9]。Kostopoulou等^[8]对1 410例希腊骨关节炎患者和健康组遗传关联分析后发现SREBP-2基因单核苷酸多态性1784G>C与骨关节炎高度相关。然而，白藜芦醇与软骨细胞SREBP-2之间的关系尚未有研究报道，需进一步的深入研究为应用白藜芦醇治疗骨关节炎提供新的理论依据。

实验拟通过体外培养小鼠软骨细胞，在脂多糖的诱导下模拟骨关节炎软骨细胞状态，对比不同组中软骨细胞SREBP-2、基质金属蛋白酶13的蛋白表达情况，探究白藜芦醇对骨关节炎的治疗作用及其可能机制。

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材料方法

1.1 设计分组对照细胞学观察。

1.2 时间及地点实验于2015年9月至2016年1月于北京大学/香港科技大学医学中心科研楼完成。

1.3 材料

实验动物：新生1 d的C57BL/6J健康清洁级小鼠8只，体质量(4±1)g，雌雄不限，购于广东省医学实验动物中心，动物生产许可证号：SCXK(粤)2013-0002。实验动物环境在北京大学/香港科技大学医学中心深圳医院实验动物中心，实验动物处置过程符合动物伦理学标准。

实验用试剂及仪器：改良型1640细胞培养基(Hyclone公司，美国)；胎牛血清、PBS(Gibco公司，美国)；白藜芦醇，脂多糖(Sigma公司，美国)；兔抗鼠Ⅱ型胶原抗体(Proteintech公司，美国)；Cy3标记山羊抗兔IgG(H+L)、BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天公司，中国)；酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(上海酶联公司，中国)；恒温CO₂培养箱(Thermo公司，美国)；倒置相差显微镜、荧光显微镜(Leica公司，德国)。

1.4 实验方法

1.4.1 小鼠膝关节软骨细胞的获取与培养将8只新生 1 d的乳鼠处死后置于体积分数75%乙醇中浸泡消毒 10 min，无菌条件下截取小鼠膝关节，用含双抗(1x10⁵ U/L青霉素，100 mg/L链霉素)的1×PBS漂洗3次，用眼科剪将其剪碎至1 mm×1 mm×1 mm大小的组织块。将组织块转移至15 mL离心管内，加5倍体积的0.25%胰蛋白酶置于 37 ℃恒温箱中消化15 min，用含体积分数10%FBS的培养基终止消化，1 000 r/min，离心5 min，弃去上清。用无菌PBS冲洗后，加无菌0.2%Ⅱ型胶原酶置于37 ℃恒温箱内消化4 h，每隔30 min取出震荡1次，用等体积含体积分数10%胎牛血清的1640培养基终止消化，1 000 r/min，离心5 min，弃上清。按(3.0-4.0)×10⁸ L^-1，接种于25 cm²培养瓶内。37 ℃恒温，体积分数5% CO₂饱和湿度培养箱内培养。每3 d更换培养液1次，待软骨细胞贴壁达80%后传代，选取传代三四代的细胞用于实验。

1.4.2 锥虫蓝染色检测细胞活性取对数生长期软骨细胞，0.25%胰蛋白酶消化制备单细胞悬液，调整细胞浓度为1×10⁹L^-1，取9滴细胞悬液，加入1滴0.4%锥虫蓝染色液，充分混匀，用血球计数板在3 min内计算活细胞及死细胞的数量，死细胞镜下被染为蓝色，活细胞呈无色透明状。活细胞率(%)=活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%。

1.4.3 Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞取生长良好的软骨细胞，调整细胞悬液浓度为1×10⁷L^-1，在24孔板内爬片，每孔加1 mL细胞悬液后置37 ℃、体积分数5% CO₂温箱中培养24 h。PBS漂洗3次，每次5 min，40 g/L多聚甲醛固定10 min，PBS洗3次，每次5 min，5% BSA封闭30 min，加入一抗4 ℃过夜，PBS漂洗3次，每次5 min，加入Cy3标记山羊抗兔IgG(H+L)37 ℃放置30 min以上，荧光显微镜下观察。

1.4.4 分组实验干预取小鼠膝关节软骨细胞进行实验，先予以含体积分数5% FBS的1640培养液孵育24 h。然后用0.25%胰蛋白酶消化重悬细胞，并按(2.0-3.0)×10⁸L^-1接种于6孔板。每孔给予含体积分数10% FBS的1640完全培养基2.5 mL，孵育24 h。每个样本3份随机分为3组，并分别按以下方式处理：①空白对照组：仅加入含体积分数10% FBS的1640完全培养基；②脂多糖组：予以脂多糖干预 6 h(终浓度为1 mg/L)；③白藜芦醇组：先用白藜芦醇干预2 h(终浓度为100 μmol/L)，弃去培养液，然后再给以脂多糖干预6 h(终浓度为mg/L)。

1.4.5 Western blot检测基质金属蛋白酶13表达收集并用RIPA裂解液裂解软骨细胞(200 μL/孔)，冰上裂解 20 min，用洁净细胞刮均匀刮下细胞，20 min后将裂解液转移至1.5 mL EP管中并标记，用BCA试剂盒蛋白定量。蛋白变性后，经SDS-PAGE系统电泳分离后转PVDF膜，5%脱脂奶粉(0.1%TBST稀释)室温封闭1 h，TBST洗3次，每次5 min，室温孵育基质金属蛋白酶13抗体(1∶2 000) 4 h，TBST洗涤3次，每次5 min，孵育二抗HRP标记抗体(1∶5 000) 1 h，TBST洗涤3次，最后加ECL发光液、曝光、显影，用Image J软件进行灰度分析。实验重复4次。

1.4.6 酶联免疫吸附检测SREBP-2表达采用双抗体夹心ELISA法，按试剂盒说明书上步骤进行。用抗大鼠SREBP抗体包被于酶标板上，使样品或标准品中的大鼠SREBP-2与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入抗大鼠SREBP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。加入显色底物(TMB)，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测吸光度值。

1.5 主要观察指标 ①所培养细胞Ⅱ型胶原免疫荧光染色阳性率；②不同组间软骨细胞中SREBP-2蛋白表达量的差别；③不同组别软骨细胞中基质金属蛋白酶13蛋白表达量的差别。

1.6 统计学分析实验数据采用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析，所有数据用x(_)±s表示，组间计量资料采用单因素方差分析，以P < 0.05为差异有显著性意义。

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讨论

白藜芦醇是一种存在于多种植物中的多酚类物质，其中在葡萄皮、虎杖和坚果中的含量较多，具有抗炎、抗氧化和调控细胞凋亡等作用。有研究表明白藜芦醇可通过抑制软骨细胞的凋亡而起到预防骨关节炎的作用^[11]。体外实验发现白藜芦醇可通过抑制白细胞介素1β的对软骨细胞caspase-3的激活而抑制软骨细胞的凋亡^[12]。脂多糖是革兰阴性杆菌外膜的主要成分，它可促进发热、感染性休克和血栓形成等炎症过程。脂多糖通过与软骨细胞脂多糖结合蛋白相结合而干扰软骨细胞的正常功能，促进软骨细胞促炎因子如白细胞介素1β、肿瘤坏死因子a和白细胞介素6等的表达而表现为退化性关节炎的早期阶段^[13]。在该实验中，以脂多糖为诱导剂来刺激小鼠软骨细胞，模拟退化性骨关节炎的软骨细胞模型^[14]，在细胞水平研究白藜芦醇对软骨细胞的保护机制。

软骨细胞是软骨组织中唯一的细胞成分，它可以分泌大量的Ⅱ型胶原及蛋白多糖。Ⅱ型胶原在机体内主要存在于软骨细胞，经Ⅱ型胶原免疫荧光染色可以证实该实验所培养细胞为软骨细胞。骨关节炎是一种多致病因素引起的关节退行性病变，年龄、肥胖、炎性反应、过度负载以及关节损伤和疾病均是发病的危险因素^[15]。传统观点认为骨关节炎的发生发展与软骨退变、衰老、创伤等因素有关，但随着研究的不断深入发现，“代谢紊乱”与“炎性衰老”与骨关节炎的发生发展有密切关系。流行病学研究发现高水平的血清胆固醇和三酰甘油可使膝关节软骨下骨发生骨髓损伤的风险增加^[16]。另有研究表明骨关节炎患者体内存在多种脂肪因子水平的异常^[17-18]，同时伴有关节内炎性因子水平升高、软骨细胞代谢紊乱，并最终出现软骨组织退变。以上研究均提示脂代谢紊乱参与了骨关节炎的发生过程。

SREBPs最早由体外培养的HeLa细胞核抽提物中纯化出来，参与体内胆固醇的合成与代谢，对体内脂质代谢具有重要影响，是机体脂质平衡的主要调节者^[19]。SREBPs存在3种形式的同分异构体，即SREBP-la、SREBP-lc和SREBP-2，其中SREBP-2主要与胆固醇代谢密切相关^[20]，促进胆固醇的合成有研究表明SREBP-2在软骨退变的过程中表达上调^[21]。以往研究发现白藜芦醇对于骨关节炎的防治作用与其可以减少软骨细胞凋亡及滑膜炎症有关，但关于白藜芦醇和软骨细胞脂代谢调控因子SREBP-2的研究尚未有文献报道，而目前骨关节炎的早期治疗仍主要集中在改善关节软骨的营养状况及减少关节软骨的磨损。因此，研究白藜芦醇对软骨细胞中SREBP-2表达的影响，为更深入的了解白藜芦醇保护软骨细胞的机制具有重要意义。

软骨细胞合成软骨基质，正常情况下软骨基质的合成和分解处于动态平衡。细胞因子以及外界机械刺激主要通过关节液和软骨基质作用于软骨细胞^[22]。软骨组织中的软骨细胞可以产生大量的Ⅱ型胶原蛋白。在基质金属蛋白酶家族中基质金属蛋白酶13裂解Ⅱ型胶原的活性最强，在骨关节炎的软骨破坏过程中极为重要。在体外实验中有研究证实白藜芦醇可抑制白细胞介素1β诱导的软骨基质的降解^[23]。另外，NF-κB转录因子介导炎症反应，刺激细胞分泌基质金属蛋白酶和炎症因子等，破坏关节软骨，对骨关节炎患者软骨修复产生不利影响^[24]。因此，找到抑制软骨细胞中基质金属蛋白酶13的表达的方法对于骨关节炎的治疗具有重要意义。

实验结果表明，与空白组相比，脂多糖组白藜芦醇SREBP-2表达明显增加，白藜芦醇组虽也有所增加，但幅度明显低于脂多糖组，差异均有显著性意义(P < 0.05)，提示白藜芦醇可以抑制SREBP-2在软骨细胞中的表达。另外，基质金属蛋白酶13在脂多糖组表达呈增高趋势，而且随着浓度的增加而增高，而在白藜芦醇组基质金属蛋白酶13的表达受到抑制，说明白藜芦醇对于基质金属蛋白酶13的表达同样具有抑制作用。综上所述，白藜芦醇防治骨关节炎的作用可能与抑制软骨细胞中SREBP-2和基质金属蛋白酶13的表达有关，这对临床应用白藜芦醇治疗骨关节炎提供新的理论依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

白藜芦醇干预小鼠软骨细胞固醇调节元件结合蛋白2及基质金属蛋白酶13的表达

Resveratrol regulates the expression of sterol regulatory element-binding protein-2 and matrix metalloproteinase 13 in mouse chondrocytes

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[1]	黄登承, 王志科, 曹学伟. 体外冲击波疗法治疗中老年膝骨关节炎短期疗效对比的荟萃分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1471-1476.
[2]	韦玮, 李剑, 黄林海, 兰敏东, 卢显威, 黄绍东. 全膝或全髋关节置换后老年人首次活动时跌倒恐惧的影响因素[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1351-1355.
[3]	王金军, 邓增发, 刘康, 何智勇, 余新平, 梁建基, 李晨, 郭洲洋. 全膝关节置换静脉滴注氨甲环酸联合含氨甲环酸鸡尾酒局部应用的止血效果及安全性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1356-1361.
[4]	肖国庆, 刘选泽, 严钰皓, 钟喜红. 后交叉韧带替代型假体全膝关节置换术后屈曲受限的影响因素[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1362-1367.
[5]	彭智浩, 冯宗权, 邹勇根, 牛国庆, 吴峰. 活动平台单髁置换后下肢力线与外侧间室骨关节炎进展的关系[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1368-1374.
[6]	黄泽晓, 杨妹, 林诗炜, 何和与. 血清n-3多不饱和脂肪酸水平与全膝关节置换早期股四头肌肌力变化的相关性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1375-1380.
[7]	李静, 谢建山, 崔慧林, 曹锡梅, 杨艳萍, 李海荣. 不同毛色小鼠背部皮肤中甘油二酯激酶ζ和蛋白激酶CβⅡ的表达和定位[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1196-1200.
[8]	陈继铭, 吴晓静, 刘田丰, 陈海聪, 黄成硕. 水飞蓟素对四氯化碳致小鼠肝损伤和骨代谢的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1224-1228.
[9]	刘翔翔, 黄云梅, 陈文列, 林如辉, 卢小冬, 李钻芳, 许亚晔, 黄美雅, 李西海. 早期骨关节炎模型大鼠半月板白区细胞的超微结构变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1237-1242.
[10]	史洋洋, 秦英飞, 吴福玲, 何潇, 张雪静. 胎盘间充质干细胞预处理预防小鼠毛细支气管炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 991-995.
[11]	袁俊, 杨家福. 局部氨甲环酸浸润在非骨水泥全膝关节置换过程中止血效果的评价[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(6): 873-877.
[12]	侯广原, 张继学, 张志军, 孟祥晖, 段文, 高维陆. 骨水泥强化椎弓根螺钉内固定治疗伴骨质疏松腰椎退行性疾病的1年随访[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(6): 878-883.
[13]	黄登承, 王志科, 曹学伟. 全膝关节置换中静脉和局部联合或单一应用氨甲环酸：一项随机对照试验的荟萃分析 [J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(6): 948-956.
[14]	李琰, 王佩, 邓东焕, 严伟, 李磊, 姜红江. 电针干预全膝关节置换后疼痛的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(6): 957-963.
[15]	何祥忠, 陈海云, 刘军, 吕阳, 潘建科, 杨文斌, 何静雯, 黄俊翰. 富血小板血浆联合微骨折对比微骨折治疗膝关节软骨病变的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(6): 964-969.